Laboratorio Cromatografía

María Fernanda Ruiz Moreno ​Cód (2224253),​ Arley Giovanni Cardenas Rodríguez ​Cód (2211327),
Eliana Velandia Aguilera ​Cód (2201075)​
Laboratorio Química Orgánica, Grupo (QOA1), Prof. Emilbus Azelleb Uribe;
Ingeniería Ambiental, Departamento de Ciencias Básicas Universidad Santo Tomás

Realizada 28 de agosto de 2017

1. Objetivos

● Identificar cada uno de los componentes de un sistema cromatográfico.

● Entender los principios cromatográficos en la purificación e identificación de moléculas orgánicas.
● Comprender la relación entre la estructura química de una molécula y su comportamiento en un
sistema cromatográfico.
● Extrapolar el uso de la cromatografía usada en la práctica con aplicaciones en el análisis ambiental.

2. Resumen
En esta práctica de laboratorio, cuyo propósito es la identificación de pigmentos en una muestra analizada se pudo
identificar en todas las prácticas un arrastre de colores en el papel (fase estacionaria) que definen por medio de
tablas estándar de colores cromatográficos el componente presente en la muestra analizada. Para los puntos
pintados, en agua estos se disocian, se observa que en el etanol se concentran sin correrse mucho en el papel y en el
Nacl se dispersan poco. Para la espinaca en etanol y Nacl, se observa que en el etanol el color no sube sino el solo
alcohol, en cambio en el Nacl sube el color del pigmento divisando solo clorofila A (Tono verde), esto por la
disociación de las moléculas que provocan iones polares y apolares.
Se utilizan distintos solventes para comprobar la efectividad (tiempo) de arrastre de los pigmentos en el papel como
lo fueron una solución de NaCl 1% y Alcohol.

3. Palabras claves
fase móvil, fase estacionaria, maceración, solventes,

4. Introducción

La cromatografía en papel es una técnica que sirve para separar sustancias, esta se basa en la velocidad
con la que es arrastrada cada sustancia a través de un medio poroso (papel filtro) por un disolvente en
movimiento. A medida que el disolvente se desplaza por el medio poroso va arrastrando los pigmentos
que contiene la sustancia, unos van con una mayor velocidad que otros; al pasar un tiempo se forman unas
franjas de color marrón las cuales corresponden a los componentes de la sustancia.

La cromatografía en papel separa los componentes de una sustancia y esta lo hace en dos fases; la fase
móvil y la fase estacionaria. La fase móvil es la que fluye a través de la fase estacionaria y arrastra con
ella los compuestos de la mezcla, esta puede ser líquida o gaseosa; y la fase estacionaria en la cual los
componentes de la sustancia quedan retenidos, esta fase puede ser líquida o sólida.
 5. Procedimiento

1. Separación de tintes

Para realizar el primer procedimiento se separaron por seis (6) colores diferentes unos dulces (M&M’s), se
adicionaron cinco (5) dulce de cada color a un tubo de ensayo, es decir, cada color a un tubo diferente y se
adiciono a cada tubo aproximadamente 0,5 ml de agua con el fin de que la capa de color del dulce se
disolviera. Seguido de esto se cortaron los bordes de un papel filtro de tal manera que cada uno quedará en
forma de cuadrado y se dibujó una margen a 1cm del borde en cada uno. Con un lápiz se dibujaron 6
puntos sobre una línea de la margen del papel filtro, cada uno separado por 1cm de distancia y sobre cada
punto dibujado se puso un punto, cada uno de diferente color de la solución de dulces con ayuda de un
capilar, este debía ser diferente para cada color, cada punto fue puesto 3 veces. El procedimiento dicho
anteriormente se repitió en otros dos papel filtro para tener un total de tres papel filtro.

En una caja de petri se adiciono una solución salina con una concentración del 1% (NaCl 1%) a una
profundidad de 0,5 cm; se dobló el papel filtro por la mitad, de tal manera que pudiera sostenerse parado
solo y se sumergió en la solución de tal manera que los puntos de colores quedaran hacia el lado de la
solución. Cuando la solución salina subió hasta la margen realizada a 1 cm del borde del papel filtro, este
se retiró de la solución y se puso en una superficie limpia y seca para que secara. Otro papel filtro fue
sumergido en alcohol y otro en agua. Al finalizar, se compararon las manchas de cada uno de los colores y
se analizaron diferencias y similitudes.

2. Espinaca

Para la segunda parte de la práctica de laboratorio se trituraron 5 hojas de espinaca en un mortero y se

pusieron en un vaso de precipitados, luego fueron trituradas otras 5 hojas las cuales fueron dejadas en el
mortero con el fin de tener dos muestras. A la muestra contenida en el vaso de precipitados se le adiciono
alcohol y a la que estaba en el mortero se le adiciono una solución salina. Con ayuda de la espátula se
revolvió la espinaca triturada con cada una de las soluciones adicionadas hasta obtener una solución
líquida de cada muestra, estas fueron regadas un una caja de petri, es decir cada una en una caja de petri
diferente. Luego de esto al mismo tiempo fue sumergida una lámina de papel filtro en cada una de las
muestras, y se esperó un tiempo aproximado de 35 min hasta que en el borde de la solución que había
subido por el medio poroso se pudiera observar un color marrón.

6. Resultados y Análisis de Resultados

Resultados En la separación de tintes.

Al cabo de 21min:17seg la dispersión de los colores del agua a partir de la línea de inicio, se corrieron 6.5
cm, siendo este el que más se corrió en el papel filtro, en el etanol se corrió 2.8cm, siendo el más bajo y
finalmente el NaCl los colores se corrieron 5.8cm.
 Soluto Factor de retención

Para colores de dulces m&m en agua destilada FR=b/a

a=7.5cm b=6.5cm
FR= 0.86

Para colores de dulces m&m en Alcohol etílico FR=b/a

a=7.5cm b=2.8cm
FR= 0.37

Para colores de dulces m&m en NaCl FR=b/a

a=7.5cm b=5.8cm
FR= 0.77

Las hojas de papel filtro marcadas con los puntos de cada color de las soluciones que se hicieron
anteriormente con alcohol etílico, se procedieron a dejar en soluciones de agua destilada, alcohol etílico y
Nacl, como se muestra en la imágen 1. Estas llevan un seguimiento en sus tiempos en donde se puede ver
que en etanol los colores del filtro se concentran, aunque se corren unos pocos milímetros, en el caso del
agua los colores tuvieron gran dispersión en el papel filtro debido a su alta polaridad, y en NaCl los puntos
de colores se dispersaron en poca medida, haciéndose notorio que los colores más oscuros se dispersan y
los más claros se mantienen, pero en si no hay pérdida del tono original como pasa con el agua en donde
los colores se dispersan en gran cantidad

Imagen 1. Separación de tintes de dulces m&m, Minuto 9:11 seg

Resultados para la espinaca.

Al cabo de 18 min 34 seg la diferencia de altura en los filtros fue de 2,5cm, siendo la más alta la hoja del
filtro con clorofila A, o sea la que estaba en solución salina. En el alcohol etílico solo subio medio
centímetro.

Tanto el Alcohol etílico al 70%, el agua destilada y el NaCl son sustancias que presentan un grado
diferente de solubilidad, lo cual permite su separación cuando una solución de la misma asciende por una
tira de papel poroso (papel de filtro), ya que las más solubles se desplazarán a mayor velocidad, pues
acompañarán fácilmente al disolvente a medida que éste va ascendiendo en este caso los pigmentos de la
espinaca. De esta forma, al cabo de cierto tiempo, a lo largo del papel de filtro se irán situando los
distintos pigmentos en forma de bandas coloreadas. Los cloroplastos de los vegetales contiene una mezcla
de pigmentos con diferentes colores: Clorofila A:verde intenso, clorofila B:verde, carotenos: amarillo
claro y Xantofilas: amarillo o anaranjado en diferentes proporciones, tanto más desplazadas cuanto más
solubles sean los pigmentos a que pertenecen.
En las soluciones de alcohol y NaCl etílico en pigmentos de espinaca, se pudo observar primero, que en el
compuesto NaCl el color sube por el papel filtro observándose durante los 16 min 34 seg que demoró en
llegar al borde del papel filtro, un tono de color verde oscuro, o sea Clorofila A, como se observa en la
imagen. Esto debido a que el NaCl es una red iónica, usada como disolvente polar en donde las moléculas
se disocian provocando ​el acercamiento a el diferencial de carga positivo del agua a los iones Cl- y el
negativo al Na+, debilitando el enlace iónico, y logrando que los iones se alejen y así lo disuelva. Para el
caso del alcohol etílico, esté solo subió y el color en muy poca proporción, como se muestra en la imagen
3, este presenta inicialmente clorofila A, y luego clorofila B, hay que tener en cuenta que este presenta
características de volatilidad, que es una sustancia iónica.

Rf=

Finalmente al cabo del tiempo que tardó en llegar al borde del papel

Imagen 2. Filtrado Soluciones en etanol y Nacl Imagen 3. papel filtro con Colores de los
de pigmentos de la espinaca pigmentos de la espinaca.

7 . Conclusiones
● Como resultado de la investigación presentada es posible concluir que gracias a esta práctica se
identificaron los componentes de un sistema cromatográfico.
● Por, consiguiente, se concluye que para que una se realice correctamente se deben tener
conocimientos previos del fundamento de la cromatografía que facilitaran la identificación de las
moléculas orgánicas que en este caso fue la clorofila -B.
● Por otro lado, en los procedimientos se identificó que la estructura de la molécula se vio afectada,
generando en el papel una separación de pigmentos por afinidad de polaridad con dichos solventes.
● Por último, gracias a esta práctica podemos utilizar el uso de la cromatografía para la
identificación, separación de compuestos en materias orgánicas, para la elaboración de productos
químicos,(por ejemplo en el caso de la fotosíntesis favorece su proceso, también tiene vitaminas y
minerales para el sistema de los herviboros.).
● Es debido a esto que se puede concluir que en cada tipo de procedimiento para que tenga éxito
debe manejarse adecuadamente y tener los conceptos claros.
8. Respuesta a las cuestiones

● ¿Cómo afecta la estructura química de las moléculas sus propiedades físicas como solubilidad?

Entre más soluble sea una sustancia mejor será para dispersar o separar componentes de ciertas sustancias,
teniendo en cuenta si es polar o no. Si la polaridad es menor en la fase móvil del experimento, la velocidad
de los pigmentos vegetales aumentará.

● ¿Que tipo de fuerzas intermoleculares permiten la interacción entre moléculas?

Fuerza dipolo-dipolo: ​Este tipo de unión se produce cuando las dos moléculas poseen cargas
positivas y negativas, es decir son moléculas polares que se atraen electrostáticamente y
forman una unión.

Fuerza dipolo-dipolo inducido: Este tipo de unión es producida cuando una molécula no polar tiene la
posibilidad de polarizarse al acercarse a una molécula polar. En este caso la molécula polar induce la
creación de la molécula apolar en una polar.

● ¿En que se basa el principio semejante disuelve semejante?

Se refiere a que dos sustancias que van a ser mezcladas deben tener una composición molecular
semejante, las sustancias polares o iónicas suelen ser más solubles en solventes polares, y las sustancias no
polares suelen ser más solubles en solventes no polares.

9. Referencias
● Dominguez, X. A., & Dominguez, X. A. (1975). ​Cromatografía en papel y en capa delgada (No.
543.544 DOM).
● Abbott, D. (1973). ​Introducción a la cromatografía​. Alhambra,.