Práctica No.

1
Aislamiento de microorganismos en diferentes superficies

a. ¿Que es bioseguridad?

se define como el conjunto de medidas preventivas, destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales
procedentes de agentes biológicos, físicos o químicos, logrando la prevención de impactos nocivos, asegurando que
el desarrollo o producto final de dichos procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de trabajadores de la
salud, pacientes, visitantes y el medio ambiente.

b. ¿Cuáles son las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiología?

Evitar contacto de piel o mucosas con sangre y otros liquidos de precaucion universal
Lavado de las manos.
Uso de los guantes:
Uso de mascarillas:
Manejo cuidadoso de elementos cortopunzantes
Limpieza de equipos e instrumentos
No correr
No comer ni fumar

c. Mencione las clases de esterilización, cuales son los agentes de esterilización con más uso en el laboratorio,
en que consiste cada uno de ellos y para qué materiales se utilizan.
 Agente De Temperatura De Material Que Se Puede
Esterilización Uso (Si Se Equipo Utilizado Esterilizar Por Este
Aplica) Método.
Esterilización Aire Caliente 170°C Hornos, Llama Directa O Material De Laboratorio,
Con Calor Seco Incineracion Envaces
Esterilización Vapor A Presión 121ºc Autoclave Termoestables Y No
Con Calor De 15 Libras Sensibles A La Humedad
Húmedo Como Medios De Cultivo
Radiaciones Radiación NO PLANTA DE Productos Medicos,
Gamma IRRADIACIÓN GAMMA Plásticos.
Filtración Un Líquido O Un 32,5ºc +/- 2,5ºc Filtro De Membrana Ciertos Medios De
Gas Cultivo, Azúcares,
Soluciones De
d. Establezca las diferencias entre esterilización y desinfección Antibióticos Y Otros
Medicamentos

Desinfección
Eliminación de la mayoría de micoorganismos
pátogenos y no pátogenos, exceptuando las
esporas, mediante el uso de agentes físicos y
químicos
Esterilización
Procedimiento en el que se usan métodos
físicos y químicos para eliminar toda posibilidad
de vida microbiana, incluidas esporas, bacterias
altamente termoresistentes

e. ¿Qué es un medio de cultivo; de qué están compuestos principalmente; cómo se clasifican según su
proporción de agar y según su suministro de nutrientes?

Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En
las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las
muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.

 Agar, comercialmente se presenta en gránulos y polvos, la concentración en la que se encuentra en los

medios de cultivo dependerá del uso que quiera darse al medio.
  Nutrientes adecuados Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,
como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias
ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustacnias
adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan
lugar.

f. ¿Cuál es la utilidad de los medios de cultivo y qué diferencia un caldo de un medio sólido?

Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patógeno (secreción purulenta, orina, órgano, fecas, etc.) o
de un alimento (leche, carne, etc.)
Estudio morfológico de las colonias.
Conservación de cepas identificadas (colección de cepas microbianas o cepario).
Clasificación y tipificación de bacterias por estudio de sus propiedades bioquímicas en medios diferenciales.
Obtención de toxinas o investigación de sus características.
Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboración de productos biológicos (vacunas, antígenos, bacterinas,
toxoides, etc.).

Caldo Medio solido

las células se cultivan en suspensión, por lo que para ello se les agrega agar (u otro agente solidificante) en
es necesario mantenerlos en agitación. proporciones que varían dependiendo de que tan sólido se
requiera

g. ¿Cuál es el fundamento de la coloración de Gram?

mucopéptido, etanol y diferencias de color.

h. ¿Qué diferencias encuentra entre bacterias Gram positivas y Gram negativas?

 Gram positivas
Se le denomina bacterias grampositivas, o bacterias
Gram-positivas, son aquellas que se tiñen de azul
oscuro o violeta por la tinción de gram. Esta
características química está íntimamente ligada a la
estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un
tipo natural de organización bacteriana. Son grupos
principales de bacterias y cuando se tratan como taxón
se utiliza también el nombre de Posibacteria y las que
restan son las bacterias gramnegativas.
Gram negativas
Las bacterias gramnegativas son todas aquellas que no se
tiñen de azul oscuro o de violeta por la tinción de Gram, y lo
hacen de un color rosado tenue: Es por eso el nombre
gramnegativas o también Gram-negativas. Esta
característica está íntimamente ligada a la estructura
didérmica dada por la envoltura celular, ya que presenta
doble membrana celular (una es externa y la otra
citoplasmática) lo que refleja un tipo natural de organización
bacteriana. Son uno de los principales supergrupos de
bacterias y cuando se trata como taxón se le puede llamar
con el nombre de Negibacteria o bien Didermata. Las que
restan son las bacterías grampositivas.

i. ¿Cuáles son las principales características morfológicas y metabólicas de los hongos?

Los hongos poseen pared celular contiene quitina, un polisacárido que le da rigidez y es responsable de su
morfología y en ocasiones celulosa. Algunos hongos presentan cápsula, formada por polisacáridos, con
propiedades inmunógenas y antifagocitarias.

La estructura o cuerpo vegetativo de un hongo se denomina talo. El talo está formado por filamentos, o hifas, que
generalmente están ramificadas.

Las hifas son tubos largos que están formadas por la pared celular de quitina (componente mayoritario) y el
citoplasma con sus inclusiones y núcleos con la información genética. En el citoplasma se realiza la actividad
bioquímica del hongo.

Las hifas pueden estar separadas en células por paredes transversales (septos) en los hongos superiores
(Eumicetos), o carecer de paredes en los hongos inferiores (Ficomicetos).

El conjunto de hifas se llama micelio. En el micelio se distinguen dos partes: una que penetra en el medio de cultivo
y se extiende por su superficie (micelio vegetativo), y otra que se proyecta y contiene las esporas (micelio
reproductor o aéreo).
 Práctica No. 2
Condiciones de crecimiento y Metabolismo Bacteriano

a. ¿Qué factores intrínsecos y extrínsecos afectan el crecimiento de los microorganismos?

Factores intrínsecos Factores extrínsecos

Actividad del agua, Acidez pH, Óxido-reducción, Temperatura, humedad
Composición química, Presencia de substancias relativa, Composición de la
antimicrobianas naturales, microbiota competitiva atmósfera, Efecto valla

b. Defina los diferentes sistemas de siembra: Punción y estría, agotamiento, rejilla y profundidad.

Punción y estría Agotamiento rejilla Profundidad

Es la siembra de una colonia
bacteriana de un tubo con
agar donde se toma un asa
recta, se punza una colonia
bacteriana y se punza el agar
en el tubo
Se toma una caja de preti, la
base se marca con números
del 1 al 3, se toma la muestra
y se estria en la caja primero
el numero1 hasta la mitad, se
esteriliza el asa, se voltea la
caja y se repite el
procedimiento en los
siguientes números
Se toma la muestra y se
realizan estrias que atraviese
el centro de la caja de Petri,
luego se realizan estrias en
angulo recto a la primera y
paso a seguir se da vuelta 90°
para realizar estrias y cubrir y
así cubir la superficie de la
caja
Se marca una caja de Petri
con el numero del grupo,
fecha y siembra, cerca del
calor del mechero se abre la
caja de Petri, y se toma la
muestra del microorganismo a
cultivar del tubo de ensayo
con la pipeta y verter un poco
de agar nutrido, realizar los
movimientos necesarios para
distribuir uniformemente y
dejar reposar a 37°C por 48
horas para su encuvacion

c. Qué se entiende por metabolismo Bacteriano

Es la suma de transformaciones quimicas que ocurren en la celula

Se pueden diferenciar en dos clases: Generadoras e energía o degradavitas (catabolismo), y las consumidora de
energía biosintética (anabolismo)
 Practica No. 3
Análisis microbiológico de alimentos

a. ¿Qué son microorganismos indicadores y que revela su presencia en un análisis microbiológico?

Son organismos (o grupos) que advierten la presencia de microorganismospatógenosSu detección en el

laboratorio es más sencilla, rápida y/o económicaMicroorganismos marcadores Índices Microorganismos
cuya presencia encantidades o niveles por encima de ciertos límites numéricos indica laposible presencia de
patógenos ecológicamente relacionados.Indicadores: Microorganismos cuya presencia en cantidades
determinadasindica un tratamiento o procesado de inocuidad inadecuado

b. ¿Cómo se expresan los resultados de un recuento?

Los resultados del Recuento de la bacteria que se de la bacteria que sedesee estudiar se expresan
cuantitativamente por ejemplo para el caso delos coliformes sería algo cómo: Nº coliformes/100 mL de
muestra

c. ¿En que consiste el método del número más probable?

El método se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo onegativo) de atributos específicos de

microorganismos en copias obtenidaspor diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros
ambientes. Se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse yproducir un cultivo
turbio. El método requiere la realización de una serie dediluciones en serie de la muestra de cultivo, en un
medio líquido adecuadopara el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se
incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, seexaminan los tubos. Aquellos tubos que recibieron
una o más célulasmicrobianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras quelos tubos que no
recibieron ninguna célula permanecerán transparentes. Al aumentar el factor de dilución, se alcanza un punto
en el que algunostubos contendrán tan sólo un microorganismo y otros tubos no contendránninguno. Al
calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibidoninguna célula, se puede estimar el número más
probable demicroorganismos presentes en la muestra original, a partir de una tablaestadística. La precisión
del método del número más probable aumenta con el númerode tubos que se usan; cinco tubos por dilución
se consideran como unarelación adecuada entre precisión y economía.
Una condición del método es la necesidad de poder reconocer un atributoespecífico de la población en el
medio de crecimiento que se emplee. Laestimación de la densidad poblacional se obtiene del patrón de
ocurrenciade ese atributo en sucesivas diluciones en serie y el empleo del cálculo probabilístico. Hay muchas
entidades discretas que son fáciles de detectar pero difíciles decontar. Una aplicación es el de cualquier clase
de reacción de amplificacióno reacción de catálisis que impide una cuantificación fácil, pero permite quesu
presencia sea detectada de modo muy sensible. Algunos ejemploscomunes son: crecimiento de
microorganismos, acción enzimática, ocatálisis química. El método del NMP supone tomar la disolución
original omuestra y subdividirla en un factor (frecuentemente 10 veces, o 2 veces) yevaluar la
presencia/ausencia en múltiples subdivisiones. El grado de dilución para el cual comienza a aparecer la
ausencia indica quelos elementos se han diluido tanto que hay muchas submuestras en las queno aparece.
Un juego de repeticiones para cualquier concentración dadapermite una resolución más fina, para usar el
número de muestras positivasy negativas que estiman la concentración original dentro del apropiadoorden de
magnitud. Este método se usa para contar microorganismos difíciles de cultivar enmedio sólido, o para
determinar el número de células que pueden crecer enun medio líquido determinado, como el análisis para
determinar lacontaminación del agua potable, determinando el número de bacterias
Escherichia coli que pueden crecer en un medio con lactosa. La presencia de E. coli en el agua potable es
una prueba de contaminación.