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TALLER ENZIMAS E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

DANIEL BEJARANO VILLAFAÑE 00011001580


ANDRÉS MAURICIO GALLEGO HERRERA 98112111824

Universidad de Antioquia.
Facultad de Medicina.
Biología de La Célula I.
1. Comportamiento del valor de Vmáx de la enzima y del valor de Vmáx app de la enzima
inhibida.

a. Para un inhibidor competitivo la velocidad máxima aparente es igual a la velocidad


máxima, la única diferencia es que en la reacción sin inhibidor la velocidad máxima
se alcanza con menores concentraciones de sustrato que en el sistema en que el
inhibidor está presente. Esto sucede debido a que el inhibidor competitivo interfiere
en la formación de ES más no en la catálisis de producto.
b. En una inhibición causada por un inhibidor de naturaleza no competitiva la Vmáxapp
es menor con respecto a la Vmáx de la reacción sin el inhibidor, debido a que este
tipo de inhibidor obstaculiza la catálisis al unirse al complejo ES.
c. Los inhibidores mixtos, al ser similares a los de tipo no competitivo, causan el mismo
efecto sobre la Vmáx de la reacción, creando una Vmáxapp menor ya que dificulta
la formación de producto al afectar el complejo ES.

2. Comportamiento del valor de Km de la enzima y del valor de Km app de la enzima inhibida.

a. Un inhibidor competitivo afecta de forma directa la unión del sustrato a la enzima,


por tanto, cambia el valor de la Km, creando una Kmapp mayor a la Km sin inhibidor.
b. Un inhibidor No competitivo no afecta la Km, es decir no influye en la unión del
sustrato a la enzima.
c. En la inhibición mixta, al igual que en la inhibición competitiva, se altera la unión del
sustrato a la enzima, y se crea una Kmapp mayor al Km de la reacción original.

3. Consideración de un inhibidor más eficiente para los gráficos del modelo 1.

a. Inhibidor competitivo: Un nuevo inhibidor competitivo más eficiente, estaría


modelado por una función lineal cuyo corte en el eje X sería un valor negativo,
mayor al valor del corte presentado en reacción inhibida en la gráfica del modelo 1,
y con un intercepto igual al del inhibidor menos eficiente. Esto porque un inhibidor
competitivo afectaría en mayor medida la formación del complejo enzima sustrato,
y por tanto un aumento en la Km.
b. Inhibidor acompetitivo: Un inhibidor acompetitivo más eficiente, tendrá la misma
pendiente que las líneas presentadas en la segunda gráfica del modelo 1. Esta
disposición se debe a que gracias a su mayor eficiencia disminuirá tanto la Km
como la Vmáx.
c. Inhibidor mixto: Al tener una mayor eficiencia, el nuevo inhibidor aumentaría aún
más los valores de la Km y la Vmáx, aumentando el primero y disminuyendo el
segundo. Así, su gráfica tendrá un corte en X negativo, más alejado de cero con un
intercepto en Y mayor.
4. Extrapolaciones de datos presentes en el modelo 2

Gráfica de doble recíproco. Realizada a partir de los datos de la tabla y gráfica del modelo
2 del taller enzimas e inhibición enzimática. Se extendieron las líneas para encontrar el
intercepto con los ejes X y Y, y se nombraron estos interceptos según el parámetro
cinético que les corresponde.

Velocidad [(mmol/L)*min-1]
[S] Sin Inhibidor Inhibidor B Inhibidor B
(mmol/L) inhibidor A (3mM) (5mM)
1,26 1,72 0,98 1,25 1,01
1,67 2,04 1,17 1,54 1,26
2,50 2,63 1,47 2,00 1,72
5,00 3,33 1,96 2,86 2,56
10,00 4,17 2,38 3,70 3,49
Tabla Velocidades de reacción. En esta tabla se muestran las velocidades de reacción
de: un sistema sin inhibidor, uno al que se le adiciona un Inhibidor A, y dos a los que se
le agrega un Inhibidor B pero a diferente concentración. Velocidades dependientes de la
concentración de sustrato. Tabla tomada del modelo 2 del taller
5. Predicciones para hallar el tipo de inhibición de cada inhibidor presente en el modelo 2.
Vmáx Km Vmáxapp Kmapp
Sin inhibidor 𝑦 = 0,4843𝑥 + 0,1951 5,1256 2,4820
Inhibidor A 𝑦 = 0,8582𝑥 + 0,3369 5,1256 2,4820 2,9682 2,5473
Inhibidor B (3mM) 𝑦 = 0,755𝑥 + 0,1969 5,1256 2,4820 5,0787 3,8344
Inhibidor B (5mM) 𝑦 = 1,006𝑥 + 0,1861 5,1256 2,4820 5,3735 5,4054
Tabla de datos para predicción del tipo de inhibición de cada inhibidor. La tabla presenta
las ecuaciones que modelan las líneas en la gráfica de doble recíproco, para cada
sistema presentados anteriormente, junto con los parámetros cinéticos calculables a
partir de estas ecuaciones. Tabla tomada del taller de enzimas e inhibición enzimática y
completada con valores calculados a partir de las ecuaciones presentes en la tabla.

Ya que en la gráfica de doble reciproco el intercepto con el eje Y (cuando x es igual a 0),
es equivalente a 1/Vmáx, se puede hallar el valor de Vmáx a partir de la ecuación lineal
planteada en la tabla anterior, de esta manera:

𝑦 = 0,4843𝑥 + 0,1951
𝑦 = 0,4843(0) + 0,1951 → se reemplaza x por cero
𝑦 = 0,1951
1
= 0,1951
𝑉𝑚á𝑥
1
𝑉𝑚á𝑥 =
0,1951
𝑉𝑚á𝑥 = 5,1256
Igualmente, puesto que el corte con el eje X es equivalente a -1/Km, es posible calcular
el valor de Km para el sistema, del siguiente modo:
𝑦 = 0,4843𝑥 + 0,1951
0 = 0,4843𝑥 + 0,1951 → se iguala y a cero y se procede a despejar x
0,1951
𝑥=−
0,4843
𝑥 = −0,4029
−1
= −0,4029
𝐾𝑚
−1
𝐾𝑚 =
−0,4029
𝐾𝑚 = 2,4820
De este mismo modo, a partir de las demás ecuaciones, es posible hallar los valores de
las Kmapp y Vmáxapp para cada sistema presentado en la gráfica del modelo 2. Para todos
los sistemas el valor de Vmáx y Km es el mismo, ya que la enzima es igual en todos los
sistemas, y estos datos son necesarios para poder realizar una comparación con los
datos aparentes de los sistemas y poder determinar el tipo de inhibición presentada en
cada caso.
Inhibidor A: 𝑦 = 0,8582𝑥 + 0,3369
𝑦 = 0,8582(0) + 0,3369 0 = 0,8582𝑥 + 0,3369
0,3369
𝑦 = 0,3369 𝑥 = − 0,8582
1
𝑎𝑝𝑝 = 0,3369 𝑥 = −0,3926
𝑉𝑚á𝑥
−1
= −0,3926
𝑎𝑝𝑝 1 𝐾𝑚
𝑉𝑚á𝑥 =
0,3369 −1
𝑎𝑝𝑝
𝐾𝑚 =
𝑉𝑚á𝑥 = 2,9682 −0,3926
𝐾𝑚 = 2,5471

Inhibidor B (3mM): 𝑦 = 0,755𝑥 + 0,1969


𝑦 = 0,755(0) + 0,1969 0 = 0,755𝑥 + 0,1969
𝑦 = 0,1969 0,1969
𝑥=−
1 0,755
𝑎𝑝𝑝 = 0,1969
𝑉𝑚á𝑥 𝑥 = −0,2608
1 −1
𝑎𝑝𝑝 = −0,2608
𝑉𝑚á𝑥 = 𝐾𝑚
0,1969
𝑎𝑝𝑝
𝑉𝑚á𝑥 = 5,0787 −1
𝐾𝑚 =
−0,2608
𝐾𝑚 = 3,8344
Inhibidor B (5mM): 𝑦 = 1,006𝑥 + 0,1861
𝑦 = 1,006(0) + 0,1861 0 = 1,006𝑥 + 0,1861
𝑦 = 0,1861 0,1861
𝑥=−
1 1,006
𝑎𝑝𝑝 = 0,1861
𝑉𝑚á𝑥 𝑥 = −0,1850
1 −1
𝑎𝑝𝑝 = −0,1850
𝑉𝑚á𝑥 = 𝐾𝑚
0,1861
𝑎𝑝𝑝
𝑉𝑚á𝑥 = 5,3735 −1
𝐾𝑚 =
−0,1850
𝐾𝑚 = 5,4054
6. Tipo de inhibición de cada inhibidor del modelo 2
El inhibidor A corresponde a un inhibidor de naturaleza no competitiva, y el B es de tipo
competitivo. Esta conclusión se puede extraer de la gráfica teniendo en cuenta el
parámetro cinético que altera cada inhibidor, en el caso A, se altera el valor de Vmáx
disminuyéndola, pero se mantiene constante la Km (comportamiento propio de los
inhibidores no competitivos). Por su parte, el inhibidor B a ambas concentraciones
aumenta el valor de la Km, sin alterar la Vmáx, lo cual corresponde a una inhibición
competitiva.
7. ¿Qué indica un valor grande de Ki de un inhibidor competitivo acerca de su potencia
de inhibición?
A mayor Ki menor potencia de inhibición, esto debido a que un Ki con un valor grande
implica un Kmapp de menor variación en comparación con el Km de la reacción, y si existe
una variación pequeña en este valor la velocidad de la reacción será disminuida, más no
de manera tan significativa como con un inhibidor de Ki menor.