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PIURA
ESCUELA DE POSTGRADO
Febrero de 2016
INDICE
I. Introducción
II. Generalidades
a) El crudo Petróleo
b) Refinado del Crudo Petróleo
c) Biorremediación de Petróleo
diésel
d) Biosurfactantes
III. Objetivos
I V. Materiales y Métodos
V. Resultados
VI. Referencias
I . I n t r o d u c c i ó n :
La industria petroquímica es importante en una sociedad moderna, no obstante la
falta de un programa de protección ambiental, hace que el medio ambiente se contamine
al producirse derrames de petróleo, principalmente de crudo, por un deterioro de
los oleoductos, descargas de efluentes contaminados, afloramientos naturales a
través de fisuras de la corteza terrestre y debido a la producción, transporte y
almacenamiento de este recurso natural. A nivel mundial, el volumen de derrame de
petróleo es de 1.7 a 8.8 millones de toneladas métricas por año y en nuestra región
(Pacífico Sudeste) es de 6000 toneladas métricas al año. En el Perú se registran
derrames de petróleo desde 1978, uno de ellos fue el producido en el oleoducto
marino de Talara, estando entre los últimos el ocurrido el año 2000 en el río Marañón
que afectó la Reserva Pacaya-Samiria y el producido el 30 de enero del 2008 en el
que, debido a una explosión producida en un barco carguero, se derramaron frente al mar
de tumbes 1,300 barriles de crudo de petróleo. Pero no solo derrames mayores causan
contaminación si no también los constantes derrames accidentales en suelos de
nuestra selva, los que se producen por el rompimiento del Oleoducto Nor-Peruano,
debido a accidentes naturales y por la actividad extractiva. Los mar es del planet a
sufren cada año m illones de pequeños der ram es
cont am inantes procedentes de barcos, refinerías costeras y plataformas
petrolíferas. Un estudio de la Univer sidad Polit écnica de Cataluña advierte
de que el im pact o am biental de los pequeños vertidos diarios es mucho mayor
que el ocasionado por un gran accidente y han lanzado una seria advertencia sobre
el enorme impacto ambiental que provocan los pequeños vertidos de petróleo
-desde un litr o a unas 80 toneladas- por su excesiva frecuencia.
I I . G e n e r a l i d a d e s :
a. El crudo de petróleo:
El crudo de petróleo se caracteriza por ser un líquido verdusco oscuro,
viscoso y con una composición química sumamente compleja, pudiendo
contener miles de compuestos, básicamente de la familia de los
hidrocarburos. Los hidrocarburos componen la familia predominante de
compuesto (un 50%-98% de la composición), por lo que constituyen uno
de los grupos de contaminantes ambientales más importantes, tanto por
su abundancia, como por su persistencia en distintos compartimentos
ambientales. Mayoritariamente son alcanos de cadena lineal (n-alcanos o
n-parafinas), alcanos ramificados (en menor cantidad), ciclo alcanos (o
naftenos) y cantidades variables de hidrocarburos aromáticos. La
composición elemental de un crudo está condicionada por la
predominancia de los compuestos tipo hidrocarburo: 84-87% de C, 11-14%
de H, de0-8% de S, y de 0-4% de O y N y metales como el níquel y el
vanadio. Los principales componentes se subdividen y purifican en
distintas fracciones: i) fracción saturada (n-alcanos, alcanos ramificados
con cadenas alquílicas y las ciclo parafinas),ii) fracción aromática (mono
aromáticos, di aromáticos e hidrocarburos aromáticos (HAPs), iii) fracción
de resinas y iv) fracción de asfáltenos que son menos abundantes y
consisten en compuestos más polares, pudiéndose encontrar hidrocarburo
heterocíclicos, hidrocarburos oxigenados y agregados de alto peso
molecular.
Fig. 1.1 Estructuras químicas de diferentes componentes de un crudo de petróleo
d. Biosurfactantes:
Se dice que un soluto es un agente tenso activo o surfactante cuando da
lugar a un descenso significativo de la tensión superficial. El descenso
de la tensión facilita la eliminación de las partículas de la suciedad de las
superficies sólidas. Son moléculas que contienen un segmento liposoluble
(soluble en aceite) y otro hidrosoluble (soluble en agua o disolventes
polares). La solubilidad parcial tanto en agua como en aceite permite al
surfactante ocupar la interface. Así pues, reducen la tensión superficial
y las tensiones interfaciales entre moléculas individuales en la superficie y
la interfase, respectivamente. Tienen propiedades emulsionantes.
Atendiendo a estos criterios un biosurfactante sería una molécula
biológica (orgánica) con propiedades surfactantes o tenso activas
producidas sobre superficies vivas, mayormente superficies de células
microbianas, o excretados al medio extra celular.
Con excepción del poder bactericida de ciertos surfactantes, fenómeno del
cual no hay una explicación absolutamente segura, se pude decir que
todas las propiedades y uso de los surfactantes provienen de dos
propiedades fundamentales de estas sustancias: su capacidad de
absorberse a las interfaces y de otra parte su tendencia a asociarse para
formar estructuras organizadas.
Nutrientes inorgánicos.
Las concentraciones de nitrógeno y fósforo asimilables presentes en el
suelo, suelen ser lim it antes para un increment o y activación de la
población m icr obiana, m ient ras que otros nut rientes esenciales
como el Ca2 Na+, Fe2+y SO42- ya est án presentes en cantidades suficientes
en el suelo. La adición de fuent es de N y P inor gánicas, gener alm ente
tiene un efecto positivo incrementando las poblaciones microbianas y las
tasas de biodegradación de hidrocarburos en suelos contaminados. Las
proporciones molares de C:N:P, descritas en la bibliografía, r especto al
cont enido de carbono a degr adar son muy dist int as. La Agencia de
Protección Ambiental de USA recomienda utilizar proporciones C:N
de100:10 a 1000:10 para la biodegradación de suelos contaminados por
hidrocarburos, y dentr o de est e intervalo se han descr it o proporciones
C: N de 600:10, 500: 10 y de 100:10:1 a 300:10:1 respecto al Carbono
Orgánico Total a degradar. Aunque en general la adición de fuentes inorgánicas
de N y P al suelo es beneficiosa para los procesos de biodegradación,
existen estudios que han descrito efectos inhibitorios en la adición de
nutrientes inorgánicos. Además es importante destacar que la acción de los
nutrientes inorgánicos puede estar limitada debido a la interacción química con los
minerales del suelo (el amonio se puede unir a las arcillas por intercambio
catiónico y el fosfato puede unirse y precipitar con iones calcio, hierro y aluminio).
Microorganismos reportados como degradadores de Petróleo:
- Todos los ecosistemas acuáticos y marinos contienen algún tipo de
microorganismo degradadores degradadores de petróleo, entre los géneros
reportados están:
- Bacterias:
- H o n g o s :
I I I . O b j e t i v o s :
-Aislar bacterias degradadoras de Petróleo Diesel.
-Cuantificar la actividad degradativa del Petróleo Diesel de cada una de
las bacterias aisladas.
I V. M a t e r i a l e s y M é t o d o s :
Materiales:
Muestra: 100 g de suelo de servicentro contaminado con Petróleo Diesel.
Medios: Agar Bushnell Hass, Agar Tripticasa Soya, Petróleo Diesel.
Frascos estériles.
Tubos de dilución
Tubos medianos
Placas de Petri
Gradillas
Mechero Bunsen
Asas bacteriológicas
Viales
Pipetas
Jeringas
Biorreactores tipo tanque Bacht Air Lift
Método:
Enriquecimiento de las muestras de suelo y adaptación de losmicroorganismos a
concentraciones crecientes de petróleo.
Diseñar y acondicionar dos biorreactores tipo tanque Bacht Air Lift con flujo
descendente de 1 L de capacidad.
Pesar 50 g de muestra de suelo previamente tamizada y llevarla hacia un
biorreactor conteniendo 100 mL de caldo Bushnell Hass (BH) con 1% dePetróleo
Diesel.
Incubar a 30 ºC durante 72 h.-Tomar 10 mL de la muestra enriquecida y llevarla
hacia el segundo biorreactor conteniendo 100 mL de caldo BH con 2% de Petróleo
Diesel. Lavar y esterilizar el primer biorreactor.
Incubar a 30 ºC durante 72 h
Tomar 10 mL de la muestra enriquecida y llevarla hacia el primer
biorreactor conteniendo 100 mL de caldo BH con 4% de Petróleo Diesel.
-Incubar a 30 ºC durante 72 h.
Aislamiento de las bacterias degradadoras de Petróleo Diesel.
A partir de la m uestr a enr iquecida en caldo BH con 4% de Petr óleo
Diesel (PD) tomar una alícuota y sembrarla mediante la técnica de
agotamiento y estría sobre la superficie de placas de Petri conteniendo Agar BH
con 4% de PD.
Incubar a 30 ºC durante 48 h.
Seleccionar y repicar las cinco colonias que presenten la
m a y o r b i o m a s a y m a y o r rapidez en el crecimiento hacia viales
conteniendo agar BH con 4% dePD y agar Tripticasa Soya (TSA).
Incubar a 30 ºC durante 48 h.
Conservar las cepas de bacterias biodegradador as de PD en
refr igeración
Cuantificación de la actividad degradativa sobre el PD de cada una de las cepas de
bacterias aisladas.
La actividad degradativa sobre el PD de cada una de las cepas bacterianas aisladas será
cuantificada a través del tiempo requerido para la utilización del PD como fuente
de carbono y energía y del número de Unidades de Actividad Emulsificante (UAE) de
cada una de ellas.
Preparación del inóculo:
Reactivar cada una de las cepas bacterianas degradadoras del PD en 5 mL
de caldo nutritivo a 30 ºC durante 24 h.
Centrifugar el caldo nutritivo a 3500 RPM durante 15 min; eliminar el
sobrenadante y lavar el sedimento con SSFE por dos veces.
Con el paquete celular obtenido preparar una suspensión de células en
SSFE y estandarizarla con el tubo Nº 3 del Nefelómetro de McFarland
(9x108 células/ml)
V. R e s u l t a d o s :
-Tiem po requer ido par a la ut ilización del PD com o fuent e de carbono y
ener gí a:
Inóculos a 15 días
Con el tubo blanco se lee la absorbancia a 540 nm. Luego los resultados obtenidos se los
divide entre 0.816 (1 UAE = 0.816).-Identificación de las cepas aisladas:
VI. Referencias:
http://biblioweb.dgsca.unam.mx/cienciasdelmar/centro/1975-1/articulo11.html20