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Liceo Santa Teresa

Valparaíso
Profesora: Carolina Severino
Asignatura: Biología

“Acogemos, Servimos y Educamos con Espíritu Cristiano”

Guía de Laboratorio
“AISLAMIENTO DE ADN “

Integrantes: ____________________________________________Fecha: _________Nota:

INTRODUCCIÓN

El ADN (Acido Desoxirribonicleico) es el material hereditario presente en


todas las células vegetales, animales, bacterias y algunos virus. Existen
diversas técnicas para obtenerlo, aislarlo y trabajar con él en distintos
ámbitos de Biología Molecular y Biotecnología. Una sencilla técnica se
aplicará en la presente actividad práctica para visualizar en forma
microscópica la estructura fibrilar del ADN.

MATERIALES

 1 procesadora de alimentos (licuadora o similar)


 300 grs. De una muestra biológica vegetal, lavada y cortada en trozos
 500 ml. De agua
 3ml. De alcohol absoluto (etanol) o alcohol isopropílico
 2 grs. De NaCl
 1 ml. De detergente liquido
 2 ml. De proteasa (papaína de piña o papaya)
 1 vaso de precipitado
 Pipetas de 5 ml. Y de 10 ml.
 2 vasos o frascos de vidrio de 50 ml.
 1 paleta de plástico

ACTIVIDAD PRÁCTICA

 Lavar, cortar y poner en la procesadora toda la muestra vegetal. Agregar 500ml. De agua,
tapar y procesar hasta obtener un preparado cremoso. El objetivo es la ruptura o lisis del
tejido.
 En un vaso de 50 ml. separe 30 ml. De la muestra ya procesada.
 Prepare en un vaso, solución tampón salina con : 2grs. De NaCl, 1 ml de detergente, 5ml de
agua.
Liceo Santa Teresa
Valparaíso
Profesora: Carolina Severino
Asignatura: Biología

“Acogemos, Servimos y Educamos con Espíritu Cristiano”

 Agregue el tampón a su muestra. Mezcle con la paleta plástica, sin hacer espuma. El tampón
provoca la rotura de las membrana citoplasmatica y nuclear, por acción conjunta de sal y
detergente, que rompen las células y liberan sus componentes y al ADN y proteínas
asociadas (por ejemplo las histonas).
 Agregue 2ml. De proteasa. Mezcle bien, cuidando de no producir exceso de espuma. Así
destruye las proteina asociadas al ADN.
 Obtenga 10 ml de la solución, Incline un poco este vaso y con una pipeta limpia, deje deslizar
suavemente 5 ml. De alcohol sobre el filtrado. Observe la formación de una interfase entre
el filtrado y el alcohol. El ADN migra hacia el alcohol, aislándose de los otros componentes
celulares, que permanecen en la fase acuosa.
 Revuelva suavemente a nivel de interfase.

Observe la reacción. Describa lo obtenido en relación a su estructura y color.

 Anote el resultado final ¿Cuál es su conclusión respecto a la estructura del ADN ?


 Describa 5 etapas en la obtención del ADN y el rol del equipo y reactivos usados en esta
actividad práctica.