Infeksi cacing usus menyebabkan karsinogenesis pada kanker

kolon terkait kolitis

Abstrak

Penyakit radang usus (IBD) adalah gangguan inflamasi kronis pada saluran gastrointestinal,
sangat terkait dengan peningkatan risiko perkembangan kanker kolorektal. Infeksi parasit
yang disebabkan oleh cacing menunjukkan modulasi respon imun inang dengan melepaskan
molekul imunomodulator dan menginduksi sel T regulator (Tregs). Status imunosupresif
yang diprovokasi di inang ini telah dianggap sebagai pendekatan baru dan menjanjikan untuk
mengobati pasien IBD dan mengurangi peradangan usus akut. Sebaliknya, infeksi parasit
spesifik diketahui terkait langsung dengan karsinogenesis. Apakah infeksi cacing
menyebabkan perkembangan colitis associated colon cancer (CAC) belum diketahui. Dalam
penelitian ini, kami menunjukkan bahwa pengobatan pada tikus dengan cacing
Helmmosomoides polygyrus saat onset progresi tumor pada model tikus CAC tidak
mengubah pertumbuhan tumor dan distribusi. Sebaliknya, infeksi H. poligemus pada fase
inflamasi awal CAC memperkuat respons inflamasi dan secara signifikan meningkatkan
perkembangan tumor. Di sini, infeksi H. polygyrus berhubungan dengan perubahan jangka
panjang pada kompartemen sel imun kolon, dengan pengurangan frekuensi efektor sel T CD8
+ kolon. Selain itu, infeksi H. poligemus pada dekstran sulfat (DSS) dimediasi kolitis secara
bermakna menyebabkan kekambuhan radang usus dengan memperkuat pelepasan IL-6 dan
CXCL1 kolon. Dengan demikian, temuan kami menunjukkan bahwa aplikasi terapeutik
cacing selama CAC mungkin memiliki efek yang mempromosikan tumor dan oleh karena itu
harus dipertimbangkan dengan baik.

Ringkasan penulis

Bukti dari studi epidemiologi menunjukkan adanya korelasi terbalik antara kejadian penyakit
yang dimediasi oleh kekebalan tubuh tertentu, termasuk penyakit radang usus, dan paparan
cacing. Sebagai konsekuensinya, cacing parasit diuji untuk mengobati pasien IBD, yang
mengakibatkan perbaikan klinis penyakit karena induksi lingkungan mikro yang tidak
menentu. Namun, beberapa infeksi terkait kanker dapat dikaitkan dengan infeksi cacing,
mungkin karena generasi lingkungan mikro yang konduktif terhadap inisiasi dan
perkembangan kanker. Dalam penelitian ini, tujuan kami mengungkap fungsi cacing yang
tampaknya kontroversial pada model tikus kolitis yang terkait dengan kanker usus besar.
Kami menunjukkan bahwa infeksi cacing pada awal kolitis dan kolitis yang terkait dengan
kanker usus besar tidak memperbaiki peradangan kolon tapi mengaktifkan sel kekebalan usus
yang selanjutnya memfasilitasi perkembangan tumor. Oleh karena itu, pemahaman
mekanisme yang lebih baik dimana cacing memodulasi respon imun inang di
usus harus didefinisikan secara tepat sebelum penerapan cacing pada penyakit autoimun
seperti IBD.

Pengantar
Hubungan erat antara peradangan dan perkembangan tumor telah dijelaskan pada banyak
kanker manusia selama beberapa tahun terakhir [1]. Dalam hal penyakit radang usus besar
(IBD) seperti ulcerative colitis (UC), telah ditunjukkan dengan jelas bahwa pasien diprediksi
berkembang menjadi kanker kolorektal [2]. Patologi IBD dianggap disebabkan oleh
kerentanan genetik, pengaruh lingkungan, mikroba menular, atau diregulasi respon imun
intestinal. Karena satu atau lebih faktor ini, toleransi terhadap antigen diet dan mikrobiota
komensal di saluran cerna terganggu. Peradangan berlebihan diprakarsai oleh sel imun
bawaan, namun patologi lebih lanjut didorong oleh aktivasi merata sel T helper (Th) 1, Th2
atau Th17 [3]. Sementara mempelajari model tikus peradangan usus, sel T regulator (Tregs)
terbukti memainkan peran penting dalam mempertahankan homoeostasis mukosa. Saat
mereka menggunakan berbagai fungsi supresif, Tregs dapat mencegah respons imun
intestinal yang menyimpang [4]. Dalam model murine dari kanker usus besar kolitis (CAC),
CD4 + Foxp3 + Tregs sangat penting untuk mengendalikan proses inflamasi. Namun, selama
perkembangan tumor, Treg yang sangat aktif menumpuk dalam tumor kolon dan menekan
respon antitumor sel T CD8 + secara efektif [5].

Karena etiologi IBD masih belum diketahui dan terapi penyebabnya tidak tersedia
Ekspresi pasien terhadap cacing tampaknya merupakan pendekatan baru dan menjanjikan
dalam pengobatan kolitis. Selama infeksi cacing, tanggapan respon imun Th2 sama baiknya
dengan aktivasi sel B, basofil, sel mast, sel dendritik, dan eosinofil yang ditimbulkan pada
host untuk mengendalikan dan mengusir parasit. Dengan perluasan sel regulasi secara
alternatif mengaktifkan makrofag, CD4 + dan CD8 + Tregs atau sel regulator B, dan induksi
sitokin anti-inflamasi berikut, misalnya. IL-10 atau TGF-β, cacing membangun kondisi
immunoregulatory untuk memastikan kelangsungan hidup mereka [6]. Kondisi
imunomodulator ini disarankan untuk membatasi peradangan usus di IBD. Namun,
pemanfaatan cacing pada berbagai penelitian manusia dan eksperimen hewan tentang kolitis
menuai hasil yang kontroversial. Hasil pertama uji klinis terapi Trichuris suis ova (TSO) pada
pasien penyakit UC dan Crohn menunjukkan penurunan indeks aktivitas penyakit [7, 8].
Dalam retrospeksi, evaluasi studi lengkap tidak menggambarkan efek manfaat yang
signifikan dari pemberian TSO oral terhadap respons klinis atau remisi pada penyakit Crohn
atau pasien UC (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT01433471, NCT01576471,
NCT01953354). Oleh karena itu, semua uji klinis dihentikan atau diselesaikan tanpa
publikasi hasil akhir. Sebaliknya, model murine infeksi H. polygyrus selama DSS [9] atau
kolitis transfer sel T [10] serta penerapan Hymenolepis diminuta pada dinitrobenzene sulfonic
acid yang diinduksi kolitis [11] menggambarkan ameliorasi peradangan usus. Di hampir
semua penelitian, kemanjuran pengobatan disertai dengan perluasan Foxp3 + Tregs atau
produksi IL-10. Meskipun demikian, efek samping dari aplikasi cacing juga ditunjukkan pada
model mouse yang berbeda. Tingkat keparahan penyakit meningkat saat tikus terinfeksi H.
diminuta pada oxalozone yg diinduksi kolitis [12, 13], atau setelah infeksi Trichuris muris
pada tikus rentan genetik yang mengembangkan kolitis secara spontan [14]. Selain itu, infeksi
H. polimemus pada model tikus kolitis bakteri terbukti memperburuk peradangan usus
dengan menginduksi perubahan mikrobiota kolon [15].

Terlepas dari IBD, infeksi diketahui menyebabkan banyak keganasan, termasuk

kanker, karena dapat menyebabkan peradangan kronis, ketidakstabilan genomik,
penghambatan apoptosis atau supresor tumor, dan modulasi proliferasi sel, angiogenesis atau
metabolisme glukosa. Sehubungan dengan cacing, data menunjukkan bahwa setidaknya
cacing darah dan hati dapat menyebabkan karsinogenesis. Infeksi haematobium Schistosoma
dapat dikaitkan dengan kandung kemih dengan jelas, dan Chlonorchis sinensis atau infeksi
Opisthorch viverrini telah terbukti menyebabkan kanker koiokarsinoma dan empedu. 16, 17].
Mekanisme yang memfasilitasi karsinogenesis pada infeksi O. viverrini adalah produksi
reactive oxygen intermediates yang menginduksi peradangan kronis dan pelepasan protein
yang meningkatkan proliferasi sel dan mengganggu jalur perbaikan DNA dan apoptosis [18].
Apakah hubungan antara cacing selain cacing atau schistosom dan kejadian kanker, tetap
tidak jelas. Untuk nematoda intestinal, seperti T. suis, yang telah diterapkan pada pasien IBD,
tidak banyak yang diketahui tentang potensinya untuk memberikan efek jangka panjang pada
inang.

Mengingat bahwa cacing berpotensi menekan peradangan melalui mekanisme

imunoregulasi serbaguna namun secara bersamaan dapat memfasilitasi karsinogenesis, kami
bertujuan untuk mengungkap fungsi kontroversial dari infeksi cacing pada model tikus kolitis
yang terkait dengan kanker usus besar. Dengan demikian, kami berfokus pada distribusi dan
fenotipe Foxp3 + Tregs dan sel CD8 + T yang berperan penting dalam imunitas tumor.

Hasil
Infeksi cacing mempengaruhi frekuensi CD4 + Foxp3 + Tregs di usus besar.
Infeksi usus dengan parasit nematoda H. poligidus diketahui memperluas CD4 + Foxp3 +
Tregs [19] dan menyebabkan peradangan kronis pada strain tikus yang rentan; dua fitur yang
dianggap dapat menyebabkan karsinogenesis pada colitis-associated colon cancer [5].
Sebelum kita menerapkan nematoda usus H. poligyrus pada model tikus kolon AOM / DSS,
kami menguji apakah infeksi cacing saja bisa memodulasi respon imun inang distal ke tempat
infeksi, terutama di usus besar. Empat belas hari setelah infeksi tikus BALB / c dengan 200
larva H. poligyrus stadium tiga, kami tidak mengamati adanya kerusakan mukosa namun
sedikit induksi penebalan otot polos di usus besar (Gambar 1A). Hal ini sejalan dengan
pengurangan minimal panjang kolon antara 7 dan 14 hari pasca infeksi (Gambar 1C). Seperti
yang diharapkan, di usus kecil, di mana larva H. polygyrus encyst, berganti kulit dan muncul
kembali sebagai cacing dewasa ke lumen usus, hiperplasia sel piala berat terdeteksi pada hari
ke 14 pasca infeksi (Gambar 1A dan 1B). Infeksi cacing usus dianggap memodulasi subset
sel T CD4 + [20]. Dengan demikian, kita selanjutnya menganalisis lebih jauh kompartemen
sel T dari kelenjar getah bening mesenterika (mLNs) dan lamina propria kolon (LP) pada titik
waktu yang berbeda setelah infeksi H. poligemus. Selain perluasan jumlah CD4 + Foxp3 +
Tregs pada mLN tikus yang terinfeksi, paling menonjol pada hari ke-10 pasca infeksi, kami
juga mendeteksi peningkatan frekuensi Treg di LP selama masa infeksi (Gambar 1D). Untuk
mengeksplorasi fenotipe sel-sel ini, kami menentukan ekspresi integrin αE (CD103) pada
CD4 + Foxp3 + Tregs dari tikus naif dan tikus yang terinfeksi H. polygyrus seperti CD103 +
Tregs ditunjukkan untuk mewakili fenotip efektor / memori [21]. Ekspresi CD103 meningkat
secara signifikan pada Treg yang diisolasi dari usus besar setelah 7 hari setelah infeksi dan
menunjukkan peningkatan tertinggi pada hari ke 10 (Gambar 1E). Untuk mengetahui apakah
fenotip yang diaktifkan ini berkorelasi dengan aktivitas fungsional yang lebih tinggi, kami
mengisolasi CD4 + Foxp3 + Tregs dari mLN pada hari ke-10 pasca infeksi dan
membudidayakannya dengan sel CD4 tanggapan CD4 +. Memang, Treg yang diisolasi dari
tikus yang terinfeksi H. polygyrus lebih kuat dalam menekan proliferasi sel T responden
dibandingkan dengan CD4 + Foxp3 + Treg dari hewan naif (Gambar 1F)

Infeksi H. polygyrus tidak mengganggu pertumbuhan tumor pada colitis-associated

colon cancer .
Kami sebelumnya menunjukkan bahwa CD4 + Foxp3 + Tregs menghasilkan fungsi
pendukung tumor selama CAC pada tikus. Lebih tepatnya, Treg CD4 + terlibat dalam
penekanan respon antitumor dimediasi sel T CD8 + yang efektif [5]. Untuk menyelidiki
apakah perubahan frekuensi Treg, yang dipicu oleh infeksi H. polygyrus, mungkin
berdampak pada perkembangan CAC, kami menginfeksi tikus BALB / c dengan 200 larva
tahap tiga H. polygyrus pada minggu ke 8 dari rejimen AOM / DSS (Gambar 2A). Pada titik
waktu ini, dasar adenokarsinoma telah diciptakan dan pertumbuhan tumor terbentuk. Seperti
yang terlihat pada Gambar 2B, infeksi H. polygyrus pada minggu ke 8 tidak mengurangi
bobot tikus yang hanya didiktekan oleh administrasi DSS melalui air minum. Ketika
perkembangan tumor dipantau oleh endoskopi pada minggu ke 12, tidak ada perbedaan
frekuensi atau ukuran adenokarsinoma seperti yang ditunjukkan oleh skor tumor yang
diamati (Gambar 2C). Karena pertumbuhan tumor, rasio berat terhadap panjang usus besar
meningkat pada tikus yang diberi perlakuan AOM / DSS. Namun sebagai tambahan, infeksi
H. polygyrus tidak berpengaruh lebih jauh terhadap karsinogenesis (Gambar 2D)

Perkembangan tumor selama kolitis terkait kanker usus besar didorong oleh infeksi
H.polygyrus tahap awal

Dengan meningkatkan jumlah sel T yang mengekspresikan Foxp3 di usus besar, infeksi H.
poligemus ditunjukkan untuk melindungi tikus pada beberapa model kolitis eksperimental
[10, 22]. Sebaliknya, infeksi cacing itu sendiri memodulasi sistem kekebalan tubuh inang
mereka, yang mungkin mendukung perkembangan tumor. Untuk mengetahui pengaruh
infeksi H. polygyrus terhadap peradangan yang diinduksi DSS selama CAC, kami
menginfeksi tikus BALB / c dengan 200 larva tahap tiga H. poligram satu hari setelah injeksi
AOM, 6 hari sebelum pemberian DSS pertama, masing-masing (Gambar 3A). Menariknya,
kami mengamati penurunan berat badan secara signifikan selama siklus DSS pertama pada
tikus yang terinfeksi H. polygyrus, yang mengindikasikan peradangan usus yang lebih parah
(Gambar 3B). Kolonoskopi pada minggu ke 12 menunjukkan bahwa tikus yang terinfeksi H.
polygyrus sebelum pemberian DSS pertama menunjukkan skor tumor secara signifikan lebih
tinggi dibandingkan dengan tikus perlakuan AOM / DSS (Gambar 3C). Pembentukan tumor
Augmented disertai dengan perolehan yang signifikan rasio berat usus besar terhadap panjang
pada tikus CAC yang terinfeksi H. poligemus dibandingkan dengan tikus CAC yang tidak
terinfeksi (Gambar 3D). Karena meningkatnya frekuensi Treg di lamina propia kolon selama
infeksi, kami menduga ada perubahan dalam posisi komuntus kolonik yang bertanggung
jawab atas pengembangan tumor yang disempurnakan setelah infeksi H. polygyrus. Seperti
yang diharapkan, tikus yang menderita CAC menunjukkan akumulasi Foxp3 + Treg yang
kuat di usus besar (Gambar 3E dan 3F). Namun, tidak ada efek aditif yang diamati saat tikus
terinfeksi H. polygyrus. Sebaliknya, jumlah absolut Foxp3 + Tregs secara signifikan menurun
pada usus besar tikus CAC yang terinfeksi H. polygyrus dibandingkan dengan tikus CAC
(Gambar 3E dan 3F). Hal ini dapat dianggap berasal dari keseluruhan pengurangan sel-sel di
dalam usus besar tikus CAC yang terinfeksi H. polygyrus karena juga frekuensi dan jumlah
absolut sel T CD8 + efektor T secara signifikan berkurang pada usus besar tikus CAC yang
terinfeksi, walaupun infeksi H. polygyrus awal diinduksi 12 minggu sebelumnya (Gambar
3G). Singkatnya, data ini menunjukkan bahwa infeksi H. polygyrus tampaknya memiliki
dampak jangka panjang pada respons kekebalan anti tumor, namun peningkatan skor tumor
setelah H. polygyrus tidak bergantung pada frekuensi Treg yang disempurnakan

Infeksi H. polygyrus meningkatkan peradangan akibat DSS di usus besar

Menariknya, kami mengamati bahwa tikus yang menjalani pengobatan AOM / DSS dan
infeksi H. polygyrus sebelum pemberian DSS pertama, menunjukkan penurunan berat badan
yang lebih kuat dibandingkan tikus yang diberi perlakuan AOM / DSS selama siklus DSS
pertama (Gambar 3B). Pengamatan ini menunjukkan peradangan usus yang lebih parah pada
tikus CAC yang terinfeksi H. polygyrus, yang terbukti dapat meningkatkan pembentukan
tumor pada model tikus eksperimental ini [23, 24]. Untuk menjelaskan absennya peradangan,
kami menginfeksi tikus BALB / c dengan 200 larva tahap tiga H. poligirin 6 hari sebelum
pemberian DSS 2% pada air minum (Gambar 4A). Sesuai dengan hipotesis kami, tikus yang
diobati dengan H. polygyrus terinfeksi DSS mulai menurunkan berat badan lebih awal dan
mengurangi bobot tubuh secara signifikan pada hari ke 14 jika dibandingkan dengan DSS
yang hanya merawat tikus (Gambar 4B). Penentuan indeks aktivitas penyakit, yang terdiri
dari penurunan berat badan, konsistensi tinja dan pendarahan rektum, memastikan bahwa
tikus yang terinfeksi H. polygyrus secara signifikan lebih sensitif terhadap peradangan
intestinal DSS daripada tikus yang tidak terinfeksi (Gambar 4C). Peningkatan peradangan
kolon pada tikus yang mendapat DSS terinfeksi H. poligemus dikaitkan dengan penurunan
yang signifikan pada panjang kolon dan patologi yang ditingkatkan yang ditandai dengan
hilangnya struktur kriptografi yang lebih parah, erosi sel epitel permukaan, penurunan sel
punca dan infiltrasi leukosit masal dibandingkan dengan DSS hanya mengobati tikus
(Gambar 4D dan 4E). Sejalan dengan itu, produksi IL-6 dan CXCL1 meningkat secara
bermakna pada usus besar tikus yang diobati dengan DSS yang terinfeksi dibandingkan tikus
percobaan DSS yang tidak terinfeksi (Gambar 4F). Berbeda dengan perubahan patologis di
usus besar, tidak ada tanda-tanda patologis yang diinduksi DSS diamati pada intestinitas
kecil, namun hiperplasia sel pager silang H. poligemus hadir (Sinyal S1A dan S1B). Produksi
sitokin dan kemokin pada kultur eksplan usus dari ileum menegaskan bahwa pemberian DSS
tidak mengubah ekspresi IL-6 atau CXCL1 konstitutif di usus kecil. Namun, tikus yang
terinfeksi H. poligemus dan DSS yang diobati menghasilkan tingkat IL-6 dan CXCL1 yang
jauh lebih rendah dibandingkan dengan tikus perlakuan DSS, yang menunjukkan setidaknya
sebagian lingkungan imunogenissi di usus kecil (Gambar S1C)

Menentukan komposisi seluler di lamina propria kolon, kita mendeteksi frekuensi

tertinggi sel CD4 + T pada tikus uji DSS yang terinfeksi H. poligemus (Gambar 5A).
Ungkapan kuat dari kiwi penanda kiwi dan turunnya CD62L pada sel CD4 + Foxp3-T di usus
besar tikus uji DSS yang terinfeksi H. poligemus mencerminkan peningkatan sel CD4 +
Foxp3-T yang secara signifikan ditingkatkan yang terlepas dari penerapan DSS (Gambar 5B
). Menariknya, frekuensi sel CD8 + secara signifikan berkurang pada usus besar tikus yang
terinfeksi H.polygyrus tetapi tidak pada tikus yang terinfeksi DSS yang diobati (Gambar 5A).
Akhirnya, frekuensi Foxp3 + Treg meningkat pada usus besar tikus yang terinfeksi H.
polygyrus, yang kemudian ditingkatkan dengan pengobatan DSS (Gambar 5C). Singkatnya,
kami menyimpulkan bahwa infeksi H. polygyrus sebelum kolitis akibat DSS meningkatkan
respon inflamasi di usus besar pada ekspresi IL-6 dan CXCL1 yang disempurnakan dan
peningkatan aktivasi sel T CD4 +. Karena hasil ini tidak terduga dan sebagian berbeda
dengan literatur yang dipublikasikan, kami menggunakan dua model mouse lainnya untuk
peradangan kolon untuk memvalidasi hasil kami. Kami menggunakan model colitis transfer
sel RAG2 - / - T [25] dan model transfer sel VILLIN-HA T [26]. Berdasarkan percobaan
kami, tikus terinfeksi H. polygyrus sebelum transfer sel T dan patologi di usus besar
dianalisis. Sejalan dengan hasil yang diperoleh pada model colitis DSS, kita sama sekali tidak
melihat adanya perbaikan pada hasil penyakit setelah infeksi H. poligemus (S2A-S2E Fig).
Sebaliknya, H. pra-infeksi poligemus pada model kolitis transfer sel RAG2 - / - T nampaknya
menginduksi IL-6 dan CXCL1 di usus besar dengan cara yang sama seperti pada model DSS
(S2C Fig)

In vivo netralisasi IL-6 dan CXCL1 mengurangi tingkat keparahan peradangan akibat
DSS pada tikus yang terinfeksi H. Polygyrus

Sitokin pro-inflamasi seperti IL-6 memiliki implikasi penting dalam mendorong peradangan
usus [27]. Selain itu, IL-6 adalah promotor tumor kritis selama tumorigenesis awal pada
model tikus CAC [28]. Untuk menganalisis apakah peningkatan skrining pada IL-6 dan
CXCL1 menyebabkan peningkatan tingkat keparahan kolitis akibat DSS, kami menginfeksi
tikus BALB / c dengan 200 larva tahap tiga H. poligirin 6 hari sebelum pemberian DSS.
Sebagai tambahan, tikus kemudian diobati dengan nanopartikel siRNA yang diarahkan pada
CXCL1 dan IL-6 selama aplikasi DSS (Gambar 6A) dan indeks aktivitas penyakit dipantau.
Yang penting, penghambatan H. polygyrus memediasi IL-6 dan CXCL1 ekspresi oleh siRNA
secara signifikan mengurangi indeks aktivitas penyakit ke tingkat DSS hanya tikus yang
diobati (Gambar 6B). Peradangan yang kurang parah ditemui di bagian jaringan kolon karena
tikus yang terinfeksi yang diobati dengan nanopartikel siRNA memuat struktur kolon yang
lebih awet dibandingkan tikus non-siRNA (Gambar 6C). Pembungkaman gen yang efisien
dari IL-6 dan CXCL1 ditentukan pada supernatan koloni eksplan eksplan (Gambar 6D). Hasil
kami dengan jelas menggarisbawahi bahwa infeksi H. poligemus yang dimediasi pelepasan
kolon IL-6 dan CXCL1 memfasilitasi kejengkelan kolitis akibat DSS.

Peradangan usus dan kolitis terkait kanker usus besar mengganggu respon anti-cacing
Hasil kami jelas menunjukkan bahwa infeksi H. polygyrus memfasilitasi peradangan usus
pada model AOM / DSS. Namun, tidak jelas apakah peradangan usus atau lingkungan
imunosupresif selama kanker usus besar berdampak pada tanggapan kekebalan anti-cacing
dan dengan demikian mengubah jalannya infeksi. Untuk mengklarifikasi masalah ini, kami
mengukur jumlah telur tinja setiap minggu pada tikus yang terinfeksi H. poligemus dan pada
tikus yang diobati dengan rejimen AOM / DSS setelah infeksi H. polygyrus selama
percobaan (Gambar 7A). Menariknya, cacing bertahan lebih lama pada tikus yang menderita
radang usus dan kanker usus besar daripada pada tikus naif. Pada minggu ke 10, hanya 15%
tikus CAC yang pulih dari infeksi sementara 50% tikus naif menunjukkan pengusiran cacing
(Gambar 7B). Analisis sitokin dan kemokin selanjutnya menunjukkan bahwa infeksi H.
poligemus pada tikus naif menimbulkan respons Th2 pada usus besar, yang ditunjukkan oleh
pelepasan IL-4 yang kuat, penting untuk pembersihan par-asites. Sejalan dengan penundaan
yang tertunda, tikus yang terinfeksi H. poligemus yang menderita kanker usus besar secara
signifikan menghasilkan IL-4 sebagai respons terhadap parasit (Gambar 7C). Dari catatan,
infeksi H. polygyrus mempromosikan pengaturan jangka panjang ekspresi IL-6 dan CXCL1
pada tikus naif yang masih terdeteksi 10 minggu setelah infeksi awal. Namun, lingkungan
tumor imunosupresif pada tumor yang diobati dengan tikus AOM / DSS benar-benar
menghapus ekspresi IL-6 dan CXCL1 (Gambar 7D), menunjukkan bahwa kanker usus besar
juga mempengaruhi respon kekebalan spesifik cacing. Diambil bersama-sama, kami
menunjukkan bahwa infeksi H. poligemus dapat memperkuat peradangan usus dan
menginduksi perubahan jangka panjang di kompartemen sel imun kolon, sehingga
meningkatkan risiko pengembangan kanker usus besar terkait kolitis.

Diskusi
Karsinogenesis pada kolitis terkait kanker kolon jelas didorong oleh peradangan [1]. Oleh
karena itu, mengendalikan respons imun inflamasi sangat menarik pada pasien IBD.
Upaya besar telah dilakukan untuk menemukan obat alternatif yang tidak hanya meringankan
gejala namun mengganggu respon imun bawaan atau adaptif untuk mengembalikan
homeostasis usus. Infeksi cacing parasit menjadi subjek penelitian murine dan manusia di
IBD saat mereka melepaskan molekul imunomodulator yang dapat mengurangi peradangan
usus. Namun, infeksi parasit yang sistematis pada pasien harus dipertimbangkan dengan baik
karena telah terbukti penyebab berbagai jenis kanker [17]. Di negara berkembang, penyakit
autoimun seperti IBD mungkin jarang terjadi, namun infeksi cacing yang ditularkan melalui
tanah mempengaruhi sekitar sepertiga populasi [29], dan 22,9% kanker yang didiagnosis
disebabkan oleh infeksi [30]. Berkenaan dengan infeksi usus parasitik yang disebabkan oleh
nematoda, hampir tidak ada yang diketahui tentang kemampuan mereka untuk menyebabkan
kanker.

Dalam penelitian ini, kami membahas dampak infeksi H. polygyrus dalam konteks
kolitis terkait kanker usus besar (CAC). Yang penting, kita bisa menunjukkan bahwa,
tergantung pada titik waktu infeksi cacing, perkembangan tumor dipromosikan dengan kuat.
Berbeda dengan hipotesis kami, efek ini bukan karena peningkatan jangka panjang pada
frekuensi Foxp3 + Tregs imunosupertensi di usus besar, yang diinduksi selama infeksi H.
poligyrus. Kami mengidentifikasi bahwa infeksi H. polygyrus pada fase awal CAC, sebelum
peradangan akibat DSS, mempercepat respons imun inflamasi di usus besar, yang
menyebabkan patologi berat, yang terbukti dapat meningkatkan perkembangan tumor pada
model ini [23, 24]
 Hal ini berbeda dengan penelitian lain, yang menggambarkan peran pelindung cacing
pada model tikus IBD yang berbeda [31-33]. Untuk memvalidasi data kami sendiri, kami
memperluas penelitian kami dari model IBD yang diinduksi secara kimia ke dua sel T yang
dimediasi model tikus IBD. Yang terpenting, tidak ada sistem model kami yang melakukan
pra-infeksi dengan H. polygyrus menghasilkan efek perlindungan dan mengurangi
peradangan di usus besar. Oleh karena itu, perbedaan pada penelitian sebelumnya harus
bergantung pada alasan lain mis. di jalan aplikasi, titik waktu infeksi atau nematoda yang
digunakan. Secara rinci, pelemahan peradangan yang dimediasi oleh DSS ditemukan saat
ekstrak atau produk ekskresi / sekresi cacing dioleskan [34, 35]. Selanjutnya, pengikatan
silang H. poligyrus yang dimediasi oleh kolitis di colitis transfer sel RAG IL-10-/-T diamati,
ketika tikus yang terinfeksi H. poligyrus diberi cacing sebelum kolin transfer sel T [31]. Data
ini sangat menyarankan agar produk helminth bisa dianggap antiinflamasi, bukan pada
helminth itu sendiri. Hanya satu penelitian yang menggambarkan adanya perlindungan
terhadap kolitis DSS setelah terinfeksi dengan larva H. poligyrus (9). Namun, penulis
menginfeksi tikus dalam kursus pengobatan DSS dan dianalisis hasil klinis 5 hari pasca
infeksi. Sebaliknya, kami menentukan hasil klinis di titik waktu berikutnya, karena kami
mengukur skor inflamasi dua minggu setelah infeksi, dan pada model kolitis yang dimediasi
sel T kami melihat 3 minggu dan 9 minggu, masing-masing, setelah infeksi awal. Oleh
karena itu, efek jangka panjang dari infeksi H. polygyrus tampaknya berbeda dari efek jangka
pendek, namun harus dipertimbangkan dengan kuat dalam konteks ini. Sejalan dengan hasil
kami, percobaan dengan infeksi H. diminuta pada kolitis oxazolone juga menunjukkan
respons inflamasi yang meningkat [12, 13]. Selain itu, dalam sebuah studi yang sangat baru-
baru ini yang menganalisis dampak infeksi H. poligyrus pada kolitis bakteri, para penulis
menunjukkan bahwa infeksi H. polygyrus menyebabkan perubahan signifikan pada
komposisi mikrobiota yang menyebabkan peradangan usus lebih parah [15]. Apakah
perubahan dalam akun microbiota untuk peningkatan mediator pro-inflamasi di usus besar
dan peningkatan keparahan colitis memerlukan penyelidikan lebih lanjut.

Selama kolitis akibat DSS, tidak adanya sel T fungsional, sel B dan sel NK, atau
bakteri komensal sangat penting untuk inisiasi proses inflamasi [36, 37]. Meskipun demikian,
pada tikus spesifik-patogen-bebas (SPF), gangguan penghalang epitel oleh DSS
menyebabkan pengaktifan sel kekebalan bawaan yang merasakan bakteri komensal dan
memulai peradangan. Sel T CD4 + diketahui terakumulasi di usus selama IBD [3, 38], dan
selama kolitis DSS, sel T yang spesifik terhadap antigen oral berkembang [39]. Dalam
penelitian saat ini, kami mencoba untuk mengidentifikasi pengaruh infeksi H. poligemus
pada respon imunologis pada kolitis akibat DSS. Menariknya, kita tidak dapat melihat
perbedaan frekuensi Treg antara tikus H. terinfeksi poligemus dan tidak terinfeksi yang
menderita radang, namun aktivasi dan proliferasi sel T CD4 + sel beta kolon hanya diamati
saat DSS mengobati tikus terinfeksi H. polygyrus. . Kolitis DSS sendiri tidak memperluas
atau mengaktifkan sel CD4 + secara signifikan. Selain itu, tingkat tinggi pro-inflamasi IL-6
dan CXCL1 diproduksi di usus besar H. polygyrus DSS tikus yang diobati. Pada pasien IBD
IL-6 berfungsi sebagai penanda prognostik karena peningkatan kadar serum berhubungan
dengan peningkatan aktivitas penyakit klinis. Dalam konteks ini, IL-6 bertindak sebagai
mediator pro-inflamasi yang berkontribusi terhadap peningkatan kelangsungan hidup sel T
dan ketahanan terhadap apoptosis dengan menginduksi aktivasi STAT3 [40, 41]. Selanjutnya,
IL-6 memfasilitasi perluasan sel Th17 yang merupakan produsen IL-6 sendiri dan mungkin
memiliki peran patogen dalam peradangan usus [42]. CXCL1 sangat diekspresikan dalam
mukosa kolon pasien IBD dan peran patofisiologisnya dapat ditunjukkan pada tikus yang
kekurangan CXCR2 reseptornya. Tikus ini menunjukkan perbaikan kolitis DSS disertai
pengurangan infiltrasi leukosit ke kolon [43]. Sejalan dengan itu, kami menunjukkan bahwa
peningkatan kadar IL-6 dan CXCL1 bersifat penyebab H. polygyrus yang menginduksi
amplifikasi peradangan usus karena penghambatan ekspresi IL-6 dan CXCL1 oleh
nanopartikel terfaktivasi siRNA secara signifikan mengurangi aktivitas penyakit pada H.
poligemus yang terinfeksi. DSS mengobati tikus. Peradangan yang memburuk diketahui
dapat mendorong pembentukan tumor. Dalam konteks ini, proliferasi sel inisiasi tumor
ditingkatkan oleh IL-6 sedangkan sel epitel intestinal normal dan premaligna terlindungi dari
apoptosis [28]. Selanjutnya, chemokine CXCL1 ditunjukkan untuk mempromosikan
angiogenesis pada kanker kolorektal [44]

Data kami menunjukkan bahwa peradangan yang diperbesar dapat dikaitkan dengan
peningkatan pertumbuhan tumor yang cukup besar. Kami telah menunjukkan bahwa pada
model CAC murine CD8 + sitotoksik T sangat penting untuk respons imun anti tumor yang
adaptif, sementara Foxp3 + Tregs memfasilitasi penekanan kekebalan [5]. Menariknya,
infeksi H. polygyrus selama pengembangan CAC menyebabkan pengurangan frekuensi CD8
+ T sel dalam usus besar. Untuk pengetahuan kami, penelitian kami adalah yang pertama
untuk mendeskripsikan hubungan infeksi H. polygyrus dan pengurangan sel CD8 + T yang
berkepanjangan dalam konteks karsinogenesis. Namun, temuan kami sangat sesuai dengan
pengamatan dari model koinfeksi murine dan human clminth. Infeksi cacing pada pasien
yang menderita tuberkulosis atau penerapan telur T. suis pada pasien multiple sclerosis
menyebabkan penurunan sel CD8 + T pada darah tepi [45, 46]. Pada tikus terinfeksi Ascaris
sp. dan virus Vaccinia, di mana respon sel CD8 + T sangat penting untuk perlindungan host,
penurunan frekuensi sel CD8 + T dan peningkatan mortalitas terdeteksi [47]. Untuk infeksi
H. polygyrus, dapat ditunjukkan bahwa tanggapan sel T CD8 terhadap T. gondii telah ditekan
dan tidak dapat dipulihkan. Ketika sel T CD8 + efektor ditransfer secara paksa pada tikus
yang terinfeksi H. polygyrus, jumlah dan perkembangan ingatannya terkena dampak negatif
[49]. Seberapa tepatnya infeksi cacing memodulasi respons sel CD8 + T, perlu diselidiki
lebih lanjut.

Infeksi H. poligemus menginduksi respon kekebalan Th2 yang kuat [50]. Peningkatan sel T
CD4 + yang menghasilkan IL-4 dapat dideteksi di usus besar beberapa minggu setelah infeksi
H. polygyrus. Hebatnya, pembentukan CAC secara signifikan mengurangi respons IL-4 sel
CD4 + setelah infeksi cacing yang disertai dengan kelangsungan hidup cacing yang
berkepanjangan. Lingkungan sitokin yang berubah selama peradangan usus dapat
menyebabkan imunogenik pada cacing. Hal ini dapat dikonfirmasikan dalam sebuah
penelitian dimana pemberian DSS ditunjukkan untuk meningkatkan adaptasi dan
pembentukan H. poligemus yang ditunjukkan dengan peningkatan produksi telur,
peningkatan panjang cacing dan distribusi larva yang berubah di usus kecil [51]. Sitokin yang
diukur dalam biakan eksplan usus besar dari H. poligyrus jangka panjang hanya tikus yang
terinfeksi menunjukkan kecenderungan peningkatan kadar IL-6 dan CXCL1 (Gambar 7D).
Sebaliknya, induksi CAC setelah infeksi H. poligirin secara signifikan mengurangi produksi
IL-6 dan CXCL1 di usus besar dibandingkan dengan tikus yang terinfeksi naif. Hasil ini
tampaknya mengejutkan karena orang akan memperkirakan bahwa perkembangan tumor
pada tikus CAC yang terinfeksi terhubung ke tingkat IL-6 dan CXCL1 yang lebih tinggi.
Namun, ada kemungkinan mediator pro-inflamasi ini mempromosikan peradangan pada
tahap awal pengembangan CAC dan ini cukup untuk meningkatkan karsinogenesis dalam
perspektif jangka panjang.

Sebagai kesimpulan, kami telah menunjukkan bahwa infeksi H. poligemus dalam konteks
kolitis akibat DSS dan CAC tidak memperbaiki peradangan kolon tapi mengaktifkan
kekebalan usus yang memfasilitasi perkembangan tumor. Data menunjukkan bahwa infeksi
H. polygyrus tidak hanya terkait dengan tanggapan sel CD4 + namun berdampak langsung
pada sel T CD8 + efektor. Dengan demikian, mekanisme modulasi kekebalan cacing harus
didefinisikan secara tepat sebelum diterapkan pada penyakit autoimun seperti IBD.

Bahan dan metode

Pernyataan etika Semua percobaan hewan dilakukan sesuai dengan pedoman kelembagaan,
negara bagian, dan federal (disetujui oleh Landesamt fuer Natur, Umwelt und
Verbraucherschutz, North Rhine-Westphalia, Jerman; nomor referensi: 84-02.04.2014.A243
dan 87-51.04.2010. A163).

Tikus

Enam sampai delapan minggu tikus betina perempuan BALB / c dibeli dari Envigo
(Rossdorf, Jerman). Tikus C.Cg-Foxp3tm2Tch / J (disebut Foxp3 / eGFP) mencit dan tikus
CBy.PL (B6) -Thy1a / ScrJ (disebut Thy1.1) (Laboratorium Jackson, Bar Harbor, ME)
dibesarkan di rumah dan digunakan pada usia enam sampai sepuluh minggu. Hewan
ditempatkan di bawah kondisi bebas patogen spesifik di Laboratorium Fasilitas Hewan di
Rumah Sakit Universitas Essen.

Induksi kanker usus besar kolitis dan kolonoskopi murine

Untuk menginduksi CAC, tikus diinjeksikan secara intraperitoneal dengan dosis tunggal
azoxymethane (AOM, 12,5 mg / kg berat badan; Sigma-Aldrich, Munich, Jerman), diikuti
oleh 3 siklus garam natrium dekstran sulfat 3% (DSS, MP Biomedicals , Eschwege, Jerman;
MW, 36-50 kDa) diberikan via air minum selama 5 sampai 7 hari. Karena kerentanan yang
meningkat terhadap tikus yang terinfeksi H. polygyrus terhadap pengobatan DSS, tikus ini
diobati dengan DSS 2% pada siklus pertama. Sepuluh sampai dua belas minggu setelah
injeksi AOM, distribusi tumor di bagian distal usus besar ditentukan oleh kolonoskopi murine
[52], dan skor tumor dihitung. Singkatnya, tikus itu dibius dengan suntikan keton / xilazin
intraperitoneal, dan endoskopi yang kaku (sistem miniendoskopik Colo-view, Karl Storz,
Tuttlingen, Jerman) dimasukkan sejauh mungkin ke dalam rektum di bawah kontrol visual.
Endoskopi direkam saat endoskopi perlahan ditarik, dimulai dari lentur dan berhenti di anus.
Ukuran tumor dinilai pada skala 1-5 menurut nilai berikut: grade 1 (tumor yang sangat kecil
tapi terdeteksi), grade 2 (tumor menutupi sampai kedelapan dari lingkar kolon), grade 3
(tumor yang menutupi sampai dengan seperempat lingkar kolon), kelas 4 (tumor menutupi
setengah dari lingkar kolon), dan kelas 5 (tumor menutupi lebih dari setengah lingkar kolon).
Skor tumor per tikus dihitung dengan menjumlahkan ukuran / nilai semua tumor pada tikus
yang diberikan.

Induksi kolitis DSS dan penentuan skor klinis

Tikus menerima 2% DSS (MP Biomedicals) dalam air minum selama 7 hari. DSS diganti
dengan air minum biasa dan tikus dikorbankan satu hari kemudian. Beberapa tikus terinfeksi
polinefrase 200 L3 H. 6 hari sebelum pengobatan DSS. Untuk mengetahui indeks aktivitas
penyakit (DAI, 0-12) kami menggunakan sistem penilaian yang divalidasi; DAI terdiri dari
kehilangan berat badan (1, 1-5%; 2, 6-10%; 3, 11-15%; 4, 16-20%), pendarahan rektum (0,
tidak ada darah; 2, darah terlihat; 4, perdarahan kotor) dan konsistensi tinja (0, normal; 2,
tinja longgar; 4, diare) [53].

Persiapan difungsikan CaP-PLGA nanopartikel dan aplikasi

in vivo

Nanopartikel CaP-PLGA difungsikan dengan siRNA yang diarahkan melawan IL-6 dan
CXCL1 dibuat seperti yang dijelaskan sebelumnya [54]. Singkatnya, nanopartikel shell
tunggal disintesis dengan mencampur sejumlah kalsium-l-laktat dan diammonium hidrogen
fosfat dengan cepat. Segera setelah pencampuran, dispersi kalsium fosfat dicampur dengan
larutan siRNA (4 mg mL-1, ilmu kesehatan GE, Chalfont St. Giles, Inggris) untuk
memfungsikan partikel-partikelnya. Untuk mengenkapsulasi nanopartikel kalsium fosfat
menjadi poli polimer biodegradable (d, l-lac- tide-co-glycolide) (PLGA, Resomer RG 502 H,
Evonik Industries, Darmstadt, Jerman), air-dalam-minyak-dalam-air Metode evaporasi
pelarut emulsi ganda diterapkan. Nanopartikel berlapis polyvinylalcohol yang terdispersi
(PVA) dikukus pada nitrogen cair dan diastilisisasi. Nanopartikel (8 μg setiap siRNA per
aplikasi) diberikan secara intrarektal ke dalam tikus yang diberi obat dengan jumlah kecil
isofluran menggunakan kateter kecil. Tikus diobati dari hari ke 1 dan seterusnya, setelah
dimulainya pengobatan DSS 2%. Tingkat keparahan kolitis dinilai oleh indeks aktivitas
penyakit.

Heligmosomoides infeksi poligirin

Siklus hidup polyigyrus Heligmosomoides dan produksi larva dilakukan di Universitas

Edinburgh seperti yang dijelaskan di tempat lain [55]. Tikus BALB / c terinfeksi dengan
larva 200 tahap ketiga (L3) oleh gavage oral baik pada minggu ke 0 (6 hari sebelum aplikasi
DSS pertama) atau pada minggu ke 8 (6 hari setelah aplikasi DSS terakhir) induksi CAC.
Jumlah telur tinja ditentukan menurut protokol standar [56].

Histologi dan imunohistokimia usus besar dan usus halus

Usus kecil dan titik dua disiapkan dan dibilas dengan PBS. Sekitar 1 cm kolon distal dan
ileum tertanam pada parafin. Bagian jaringan dari 4 μm diwarnai dengan hematoxylin dan
eosin (H & E) dan asam periodik Schiff (PAS) untuk menunjukkan mucopoly-saccharides.
Sel goblet dicacah dan mengacu pada panjang villi.

Usus kecil / Colon eksplan culture

Setelah persiapan usus kecil atau titik dua, mereka dibilas dengan PBS dan dipotong
longitudinal. Eksplan kecil dari bagian distal usus besar atau ileum diambil dan beratnya
ditentukan (sekitar 10-20 mg). Biopsi dibiakkan selama 6 jam dalam 300 μl RPMI
(Invitrogen) ditambah dengan FCS 25% yang tidak aktif, 25 mmol / L HEPES (Biochrom,
Berlin, Jerman), 100 U / mL penisilin, dan streptomisin 0,1 mg / mL (keduanya Sigma-
Aldrich) (media lengkap). Tingkat sitokin dalam supernatan diukur dengan uji Luminex
Assay Polystyrene (R & D Systems, Abingdon, Inggris). Pengujian dijalankan pada Luminex
200 instrumen Konsentrasi sitokin dihitung dengan menggunakan perangkat lunak Luminex
IS (Luminex Corporation, Austin, TX), dan dinormalisasi ke kolon / ileum masing-masing.
berat

Isolasi sel dan flow cytometry

Suspensi sel tunggal dari kelenjar getah bening mesenterika (mLNs) disiapkan dengan
menghubungkan kelenjar getah bening melalui saringan sel 70 μm dan mencuci dengan PBS
yang mengandung 2 mM EDTA dan FCS 2%. Lamina propria lymphocytes (LPLs) diisolasi
seperti yang dijelaskan sebelumnya [5]. Singkatnya, potongan jaringan usus besar dicuci di
PBS yang mengandung EDM 3 mM. EDTA dikeluarkan dengan cara mencuci jaringan
dengan RPMI yang mengandung 1% FCS, 1 mM EGTA, dan 1,5 mM MgCl2. Sel tunggal
diperoleh dengan mencerna jaringan di RPMI yang mengandung 20% FCS dan 100 U / mL
collagenase (Clostridium histolyticum, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) pada suhu 37 ° C
selama 1 jam dengan filtrasi berikutnya melalui sel 40 μm dan 30 μm. saringan.
Untuk analisis flow cytometry, sel tunggal diinkubasi dengan antibodi berlabel fluorochrome
terhadap CD4 (RM4-5 atau H129.19; BD Biosciences, Heidelberg, Jerman), CD8 (53-6.7;
BD Biosciences), CD62L (MEL-14; BD Biosciences), CD90.1 (OX-7; BD Biosciences),
Ki67 (SolA15; eBioscience), IL-4 (11B11; BD Biosciences), dan Foxp3 (FJK-16;
eBioscience). Kit pewarnaan Foxp3 dari eBioscience digunakan sesuai dengan rekomendasi
pabrikan untuk menodai Foxp3 dan Ki67 secara intraselular. Untuk menilai IL-4, sel dikultur
selama 4 jam dengan 10 ng / mL PMA dan 1 μg / mL ionomycin dengan adanya 5 μg / mL
Brefeldin A (semua Sigma-Aldrich) di media yang lengkap. Setelah pewarnaan permukaan,
sel-sel diperbaiki dengan 2% paraformaldehida, dimetabsorbsi dengan 0,1% NP-40, dan
diwarnai dengan antibodi terhadap IL-4. Sel diperoleh dengan instrumen LSR II dan
dianalisis dengan menggunakan perangkat lunak DIVA (keduanya dari Biosciences BD).

Uji penghambatan

CD4 + Foxp3 + (eGFP +) Tregs dimurnikan dari mLN tikus reporter Foxp3 / eGFP naif dan
tikus Foxp3 / eGFP yang terinfeksi H. polygyrus selama 10 hari dengan menggunakan
penyortir sel FACSAria II (BD Biosciences). Menggunakan kit isolasi sel T + CD4 II
(Miltenyi Biotec, Bergisch-Gladachach, Jerman), sel T CD4 + responden diperkaya dari
limpa tikus I1.1 yang naif. Sel T CD4 + responden diberi label dengan eFluor670
(eBioscience). 1 × 105 sel T CD4 + responden dikultur sendiri atau dikoordinasi dengan CD4
+ Foxp3 + (eGFP +) Tregs (1 × 105) selama 3 hari di media lengkap dengan adanya 1 μg /
mL anti-CD3 (2C11; BD Biosciences ) dan splenosit yang teraliasi dari tikus BALB / c naif,
yang berfungsi sebagai sel penyajian antigen (APCs) (3 × 105).

Analisis statistik

Data dinyatakan sebagai mean ± SEM. Hasil diuji untuk distribusi normal dengan uji
normalitas Kolmo- gorov-Smirnov atau D'Agostino & Pearson omnibus. Bila sesuai, tes t
Student tidak berpasangan atau uji Mann Whitney digunakan untuk membandingkan dua
kelompok. Perbedaan antara sarana lebih dari dua kelompok dinilai menggunakan ANOVA
satu arah yang diikuti oleh Uji Perbandingan Beberapa Tukey atau Dunn. Signifikansi
statistik antara dua kelompok pada titik waktu yang berbeda dihitung dengan menggunakan
ANOVA dua arah yang diikuti oleh postest Bonferroni. Plot Kaplan-Meier digunakan untuk
menganalisis pemulihan tikus yang terinfeksi H. polygyrus. Perbandingan kurva survival
dilakukan dengan menggunakan uji log-rank (Mantel-Cox). Signifikansi statistik ditetapkan
pada tingkat p <0,05. Semua analisis dihitung dengan menggunakan perangkat lunak
GraphPad Prism 7.03 (La Jolla, CA).

Informasi pendukung

Metode S1 Induksi kolitis pada RAG2 - / - dan tikus transgenik VILLIN-HA.

(DOCX)

S1 Infeksi H. poligemus menurunkan produksi sitokin pro-inflamasi di usus kecil. Pada hari
ke 1, tikus terinfeksi dengan 200 larva stadium-tiga larva (L3) H. poligemus dengan
pembiakan oral. Enam hari kemudian, DSS diberikan melalui air minum selama 7 hari dan
tikus diberi krepala pada hari ke 15. (A) Usus kecil disiapkan dan bagian jaringan perwakilan
dari tikus DSS dan DSS + H. Tikus poli diperbaiki dan diwarnai dengan hematoxylin dan
eosin (H & E) atau asam periodik Schiff (PAS) untuk menunjukkan perubahan patologis.
Gambar menunjukkan pembesaran pada x200. (B) Sel goblet di bagian bernoda PAS dihitung
dan disebut panjang villi. Bar mewakili mean ± SEM data dari satu percobaan (naif, n = 2;
naif + H.poly, n = 3; DSS, n = 3; DSS + H.poly, n = 2). Signifikansi statistik dihitung dengan
menggunakan ANOVA satu arah diikuti oleh Uji Perbandingan Multiple Tukey (, p 0,05 ;, p
0,01). (C) Biopsi dari sampel usus kecil dikultur secara in vitro selama 6 jam dalam media
kultur. Tingkat IL-6 dan CXCL1 pada supernatan ditentukan oleh Luminex. Bar
menunjukkan rata-rata ± SEM sitokin per miligram dari 3 percobaan (naif, n = 10; naif +
H.poly, n = 12; DSS, n = 11; DSS + H.poly, n = 11). Signifikansi statistik dihitung dengan
menggunakan ANOVA satu arah diikuti oleh Uji Perbandingan Beberapa Dunn (, p 0,05 ;, p
0,01).
(TIF)

Infeksi H. polygyrus S2 tidak melindungi dari RAG2 - / - dan kolitis transgenik sel VILLIN-
HA. (A) Skema jadwal waktu infeksi H. polygyrus (H.poly) dan induksi kolitis transfer sel T
pada tikus RAG2 - / -. Pada minggu ke 0, tikus RAG2 - / - terinfeksi dengan 200 larva
stadium tiga larva (L3) H. polygyrus oleh gavage oral. Dua minggu kemudian, sel CD4 +
CD45RBhi 5x105 disuntikkan i.p. ke dalam RAG2 - / - tikus atau tikus RAG2 - / - tikus yang
terinfeksi. Pada minggu ke 9 tikus dikorbankan dan kolon disiapkan (B) Bagian jaringan
perwakilan sampel usus besar dari RAG dan RAG + H. Tikus poli diperbaiki dan diwarnai
dengan hematoxylin dan eosin (H & E) menunjukkan perubahan patologis. Gambar
menunjukkan pembesaran pada x200. Tingkat keparahan kolitis dinilai dengan menilai
perubahan patologis. (C) Biopsi dari sampel usus besar diinkubasi secara in vitro selama 6
jam dalam medium kultur. Tingkat IL-6 dan CXCL1 pada supernatan ditentukan oleh
luminex dan sitokin per miligram jaringan usus besar dihitung. Grafik menunjukkan mean ±
SEM tikus individu dari 1 percobaan (RAG, n = 4; RAG + H.poly, n = 4). (D) Skema jadwal
waktu infeksi H. polygyrus (H.poly) dan induksi kolitis transfer sel T pada tikus VILLIN-
HA. Pada minggu ke 0, tikus VILLIN-HA terinfeksi dengan 200 larva stadium tiga larva (L3)
H. polygyrus dengan pembuahan oral. Dua minggu kemudian, sel-sel polimetrik spesifik-
CD4 + Thx 3x106 disuntik i.v. ke tikus VILLIN-HA atau tikus HILL VILLIN-HA yang baru
terinfeksi. Lima hari setelah tikus transfer sel T dikorbankan dan titik dua disiapkan. (E)
Bagian jaringan perwakilan sampel usus besar dari VILLIN-HA dan VILLIN-HA + H. Tikus
poli tetap dan diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H & E) untuk menunjukkan
perubahan patologis. Gambar menunjukkan pembesaran pada x200. Tingkat keparahan
kolitis dinilai dengan menilai perubahan patologis. Grafik menunjukkan rata-rata ± SEM
tikus individu dari 1 percobaan (VILLIN-HA, n = 4; VILLIN-HA
+ H.poly, n = 4)

Ucapan Terima Kasih

Penulis mengakui Christian Fehring dan Mechthild Hemmler-Roloff atas bantuan teknis yang
sangat baik. Kami berterima kasih kepada Daniela Catrini atas pembacaan naskah yang kritis