Prepara soluciones para las

operaciones básicas del

laboratorio

Uso del Microscopio y Centrifuga

en la técnica de Sedimento Urinario

Jacqueline Cornejo Medel

Diana Laura Fonseca Razo
Estefanía Martínez Gutiérrez
Carmen Valeria Santoyo Crespo
Joselyn Cabrera Gutiérrez
Janette Alfaro Vázquez
 PRACTICA No. 3

USO DE MICROSCOPIO Y CENTRIFUGA EN LA TÉCNICA DE SEDIMENTO URINARIO

SUBMÓDULO: Prepara soluciones para las operaciones básicas del laboratorio.

DOCENTE: Q.F.B. Silvia Medina Arreguín.

COMPETENCIAS A DESARROLLAR

DISCIPLINAR BÁSICA GENÉRICAS PROFESIONALES

CE14 Aplica normas de
seguridad en el manejo de
sustancias, instrumentos y
equipo en la realización de
actividades de su vida
cotidiana
CONTRUYE T
Conoce T
Habilidad general: Autoconciencia Habilidad específica: Autoeficacia, Reconocimiento de
emociones
5.1 Sigue instrucciones y Mantiene material y equipo
procedimientos de manera en condiciones de uso
reflexiva, comprendiendo
como cada uno de sus pasos
contribuye al alcance de un
objetivo.

OBJETIVO:

El alumno aprenderá el manejo de manera eficiente de los siguientes equipos de laboratorio:

microscopio óptico y centrífuga en la técnica de sedimento urinario.

JUSTIFICACIÓN:

El microscopio óptico es uno de los instrumentos de laboratorio más utilizados en los

laboratorios, proporciona una imagen amplificada de microorganismos, células, cristales, etc., de
gran interés para el diagnóstico de algunas patologías y que no pueden ser observados a simple
vista. Por éste motivo es esencial que el técnico laboratorista clínico conozca cada una de sus
partes, lo maneje adecuadamente y sea capaz de identificar los microorganismos y otros
materiales de interés.

Otros equipos de laboratorio muy utilizados es la centrífuga que se utiliza para obtener o separar
fases presentes en una suspensión.
INTRODUCCIÓN:

MICROSCOPIO ÓPTICO

El microscopio es un aparato que aumenta la imagen de los objetos y nos permite observar
aquello que, en un principio, es invisible para el ojo humano. Fue utilizado por primera vez, como
tal, por el holandés Anton Van Leeuwenhoek el año 1675. Tiene dos partes: una óptica, para
observar, y otra mecánica, que sostiene a la primera.

La parte óptica consta de:

• Ocular, lente situada cerca del ojo del observador.

• Objetivo, lente situada cerca del objeto que se quiere observar.

• Diafragma, dispositivo para graduar la entrada de luz.

• Condensador, dispositivo para concentrar la luz sobre el objeto.

• Foco de luz o espejo, para iluminar el objeto.

La parte mecánica del microscopio consta de:

• Columna, parte que sostiene el tubo óptico.

• Tubo óptico, donde se encuentra ubicado el ocular.

• Revólver, parte móvil que sostiene los objetivos.

• Platina, que soporta el portaobjetos.

• Pié, sostiene todo el microscopio.

• Tornillo macrométrico, que permite desplazamientos rápidos de las lentes.

• Tornillo micrométrico, que permite desplazamientos suaves de las lentes.

CENTRÍFUGA

Las centrífugas son equipos utilizados en los laboratorios, clínicas y otros, se utilizan para la
separación de solutos y sus solventes. Por ejemplo, en la rama de laboratorios clínicos, para el
análisis de sangre por lo general es necesario separar el plasma de los otros componentes para
poder analizar la muestra.

Existen varios tipos básicos: centrífugas de separación de sueros o plasma de baja velocidad (entre
2000 y 6000 rpm) llamadas macrocentrífugas, centrífugas para microhematocritos (entre 10000 y
18000 rpm) y las ultracentrífugas (de 20000 hasta 75000 rpm) para la separación de proteínas.

Hay varias precauciones para su uso, entre ellas se encuentran que debe encontrarse limpia, los
tubos deben tener un peso similar, deben colocarse uno frente al otro, debe tenerse sumo
cuidado al detenerse, nunca se debe abrir cuando ésta se encuentre en movimiento, ya que las
muestras o los tubos se podrían proyectar hacia el exterior ocasionando algún derrame o lesiones
al usuario. En técnicas coproparasitoscópicas de concentración es indispensable este equipo.
Las partes principales de la centrifuga son:

Tapa.- Impide el acceso a las muestras mientras están en movimiento.

Cámara o gabinete.- Es el espacio físico donde se realiza el proceso de centrifugación

Base.- Está construida generalmente de materiales pesados y con sistema de fijación a las
superficies, de modo que brinda estabilidad al equipo.

Interruptor de encendido.- Permite controlar el suministro de energía al equipo.

Control de tiempo.- Permite controlar el tiempo de centrifugación

Tacómetro .- Muestra la velocidad a la que gira el motor

Freno.- Alguna centrífugas dependiendo del modelo presentan este control, que permite
detenerla en situaciones de emergencia.

El rotor.- También conocido como araña es donde se colocan los portamuestras.

Portamuestras.- Son una especie de recipientes donde se colocan las muestras, su tamaño
depende de la aplicación para la que esté diseñado el equipo: Banco de sangre, hematocrito, etc.

OBSERVACIÓN DEL SEDIMENTO URINARIO

Consiste en la observación al microscopio de una muestra de orina procedente de una única

micción, que se ha sometido a centrifugación previa. Este procedimiento separa los componentes
sólidos del líquido de la orina; el líquido se desecha y el sólido que ha sedimentado (de ahí el
nombre del análisis) permite el recuento e identificación de elementos celulares como glóbulos
blancos o rojos, de cristales como los de calcio o ácido úrico, y de microorganismos, presentes en
la orina.

En condiciones normales, el sedimento urinario no contiene células, o su número es escaso, y no

contiene tampoco microorganismos ni otros sólidos como proteínas o cristales.

MATERIALES Y REACTIVOS:

 1 vaso de precipitados de 250 mL

 2 tubos de ensayo

 1 porta-objetos
  1 cubre-objetos

 Microscopio óptico

 Centrifuga

 Muestra de orina de la primera hora de la mañana y almacenada en refrigeración hasta el

momento de su análisis.

METODOLOGIA:

USO DE CENTRÍFUGA

RECOMENDACIONES DE SEGURIDAD

1. Coloque la centrífuga en una mesa firme.

2. Procure colocar los tubos con el mismo volumen y colocarlos en la centrífuga en forma opuesta
para evitar la vibración y la ruptura de los tubos

3. No abra la centrífuga cuando esté en movimiento ni trate de pararla con las manos.

4. El cargado de la centrífuga en una forma adecuada es muy importante para el funcionamiento

correcto de la misma y su preservación.

PROCEDIMIENTO

1. Tomar el recipiente que contiene la muestra de orina y mezclar bien.

2. Llenar dos tubos de ensaye para su centrifugación, hasta aproximadamente 1 cm antes del
borde superior.

3. Abrir la centrífuga.

4. Depositar por pares e identificados, los tubos con las muestras en forma opuesta para equilibrar
la centrífuga.

5. Cerrar la centrífuga y establecer los siguientes parámetros con las perillas correspondientes:
tiempo 5 minutos y velocidad 2500 rpm.
6. Una vez concluido el tiempo y que la centrífuga esté completamente detenida, retirar con
cuidado los tubos, sin moverlos demasiado.

7. Desechar el líquido sobrenadante de cada tubo y con una pipeta pasteur tomar el sedimento
urinario.

8. Colocar una gota del en el centro de un portaobjetos limpio y seco.

9. Colocar un cubreobjetos cuidando de que no queden burbujas

10. Observar la muestra en el microscopio óptico.

USO DE MICROSCOPIO ÓPTICO

PROCEDIMIENTO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.

Si el microscopio se utilizó correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.

2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

3. Comenzar la observación con el objetivo de 10X

4. Para realizar el enfoque: Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el
tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se
corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o
ambos.

5. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la

preparación con el macrométrico y cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico
hasta obtener un enfoque fino.

6. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con
mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación
desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil
que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones
anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó
con el objetivo de inmersión.

7. Empleo del objetivo de inmersión (para éste caso no servirá la muestra de sedimento urinario,
en éste caso el docente proporcionará un frotis previamente preparado).

a. Bajar totalmente la platina.

b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona
que se va a visualizar y donde habrá de verter el aceite.

c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.

d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.

e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.

f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de
aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de

inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de
accidente es muy grande.

h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar
el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro
campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.

i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de

menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la
platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.

j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

RESULTADOS:

Describir lo observado en el microscopio de la muestra con sedimento urinario y anexando

fotografías de lo observado.

Anexar a la presente práctica los resultados obtenidos.

CONCLUSIONES:

Anexar a la presente práctica las conclusiones obtenidas.

OBSERVACIONES.
Dibuja todos los pasos realizados en la presente práctica.

CUESTIONARIO

1. Menciona los principales tipos de microscopios que existen. Microscopio óptico, simple de
luz ultravioleta, fluorescencia, petrográfico, ampo oscuro, de contraste de fases, de luz
polarisado.
2. ¿Para qué sirve el objetivo? Es el elemento que concentra la luz procedente del objeto
observado y la enfoca para producir una imagen real
3. ¿Para que sirve la platina? Sirve como soporte para las preparaciones microscópicas, o
laminas delgadas, que van a ser estudiadas.
4. Si tengo un ocular de 15x y observo una muestra con el objetivo de 40x ¿Cuál es el
aumento que tengo de la muestra? Serán 25x mas aumentado y este va hacer que la
imagen pueda observarse mas de cerca.
5. Escribe el concepto y fundamento de la centrifugación. Es una técnica e separación que se
utiliza para aislar o concentrar partículas suspendidas en un liquido aprovechando la
diferente velocidad de desplazamiento según su forma, tamaño o peso al ser sometidos a
una centrifuga.
6. ¿Para qué se utiliza la centrífuga en la técnica de sedimento urinario? Se utiliza para la
separación de sus solutos y solventes.
7. Indica tres medidas de seguridad que consideres importantes al utilizar la centrífuga. La
carga debe ser equilibrada, los tubos ser de una calidad adecuada, la tapa debe
permanecer cerrada durante el funcionamiento.

BIBLIOGRAFIA:

www.pucmmsti.edu.do/cienciasfisiologicas/1ra practica Bioquimica I.pdf

http://www.gruposaludgtz.org/proyecto/mspas-gtz/Downloads/Laboratorio-Clinico.pdf