IMPORTANCIA DE LAS REGIONES NO CODIFICANTES DEL ADN

Un gen es un segmento de DNA que al expresarse da un producto funcional que puede ser una
proteína o un RNA.

2. Un genoma es el conjunto de genes que contiene la información necesaria para que una célula
pueda existir y reproducirse, es decir, son todos los genes de un organismo.

Las regiones intergénicas o extragénicas (regiones no codificantes) constituyen cerca del 95% del
genoma completo y su función es generalmente desconocida. El estudio del genoma se asoció en sus
inicios al estudio de los genes, los codificadores de proteínas (conocidas como los ladrillos de la
vida). El ADN codificante constituye una pequeña parte del genoma completo, en torno al 5% en
humanos. “El resto del genoma, compuesto de secuencias repetidas o no codificantes, es un área de
difícil análisis.
“En los últimos años, la comunidad científica ha tenido que admitir que el ADN intergénico
contiene muchas de las claves que permiten explicar por qué los genes se activan en determinados
momentos del desarrollo, o por qué lo hacen en unas células y no en otras”. Gran parte del ADN
intergénico puede ser un artefacto evolutivo sin una función determinada en el genoma actual, dado
el papel regulador conocido de muchas de estas secuencias. Además el notable grado de
conservación evolutiva de algunas de estas secuencias parece indicar que poseen otras funciones
esenciales aún desconocidas o poco conocidas.

Asimismo, estudios detallados han identificado un número mucho mayor de secuencias de inicio de
transcripción por gen, algunas muy alejadas de la región proxima a la traducida. Como
consecuencia, actualmente resulta más complicado definir una región del genoma como génica o
intergénica, dado que los genes y las secuencias relacionadas con los genes se extienden en las
regiones habitualmente consideradas intergénicas. La función de este elemento repetido ya había
sido asociada con anterioridad a la respuesta a estrés celular o frente a la infección por un virus.

El investigador del CSIC y coautor del trabajo, Lluis Montoliu, que trabaja en el Centro Nacional de
Biotecnología (del CSIC), en Madrid, explica la principal motivación de este estudio: “Tratamos de
dar sentido al ADN que parecía no importarle a nadie porque no codifica genes.

En este caso particular, los autores han analizado en ratones un elemento denominado SINEB2, que
aparece repetido en el ADN de multitud de mamíferos y, en menor medida, en el ser humano.
Según sus conclusiones, la activación de esta secuencia determina la expresión del gen de la
hormona del crecimiento. El equipo ha demostrado que determinadas alteraciones de SINEB2,
adyacente a la hormona del crecimiento del ratón, provocan la pérdida de expresión de este gen,
implicado en el crecimiento de las células, en la mitosis, el envejecimiento y la longevidad. El
déficit de esta hormona en el organismo propicia, por ejemplo, enanismo.

La relevancia del hallazgo estriba en que esta alteración de SINEB2, que se sitúa en regiones muy
alejadas del cuerpo del gen del crecimiento, provoca el mismo efecto que si se mutara directamente
la zona codificante de la propia hormona: en ambos casos, se pierde la expresión del gen. La
explicación de la patología se encuentra en zonas reguladoras del genoma intergénico, incluso en
áreas alejadas del propio gen.

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Estudios recientes enmarcados en el proyecto ENCODE han obtenido resultados sorprendentes, que
exigen la reformulación de nuestra visión de la organización y la dinámica del genoma humano.
Según estos estudios, el 15% de la secuencia del genoma humano se transcribe a ARN maduros, y
hasta el 90% se transcribe al menos a transcritos inmaduros en algún tejido. Así, una gran parte del
genoma humano codifica genes de ARN funcionales. Esto es coherente con la tendencia de la
literatura científica reciente a asignar una importancia creciente al ARN en la regulación génica.

Determinadas secuencias deciden el momento y la acción de determinados genes.

Otras reprimen su actividad o la potencian.

LA CUANTIFICACIÓN Y EL ANÁLISIS DEL ADN

Luego de la extracción del ADN, son necesarias la cuantificación y el análisis de la calidad de las
moléculas obtenidas. La cuantificación del ADN se puede llevar a cabo por estimación de la
intensidad de una banda en geles de agarosa en el que el ADN es teñido por algún colorante como
Bromuro de Etidio, Syber Green o Gel Red, o bien mediante técnicas de espectrofotometría de luz
ultravioleta.

Uno de los métodos más utilizados para la cuantificación del ADN es el análisis de la absorción
UV, ya que los nucleótidos poseen máximos de absorción alrededor de 260 nm. Este método
proporciona una estimación simple y precisa de la concentración de una muestra, pero sólo si ésta
se encuentra pura, sin contaminación significativa de proteínas o solventes orgánicos que absorben
a longitudes de onda cercanas. Para evaluar la pureza de la muestra debe determinarse la proporción
OD 260nm/OD 280nm. Si la relación es mayor a 1,6 puede estimarse que la muestra es lo bastante
pura para confiar en la cuantificación espectrofotométrica. La calidad de las moléculas extraídas se
analiza por electroforesis en gel de agarosa. La agarosa es un polisacárido altamente purificado
derivado del agar. Se utiliza para separar macromoléculas tales como ácidos nucleicos y grandes
complejos proteicos.

El ADN esta homogéneamente cargada de forma negativa a pH neutro, por lo que la relación carga:
masa es constante. Su velocidad de migración del ADN en la matriz de agarosa está determinada
por una serie de parámetros:

 Tamaño del ADN.

 Concentración de azarosa.
 Conformación del ADN. Las distintas conformaciones de las moléculas de ADN circular
del mismo peso molecular migran a distinta velocidad: de mayor a menor velocidad,
superenrollado circular, lineal y circular relajado.
 Voltaje aplicado. A bajo voltaje la velocidad de migración de un fragmento lineal de ADN
es proporcional al voltaje aplicado, así el rango efectivo de separación decrece a medida
que el voltaje se incrementa.
 Presencia de colorante intercalante. El Bromuro de Etidio o Sybr green reduce la movilidad
electroforética del ADN lineal ya que el intercalante se introduce entre las bases,
extendiendo la longitud del ADN lineal o nicked haciéndolo mas rígido.

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