Tema 17: PROCESAMIENTO POST-TRANSCRIPCIONAL

Tipos de ARN: ARNm, ARNr, ARNt, ARNhn, ARNsn, ARNsc

Procesamiento en procariotas

Procesamiento en eucariotas

ARNm: Adición de caperuza y poli(A)

Edición
Splicing y Splicing alternativo

ARNr

ARNt
Tipos de ARN

ARN funcionales (no se traducen a proteínas)

- ARN ribosómico (rRNA).
- ARN de transferencia (tRNA).
- ARN pequeño nuclear (snRNA)
- ARN citoplasmático pequeño (scRNA)

ARN informativos (se traducen a proteínas)

- ARN mensajero (mRNA).
- ARN heterogéneo nuclear (hnRNA).
 Ácido Ribonucleico
ARN heterogéneo nuclear (hnRNA)
Molécula precursora del ARNm en eucariotas. Es la molécula transcrita directamente del ADN.
Incluye secuencias codificantes (exones) y no codificantes (intrones). Este ARN será procesado.

ARN mensajero (mRNA)

Eucariotas: molécula resultante del procesamiento del hnRNA.

Procariotas: molécula transcrita directamente del ADN.

Codifican para una o varias proteínas. Su secuencia de nucleótidos es traducida en una secuencia
de aminoácidos en el proceso de la traducción.

Incluye formas muy heterogéneas tanto en tamaño como en secuencia.

Existe, en general, una molécula de mRNA para cada gen o grupo de genes que codifique
una proteína

Es el menos abundante de todos los ARNs celulares.

En E. coli. Representa entre el 2 y el 5 % del total del ARN celular

Tipos de ARNs en la célula eucariótica

ARN mensajero

ADN: núcleo Síntesis protéica: citoplasma

Mensajero de vida muy corta
entre el núcleo y el citoplasma Concepto de mRNA introducido por
François Jacob y Jacques Monod
en 1961.

* Es el molde para la síntesis de proteínas

* Polinucleótido.

* Composición reflejo de la del ADN que lo especifica.

* Heterogéneo en tamaño.

* Asociado transitoriamente con los ribosomas.

* De síntesis y degradación rápida.

Tipos de ARNs en la célula eucariótica

ARN ribosómico (rRNA)

Es el más abundante en la célula (75%).

Componente de los ribosomas. Función estructural

Función catalítica en la síntesis de proteínas (Ribozimas).

Diferentes tipos en función de sus coeficientes de sedimentación.

16S + 21 polipèptidos (subunidad ribosómica pequeña: 30S)

Procariotas 23S + 34 polipéptidos (subunidad ribosómica grande: 50S).

5S (subunidad ribosómica grande: 50S).

18S + 30 polipéptidos (subunidad ribosómica pequeña: 40S).

Eucariotas 28S (subunidad ribosómica grande: 60S).

5,8S + 49 polipéptidos (subunidad ribosómica grande: 60S).
5S (subunidad ribosómica grande: 60S).
Tipos de ARNs en la célula eucariótica

ARN de transferencia (tRNA)

ARN pequeño con unos 75 nucleótidos de media.

Transporte de aminoácidos activados hasta el ribosoma.

Proceso de traducción del mRNA.

Al menos un tipo de tRNA para cada uno de los 20 aminoácidos.

Algunos aminoácidos tienen varios tRNAs: Leu y Arg (6 cada uno)

Todos los tRNAs presentan en su extremo 3´ la secuencia de nucleótidos CCA.

Extremo aceptor del aminoácido.

5´
Tipos de ARNs en la célula eucariótica

ARN pequeño nuclear (snRNA)

Son secuencias pequeñas de unos 150 nucleótidos de media.

Se asocian con proteínas específicas formando los “Snurps”

Participan en el proceso de eliminación de intrones y unión de exones (ARNm).

Forman parte de los Espliceosomas: Complejos dinámicos grandes formados por Snurps, proteínas
denominadas factores de empalme, y los pre-mRNA que se van a procesar.
.

ARN citoplasmático pequeño (scRNA)

ARN de unos 300 nucleótidos 7SL RNA que forma parte del SRP (Signal Recognition Particle).

Partician en el envío de proteínas a su destinos finales

 Procesamiento de RNA
Procesamiento en procariotas
* RNA ribosómico
* Metilación
* Rotura nucleolítica
* RNA mensajero
* No modificado
* RNA transferente
* Rotura en 5’- y 3’-
* Adición de CCA
* Modificación de bases
Procesamiento en eucariotas
* RNA ribosómico (RNA polimerasa I)
* Metilación
* Rotura nucleolítica
* RNA mensajero (RNA polimerasa II)
* Caperuza 5’
* Poliadenilación 3’
* Eliminación de intrones (maduración o splicing nuclear)
* Edición del ARN
* RNA transferente (RNA polimerasa III)
* Rotura en 5’- y 3’-
* Adición de CCA
* Modificación de bases
* tRNA splicing
 Procesamiento en procariotas
ARNm Prácticamente no experimentan ningún tipo de maduración en procariotas.

ARNt y ARNr: Se originan por escisión de un mismo

transcrito primario.

Endonucleasas
1-RNAasa III
2-RNAasa P
3-RNAasa E

Exonucleasas
Procesamiento en procariotas

ARNt

RNasa D

RNasa P
Modificación de bases
Escisión en 5´
Escisión en 3´
Adición de CCA
 Procesamiento en eucariotas

Esquema de un RNA mensajero maduro

 Procesamiento en eucariotas

En los extremos del transcrito pre-mRNA se sitúa una cofia en 5´ y una

cola de poli(A) en 3´

pre-mRNA
Procesamiento en eucariotas

Modificación del extremo 5´de la cadena de ARNm durante la transcripción por

adicción de una cofia.

ARNm
Cofia 0

Hidrólisis del extremo 5´trifosfato (RNA-trifosfatasa)

Formación de un enlace 5´-5´-trifosfato entre Cofia 1

extremo 5´-difosfato y el fosfato-αα de un GTP.
(guanililtransferasa) 2´-O-metil
transferasa

Metilación del N7 de la guanina terminal Cofia 2

guanina-7-metil transferasa
(S-adenosilmetionina).
Procesamiento en eucariotas
ARNm

Funciones de la cofia en 5’:

Marca el extremo 5’ para el procesamiento del

primer exón

Esencial para el transporte del mRNA entre el

nucleo y el citosol. Interacción con proteínas
nucleares.

Aumenta la eficiencia de la traducción.

Interviene en la formación del complejo de
pre-iniciación (cytoplasmic cap-binding proteins)

Protege de la actividad de exonucleasas 5’→3’

Procesamiento en eucariotas
ARNm
Poliadenilación en el extremo 3´

1. Una endonucleasa específica reconoce la

secuencia AAUAAA en el pre mRNA

2. Una poli(A) polimerasa añade unos 250

residuos al extremo 3´.
El ATP sirve de donador

La poliadenilación ocurre antes de que

el transcrito se disocie de la ARN
polimerasa II

¿ Cuál es el papel fisiológico de la cola de poli A ?

•Confiere estabilidad a frente a la acción de nucleasas.
•Facilita y aumenta la efectividad de la traducción del ARNm
•Relación inversa entre velocidad de degradación de la cola de poli A y vida media de una molécula de ARNm.
Procesamiento en eucariotas

Modificación post-transcripcional o corrección del ARN mensajero (RNA editing)

Se sintetiza en hígado.
Modificación a posteriori de la Participa en el transporte
de lípidos celulares
secuencia del transcrito. Puede
afectar a uno o a varios nucleótidos.

La modificación del nucleótido -Desaminación de citidina, generando uridina

puede acarrear un cambio de - cambio del codón: CAA (Gln)  UAA(stop)
aminoácido y que éste afecte a la
estructura o la función de la
proteína.
Ej: Apo B-100 ,Apo B-48.

No puede unirse al receptor de

la LDL de la superficie celular
Se sintetiza en intestino delgado
Transporte de grasa de la dieta
Procesamiento en eucariotas

Eliminación de los intrones: splicing

• El pre-ARN mensajero está formado por secuencias codificantes denominadas
exones separados por secuencias no codificantes denominadas intrones.

•El proceso de eliminación de los intrones se realiza en el núcleo, mediante un

mecanismo muy complejo denominado splicing.
Procesamiento en eucariotas

Estructura de los intrones

Secuencia variable en longitud (50 a 10.000 pb). Todos comienza con GU y termina con AG.

En vertebrados la secuencia consenso es:

GU-AG
Extremo 5´: AGGUAAGU
Extremo 3´: 10 pirimidinas (U o C), N, C y la secuencia AG.

Todos los intrones poseen una secuencia interna importante que se denomina centro de ramificación.
Esta secuencia se situá entre 20 y 50 nucleótidos secuencia arriba del sitio de empalme 3´.

Los puntos de corte y empalme se especifican mediante las secuencias situadas en

los extremos de los intrones
Procesamiento en eucariotas

¿ Cómo se unen los exones ? Implica la rotura y formación de nuevos enlaces fosfodiesteres

Ataque nucleofílico al
5´del segundo exón

Extremo 3´OH
libre del exón 1
Formación enlace
fosfodiester 5´-3´
Ataque nucleofílico
(2´-5´-fosfodiéster)

Precursor
Lazo intermedio Producto

Dos reacciones de Generación de un grupo 3´-OH Unión del grupo 3´-OH con el
transesterificación libre en el extremo 3´en el exón 1 grupo fosfato 5´del exón 2
Procesamiento en eucariotas ¿ Cómo se unen los exones ?
Los RNAs nucleares pequeños (snRNAs) de los espliceosomas catalizan el
empalme de los precursores de mRNA

Espliceosoma: Complejos dinámicos grandes (60S) que se forman durante la maduración del mRNA

Formados por:
- snRNPs o snurps: asociaciones de snRNAs y proteínas
- Cientos de proteínas factores de empalme
- los pre-mRNA que están madurando

Reconocen sitios de unión 5´y 3´de los exones

así como los puntos de ramificación.

Unión de U2-snRNP al
centro de ramificación

Unión de U1-snRNP al
sitio 5´de splicing 5´ snRNAs: U1, U2, U4, U5, U6
Procesamiento en eucariotas
Células de mamífero

Asociación del complejo U4/U6 U5,

previamente formado al complejo
U1-U2 (espliceosoma inactiva ).

Interacción de U5 con la secuencia

del exón en el centro de corte y unión 5´.
Liberación de
U2,U5,U6-intrón (lazo)

U5 interacciona con el exon en 3’ .

Ataque nuclefílico
grupo 3´-OH del exón 1 al centro de emplame del exón 2.

U6 se disocia de U4.
U6 se reordena e interacciona con U2 Se forma el lazo U2-U6: centro catalítico
y el extremo 5’ del intrón Primera reacción de transesterificación
Ataque nuclefílico del –OH 2’ del adenilato

Separación de U1 (spliceosoma U5 alinea el exón libre en 5’ con el

activo) situado en 3’
Procesamiento en eucariotas

La maduración está catalizada principalmente por moléculas RNA

(Ribozimas), con las proteínas desempeñando un papel secundario
Procesamiento en eucariotas

Splicing alternativo

1. Mecanismo que crea diversos ARN maduros a partir de un mismo gen,

mediante corte y empalme de distintas combinaciones de exones.

2. La selección que controla qué centros de cortes y empalmes son

elegidos, viene determinada por la unión de factores de
maduración.

3. Se generan distintas formas de una proteína según el tejido, estado

de desarrollo, vía de señalización…

Mecanismo que genera diversidad proteica

En el genoma humano, la mayor parte de los

pre-mRNA experimentan splicing alternativo
Procesamiento en eucariotas
Splicing alternativo
Gen de la Calcitonina

Proteína relacionada con el gen de la calcitonina

Procesamiento en eucariotas
ARNr
Las moléculas de ARN ribosómico se forman por rotura de transcritos primarios

RNA polimerasa III (nucleoplasma)

RNA polimerasa I (nucleolo)

snoRNPs
Procesamiento en eucariotas
ARNt

RNA polimerasa III

Sufren una escisión de una secuencia guía 5.

Eliminación de un intrón de 14 nucleótidos.

Sustitución del extremo terminal 3´UU por CCA.

Modificaciones químicas de bases y ribosa.

RNasa P

endonucleasa

ligasa