APLICACIÓN DE LA GENETICA

Bioquímica Aplicada
 ALTERACIONES GENÉTICAS

•Se denomina mutación genética, a los cambios que

alteran la secuencia de nucleótidos del ADN.
•Estos cambios en la secuencia de ADN pueden llevar al
cambio de secuencia de aminoácidos en las proteínas
resultantes.
•Según la extensión de la mutación, esta puede ser:
•Mutación génica: mutación que afecta a un solo gen.
•Mutación: cromosómica: mutación que afecta a un
segmento cromosómico que incluye varios genes.
•Mutación genómica: mutación que afecta a cromosomas
completos (por exceso o por defecto) o a juegos
cromosómicos completos.
 I.- APLICACIÓN EN BIOTECNOLOGÍA

•Biotecnología. Es la utilización de células y componentes

de células, microbianas, vegetales y animales en cultivo
para la fabricación de sustancias específicas.
• Ingeniería Genética, rama que estudia el ADN, y su
manipulación
•La Ingeniería genética busca cambiar el fenotipo
manipulando del genotipo.
 II.- HERRAMIENTAS DE MANIPULACION

• Mutaciones
• Ingeniería genética.
– Fusión de protoplastos
– ADN- recombinante: Permiten la propagación de
secuencias de DNA de cualquier organismo mediante
su inserción en moléculas de DNA de otro origen.
En esta tecnica, resulta de gran apoyo la tecnica de
PCR: Técnica de amplificación, que permite la
obtención in vitro de grandes cantidades de copias
exactas de una secuencia de DNA
 Mutaciones: algunas definiciones
•Cualquier cambio heredable en la secuencia del material
genético se denomina mutación.
•Las mutaciones en un gen determinado crean variantes
de este gen, denominadas alelos
 TIPOS DE MUTACIONES
•La alteración de la información genética en el ADN, por
mutacion, puede producirse por dos mecanismos:
•Por sustitución.
•Por corrimiento

a.- Por sustitución de bases:

Se producen al cambiar una base por otra:
 Tipos de sustitución
•Transición. Si una base es sustituida por otra del mismo
tipo. Una purina por otra purina (A ⇔ G ), o una pirimidina
por otra pirimidina (C ⇔ T).
•Las transiciones pueden ser causadas por desaminación
oxidativa (Citosina en Timina) y tautomerización (posicion del
grupo funcional)
•Transversion. Cuando hay sustitución de una purina por
una pirimidina o viceversa
 Tautomeros

•las bases
nitrogenadas estan
habitualmente en
forma cetónica y con
menos frecuencia en
su forma tautomérica
enólica o imino.)
•Las formas enólicas
de las bases
nitrogenadas (A*, T*,
G* y C*) muestran
relaciones de
apareamiento
distintas: A*-C, T*-
G, G*-T y C*-A.
Efectos:
•Las sustituciones provocan el cambio de un solo aminoácido de
la cadena polipeptidica. Ejemplos:
En el caso 2 se produce truncamiento de la cadena peptidica.

•Caso 3. Mutacion silenciosa o anonima. Como la mayoría de

aminoácidos son especificados por múltiples codones, los que
codifican para el mismo aminoácido se denominan sinónimos.
•Una mutación genética que convierte un codón en otro sinónimo
no afecta a la composición de la proteína sintetizada.
 …Tipos de mutaciones
b.- Por corrimiento estructural. (de desplazamiento)
Cuando se añaden o se quitan nucleótidos, alterándose la
longitud de la cadena.
•Hay dos casos:
Deleción: en la secuencia de nucleótidos se pierde uno, y la
cadena se acorta en una unidad.
Inserción: Dentro de la secuencia del ADN se introducen
nucleótidos adicionales, alargándose la cadena.
•Si la variación es en un número, no múltiplo de tres, a partir de
ese punto, toda la información queda alterada.
 Efectos.
•En una delecion

•En una inserción

 EL ORIGEN DE LAS MUTACIONES
•Espontáneas (mecanismos endógenos)

–Debidas a procesos celulares normales

–Dependen de la tasa de error de la DNA polimerasa y
de la eficiencia de los sistemas de reparación
–Suceden con baja frecuencia

•Inducidas (agentes mutagenicos)

–Debidas a agentes físicos o químicos (mutágenos) que
dañan las moléculas de DNA
–El tipo de daño es específico del mutágeno
–La frecuencia de mutación es función de la dosis de
mutágeno
 2.1.1.- Mecanismos endógenos
1.Pérdida de bases tipo purinas por ruptura espontánea
del enlace con el azúcar: 5000/día/célula humana
2.Desaminación espontánea de citosinas y adeninas,
para producir uracilo e hipoxantina
3.Daños oxidativos. Moléculas con oxígenos reactivos,
que atacan los anillos de las bases nitrogenadas, y pueden
dañar el ADN).
4.Error de replicación. La ADN polimerasa puede
incorporar bases equivocadas en la replicación. Como; el
5-bromouracilo o la 2-aminopurina, que se incorporan en el
ADN que se replica en lugar de las bases Timina y
Adenina, respectivamente
Bases nitrogendas
 a.- Perdida de base

•provocara una delecion en la cadena polipeptidica

 b.- Desaminación

•La Citosina (C) por desaminación se convierte en Uracilo (U)

•El Uracilo (U) no forma parte del ADN, existiendo un enzima
llamada glucosidasa de uracilo encargada de detectar la
presencia de U en el ADN y retirarlo.
 c.- Daños oxidativos al ADN
El metabolismo aeróbico produce radicales superoxido O2,
peróxido de hidrógeno H2O2 e hidroxilo, por accion del
ozono y drogas como la 8-oxi-7,8 dihidrodesoxiguanina)

Transformación de Guanina (G) en 8-

oxo-7,8-dihidro-desoxiguanina que La Timidina se convierte
simula una Adenina (A). en Glicol de timidina.
Esta alteración produce Ocurre una delecion
transversiones: GC→TA.
 2.1.2.-Mutagénicos exógenos

1.Radiaciones ionizantes: rayos gamma y rayos X causan

rupturas en la doble hélice y deleción
2.Luz UV causa formación de dímeros de timina
3.Químicos ambientales como agentes alquilantes,
deaminantes y otras sustancias químicas forman derivados
con las bases del ADN.
 a.- Radiación ionizante
•Producen dos efectos:

•Reacciones oxidativas. Produce iones (hidrógeno o de

radicales hidroxilo (OH) ionizados) a partir del agua.
•Estos radicales reaccionan con otras moléculas de su
misma clase para formar peróxido de hidrógeno (H2O2)
que puede destruir proteínas y ADN.

•Daños cromosómicos. roturas físicas ó “lesiones”

cromosómicas que luego estimulan intercambios entre
partes del mismo cromosoma o de diferentes cromosomas.
 b.- Radiación ultravioleta
Hay tres tipos principales de rayos
UV:
- Tipo A: 320- 400nm
• Responsable de las rx de
pigmentación en la piel
(melanogenesis)
• Envejecimiento prematuro de la
piel
• Cancer cutaneo
- Tipo B: 280- 320 nm
• Responsable de quemaduras
solares
• Cancer cutaneo
. Tipo C 100-280 nm. Esta junto a
la radiación gama.
Causa, carcinogenesis, pero son
retenidas por capa de ozono
 Absorcion y daño al ADN
Produciendo daño por dos mecanismos:
• Absorción DIRECTA. El ADN Absorbe UVB(290_320), y
produce la formación de dímeros de ciclopirimidina
particularmente dímeros de timina. Los rayos UVA también
generan dímeros de timina.

•Lesiones INDIRECTAS. Daños oxidativos al ADN, provocado

por moléculas de peroxido, formadas por accion UV
•Transformación de Guanina (G) en 8-oxo-7,8-dihidro-
desoxiguanina que simula una Adenina (A).
 Reparación del daño genético

•El daño producido por la radiación UV se puede reparar

por dos mecanismos:
•Directo. Los nucleótidos alterados se devuelven a sus
estructuras originales
•Indirecto. Los nucleótidos alterados son reemplazados por
otros normales (Voet y Voet, 2002).

•Los organismos que presentan un mecanismo de

reparación directa poseen una enzima llamada
fotorreactivante o fotoliasa, que utiliza la energía tomada
de la luz para romper las uniones covalentes que conectan
las pirimidinas en un dímero
 c.- Químicos ambientales
Pueden ser: alquilantes, desminantes, reemplazantes e
intercalantes
•C.1. Agentes alquilantes
•Etil metano sulfonato (EMS), metil metano sulfonato (MMS), dietil
sulfato(DES), etiletano sulfonato, mostaza nitrogenada, etc.
•Etilmetanosulfonato (EMS): añade radicales metilo o etilo en la
Guanina, haciendo que se comporte como un análogo de la
Adenina y produce transiciones GC→AT.
•Etiletano sulfonato y mostaza nitrogenada, también adicionan
grupos metilo o etilo a la Guanina.
c.2. Desaminantes
Iones bisulfito y ácido nitroso.
•El ácido nitroso transforma la Citosina (C) en Uracilo (U), el
Uracilo (U) empareja con la Adenina (A) produciendo transiciones.
•Por desaminación de Adenina (A) se convierte en hipoxantina (H)
que empareja con la Citosina (C) produciendo transiciones.
•Nitritos (NO2-) son conservantes de alimentos. inhiben
crecimiento de hongos y levaduras.
…Nitritos
•Efectos negativos: formación de nitrosaminas y metahemoglobina:
•La metahemoglobina, es incapaz de transportar oxígeno.
•Nitrosaminas. son potentes agentes alquilantes, se producen en
alimentos que deben ser calentados (ej.: tocino), o que son ricos en
aminas nitrosables (ej.: pescado y productos fermentados).
•En los roedores, las dosis para generar tumores son muy bajas,
oscilan entre 1 y 5 ppm para la dietilnitrosamina y la
nitrosopirrolidina, esta última usada en el forraje animal.

•Hidroxilamina añade un grupo hidroxilo(OH) al grupo amino de la

citosina, haciendo que la base sufra un cambio tautomérico.
 c.3. Reemplazo de una base en el ADN
•Son compuestos químicos, análogos de bases, que pueden
remplazar a una base determinada.
•El 5-Bromouracilo (5BU) es análogo de la Timina (T), en su forma
cetónica empareja con la Adenina (A) y en su forma enólica (5BU*)
empareja con la Guanina (G).
 …Remplazo de una base en el ADN
•La 2-Aminopurina (2AP) es
análogo de la Adenina (A), puede
remplazarla, y aparea con Timina
(T)
•En su forma imíno (2AP*) empareja
con la Citosina (C).
•Produce transiciones.

•Aflatoxina B1: se une a la Guanina

(G) modificándola de manera que la
G modificada se separa de su
azúcar, produciendo una sede
apurínica.
•El sistema SOS pone
habitualmente en la sede apurínica
una Adenina (A) dando lugar a
transversiones. Es un potente
carcinógeno.
c.4. Agentes intercalantes
•La Proflavina, Naranja de acridina y otros Compuestos
(ICR): son compuestos con estructuras planas que se
meten o intercalan entre las bases nitrogenadas del ADN
produciendo adiciones (inserción) o deleciones de un par
de nucleótidos.
•Benzopireno.
 Reparación de daño al ADN
•La reparación de apareamientos incorrectos posterior a la
replicación (sistema SOS), usa un sistema capaz de realizar las
siguientes operaciones:
•Reconocer las bases mal apareadas.
•Determinar cual de las dos bases es la incorrecta.
•Eliminar la base incorrecta y sintetizar la correcta.
 Aplicación industrial de mutaciones
•La obtención de organismos modificadas por Mutación inducida,
busca modificar su genoma, para incrementar los rendimientos
•Estos pueden tener distintas modificaciones: a) el mutante no
reconoce la presencia del inhibidor o represor; b) no se produce
producto final, que es el que controla la enzima clave de la vía
metabólica; c) el producto final es eliminado de la célula debido a
una modificación en la permeabilidad de la membrana celular.
•El empleo de diferentes agentes resulta en el aislamiento de
distintos "espectros" de mutantes.
•Implica dos etapas: tratamiento de la población con el mutágeno
y el aislamiento de los mutantes para su ensayo y selección.

•Limitaciones.
•La mutagénesis origina mutaciones aleatorias en el organismo,
la mayor parte de las cuales son negativas para su supervivencia,
o empeoran algunas de sus características originales.
•Los programas de mejora suelen ser muy largos y tediosos, y a
menudo no dan los resultados deseados.
 2.2.- INGENIERÍA GENÉTICA
•La ingeniería genética es la tecnología del control y
transferencia de ADN de un organismo a otro.
•Surge en los años 70 (siglo XX) cuando se consigue
introducir material genético de una especie en células de
otra especie muy distinta.

•Técnicas:
–Fusión de protoplastos
–ADN recombinante (clonación)
 a.- Fusión de
protoplastos
Es una técnica en la cual
se produce la fusión del
citosol de dos o más
células dando lugar a un
híbrido.
Se aplica principalmente
en células vegetales.
•Fases:
- Selección de la muestra.
- Preparación del
protoplasto.
- Mantenimiento de
protoplastos.
- Fusión de protoplastos.
- Crecimiento
•a.1- Selección del material de partida.
•Generalmente se emplean hojas en cultivo líquido o sólido.
•Se obtienen mejores resultados con hojas jóvenes
•a.2.Tratamiento enzimatico.
•Aplicación de una enzima (celulasa ó pectinasa) que destruye la
pared celular, quedando la célula desprotegida, o protoplastos.
•El pH se regula de 4,7 a 6, y la temp. entre 25 y 30º C.
•Durante el aislamiento se produce la lisis de algunas células,
que liberan enzimas hidrolíticas y compuestos oxidantes que
pueden dañar los protoplastos.
•Por lo que se suelen agregar inhibidores de proteasas y
antioxidantes tales como el Polivinilpirrolidona-10, y CaCl2,
para incrementar la estabilidad de la membrana.
a.3.- Limpieza y purificación de los Protoplastos
Una vez liberados los protoplastos, se procede a la remoción de
las enzimas.
La suspensión se filtra.
Posteriormente, se efectúan 3 ó 4 lavados centrifugando la
suspensión por 5 minutos.
Finalmente, los protoplastos sedimentados se re-suspenden en
una solución salina. De este modo se eliminan las enzimas y
restos celulares.
a.4.- Fusión de protoplastos
•Métodos químicos Utilizan como fusógeno polietilenglicol
(PGE), alta concentración de Ca2+ (10- 50 mM) y Ph
elevado (9-11), sales tipo nitrato sódico
- Métodos fisicos (electrofusion). involucra dos pasos:
1.Los protoplastos, se colocan entre dos electrodos, en un
medio de baja conductividad; se aplica corriente alterna de
alta frecuencia (0,5 a 1,5 MHz). las cargas se separan
dentro de las células formando un dipolo y generando, por lo
tanto, un potencial de membrana.
2.El segundo paso consiste en la aplicación de uno o más
pulsos cortos de corriente directa de 15 a 100 µseg., con
una intensidad de campo elevada (1 a 3 Kv/cm), suficiente
para causar la ruptura reversible de la membrana.
Ocurre entonces la fusión de las dos células cuyas
membranas están en estrecho contacto (1 a 2 nanómetros
de distancia).
a.5. Mantenimiento de protoplastos

•Los protoplastos fusionados se mantienen en medio de

cultivo celular adecuado para nutrir la célula, que incluye
vitaminas.
•Estas células, pueden destruirse por diferencias de
presión osmótica con respecto al medio.
•En el caso de un medio hipertónico, puede producir una
contracción del protoplasto. A su vez, un medio hipotónico
puede producir citólisis del protoplasto.
•Es por esto que el medio de mantención debe estar
ajustado de manera que no hayan diferencias osmóticas
significativas con las células mismas.
•Así mismo, se debe controlar las temperaturas en las
cuales se mantienen los protoplastos, lo cual dependerá
del tipo que sean (fúngico, bacteriano o vegetal).
•Adicionalmente, los protoplastos vegetales requieren un
control de la luminosidad de cultivo.
a.6. Crecimiento.
•Luego ocurre mitosis,
y se producen
muchas células lo que
origina un callo.
•Con ayuda de auxina
y citoquinina, se
estimula el desarrollo
radicular y foliar y
forma una plantita
híbrida.

•Ejemplo. La
hibridación entre el
tomate y la papa.
Papaya con naranja,
etc.
b.- Tecnología del ADN recombinante
•Consiste en aislar y manipular un fragmento de ADN de
un organismo para "recombinarlo" con el de otro
organismo.

•Esto produce recombinación genética, mediante el cual,

elementos genéticos contenidos en genomas de diferentes
individuos se combinan, lo que permite que el individuo
lleve a cabo alguna nueva función.

•La producción de una proteína no presente en un

organismo determinado y producidas a partir de ADN
recombinante, se llaman proteínas recombinantes.
 Proceso
•La producción del ADN
recombinante comienza con la
identificación de una
secuencia de ADN de un
organismo de interés con el fin
de propagarlo en otro
organismo, para obtener una
proteína deseada.
•El procedimiento es:
–Localización de genes y sus
funciones.
– obtención del ADN
recombinante.
–Clonación del ADN, y su
almacenamiento en
genotecas.
–Utilización de vectores de
expresión.
– desarrollo de la célula
mutante.
– pruebas de producción del
metabolito deseado
 Las herramientas de la clonación
b.1. Enzimas. De restriccion, ligasas, polimerasas, kinasas.
–Enzimas de restricción. o endonucleasas de restricción
son aquellas capaces de reconocer una secuencia
característica de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y
cortarlo en ese punto en concreto, llamado diana de restricción.
–El corte de ADN da lugar a dos extremos que pueden ser
romos (cuando los enlaces rotos coinciden) o Cohesivos.
– Existen muchas enzimas de restriccion y cada una reconoce
y corta una secuencia especifica de nucleotidos.

•Corte de EcoRI dejando •Restricción de SmaI dejando

extremos cohesivos. extremos romos.
Ejemplos. Enzimas de restriccion.
Proceso del ADN
recombinante.
Los dos ADNs así
cortados se mezclan,
se calientan y se
enfrían suavemente.
Sus extremos
cohesivos se
aparearán dando lugar
a un nuevo ADN
recombinado, con
uniones no covalentes.
Las uniones
covalentes se forman
añadiendo ADN ligasa
y una fuente
energética para formar
los enlaces.
b.2.- Vectores de clonación
•Son moléculas transportadoras que transfieren y replican
fragmentos de ADN que llevan insertados.
•Una molécula vector, tiene que Ser capaz de replicarse
junto al fragmento de ADN que transporta.
•Los vectores que transportan un fragmento insertado se
denominan vectores recombinantes.

•Pueden ser:
•a) un plásmido (fragmento extra de ADN bicatenario
circular de unos 4,3 kb, que existe en algunas especies de
bacterias).
b) un cósmido (similar al plásmido pero de mayor longitud,
unos 40 kb).
c) un virus vector (en este caso el ADN extraño que se
quiere transferir se incorpora al ADN vírico y funciona
como ADN recombinante).
1

Plásmido

gen de resistencia
a la ampicilina

2 3

Extremos cohesivos

Molécula de ADN recombinante

Plásmido
1

Virus

2 3
 PCR
•La reacción en cadena de la polimerasa, PCR (Polymerase
Chain Reaction), es una técnica que busca obtener un gran
número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo
de un mínimo, desarrollada por Kary Mullis.
•Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN
polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual se
requiere temperaturas altas para separar las hebras de ADN, y
temperaturas bajas para provocar la union enzima-sustrato.

•Para replicar el ADN, la técnica PCR hizo uso, en un principio,

de la ADN polimerasa de la bacteria Escherichia coli. Pero esta
enzima se desactiva por la alta temperatura requerida para
desnaturalizar la doble cadena del ADN, por lo cual debía
agregarse enzima fresca al comenzar el tercer paso de cada
ciclo.
•El inconveniente se salvo usando enzimas de la bacteria
"termófila" Thermus aquaticus, denominada Taq, que actúa
entre 75° C y 80° C y resiste más de dos horas a 93° C.
 PCR …
•De esta manera es posible mezclar todos los componentes de la
PCR al comenzar el primer ciclo y la reacción en cadena puede
llevarse a cabo mediante equipos automatizados que realizarán
los ciclos térmicos programados.
 Componentes
•Para que el proceso
se lleve a cabo en el
tubo de reacción debe
haber:
•a- ADN objetivo ( el
que se quiere
amplificar)
•b- ADN Polimerasa
•c- Deoxinucleótidos
•d- Primers.
Oligonucleótidos
diseñados como
cebadores que inician
la replicación "in vitro“.
•En la primera etapa (desnaturalización) la doble hélice de
ADN se separa en dos hebras. Para ello se realiza una
incubación de la muestra a altas temperaturas (93-97ºC).
•La renaturalización se producirá cuando la temperatura
disminuya.
•En el segundo paso (hibridación) los cebadores se unen a
las zonas 3´ complementarias que flanquean el fragmento
que se quiere amplificar.
•Se realiza bajando la temperatura (50-65º C)
•En la tercera etapa (elongación) se produce a 70-75ºC, la
síntesis de una nueva ADN, mediante la enzima DNA polimerasa.
Obtención de proteínas de interés médico, comercial, etc.
(insulina, hormona del crecimiento, factores de coagulación).
 Vacunas
•Vacunas recombinantes contra infecciones víricas o
parasitarias.
•Este procedimiento, se basa en la expresión en bacterias
de genes de patógenos que codifican por ejemplo
antígenos de superficie del virus o del parásito contra el
que se desea vacunar, que sean capaces de actuar como
inmunógenos adecuados en la vacunación.
•Así, clonando los genes apropiados en los
microorganismos adecuados, podrán producirse grandes
cantidades del antígeno puro.
•Se ha conseguido obtener la vacuna de la hepatitis B
mediante la tecnología del ADN recombinante.
El gen de la subunidad proteica del virus de la hepatitis
fue introducido en la bacteria Escherichia coli y en la
levadura Saccharomyces cerevisiae, las cuales produjeron
en cultivo la proteína del virus
 Anticuerpos
Los anticuerpos sirven como defensa frente a
enfermedades infecciosas y sustancias extrañas, pero
además son un medio de curación para aquellos enfermos
que no son capaces de producirlos.

La técnica de los anticuerpos monoclonales permite

obtener gran cantidad de ellos y sin impurezas.
La forma de conseguirlo es hibridando células
plasmáticas y células tumorales con capacidad para
multiplicarse indefinidamente (células de mielomas), el
resultado son células híbridas llamadas hibridomas que se
pueden clonar.
Cada clon (procedente de un solo hibridoma) producirá un
anticuerpo monoclonal.
 Terapia genica
La terapia génica está siendo considerada la cuarta
revolución de la medicina (después de las medidas de
salud pública, la anestesia, y las vacunas y antibióticos).
Para su aplicación se siguen dos estrategias:
a) Insertar una copia sana de un gen en las células del
paciente con una enfermedad genética, para compensar
el efecto del gen defectuoso (ejplo. una niña que tenía una
inmunodeficiencia grave).
b) Introducir un gen especialmente diseñado para que
proporcione una nueva característica a las células (por
ejemplo, introducir en linfocitos un gen que produzca un
inhibidor del virus del sida en pacientes afectados por el
VIH).
 Biotecnologia en transgenicos

•Es un alimento modificado genéticamente, el cual

proviene de un animal o vegetal al que se le ha introducido
genes de otra especie mediante técnicas de ingeniería
genética con el fin de diseñar de forma específica alguna
de sus cualidades.
•Generalmente se trata de plantas a las que se les
introducen genes de otras especies.

•OMG: (Organismo Modificado Geneticamente) "Es el

organismo que tiene material genético modificado de
manera no natural en el apareamiento y recombinación
natural".
La clonación en plantas se logra manipulando cultivos
celulares. Para ello se obtienen fragmentos o explantes de una
planta madre, y se les aplica la técnica de ADN recombinante.
Transfección. Accion de introducir una secuencia deseada en otra
célula.

Se busca:
Mejorar la productividad, de una
especie.
Mejorar la resistencia, ante plagas,
enfermedades y condiciones
ambientales adversas (sequías,
alta salinidad).
Retardar la maduración de frutos.
Aumentar la calidad.
Adaptar especies ya cultivadas a
nuevas zonas geográficas con
características climáticas o
edafológicas extremas
Domesticar nuevas especies
silvestres.
Métodos de Obtención.
•Existen dos métodos de
introducir el gen deseado:

•1: El método del cañón:

consiste en disparar sobre
las células, microscópicas
bolitas de oro que llevan
adheridos los genes que
se pretenden incorporar al
genoma de la célula.
•Estas micropartículas,
atraviesan la pared celular
y algunas de ellas llegan
hasta el núcleo, llevando
su carga de genes, que se
unen al genoma de la
célula, obteniéndose así
células hibridas.
2 : Usando Agrobacterium tumefaciens. Es una bacteria patógena
que normalmente, se ubica en los espacios intercelulares y desde allí
transfiere a las células de la planta, un plásmido con un segmento de
ADN llamado T-ADN, que se integra al genoma de la planta,
provocando la producción de reguladores del crecimiento, y el
desarrollo de un tumor.
Se recombina el plasmido, con el gen deseado y se introduce en la
bacteria, que a su vez luego transfiere a la planta.
Agrobacterium
núcleo
Plásmido Ti
cromosoma
inductor de tumores
contiene oncogenes
(genes onc)

cromosoma

célula
vegetal

tumores

Proliferación de hormonas
crecimiento. Se forman
tumores en las zonas de la
lesión
 Productos: Plantas transgénicas
•Resistencia a herbicidas, insectos y enfermedades
microbianas

El maíz transgénico de Novartis Resistente al herbicida y al

gusano barrenador europeo (contiene el Gen de resistencia a la
toxina Bt de Bacillus thuringiensis)
Problemas: Larvas de especies de insectos predadores benéficos
(larvas verdes de crisopa) murieron cuando fueron alimentadas con
el gusano barrenador europeo
Gold rice de Monsanto con color amarillo por los altos niveles de
vitamina A
Selección y crecimiento.

•Selección
Se seleccionan las células que han sido transfectadas con
el nuevo ADN.
Los explantes se colocan en un medio de cultivo
adecuado y produce un callo (masa de células sin
diferenciar); los callos pueden dividirse en multitud de
fragmentos o incluso hacerse una suspensión de células.
•De esas uniones celulares producen muchas células lo
que origina un callo.
•Con ayuda de auxina y citoquinina, se estimula el
desarrollo radicular y foliar y forma una plantita híbrida.
Clonación de animales
•Es crear un nuevo organismo con
la misma información genética de
una célula existente.
•Este método de reproducción
asexual, usa un solo progenitor.
•Esta forma de reproducción es
muy común en organismos como
las amebas y otros seres
unicelulares, asi como la mayoría
de plantas y hongos.
•Se usa para producir un gran
numero de animales con cierta
característica (producir mas leche,
producir lana de color, etc.).
•Se usan para ello dos técnicas:
• a. La disgregación de células
embrionarias a partir de un
embrión, de modo que cada
célula separada funciona como un
zigoto y originará un animal.
a)la transferencia nuclear; consiste en obtener óvulos
enucleados (se les ha extraído el núcleo por microsucción), e
introducir un núcleo de una célula embrionaria o de una
diferenciada (especializada). Con esta modalidad se obtuvo Dolly.
Cuanto más diferenciada esté una célula más difícil es conseguir
su reprogramación para que origine un nuevo animal.
Uso en terapia de humanos

•Xenotrasplante (transferencia de células u órganos de una

especie a otra). La empresa escocesa PPL Therapeutics, logra
retirar de cerditos el gen que provoca el rechazo en transplantes
a humanos "alfa 1,3 galactosil transferasa" .
•Ayudará a superar la escasez de órganos humanos para hacer
trasplantes de todo tipo
 Bioingeniería de enzimas
•O, ingeniería de proteínas consiste en modificar o crear una
nueva proteína con propiedades específicas.
•1.- La industria del cuero y las pieles, requiere enzimas que
degraden pelos de la piel de animales en condiciones de alta
salinidad. Se usan enzimas provenientes de halo-extremófilos.
•2.- En la industria de detergentes se utilizan biolimpiadores,
para termepraturas: altas (en esterilizacion) o bajas (en climas
frios), y pH del detergente.
•Deben ser estables en amplios rangos de temperaturas
(menores a 20ºC y mayores a 70ºC) y pH alcalinos (8-12).
•En 1988 se introdujo la primera lipasa obtenida por bioingeniería
llamada Lipolase. El gen de esta lipasa, aislado de hongo
filamentoso Humicola se transfirió a Aspergillus oryzae donde se
produce a gran escala y de forma estable.
•Las enzimas, una vez obtenidas, son aisladas, purificadas, y
estabilizadas con sales de calcio, formato de sodio, borato, y
protegidas en cápsulas para incluirse en las formulaciones de
detergentes.