SESIÓN PRÁCTICA 2

TÉCNICAS HISTOQUÍMICAS APLICADAS AL ESTUDIO DEL

SISTEMA NERVIOSO
Objetivos

El objetivo principal de esta práctica es demostrar cómo diferentes métodos de tinción aportan una
“visión” distinta sobre la estructura microscópica del encéfalo.
Para ello, se va a realizar una tinción general del tejido nervioso (tinción de Nissl), junto con una
tinción específica (técnica histoquímica de la diaforasa).
Posteriormente, se realizará una observación microscópica detallada, comparando la “apariencia”
de una misma región (corteza cerebral, hipocampo, etc.) con ambos métodos de tinción.

Metodología
Estas técnicas se realizan sobre cortes histológicos de material fijado, por lo que los pasos previos
son similares a los que se emplean para la mayoría de los tejidos/órganos animales.
Se emplearán cortes coronales de encéfalo de ratón.

1. Tinción histoquímica (NADPH-diaforasa)

Protocolo básico
Se realiza con los cortes sin montar (cortes free-floating)
1. Lavar los cortes en PB 0.1M (3 lavados de 10 minutos cada uno)
2. Incubar en PB 0.1M + 0.25% Tritón-x (PB/Tx) durante 10 minutos
3. Pasar los cortes a la solución de incubación que contiene: 0,5 mg/ml de NADPH y 0,2 mg/ml
de Nitro Blue Tetrazolium, en PB/Tx
4. Colocar los cortes en el medio de incubación en la estufa a 37ºC durante 3-4h (controlar)
5. Transcurrido ese tiempo, sacar los cortes del medio de incubación y lavarlos con PB 0.1M (así
paramos la reacción)
6. Montar los cortes sobre portaobjetos gelatinados, y dejar secar hasta el día siguiente.
7. Deshidratar, aclarar y montar

2. Tinción de tipo Nissl (violeta de cresilo)

Protocolo básico
Cortes pegados sobre portaobjetos
1. Lavar los cortes en agua destilada, durante 1-3 minutos
2. Violeta de cresilo al 1%, durante 5-10 minutos
3. Lavar en agua destilada, 1 minuto aprox.
4. Diferenciar en alcohol de 70% con acético, 15 segundos
5. Deshidratar (etanol 96%, etanol 100%), aclarar (Citrosol) y montar con DPX