SINTESIS DE PROTEINAS

La información que está en el ADN en el fragmento llamado gen, es organizada en el

ARNm para sintetizar la proteína.

La proteína constituye la “forma” y ejecuta la función. En teoría, un gen no debe

cambiar la organización de la información para que esa proteína siempre se
construya con el mismo número y tipo de aminoácidos.

Esta información es transportada en forma de clave molecular constituida por

codones con el ARNm, y los otros ARN que intervienen en la síntesis de la proteína
(ARNr, ARNt y SRP en eucariota) también son piezas importantes en el ensamblaje
proteico.

La síntesis de las proteínas se realiza en los ribosomas, que también son ARN de
estructura secundaria y terciaria asociados a proteínas.
Los ribosomas procariotas tienen 70S; la subunidad mayor con 50S contienen los
ARNr 5S y 23S más 31 proteínas. La subunidad menor con 30S contiene el ARNr
16S y 21 proteínas.
Los ribosomas eucariotas tienen 80S; la subunidad mayor con 60S contiene los
ARNr5S, 28S y 5,8S más 50 proteínas. La subunidad menor con 40S contiene el
ARNr 18S más 33 proteínas.
Las 2 subunidades están normalmente separadas y sólo se asocian durante la
síntesis de la proteína.

En procariotas, cuando el ARN se va soltando de la ARN polimerasa después de la

transcripción, los ribosomas se asocian a el, y empiezan a sintetizar el polipéptido.

En eucariota el ARN transcripto sufre una transformación para convertirse en ARNm,

y esto sucede en el núcleo. El ARNm sale del citoplasma y ahí se asocia a los
ribosomas para iniciar la síntesis de proteínas. La síntesis se puede realizar en el
citoesqueleto en diversos sitios. La más conocida es la que se realiza con los
ribosomas sobre la membrana del R.E, porque el polipéptido debe pasar a la luz del
R.E, para iniciar un proceso de plegamiento y maduración.

Nota: Si el polipéptido no necesita ingresar al R.E puede sintetizarse en el

citoplasma, generalmente asociado al orgánulo que necesite el péptido.

Ya hemos expresado que todo proceso biológico es dinámico y continuo, pero para
comprenderlo se orienta por partes.

Hablaremos de la síntesis de proteínas en E. colí, que se ha dividido en 3 pasos:

iniciación, alargamiento y terminación.

INICIACIÓN

En procariotas el codon de iniciación de ARNm que es por lo general AUG que

codifica el aminoácido modificado N-Formil Metionina.
Este codon es reconocido por un ARNt iniciador también llamado metionil-ARNt
metionina inicial que tiene el anticodon para la metionina, pero va cargado con N-
formil metionina. El codon GUG y con menos frecuencia el codon UUG también
puede iniciar la traducción, y es reconocido por el mismo ARNt metionina inicial
portando el mismo N-formil metionina. Por lo tanto, la metionina es el primer a.a de
todo polipéptido recién sintetizado, no se sabe porque este ARNt metionina inicial
reconoce los 3 codones, es como si la porción de balanceo que normalmente esta
en el nucleótido 5´ del anticodón se trasladara al nucleótido 3’ del anticodon. El
anticodón del ARNt tiene forma de la base de una mecedora, por lo tanto, tiene un
movimiento de balanceo en forma lateral. Como ya se explicó en la estructura del
ADN, los puentes de hidrógenos son posibles entre un grupo OXO de un nucleótido
y un grupo NH2 y NH de otro nucleótido, por lo tanto, la unión entre diferentes
nucleótidos es posible y bioquímicamente justificada.

El anticodon de AUG es UAC.

UAC UAC UAC

AUG GUG UUG

Los puentes de hidrógenos U---G y U---U se observan con frecuencia en el ARNr y

ARNt.

Como se elige el codon de iniciación correcto en el ARNm procariota?.

Acuérdese que el transcrito primario de procariota es el mismo ARNm y no tiene el

casquete (m7 Gppp) en el extremo 5´.

Los Drs. John Shine y Lynn Dalgarno describieron que los codones de inicio del
ARNm procariota están precedidos de una secuencia que empareja en el extremo 3´
de ARN 16s (ribosoma menor). Esta secuencia que generalmente tienen solo
purinas se localiza de 6 a 10 ns antes del codon inicio se le llama secuencia de
Shine-Dalgarno.

G
3´OH – A A
U U
UCCUCCA Interacción AUC

5´GAUUCCUAGGAGGU UUGACCU AUG CGA GCU……

Met Arg Ala

Esta porción de ARN 16s permite la correcta “posición” del ARNt iniciador. El ARNt
metíonina o iniciador es diferente al ARNt que reconoce los otros codones AUG del
ARNm.

El proceso de iniciación es así:

 Hay 3 proteínas que inician la síntesis y se llaman factores de iniciación 1,2, 3 (IF1,
IF2, IF3). El factor de iniciación 1 se asocia a la subunidad menor del ribosoma y lo
estabiliza. El IF3 asocia la subunidad menor con el ARNm.

El IF2 se asocia a una molécula de GTP + Mg++ y colocan al ARNt metiionina inicial
en un sitio hipotético llamado P de la subunidad menor. La unión del IF2 + GTP +
ARNt metíli se ha llamado complejo ternario.

El GTP se hidroliza en GDP + pi (pirofosfato).

Este “pi” es utilizado como energía para asociar la subunidad mayor. Entonces,
salen los factores de iniciación, quedando el ARNt metíli en el sitio P
metíli
La asociación de IF2 + GTP+ ARN + R30S+ ARNm+ R50S se conoce como
complejo de iniciación.

3OS
Estabilizador + IF3
IF3 IF1 = estabiliza la subunidad 30s

IF2= une al ARNtmeti del complejo

ARNm-30s

5´ IF3 AUG
3´ IF3 = une la subunidad menor de
ARNm ARNm

IF2 Mg ++
FMet
| IF2 + GTP
+ FMet + GTP Ribosoma
AUG menor
IF2
ARNt meti 5´ AUG
3´

Complejo de iniciación

Ribosoma
+ FMet mayor

IF 1,2,3

5´ AUG 3´
UCC Pi + GDP
El sitio P, es por peptidil ARNt.

1- Formación del complejo terciario.

La iniciación puede 2- Formación del complejo de iniciación.

Dividirse en 3 pasos
3- Asociación de la Subunidad mayor de ribosoma.

En eucariotas también se han descrito factores de iniciación. Un factor de

iniciación estabiliza al ribosoma menor. Otro factor asocia al casquete y lo
coloca en el sitio donde se realiza el enlace peptidico (sitio P, por peptidil
ARNt). La guía para iniciar la síntesis de proteínas es el casquete (homólogo
de la secuencia de Shine Dalgarno con respecto a la función).

ELONGACIÓN

Intervienen también 3 proteínas que se llaman factores de elongación Tu, Ts y G

(EF-Tu, EF-Ts, EF-G).

El EF-Ts se asocia a EF-Tu para que asocie GTP, posteriormente TS se libera.

EF-Tu EF-Tu
EF-Ts
+ = + GTP GTP

EF-Ts

EF-Tu – GTP asocia al próximo amino-acetil ARNt que porta el siguiente a.a, de
acuerdo al próximo codon ARNm , lo coloca en el sitio A (por amino- acil, sitio donde
entra el a.a.) se hidroliza GTP GDP + Pi y sale el EF – Tu.
Posteriormente una enzima de la subunidad mayor, la transferasa del péptido,
transfiere la metionina al ARNt del sitio A al sitio P, para formar el enlace peptídico.
Se forma entonces el metionil – dipéptido inicial.

Al mismo tiempo se “transloca” el ribosoma sobe el codón en el sentido 5´- 3´

sobre el ARNm, saliendo el ARNt que estaba en el, sitio P, y quedando en este sitio
el ARNt que estaba en el sitio A formando el primer dipéptido. El paso de la
translocacion del sitio A al sitio P esta dirigida por el EF – G + GTP.

Para los próximos a.a. se sigue el mismo proceso:

EF – Tu + GTP introduce otro aminoacil – ARNt poniendo el a.a determinado por el

siguiente codón sobre el ARNm, y lo coloca en el sitio A. La transferasa del péptido
transfiere el poli péptido del ARNt, del sitio P al ARNt del sitio A para realizar el
siguiente enlace péptido. Al mismo tiempo ocurre la translocacion del ribosoma sobe
el ARNm un codón en el sentido 5´ --- 3´, y sale del sitio P el ARNt que estaba allí
para ocupar ese sitio el ARNt que estaba en el sitio A portando los aminoácidos que
se están ligando. Los ARNt que salen del sitio P, salen del ribosoma para asociar
otros aminoácidos.

La elongación puede dividirse en los siguientes pasos:

1- colocación de amino-acil ARNt en el sitio A.

2- Acción de la transferasa de péptido para realizar el enlace peptídico en el sitio

A.

3- La translocacion del ribosoma sobre el ARNm en sentido 5´ 3´ y al mismo

la translocacion del ARNt de sitio A al sitio P.

EF – Ts: Activa el TF – Tu.

ET – TU: Junto con el GTP introduce el ARNt en el sitio A.
EF – G: Junto con el GTP realiza la translocacion.

Estos pasos se repiten a través del ARNm hasta que se llega a un codon de
terminación. El poli péptido que se va sintetizando va saliendo por la subunidad
mayor.
la subunidad mayor controla la calidad de la síntesis y en eucariotas marca el
poli péptido en determinados sitios para la posterior agregación de grupos
prostéticos (azúcares, lípidos, etc) y para el correcto plegamiento de la
proteína por su paso a través del retículo endoplásmico y del aparato de
Golpgi.

La velocidad de síntesis proteica en e.coli es de 15 a.a/seg. a 37°C y la tasa de

error en incorporación es de solo 10 -4 , ó sea, un a.a incorrecto en 20 pp que tengan
un promedio de 500 a.a. (1 a.a incorrecto c/10.000a.a).

LA TERMINACION
Cuando el ribosoma llega a un codon stop (UAG, UGA, UAA) no existen
normalmente ARNt de origen nuclear cuyos anti codones sean complementarios a
los codones de parada. La síntesis proteica termina con la ayuda de proteínas
llamadas factores de liberación o terminación (release factor = RF) que también son
dependientes del GTP.

LOS FACTORES DE LIBERACION se abrevian RF1, RF2, RF3

El RF1 reconoce los tripletes AUG y UAA.
El RF2 reconoce los tripletes UGA y UAA
El RF3 cataliza la liberación del polipéptido recién sintetizado del sitio P.

Posteriormente se disocian las dos subunidades del ribosomas.

En eucariotas se libera el ribosoma menor portando el ARNm y el ribosoma

mayor queda sobre la membrana del retículo endoplásmico para que el poli
péptido que está saliendo de él, se introduzca al interior del retículo
endoplásmico y se inicie los diversos procesos que tienen que ver con la
organización final y maduración de las proteínas.
No se conoce con certeza si el ribosoma menor queda unido al ARNm y
reinicia nuevamente el proceso desde la formación de un complejo ternario, o,
si el ARNm se disocia del ribosoma menor y se reinicia el proceso con otros
ribosomas menores. En bacterias se ha reconocido el poliribosoma. Un ARNm
procariota dura aproximadamente 2 minutos. Un ARNm eucariota puede durar
varias horas que depende de la cola de poliadenina y de proteínas protectoras;
si la síntesis de un polipéptido de 500 aa en eucariotas dura aproximadamente
30 segundos, cuántos se sintetizan en una hora?.

QUE ES UN POLIRIBOSOMA?
Cuando un ARNm va saliendo de un ribosoma se le puede asociara otra subunidad
menor. Se ha visto un ARNm asociado a varios ribosomas y esto constituye un poli
ribosoma. Esta información parece corresponder a procariotas.

CARGA DEL ARNt O ASOCIACION DEL AMINOACIDO.

La enzima que activa y asocia al a.a. al ARNt es la amino acil- ARNt sintetaza. Hay
20enzimas sintetasa especificas para cada a.a, que reconocen el ARNt compatible
con el a.a. Como hay más ARNt diferentes que enzimas; una enzima puede
reconocer diferentes ARNt con anti codones diferentes que porten un mismo
aminoácido. El a.a se une al C3´ de la adenina del extremo 3´del ARNt, y la reacción
esta catalizada por ATP.

Enzima +a.a+ATP+ARNt amino acil ARNt +AMP+Pi

Estas reaccionas ocurren fuera del ribosoma a una velocidad pasmosa. Y cuando a
un ARNt sale del sitio P se recicla para asociar nuevamente el a.a.

CONCEPTOS EXCLUSIVOS DE LA SINTESIS DE PROTEINA EN EUCARIOTA

En los genes eucariota el codon de inicio es AUG y codifica metionina (no codifica el
N-formil metionina). También puede se el UUG y GUG.

El codón de inicio esta marcado con el 7-metil guanilato, que es la señal para que el
ARNt meti inicial inicie la traducción.

El complejo de iniciación también la realizan 3 factores llamados IF1, 2,3 pero

parece que requieren más de tres factores para realizar la elongación.

El ARNm eucariótico tiene mas larga vida (función del Poli A). El ARNm procariota
solo dura minutos antes de ser degradado por endonucleasas.

Los ribosomas eucariotas son más grandes (60s y 40s) y con mayor cantidad de
proteínas (50L y 33s).

Cuando la síntesis de proteínas se realiza sobre el retículo endoplásmico, al terminar

la síntesis se suelta la subunidad menor de 40s y queda la subunidad de 60s pegada
la membrana de R.E.R en el poli péptido recién sintetizado.

INTRODUCCION DEL POLI PEPTIDO EN EL R.E.

La subunidad ribosómica 60s queda adosado a la membrana del R.E. con el

polipéptido recién sintetizado. Una proteína toma el poli péptido y lo introduce dentro
del R.E., no se sabe si pasa por un poro o por la misma capa lipidica del R.E.
La proteína que reconoce la señal (S.R.P) esta formada por 6 polipéptido y un ARN
de 300ns y trabaja en asociación con otra proteína que es un receptor sobre el R.E.
para la subunidad 60s.

FUNCIONES DE LA S.R.P.

Impide la síntesis de nuevas proteínas de secreción en ausencia de suficiente

espacio en la membrana del R.E.

Junto con el receptor permite el anclaje del ribosoma 60S (mayor).

La SRP + receptor del RE inician la transferencia del poli péptido recién

sintetizado al interior del RE.

En la luz del R.E. se inicia el plegamiento y maduración del poli péptido. Uno de los
primeros pasos en formar la estructura secundaria de la proteínas por medio de
puentes de disulfuro (S—S) conectando aminoácidos de cisteínas.
Dentro del R.E. ocurren otros procesos que tienen que ver con la síntesis, como la
formación de homo o hetero dímeros o trímeros, etc. Se realiza algunos pasos del
procesamiento de los péptidos para ser presentados al sistema inmune, como parte
de un mecanismo de “control de la calidad” de la síntesis proteica.
Profesor: Enio Hernández Aguirre