INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS

MÉTODOS DE ANÁLISIS

ANÁLISIS ESPECTROFOTOMÉTRICO DE UN
SISTEMA MULTIPLE

ALUMNO: RÍOS GARCÍA BERTARIO

GRUPO: 4IV1

SECCIÓN: 3
 OBJETIVO
 Aprender a calcular la longitud de onda de una mezcla de dos
componentes.
FUNDAMENTO
El análisis de varias especies absorbentes presentes en una muestra se puede
realizar sin separar necesariamente los analitos, ya que cada analito presenta
espectros de absorción diferentes. En el análisis simultáneo se aplica el principio de
aditividad de las absorbancias:
Atotal=A1+A2
A=ambc
Si consideramos dos longitudes de onda:

Aλ 1 = amAλ1 b CA +amBλ1 b CB

Aλ 2 = amAλ2 b CA +amBλ2 b CB

La absortividad molar a cada longitud de onda se obtienen a partir de las curvas de

calibración como valor de pendientes preparadas con patrones de cada
componente o de las curvas espectrales y Ca y Cb resultan las incógnitas. Para
manejar un sistema múltiple hay que considerar que los componentes no deben
presentar interacciones químicas entre sí ni con el solvente comportándose cada
mezcla o analito como independiente, además para poder escoger longitudes de
onda donde se considera que una absorba más a una longitud y menos en la otra y
viceversa para que pueda cumplirse la ley de la aditividad.
 RESULTADOS
DETERMINACIÓN DE LAS LONGITUDES DE ONDA DE TRABAJO (λ1 y λ2 )
Tabla 1. Valores de absorbancia para construir los espectros de absorción de K2Cr2O7 y KMnO4.

Longitud de A A Longitud de A A
onda (nm) 𝑲𝟐 𝑪𝒓𝟐 𝑶𝟕 𝑲𝑴𝒏𝑶𝟒 onda 𝑲𝟐 𝑪𝒓𝟐 𝑶𝟕 𝑲𝑴𝒏𝑶𝟒
340 3 0.264 480 0.352 0.145
350 3 0.244 490 0.254 0.224
360 3 0.206 500 0.171 0.302
370 2.414 0.147 510 0.105 0.375
380 2.025 0.086 520 0.054 0.447
390 1.398 0.039 530 0.022 0.476
400 0.878 0.008 540 0.002 0.446
410 0.607 -0.006 550 -0.008 0.450
420 0.559 -0.009 560 -0.013 0.283
430 0.588 -0.004 570 -0.014 0.258
440 0.609 0.006 580 -0.014 0.126
450 0.587 0.025 590 -0.015 0.050
460 0.531 0.049 600 -0.014 0.036
470 0.450 0.094

Espectros de absorción (K2Cr2O7 KMnO4)

3
2.8
2.6
2.4
2.2
2
Absorbancia

1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
330 350 370 390 410 430 450 470 490 510 530 550 570 590 610
Longitud de onda λ [nm]
K2Cr2O7 KMnO4

Gráfica 1. Espectros de absorción de K2Cr2O7 y KMnO4.

A partir del espectro de absorción obtenido (Gráfica 1) se eligieron dos longitudes

de onda analíticas o de trabajo, una para el dicromato de potasio y otra para el
permanganato de potasio.
 Tabla 2.Valores de 𝜆𝑚á𝑥 para K2Cr2O7 y KMnO4.

Compuesto 𝝀𝒎á𝒙

K2Cr2O7 350

KMnO4 500

¿Por qué se eligen estas longitudes de onda?

Se decidió utilizar las longitudes de onda de 350 y 500 nm, ya que debe buscarse
una longitud de máxima absorción para el analito, pero, además, que en general,
en dicha longitud la absorbancia del resto de los componentes de la matriz sea
mínima.
OBTENCIÓN DE LAS ABSORTIVIDADES MOLARES DE CADA COMPONENTE
A LAS DOS LONGITUDES DE ONDA SELECCIONADAS (𝜆350 𝑦 𝜆500 )
Tabla 3. Curvas de calibración de K2Cr2O7 y KMnO4 a 𝜆380 𝑦 𝜆500 .

Compuesto Dilución Concentración molar [M] 𝑨𝟑𝟓𝟎 𝑨𝟓𝟎𝟎

K2Cr2O7 1:7 0.00022857 0.524 0.014
1:6 0.00026667 0.661 0.021
1:5 0.00032000 0.774 0.024
1:4 0.00040000 0.966 0.037
1:3 0.00053333 1.310 0.058
1:2 0.00080000 1.951 0.085
KMnO4 1:7 0.00005714 0.027 0.025
1:6 0.00006667 0.043 0.037
1:5 0.00008000 0.047 0.042
1:4 0.00010000 0.059 0.050
1:3 0.00013333 0.082 0.083
1:2 0.00020000 0.104 0.127

Cálculo de la concentración molar de las diluciones.

Para el cálculo de concentraciones se considera la fórmula: 𝐶0 ∗ 𝑉0 = 𝐶𝑓 ∗ 𝑉𝑓
(𝐶0 ∗𝑉0 )
Despejando……….. 𝐶𝑓 = 𝑉𝑓

Ejemplo: Dilución 1:6 de (0.0016 𝑀)(1 𝑚𝐿)

K2Cr2O7 𝐶𝑓 =
6 𝑚𝐿

o 𝐶0 = 0.0016 𝑀 𝑪𝒇 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟐𝟔𝟔𝟔𝟕 𝑴
o 𝑉0 = 1 𝑚𝐿
o 𝑉𝑓 = 6 𝑚𝐿
Sustituyendo
 Curvas de calibración de K2Cr2O7
2.5

y = 2,468.58616x - 0.01756
2 R² = 0.99921
Absorbancia

1.5

0.5 y = 126.04213x - 0.01370

R² = 0.99068
0
0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006 0.0007 0.0008
Concentración [M]
A350
A380 A500 Linear ( (A350)
A380) Linear (A500)
(A500)

Gráfica 2. Curvas de calibración de K2Cr2O7.

Curvas de calibración de KMnO4

0.35

0.3

0.25
Absorbancia

0.2
y = 707.61x - 0.0145
0.15 R² = 0.9904

0.1

0.05
y = 517.38998x + 0.00539
R² = 0.96008
0
0.00005 0.00007 0.00009 0.00011 0.00013 0.00015 0.00017 0.00019 0.00021
Concentración [M]
A380
A350 A500 Linear (A380)
(A350) Linear (A500) Linear (A500)

Gráfica 3. Curvas de calibración de KMnO4.

A partir de las curvas de calibración (Gráficas 2 y 3), se realizó la regresión lineal de

cada una de las rectas, obteniendo 4 ecuaciones diferentes, donde la pendiente de
cada una de ellas representa las absortividades de los analitos, dos por cada uno,
a diferentes longitudes de onda.
Tabla 4. Valores de 𝑎𝑚 para K2Cr2O7 y KMnO4 a 𝜆350 𝑦 𝜆500 .

Sustancia
K2Cr2O7 KMnO4
Absortividad
𝒂𝒎 a 𝝀𝟑𝟓𝟎 2,468.58616 517.38998
𝒂𝒎 a 𝝀𝟓𝟎𝟎 126.04213 707.61

COMPROBACIÓN DE LA LEY DE LA ADITIVIDAD EN UN SISTEMA MÚLTIPLE.

Tabla 5. Valores de 𝐶𝑚 y absorbancia en las mezclas de K2Cr2O7 y KMnO4.

Mezcla No. 𝑪𝒎 𝑪𝒎 𝑨𝒐𝒃𝒔𝒆𝒓𝒗𝒂𝒅𝒂

𝑲𝟐 𝑪𝒓𝟐 𝑶𝟕 𝑲𝑴𝒏𝑶𝟒 𝝀𝟑𝟓𝟎 𝝀𝟓𝟎𝟎
1 0.00080 0.00004 0.811 0.060
2 0.00040 0.00010 0.473 0.058
3 0.00016 0.00020 0.238 0.089
 Cálculo de la concentración molar de las mezclas.
Para el cálculo de concentraciones se considera la fórmula: 𝐶0 ∗ 𝑉0 = 𝐶𝑓 ∗ 𝑉𝑓
 Ejemplo: Mezcla 1

o 𝐶0𝑲𝟐 𝑪𝒓𝟐 𝑶𝟕 = 0.0016 𝑀

o 𝑉0𝑲𝟐 𝑪𝒓𝟐 𝑶𝟕 = 5 𝑚𝐿

o 𝐶0𝑲𝑴𝒏𝑶𝟒 = 0.0004 𝑀
o 𝑉0𝑲𝑴𝒏𝑶𝟒 = 1 𝑚𝐿

o 𝑉𝑓 = 10 𝑚𝐿
Tabla 6. Valores de absorbancia observados y calculados de las mezclas de
K2Cr2O7 y KMnO4.

Mezcla No. 𝑨𝒐𝒃𝒔𝒆𝒓𝒗𝒂𝒅𝒂 𝑨𝒄𝒂𝒍𝒄𝒖𝒍𝒂𝒅𝒂

𝝀𝟑𝟓𝟎 𝝀𝟓𝟎𝟎 𝝀𝟑𝟓𝟎 𝝀𝟓𝟎𝟎
1 0.811 0.060 1.9955 0.1291
2 0.473 0.058 1.0391 0.1211
3 0.238 0.089 0.4984 0.1616

 Cálculo de la Absorbancia Calculada.

 Según la ley de la Fotometría: 𝐴 = 𝑎𝑏𝑐
 De acuerdo a le ley de la aditividad: 𝐴𝑇(𝜆1) = 𝐴𝐴(𝜆1) + 𝐴𝐵(𝜆1)
  Por lo tanto, según los componentes de nuestro sistema, se obtienen las
absorbancias calculadas de cada mezcla a las dos longitudes de onda
seleccionada (350 y 500 nm).
𝐴𝑇 |350 = (𝑎𝑚 |350 𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 )(𝑏)(𝐶𝑚 𝐾2 𝐶𝑟2𝑂7 ) + (𝑎𝑚 |350 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )(𝑏)(𝐶𝑚 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )
𝐴𝑇 |500 = (𝑎𝑚 |500 𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 )(𝑏)(𝐶𝑚 𝐾2 𝐶𝑟2𝑂7 ) + (𝑎𝑚 |500 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )(𝑏)(𝐶𝑚 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )
Se puede omitir el paso de luz (b), dado que el valor de este es unitario (1 cm). Por
lo tanto, sustituyendo los valores de concentración y absortividad, tenemos:
 Mezcla 1:
𝐴𝑇 |350 = (2,468.58616)(0.00080) + (517.38998)(0.00004) = 𝟏. 𝟗𝟗𝟓𝟓
𝐴𝑇 |500 = (126.04213)(0.00080) + (707.61)(0.00004) = 𝟎. 𝟏𝟐𝟗𝟏

 Mezcla 2:
𝐴𝑇 |350 = (2,468.58616)(0.00040) + (517.38998)(0.00010) = 𝟏. 𝟎𝟑𝟗𝟏
𝐴𝑇 |500 = (126.04213)(0.00040) + (707.61)(0.00010) = 𝟎. 𝟏𝟐𝟏𝟏

 Mezcla 3:
𝐴𝑇 |350 = (2,468.58616)(0.00016) + (517.38998)(0.00020) = 𝟎. 𝟒𝟗𝟖𝟒
𝐴𝑇 |500 = (126.04213)(0.00016) + (707.61)(0.00020) = 𝟎. 𝟏𝟔𝟏𝟔

COMPROBACIÓN DE LA LEY DE LA ADITIVIDAD

0.9

0.8

0.7
Absorbancia observada

0.6 y = 0.37936x + 0.06058

R² = 0.99692
0.5

0.4

0.3

0.2

0.1 y = 0.802x - 0.0411

R² = 0.9832
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Absorbancia calculada
A350
A380 A500 Linear (A380)
(A350) Linear (A500) Linear (A500)

Gráfica 4. Gráfico realizado para comprobar la Ley de la Aditividad

A partir de la regresión lineal realizada a cada recta se obtiene el coeficiente de
correlación R y el de determinación R2.

Tabla 7. Valores de 𝑅 y 𝑅2 a 𝜆350 𝑦 𝜆500 .

𝝀𝟑𝟓𝟎 𝝀𝟓𝟎𝟎
𝑹 0.9984 0.9915
𝑹𝟐 0.99692 0.9832

DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE K2Cr2O7 y KMnO4. EN LA

SOLUCIÓN PROBLEMA.

 Problema No. 2

Tabla 8. Valores de absorbancia a 𝜆350 𝑦 𝜆500 .de la muestra problema

λ A Absorbancia
𝝀𝟑𝟓𝟎 1.971
𝝀𝟓𝟎𝟎 0.245
Según la ley de la Fotometría: 𝐴 = 𝑎𝑏𝑐
De acuerdo a le ley de la aditividad: 𝐴𝑇(𝜆1) = 𝐴𝐴(𝜆1) + 𝐴𝐵(𝜆1)
Por lo tanto, según los componentes de nuestro sistema, obtenemos lo siguiente:
𝐴𝑇 |350 = (𝑎𝑚 |350 𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 )(𝑏)(𝐶𝑚 𝐾2 𝐶𝑟2𝑂7 ) + (𝑎𝑚 |350 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )(𝑏)(𝐶𝑚 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )
𝐴𝑇 |500 = (𝑎𝑚 |500 𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 )(𝑏)(𝐶𝑚 𝐾2 𝐶𝑟2𝑂7 ) + (𝑎𝑚 |500 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )(𝑏)(𝐶𝑚 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )
Dado que el paso de luz (b) tiene un valor unitario (1 cm), puede descartarse de la
ecuación. Y sustituyendo los valores de absorbancia total (Tabla 8) y absortividad
obtenidos en la práctica (Tabla 4) tenemos el siguiente sistema de ecuaciones:
o 1.971 = (2,468.58616)(𝐶𝑚 𝐾2 𝐶𝑟2𝑂7 ) + (517.38998)(𝐶𝑚 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )
o 0.245 = (126.04213)(𝐶𝑚 𝐾2 𝐶𝑟2𝑂7 ) + (707.61)(𝐶𝑚 𝐾𝑀𝑛𝑂4 )
Resolviendo el sistema de ecuaciones obtenemos las concentraciones de la
solución Problema No.2:
𝒎𝒐𝒍
𝑪𝒎 𝑲𝟐 𝑪𝒓𝟐 𝑶𝟕 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟕𝟓𝟒𝟎𝟑 [ ]
𝑳
𝒎𝒐𝒍
𝑪𝒎 𝑲𝑴𝒏𝑶𝟒 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟐𝟏𝟏𝟖𝟑 [ ]
𝑳
DISCUSIÓN
Es importante destacar que en un sistema múltiple la absorbancia total de la mezcla
será equivalente a la suma de las absorbancias individuales, siempre y cuando las
sustancias no reaccionen entre sí, y sus picos de absorción no sean muy cercanos.
A partir de lo anterior nos basamos para discutir sobre la práctica. Dado que
suponemos que el K2Cr2O7 y el KMnO4 forman un sistema múltiple, se realizaron
los espectros de absorción individuales (Gráfica 1) para elegir las longitudes de
onda analíticas (de trabajo) seleccionando 350 nm para K2Cr2O7 y 500 nm para
KMnO4. Como criterio para seleccionar la longitud de onda analítica debe de
buscarse una longitud de máxima absorción para el analito, pero, además, que en
general, en dicha longitud la absorbancia del resto de los componentes de la matriz
(sistema) sea mínima. Dado que nuestro sistema consta de dos componentes, se
seleccionaron dos diferentes longitudes de onda pues así se garantiza que la
interacción materia-energía sea alta en cada uno de los analitos de manera
individual y así puedan ser cuantificados.
Posteriormente se realizaron las curvas de calibración de KMnO 4 y K2Cr2O7, con
diferentes diluciones de los anteriores analitos en H2SO4, leyéndose a las longitudes
de onda seleccionadas. A partir de las curvas obtenidas (Gráficas 2 y 3) se
determinó que el comportamiento fue directamente proporcional, la concentración
con respecto a la absorbancia, por lo que se concluye que siguen la ley de Bouguer
y Beer (𝐴 = 𝑎𝑏𝑐). Realizando la regresión lineal de cada curva se obtuvo la ecuación
de la recta donde la pendiente de esta representa la absortividad molar del analito
a la longitud de onda a la cual fue leída. Es importante conocer la absortividad molar
de cada componente a cada longitud de trabajo; como la mezcla está formada por
dos componentes se requieren 2 absortividades para cada sustancia (Tabla 4).
Para comprobar la Ley de la Aditividad en un sistema múltiple se realizaron una
serie de mezclas con concentraciones conocidas de los analitos (KMnO4 y K2Cr2O7),
leyendo dichas mezclas a las longitudes de onda seleccionadas obteniendo así
valores de Absorbancia (observadas). Para comprobar la Ley de la Aditividad se
calcularon de manera teórica las absorbancias de las mezclas mediante la ley
General de la Fotometría. Una vez teniendo estas dos absorbancias (observada y
calculada) a 𝜆350 𝑦 𝜆500 se graficaron los datos (Gráfica 4) de absorbancia
observada vs absorbancia calculada. En dicha gráfica se esperarían dos líneas
rectas (R = R2 = 1), pendiente (m) de 1, sin embargo, siempre existen errores
sistemáticos que afectan el resultado final. Los valores obtenidos de las lecturas a
la longitud de onda de 350 nm fueron; R=0.9984; R2=0.99692; m=0.37936. Por otro
lado, a la longitud de onda de 500 nm se obtuvieron R=0.9915; R2=0.9832; m=0.802.

Comparando los datos obtenidos contra los ideales (los que se esperaría tener),
tenemos que a 𝜆500 se cumple la linealidad ya que algunos datos (R, R2) se
aproximan a los ideales, por otra parte a 𝜆350 de igual forma se cumple la linealidad
y datos obtenidos son muy cercanos a los ideales. De lo anterior podemos decir que
existieron errores sistemáticos los cuales ocasionaron variación en los datos, dichos
errores pudieron haberse presentado al momento de realizar la curva de calibración,
a la preparación de las mezclas, por otro lado es posible que las longitudes de onda
seleccionadas no hayan sido las adecuadas y que la interacción materia energía,
en este caso de KMnO4 (𝜆500 ), no haya sido la suficiente para poder cuantificar el
analito. Pero por los datos obtenidos a 𝜆380 y la cercanía de ellos a 𝜆500 ,
consideramos tenemos presente un sistema múltiple el cual cumple la ley de la
aditividad.
Finalmente, considerando que tenemos un sistema múltiple en el cual no existe
interacción química entre los analitos, KMnO4 y K2Cr2O7, a partir de la ley general
de la fotometría y la Ley de la Aditividad se calculó la concentración de los analitos
en la muestra problema (No. 2), proporcionada por el profesor, obteniendo una
concentración de 0.00075403 M de K2Cr2O7 y 0.00021183 M de KMnO4

CONCLUSIONES
 Se comprobó la ley de la aditividad en un sistema múltiple de K2Cr2O7 y
KMnO4 disueltos en H2SO4
 Se determinaron las constantes fotométricas, las cuales fueron aplicadas en
el cálculo de la concentración de K2Cr2O7 y KMnO4 de una muestra problema.

REFERENCIAS
 Francisco P.M. (1945). Espectrofotometría aplicada a la medicina. España:
Real academia de medicina. (p.p.: 222-223)
 Pickering, W. (2000). Química Analítica Moderna. 2ª Edición. España:
Reverte S.A. pp.154-156