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Absorbance(s)
de trabajo a todos los pozos (véase la sección de preparación de 1.500 Negativo 20 3.1 0.23 7.4%
conflicto con los resultados de otros factores determinantes.
reactivos). Agregue siempre los reactivos en el mismo orden Patient 2
Positivo 20 39.8 1.65 4.1%
3. Para obtener resultados válidos de las pruebas, los controles
para minimizar las diferencias de tiempo de reacción entre los 1.000
TABLA 5*
y otros parámetros deben estar dentro de los rangos
pozos. Precision Inter Ensayos (Valores in U/ml)
0.500 indicados y los requisitos de ensayo.
NO SACUDA la placa después de la adición del sustrato
4. Si kits de prueba sean alterados, tal como mezcla de Muestra N X C.V.
12. Incubar a temperatura ambiente durante quince (15) minutos. 0.000
componentes de diferentes kits, puede producir falsos
13. Agregue 0.050 ml (50μl) de la solución de parada a cada
0 20 40 60 80 100 Negativo 10 3.8 0.34 8.9%
x-H.Pylori Values in U/ml resultados de las pruebas, o si los resultados están mal
pocillo y agitar la microplaca suavemente por 15-20 segundos U
interpretado, Monobind no tendrá ninguna responsabilidad. Positivo 10 37.1 2.80 7.5%
para mezclar. Agregue siempre los reactivos en el mismo curva estándar preparada con cada ensayo. 5. Si la reducción de datos de la computadora controlada se * * Según lo medido en diez experimentos por duplicado.
orden para minimizar las diferencias de tiempo de reacción utiliza para interpretar los resultados de la prueba, es
entre los pozos. 14.1.3 Precision Anti-H. Pylori - IgA
11.0 PARAMETROS DE Q.C. imperativo que los valores predichos para los calibradores
14. Leer la absorbancia en cada pocillo a 450 nm (usando una caigan dentro del 10% de las concentraciones asignadas. TABLA 6
Para que los resultados del análisis sean considerados
longitud de onda de referencia de 620-630nm para minimizar 6. La importancia clínica del resultado se debe utilizar en la Precisión Intra ensayo (Valores in U/ml)
válidos deben ser considerados los siguientes criterios:
imperfecciones del pozo) en un lector de microplacas. Los 1. Absorbancia máxima (100 U/ml calibrador) = >1,3 evaluación de la posible presencia de la enfermedad Muestra N X C.V.
resultados deben leerse dentro de los treinta (30) minutos de 2. La curva dosis-respuesta (intercepta 80%, 50%, 20%) debe gastrointestinal. Sin embargo, las inferencias clínicas no 20 2.8 0.22 8.5%
Negativo
agregar la solución de paro. estar dentro de los parámetros establecidos. deben basarse únicamente en este análisis, sino más Positivo 20 25.5 1.35 5.3%
3. Cuatro de los seis grupos de control de calidad deben estar bien como un complemento a las manifestaciones clínicas
Nota: para el re-ensayo de muestras con concentraciones dentro de los rangos establecidos. de las pruebas pertinentes paciente y otros, tales como
superiores a 100 U/ml, diluir la muestra 1:5 o 1:10 usando el Histología, ureasa y Cultivo. Un resultado positivo no indica TABLE 7*
material diluido original en el suero diluyente. Multiplicar por el 12.0 ANALISIS DE RIESGOS enfermedad gastrointestinal y no distingue entre la Precision Inter Ensayos (Valores in U/ml)
factor de dilución para obtener la concentración de la muestra. El Análisis de Riesgos y MSDS para este producto está colonización y la infección de H. pylori. Del mismo modo, Muestra N X C.V.
disponible a petición de Monobind Inc. un resultado negativo no elimina la ausencia de infección Negativo 10 2.5 0.20 8.0%
10.0 CÁLCULO DE LOS RESULTADOS por H. pylori, sino más bien un título muy bajo de anticuerpo
Una curva de referencia se utiliza para comprobar la Positivo 10 25.1 1.90 7.6%
12.1 Funcionamiento de Analisis que puede estar relacionado con las primeras etapas de la
concentración de anti-H. Pylori en muestras desconocidas. colonización. * Según lo medido en diez experimentos por duplicado.
1. Es importante que el tiempo de reacción en cada pozo se
1. Registrar la absorbancia obtenida del lector de microplacas
mantenga constante para obtener resultados reproducibles. 14.2 Sensibilidad
tal como se describe en el Ejemplo 1.
2. El pipeteo de las muestras no debe extender más allá de 13.0 RANGOS DE VALORES ESPERADOS
2. Trace la absorbancia para cada suero de referencia por La sensibilidad (límite de detección) fue comprobada
diez (10) minutos para evitar desviaciones del análisis. Un estudio de la población aparentemente sana (n = 118) y los
duplicado contra la correspondiente actividad de anti- determinando la variabilidad del calibrador '0 U / ml ' y el uso de
pacientes que sufren de alteraciones gástricas (n = 154) se
H.pylori en U/ml sobre el papel de gráfica lineal (No
3. Muestras altamente lipémicas, hemolizadas o ampliamente la estadística 2σ (95% de certeza) para calcular la dosis mínima:
contaminadas (s) no debe ser utilizadas. llevaron a cabo para determinar los valores esperados para el
promedie los duplicados de las referencias del suero antes Accubind ™ anti-H. Pylori ELISA. Basándose en los datos, se
4. Si más de una (1) placa se utiliza, se recomienda repetir la La IgG AccuBind ™ sistema de prueba ELISA tiene una
de trazar). curva de dosis respuesta. establecieron los siguientes puntos de corte.
sensibilidad del 0,1424 U / ml.
3. Dibuje la curva a través de los puntos trazados. 5. La adición de solución de sustrato inicia una reacción La IgM AccuBind ™ sistema de prueba ELISA tiene una
4. Para determinar el nivel de actividad anti-H. pylori para un cinética, que es terminada por la adición de la solución de La presencia de anticuerpos contra H. pylori confirmada sensibilidad del 0,065 U / ml.
desconocido, localizar el promedio de absorbancia de los (CONC)
parada. Por lo tanto, el sustrato y solución de parada debe La IgA AccuBind ™ sistema de prueba ELISA tiene una
duplicados para cada desconocido en el eje vertical de la añadirse en la misma secuencia para eliminar cualquier IgG > 20 U/mL sensibilidad del 0,304 U / ml.
gráfica, encuentre el punto de intersección en la curva, y lea desviación de tiempo durante la reacción. IgA > 20 U/mL
la concentración (en U/ml) desde el eje horizontal del 6. Los lectores de placas miden verticalmente. No toque el IgM > 40 U/mL 14.3 Exactitud
gráfico (los duplicados del desconocido se promedian como fondo de los pozos. El método ELISA anti-H. pylori AccuBind ™ fue comparado con
se indica). En el siguiente ejemplo el promedio de 7. Si no se retira la solución adherida adecuadamente en la Es importante tener en cuenta que el establecimiento de un un método de ELISA de referencia. Muestras biológicas de
absorbancia 1,603 intersecta la curva de dosis respuesta a etapa de lavado aspiración o decantación (s) puede dar lugar intervalo de valores que se pueden esperar para ser encontrado diferentes concentraciones fueron ensayadas.
64,0 U/ml de concentración de anti-H. pylori (véase la Figura a la réplica de resultados falsos. por un método en una población de personas "normales" es
1). * 8. Use componentes del mismo lote. No mezcle los reactivos dependiente sobre una multiplicidad de factores: la especificidad 15.0 REFERENCIAS
Nota: un software de reducción de datos diseñado para el de lotes diferentes. del método, la población analizada y la precisión del método en 1. Warren, J.R., Lancet, 1, 1273 (1983).
ensayo de ELISA puede usarse también para la reducción 9. Una concentración muy alta de anti-H. pylori en muestras de las manos del analista. Por estas razones cada laboratorio debe 2. Marshall, B., Lancet, 1, 1273 (1983).
de datos. Si dicho software se utiliza, la validación del pacientes pueden contaminar las muestras siguientes. Los establecer el rango de valores esperados establecidos por el 3. Strickland, R. G., and Mackay, I.R., Amer. J . Diag. Dis , 18 426
software debe ser comprobada. malos duplicados son indicativos de contaminación cruzada. fabricante solamente hasta que un rango en casa puede (1973).
Repita cualquier muestra, que sigue a cualquier muestra de determinarse por los analistas usando el método con una 4. Morris, A. G., and Nicholson, G., Amer. J. Gastroenterol, 82, 192
EJEMPLO 1 (resultados típicos para IgG, M o A) paciente con más de 3,0 unidades de absorbancia. población autóctona de la zona en la que está situado el (1987).
Muestra Abs Media Valor 10. Las muestras de pacientes con concentraciones superiores a laboratorio. 5. Sethi, P., et. al., Post Grad. Med. J., 63, 543 (1987).
No. De pozos Abs (A) 6. Marshall, B.J., et. al., Med. J. Aust. 42, 436 (1985)
I.D. (B) (U/ml) 100 U/ml puede diluirse (1/5 o 1/10) más allá de la inicial de
1/100 de dilución utilizando el diluyente de suero. La 7. Steer, H: J. Pathology., 146:355.1985
A1 0.042
14.0 CARACTERISTICAS DE DESEMPEÑO 8. Strickland, R. and Mackay,I: Amer. J. Diag. Dis.,18:426,1973.
Cal A 0.044 0
concentración de la muestra se obtiene multiplicando el
resultado por el factor de dilución. 9. McKenna,D: Gastroenterology.,912:1528,1987
B1 0.046
11. Las muestras, que están contaminadas microbiológicamente, 14. Presicion 10. Blaser,M. (ed): Campylobacter Pylori in Gastritis and Peptic Ulcer
C1 0.424 no se debe utilizar. La precisión inter y entre análisis del AccuBind Test ™ ELISA Disease. New York, Ikagu-Shion. 1989.
Cal B 0.406 10
D1 0.388 12. Se require un pipeteado exacto y preciso, así como un anti-H.pylori se determinó por análisis en dos niveles
Revision: 4 Date:060712 DCO: 0639
tiempo exacto y cumplimiento de los requisitos de diferentes de pooles de sueros control. El número, el valor Cat #: 1425-300 (IgG) Cat #: 1525-300 (IgM) Cat #: 1625-300 (IgA)
E1 0.810 temperatura prescritos. Cualquier desviación en las medio, la desviación estándar (σ) y el coeficiente de variación
Cal C 0.791 25 instrucciones dadas por Monobind pueden generar
F1 0.772 para cada uno de estos sueros de control se presentan a
resultados pueden ser inexactos. continuación.
G1 1.351 13. Todas las normas nacionales aplicables, reglamentos y
Cal D 1.312 50 leyes, incluyendo, y los procedimientos de laboratorio, deben
H1 1.273 14.1.1 Precisión anti-H. pylori - IgG
seguirse estrictamente para garantizar el cumplimiento y el TABLA 2
A2 2.377 uso adecuado del dispositivo. Precisión Intra ensayos (valores en U / ml)
Cal E 2.328 100 14. Es importante calibrar todo el equipo por ejemplo, Pipetas,
B2 2.279
Lectores, Lavadores y / o de los instrumentos automatizados Muestra N X C.V.
C2 0.163 utilizados con este dispositivo, y realizar el mantenimiento Negativo 20 5.5 0.31 5.6%
Paciente
0.172 5.2 preventivo de rutina. Positivo 20 43.2 1.85 4.3%
1 D2 0.182
TABLE 3*