METODOLOGIA PARA ANALISIS DE COMPUESTOS Y ELUCIDACION

ESTRUCTURAL
 Extracción de alcaloides
El material vegetal seco será sometido a un proceso de extracción acido-base con HCl 0,5
M con agitación exhaustiva durante 24 horas, luego de las cuales se realizará una
filtración obteniendo una solución acida la cual se llevará a pH 10 utilizando NH3 al 15%.
Finalmente se realizará una extracción utilizando como disolvente CHCl3, con el fin de
obtener una fase orgánica enriquecida en alcaloides. Una vez realizada la extracción, se
concentrará en rota-evaporador y se obtendrá una mezcla alcaloidal que será denominada
extracto rico en alcaloides quinolizidínicos
 Cromatografía en placa (TLC)
Se realizará cromatografía en placa utilizando cromatofolios TLC Sílica gel 60 F254. Como fases
móviles se utilizarán mezclas de disolventes como Hex-CHCl3 90:10, Tol-DCM 80:20, DCM-
MeOH 90:10, CHCl3-MeOH 90:10, DCM-MeOH-NH3 90:8:2 y DCM-MeOH-HCOOH 90:9:1.
Como reveladores se implementará el reactivo de Dragendorff y yodo.
 Cromatografía en columna (CC)
Para la separación de compuestos se usará cromatografía en columna por gravedad y flash
dependiendo el caso con un sistema de elución por gradiente. La fase estacionaria implementada
será sílice para columna Merk (0.063-0.200 mm) y como fase móvil se utilizarán mezclas
terciarias de disolventes grado analítico como DCM-MeOH-NH3 90:9:1 y DCM-MeOH-HCOOH
90:9:1.
 Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (CG-EM)
Los perfiles cromatográficos y los espectros de masas serán obtenidos con un equipo Thermo
Trace 1300 acoplado a un espectrómetro de masas ISQ LT con cuadrupolo sencillo como
analizador. Para el análisis se utilizará una columna Rxi® 5Sil MS de 60 m, 0.25 mm ID y 0.25
μm df (5% difenil/95% dimetilpolisiloxano). Se implementará un programa de temperatura
empezando en 120 °C manteniéndose durante 2 min, luego se aplicará una rampa de 6 °C/min
hasta llegar a 300°C manteniéndose durante 10 min; el volumen de inyección será 1μL en modo
Split, con un flujo de 1mL/min y una relación de Split de 10. La forma de ionización es impacto
electrónico (E.I) a 70 eV.
 Análisis por LC-MS

La caracterización de las fracciones y compuestos más polares se realizara utilizando un

cromatografo líquido Shimadzu 2020 acoplado a un espectrómetro de masas, con cuadrupolo
sencillo como analizador. Para el análisis será utilizada una columna cromatografica C-18
Phenomenex Luna® (150x2.0 mm, 3μm) y como fase móvil se utilizara una mezcla de disolventes
A (HCOOH al 0.01%) y B (metanol) en gradiente. Se realizara un monitoreo a diferentes
longitudes de onda por DAD a fin de determinar los máximos de absorción de dichos compuestos.
La forma de detección será por espectrometría de masas y con la respectiva comparación con
patones adquiridos de forma comercial y haciendo uso de las bases de datos Knapsack
(http://ka¬naya.naist.jp) y CHEMnetBASE – diccionario de productos Naturales
(http://dnp.chemnetbase.com).

 Índice de retención (R.I)

Los índices de retención serán calculados utilizando series de n-alcanos de C-10 a C-24, usando
el modelo de Van Den Dool y Kratz (Van den Dool, H., Kratz, 1963).
 Infrarrojo (IR)
Los espectros de infrarrojo se tomarán en un equipo Shimadzu IR prestige 21 FT-IR, con el
módulo de ATR Pike MIRacle de cristal de germanio, para los sólidos y en el caso de los líquidos-
aceites se disolverán con diclorometano y se depositarán sobre el cristal de forma directa y se
esperara que se evaporare el disolvente y finalmente se realizara el respectivo análisis.
 Resonancia Magnética Nuclear (RMN)
Los espectros RMN serán tomados en un espectrómetro Agilent DD2-600 MHz, operado a 600
MHz para 1H y 150 MHz para 13C empleando CDCl3 y CD3OD como disolventes. Los datos de
desplazamiento químico serán expresados en ppm con TMS como estándar interno (δ=0) y las
constantes de acoplamiento (J) en Hz.
 Rotación específica (R.E)
Se tomarán los datos de polarimetría de los alcaloides quinolizidínicos utilizando un equipo Jasco
P-2000 de la Universidad Militar Nueva Granada; como disolvente se utilizó metanol grado
HPLC y los valores fueron reportados en términos de rotación específica (RE).

MUESTRAS A ESTUDIAR

1 Lupinus bogitensis
2 lupinus mirabilis
3 Lupinus mutabilis
4 Lupinus Rusell
5 Senna viarum
6 Senna tormentosa
7 Senna multiglandulosa
8 Sena santanderensis
9 Eritrina rubrinervia
10 Crotalaria sp.
11 Genista monspessulana
12 Ulex europeus
13 Anadenanthera peregrina
 14 Mimosa sp
15 Hymenaea courbaril
16 Bowdichia virgilioides

Servicios y presupuesto requerido para el tratamiento de las muestras y la separación de

compuestos: De la misma manera se incluye el salario del contrato por 24 meses de la persona
que realizara la parte química.

Servicios Total
Tratamiento del material vegetal (Liofilizar, macerar, concentrar) 3,000,000
obtención de extractos y caracterización de las muestras por TLC 3,000,000
Separación de compuestos por técnicas cromatográficas 7,000,000
Estandarización del método y Análisis por Cromatografía Liquida 5,000,000
obtención de los índices de retención de los compuestos obtenidos 3,000,000
Estandarización del método y Análisis por Cromatografía de gases 5,000,000
Análisis de compuestos por polarimetría 3,000,000
Elucidación estructural por Resonancia Magnética nuclear 7,000,000
Evaluación del contenido fenólico y flavonoides 3,000,000
Contratista * 24 meses 55,200,000
Docking molecular 3,000,000
Estudiante de Maestría*18 48,200,000

Total: 145,400,000