J OURNAL DE segundo Y IOSCIENCE segundo IOENGINEERING

Vol. 97, No. 6, 347-364. 2004

Scale-up Metodologías para Escherichia coli y

Los procesos de fermentación de la levadura

BETH HELENE JUNKER 1

Merck Research Laboratories, Bldg. 810-127, PO Box 2000, Rahway, NJ 07065, EE.UU. 1

Recibido el 22 de agosto de 2003/15 de marzo de de 2004 Aceptado

técnicas de escala-up de la literatura se han compilado y revisado para la aplicabilidad de

Escherichia coli y los procesos de levadura. La consistencia de los parámetros de diseño y de operación para los vasos a escala piloto en
una planta piloto de fermentación existente, que varían en volumen nominal de 100 l a
19000 l, se estableció y se compara favorablemente con los enfoques que se encuentran en la literatura. Las diferencias se observaron como
una función de parámetros tales como la escala de fermentador, la geometría del vaso, de tipo agitador / tamaño y la potencia de entrada
ungassed / gaseados. Un análisis más detallado se llevó a cabo utilizando los datos de fermentación reales para los procesos de desarrollo
históricos y recientes recogidas durante un periodo de 10 años, centrándose en las condiciones de funcionamiento en las tasas de absorción de
oxígeno cultura pico. estimaciones Scale-up se realizaron basándose en la similitud geométrica, la velocidad punta del agitador, el poder
gaseados por unidad de volumen y tiempo de mezclado. En general, los cálculos de escalado de la 280 l escala eran más similares a los
parámetros de los equipos instalados. Ampliación de la 30 l escala de laboratorio típicamente underpredicted parámetros con escala-up de la 280 l
escalar los más adecuados. el 19.000 l instalación fermentador fue notablemente diferente en similitud geométrica de la 280 l -1900 l escalas ya
que su diseño estaba destinado a acomodar una amplia gama de volúmenes de operación. Análisis de rendimiento histórico y reciente
procesamiento se llevó a cabo para los teléfonos fermentaciones bacterianas o de levadura individuales que desafiaron las condiciones de
funcionamiento de pico de los fermentadores. Identificación de las cuestiones clave asociadas con ampliación de estos vasos planta piloto
específicos se cree que es fundamental para el desarrollo eficiente de procesos, producción de material clínico, y la transferencia de proceso
que se espera una planta de fabricación.

[ palabras clave: aumentar proporcionalmente, Escherichia coli, levadura, planta piloto, fermentador]

preocupaciones generales de ADN recombinante ampliación han sido abordadas
por Van Brunt ( 1 ). Aunque las tres escalas principales para el desarrollo de
bioprocesos son de laboratorio, planta piloto y producción ( 2 ), Votruba y Sobotka han
añadido la escala de frasco de agitación a esta lista ( 3 ). La relación de escala-up es
típicamente de aproximadamente 1: 10 para procesos biotecnológicos hasta
100.000 l ( 3 ), Pero relaciones más bajas de aproximadamente 1: 5 a menudo se han utilizado para
el aumento de los niveles de confort ( es decir, disminución del riesgo de rendimiento inesperado en
la escala-up). es probable que sea acerca de la escala de producción de muchos productos de
ADN recombinante
10000 l que es más tradicionalmente a escala piloto para otros tipos de
productos ( 4 ). la exacta metodología utilizada para scaleup depende en gran
medida proc condiciones ess y si existen datos preliminares para demostrar que
el procedimiento elegido es aplicable ( 5 ).
Algunos autores sostienen que la totalidad del hábitat (Young [ 6 ] Acuñado este
término para abarcar todas las variables físicas relacionadas con el caldo del
fermentador) de la célula necesita ser considerado química y ( 6 ). Un catálogo
completo de los factores afectados por la escala se detalla ampliamente por
Reisman ( 7 ) Con los elementos clave que se destacaron por otros autores ( 1 -6)
como
bien. Además, el papel de los estudios a escala reducida puede ser importante en la
identificación y evaluación de los problemas en el gran escala ( 8 -11).
Los factores biológicos afectados por escala incluyen el número de generaciones
asociados con el desarrollo del inóculo y de producción fases, probabilidad de
mutación, la vulnerabilidad contaminación, la formación de gránulos y la presión de
selección ( 8 , 12). Los factores químicos afectados por escala incluyen (i) agentes de
control de pH ( es decir, tipo y concentración de ácido y / o base), calidad media ( es
decir, pureza de los componentes) y la calidad del agua ( 8 ); (Ii) los hidratos de carbono
( p.ej, aceite), nitrógeno ( p.ej, amoníaco), fósforo y concentraciones de productos ( 6 ); (Iii)
el potencial redox y la formación de espuma debido a la superficie cambios de tensión
( 3 ). Los factores físicos afectados por escala incluyen configuración del tanque, la
aireación, agitación, de nuevo a la presión (y la presión hidrostática), la esterilización
medio, control de temperatura / transferencia de calor y de eliminación, y de mezcla ( 3 ,
8, 12). No es un documento completo que resuma enfoques generales para ampliar las
( 13 ) Y que incluye los comentarios de otros autores sobre las implicaciones de las
tendencias generales de la ampliación. A menos que específicamente mantenido
constante, con escala de hasta el fermentador más grande, el dióxido de carbono
disuelto (dCO 2) es más alto en el recipiente más grande que el vaso más pequeño
debido a la presión de la cabeza añadido, variación de la fuerza de cizallamiento es

correo electrónico: Beth_Junker@Merck.com

teléfono: + 1-732-594-7010 Fax: + 1-732-594-7698

347
348 JUNKER J. B IOS CI. segundo IOENG.,

más alto, y mayor de mezcla es menos eficiente debido a tiempos de circulación más largas y
regiones de estancamiento más grandes ( 8 ). Además, para el recipiente más grande, la altura
del líquido a la proporción de diámetro del tanque puede ser mayor, de gas se mueve hacia
arriba con retromezcla más limitado, el oxígeno disuelto vertical, existen (DO) gradientes de si
la mezcla a granel es más lento que las tasas de transferencia de masa, y radial DO gradientes
emergen ya que la velocidad de cizallamiento disminuye rápidamente con la distancia desde el
impulsor ( 14 ). Otras tendencias en escala-up incluyen superficie de transferencia de calor
disminuyeron en relación al volumen, disminución de la calidad de la mezcla, generalmente
más alta superficial velocidad del aire, y la fuerza de cizallamiento medio más bajo a pesar de
las fuerzas de corte de pico son más altos ( 14 , 15). Además, si los componentes del medio
más baratos se han seleccionado con composición variable para diferentes lotes a granel,
puede aparecer un patrón de crecimiento auxotrófico previamente desapercibido ( 15 ), Pero
esta ocurrencia se minimiza mediante el uso de un medio definido.
transferencia de gen. Para el escalado de la producción Toyocamicina por un mutante
sensible a la cizalla de Streptomyces chrestomyceticus,
ni la constante PAG gramo/ V L método ni el método OTR constante podrían ser utilizados, y
por lo tanto ampliación se realizó a la velocidad punta más bajo posible para el
recipiente más grande geométricamente similar ( 20 ). La mezcla y la circulación veces
se encontraron a ser más importante que el uso de la tasa de absorción de oxígeno
constante (OUR) para la ampliación de una fermentación de 2,3-butanodiol por
Enterobacter aerogenes en condiciones microaerobias en la que la homogeneidad
fue importante ( 21 ). Aunque, en general, la ampliación basado en dCO 2 sería aún
más factible como dCO más fiable 2 sensores estén disponibles ( dieciséis ), La tasa
específica de desprendimiento de dióxido de carbono se Actualmente todavía se
sentía a ser útil para ampliación de los cultivos de metabolitos secundarios ( 22 ).

El propósito de este trabajo es describir brevemente y evaluar diferentes

Hay varias descripciones publicadas de los estudios de escalado y algunos
ejemplos interesantes son dignos de mención. la transferencia de oxígeno a menudo
puede ser más importante a escala-up debido a su baja solubilidad en medio ( dieciséis ).
Key a escala-up utilizando la tasa de transferencia de oxígeno constante (OTR) es la
capacidad de medir o estimar el coeficiente de transferencia de masa volumétrica,
K L un, y el poder gaseados por volumen de líquido unidad, PAG gramo/ V L.
correlaciones publicadas pueden generar errores significativos como en el ejemplo
de K L un factores para una penicilina fermentación a escala comercial ( 17 ). La
ampliación de la producción por bialafos
Streptomyces hygroscopicus Residencia en K L un y PAG gramo/ V L no tuvo éxito
debido a las grandes gradientes de concentración de OD en el fermentador ( 18 ).
En este ejemplo, la cultura no era
sensible a los cambios de velocidad punta del impulsor sobre la ampliación. Escala-
métodos y enfoques de escalado que se pueden aplicar al ejemplo E. coli y los
procesos de levadura. El primero
paso mediciones característicos de catalogación implicados para ex-
laboratorio isting (30 l escala) y planta piloto (100 l -19000 l
escala) fermentadores ( Las tablas 1 y 2). A continuación, se calcularon y compararon
como una función de escala basada en la geometría de los parámetros pertinentes,
entrada de energía por unidad de volumen, tasa de flujo de gas y tiempo de mezcla ( tablas
3 -5). Varios escenarios de escalado se exploraron basan en el mantenimiento de
similitud geométrica ( Tabla 6 ), Constante de velocidad del impulsor ( Tabla 7 ), Y la
entrada de potencia constante por volumen de líquido unidad ( tablas 8 y 9). Una
comparación también se completó basándose en el estrés de calor del medio durante
la esterilización ( Tabla 10 ). Se elaboró ​una lista de condiciones históricas y recientes
de procesamiento alcanzables ( Las tablas 11 y 12), y la relación de nuestros a K L un y

hasta tuvo éxito cuando el objetivo hacer en el fermentador de laboratorio se

utilizó para controlar el fermentador a gran escala NO usando una sonda situada
en el fondo del fermentador a gran escala. síndrome de producción Del mismo
modo, la ampliación se deterioró (SUDS) se observó durante la ampliación de
milbemicina
producción por S. hygroscopicus cuando se utilizó la velocidad de agitación
para controlar DO como se hizo en la pequeña escala ( 19 ). síndrome SUDS incluido
cultivo cambios morfológicos que afectaron del hematocrito y la viscosidad, cambios de
captación de fuente de carbono, y disminución de la productividad. Una alternativa DO
estrategia de control utilizando la tasa de aireación, de vuelta a la presión, la
temperatura, además de Tasa de agitación, fue desarrollado para mantener los
rendimientos de laboratorio sobre aumento de escala.
Ejemplos adicionales se centran en los parámetros distintos de oxi-
PAG gramo/ V L a K L un se cuantificó para diversos procesos ( Tabla 13 ). Por coherencia, todos los
volúmenes citados en este texto son los volúmenes nominales de los vasos (en lugar de los
volúmenes totales o de trabajo) a menos que se indique lo contrario. Se seleccionaron las
unidades para minimizar los errores de redondeo cuando sea posible.
I. Métodos y enfoques scale-up
Varios métodos de escalado se describen a continuación, y se seleccionan los
enfoques de escalado fueron evaluados utilizando dos escalas como una base: el 280 l escala
piloto que es una primera piloto paso escala de planta fermentador común y el 30 l escala
de laboratorio
que es común a utilizar para la planta de pre-piloto (laboratorio) estu-

TABLA 1. Características de laboratorio y los vasos a escala piloto

altura total del

anchura
Trabajando Potencia Max. velocidad tangente buque / recipiente (con el Max. Rango
Escala del
volumen del tanque, instalada del motor, del agitador, tangente, plato superior e del flujo de aire,
(Volumen nominal) buque, OD,
V L ( l) PAG O ( CV) norte max ( rev / min) H TT ( metro) inferior), Q max ( l / min)
re T ( metro)
H T ( metro)

30 l 20 1 875 0.66 0,742 0.31 30

100 l 75 3 400 0,785 0.96 0,41 (ID) 120
280 l 180 7.5 460 1.12 1.34 0.56 300
800 l 600 7.5 330 1.63 2.08 0,81 600
1000 l 750 10 300 1.52 1.88 0,86 (ID) 1200
1200 l 900 15 282 1.83 2,185 0.92 1200
1900 l 1500 15 230 2.13 2.57 1.07 1500
19000 l 15000 60 155 5.87 6.58 1.98 15000

el 280 l fermentador de escala fue diseñado originalmente con un motor 3 hp que fue ampliada a 7,5 hp por conveniencia de reemplazo. OD, Diámetro exterior; ID, diámetro interior.
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TABLA 2. Características de laboratorio y planta piloto impulsores escala

Escala tipo impulsor Diámetro del impulsor, velocidad de la punta del impulsor, Número de
(Volumen nominal) (superior / inferior) re YO ( metro) norte máx re YO ( Sra) impulsores, norte yo

30 l Rushton 0,102 4.7 4

100 l Hidroala 0,184 3.8 2
A315
280 l Rushton 0,205 4.9 2
Hidroala 0.28 6.7 3
T Maxflo
800 l Rushton 0,305 5.4 2
Hidroala 0,406 7.2 2
Maxflo T
Hidroalas 0,406 7.2 2
A315
Smith Arriba, 0,343 Arriba, 6,1 2
CD-6 BTM, 0,356 BTM, 6,3
Hidroplano / Smith Arriba, 0,406 Arriba, 7,2 2
Maxflo T / CD-6 BTM, 0.394 BTM, 7,0
HE-3 / Smith Arriba, 0,533 Arriba, 9,4 2
HE-3 / CD-6 BTM, 0.394 BTM, 7,0
1000 l Rushton 0,305 4.8 2
Hidroala 0.37 5.8 2
A315
1200 l Hidroala 0.46 6.8 2
A315
1900 l Rushton 0.42 5.1 3
Hidroala 0,535 6.4 3
T Maxflo
19000 l Rushton 0,685 5.6 4
Hidroala 0,915 7.4 4
Maxflo T
Hidroalas Inicio / Medio, 0,94 7.6 3
A315 (BTM, 8.4) (BTM, 8.4)

datos del impulsor de top / o impulsores de fondo. Unidades de longitud seleccionada para minimizar los errores de redondeo. La parte superior, la parte superior del impulsor; Del medio, impulsor media; BTM, impulsor inferior.

TABLA 3. comparaciones geométricas para laboratorio y piloto fermentadores a escala de

Escala H T / re T re T / ( V L) 1/3 a V L ( l), re 10 6

re YO/ re T VL/ VT
(Volumen nominal) ( H TT / re T) similitud geométrica (agua)
30 l 2.4 0.33 (R) 1,14 a 20 0.48 (R) 0.57
(2,1)
100 l 2.4 0,45 (A) 0,97 a 75 0,71 (A) 0.75
(1,9)
280 l 2.4 0.36 (R) 0,99 a 180 1.0 (R) 0.60
(2,0) 0,5 (M) 1,9 (M)
800 l 2.6 0.38 (R) 0,96 a 600 1.6 (R) 0,704
(2,0) 0,5 (M) 2,9 (M)
0,5 (A) 2,9 (A)
1000 l 2.1 0.35 (R) 0,95 a 750 1.5 (R) 0.75
(1,7) 0,43 (A) 2,2 (A)
1200 l 2.4 0,5 (A) 0.95 en 900 3,1 (A) 0.75
(2,0)
1900 l 2.4 0.39 (R) 0,935 en 1500 2.1 (R) 0.79
(2,0) 0,5 (M) 0,96 en 1400 3,4 (M)
19000 l 3.3 0,346 (R) 0,80 a 15000 3.8 (R) 0.79
(2,9) 0.462 (M) 0,95 a 9000 6,8 (M)
0,47 (A) 7,2 (A)
(BTM, 0.56) (BTM, 8.8)

V T es la capacidad total del tanque no volumen nominal. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315; BTM, impulsor inferior.

IES. Los detalles de algunos de estos buques y sus impulsores se han discutido en similitud geométrica de reactor geometría [ re T / V T) 1/3 o ( re T / V L) 1/3] similitud
otro lugar ( 23 -25). Figura 1 muestra un diagrama de fermentador típico con lugares geométrica se expresa como sigue:
clave identificados.
re T2 / re T1 ( V T2 / V T1) 1/3 (1)
350 JUNKER
dónde re Ti es el diámetro del tanque y V Ti es el volumen total del tanque de buque, i.
Alternativamente, el volumen de líquido, V Li, podría ser utilizado. Asume la geometría del
impulsor razonablemente constante ( es decir, diámetro del impulsor, re YO, y el número de
impulsores, norte YO) como se especifica a continuación. Sobre la base de los volúmenes de
trabajo / total objetivo ob-
CONTENIDA de similitud geométrica ( Tabla 6 ), El de obra deseado
ing volumen en el fermentador puede ser alterada durante la experimentación.
Los experimentos para obtener datos para varias correlaciones empíricas utilizadas
vasos geométricamente similares. A pesar de la similitud geométrica es un requisito
previo para la aplicación de las relaciones de escalado establecidos, rara vez es
alcanzable en la práctica ( 26 ,
27). Posteriormente, se propuso un rango de aceptación de equivalencia ( 26
) Para incluir lo siguiente: (i) re YO/ re T 0.3-
0.45, donde re YO/ re T es la relación entre el impulsor a los diámetros del tanque;
(Ii) H L / re T es menor que o igual a 2 (no se dio ninguna gama), donde H L es la
altura del líquido en el recipiente; y (iii) o bien dos o tres impulsores. Como se
muestra en Tabla 3 ,
re YO/ re T Los valores oscilaron entre 0.33-0.5 para todos los buques de esta instalación. En
concreto, el rango fue de 0,33 a 0,39 para los recipientes con Rushton impulsores de flujo
radial (Lightnin, Avon, NY, USA),
0,462-0,5 para los buques con impulsores Maxflo T de flujo axial (Chemineer, Dayton,
OH, EE.UU.), y 0,43 a 0,56 para los recipientes con impulsores de flujo axial A315
(Lightnin). En el caso de los vasos estudiados, H T / re T proporciones variaron desde 02.01
hasta 03.03 donde H T
es la altura total del tanque. La gama de la altura del tanque-tangente a la tangente
a la proporción de diámetro del tanque, H TT / re T ( que fue fieltro para ser más útil que H
L/ re T comparar ya que los volúmenes de fermentador de trabajo pueden ser
variables), fue 1.7 a 2.9, con el valor de 2,9 para el 19.000 l fermentador estar muy
por encima del resto que varió de 01/07 a 02/01. Todos los buques tenían dos o tres
impulsores a excepción de dos de los tres 19000 l ves-
sels (aquellos con impulsores Rushton y Maxflo T) que tenía
cuatro impulsores.
HIGO. 1. Esquema de fermentador que muestra la nomenclatura.
J. B IOS CI. segundo IOENG.,
Fermentadores con una geometría estándar son beneficiosos desde varias correlaciones
escala-up publicados asumen geometría sea constante ( 8 ). Sin embargo, fermentadores de
laboratorio pueden tener sustancialmente menor H T / re T relaciones de 1: 1 en comparación con 3: 1
para fermentadores a escala piloto, por lo que los datos a escala de laboratorio pueden ser
engañosas ( 8 ). Grandes fermentadores a escala de piloto y de producción pueden ser diseñados
para volúmenes de trabajo variables para dar cabida a la gama más amplia de tamaños de los
lotes se esperan de un complejo de usos múltiples.
Tabla 6 muestra los parámetros de ampliación de los volúmenes totales y de
trabajo esperadas calculadas basándose en la similitud geométrica. Para el 280 l base
ampliación, los números calculados difiere radicalmente de los equipos instalados
para el 30 l
y 19.000 l escalas, pero eran razonablemente cerca (dentro de 2- 17%)
entre el 100 l y 1900 l escamas. Aunque el
19000 l valores esperados fueron más bajos por 30-47%, el 30 l
valor fue mayor por 46-55%. Para el 30 l base de ampliación, todos los números
calculados fueron sustancialmente más bajos que los valores instalados por
19-45% entre el 100 l y 1900 l
escalas y 52-65% para el 19000 l escala. Las razones para estas diferencias eran
evidentes mediante la comparación de los valores del parámetro de similitud
geométrica, ( re T / V L) 1/3, enumerados en Tabla 3 . Los valores para el 100 l a 1900 l escala
osciló 0,935 a 0,99 (media de 0.958 0,019); valores para el 30 l y 19.000 l
HIGO. 2. Disminución de instalado, el volumen de consumo de energía ungassed y gaseados por unidad
de trabajo en función de la escala para fermentadores en estudio en condiciones de funcionamiento que
figuran en el tabla 1 y para geometrías del impulsor
enumerados en Tabla 2 . Para todas las escalas, 1,7 < H TT / re T < 2,9 y 1,0 < Q max / V L < 1.67.
(A) Para Rushton geometría (R), 0,33 < re YO/ re T < 0.39, 4.7 <ITS <5,6. (segundo)
Para Maxflo T (M) geometría hidroala, 0,462 < re YO/ re T < 0.5, 6.4 <ITS <7,4.
Para la geometría A315 (A) de flujo axial, 0,43 < re YO/ re T < 0.56, 5.8 <ITS <7,6.
V OL. 97, 2004 METODOLOGIAS ESCALA en marcha de procesos de fermentación 351

Tabla de tiempo, entrada de alimentación y flujo de gas comparaciones 4. Mezcla de laboratorio y piloto fermentadores a escala de

PAG gramo/ V L a Q máx velocidad

El tiempo de mezclado, PAG o / V L Q max / V L número de
Escala Diseño y norte máx superficial del gas,
T mezcla de (Observado en (Vvm al flujo de gas,
(volumen PAG o / V L (Observado en Vs
Eq. 10h agua) (hp / 1000 l en trabajo 2), norte UN
nominal) (Hp / 1000 l) agua) (hp / 1000 l en 4 Q max / ( re T 3
(S) rpm) V L min -1) Q max / norte máx re yo
lpm) (Cm / s)

30 l 3.4 50.0 NI NI 1.5 0.66 0,032 (R)

100 l 13.4 40.0 NI NI 1.6 1.5 0,050 (A)
280 l 20.1 41.7 23,9 a 450 (R) 18,8 a 300 (R) 1.67 2.0 0,078 (R)
18,9 a 450 (M) 16,7 a 300 (M) 0.030 (M)
800 l 29.2 12.5 15,0 a 335 10 a 600 (R) 1.0 2.0 0,063 (R)
12,5 a 300 (R)
16,3 a 335 * 8,8 a 600 (M) 0.027 (M)
12,1 a 300 (M)
11,2 a 335 7,8 a 600 (A) 0,027 (A)
8,7 a 300 (A)
1000 l 30.9 13.3 7,7 a 300 (R) 4,3 a 1200 (R) 1.6 3.4 0,140 (R)
5,1 a 300 (A) 4,9 a 600 0,079 (A)
3,5 a 1200 (A)
4,6 a 600
1200 l 32.3 16.7 10,1 a 282 (A) 6,8 a 1200 (A) 1.33 3.0 0,044 (A)
7,1 a 600
1900 l 36.2 10.0 13,9 a 225 (R) 6,8 a 1500 (R) 1.0 2.8 0,088 (R)
10,0 a 225 (M) 8,0 en 1500 (M) 0.043 (M)
19000 l 53.7 4.0 4,4 a 142 (R) 2,0 a 15.000 (R) 1.0 8.1 0,300 (R)
4,4 a 150 (M) 4,1 a 15.000 (M) 0.130 (M)
4,4 a 150 (A) 3,2 a 15.000 (A) 0,120 (A)
Las medidas de potencia realizaron a 25 C en agua y a presión ambiente. condiciones no aireados no mantenibles a la máxima velocidad con certeza fer-
mentores marcados con un asterisco debido al sobrecalentamiento del variador. No hay dispositivos de medición de potencia instalados en 30 l o 100 l escamas. R, Rushton; M, Maxflo T;
A, A315. NI, dispositivo de medición de potencia no está instalado.

TABLA 5. comparaciones de transferencia de masa de laboratorio y piloto fermentadores a escala de

Escala Mesurado ( PAG o / V L) en un ( V s) b ( PAG gramo/ V L) en un ( V s) b

V s a Q máx Q max / V L
(nominal PAG gramo/ PAG o a utilizando Eq. 9a y 9b utilizando Eq. 9a y 9b y
(Cm / s) (Vvm, min -1)
volumen / designación) Q máx y norte máx y diseño PAG o medido PAG gramo
30 l 0.66 1.5 N/A 31.1 NI
100 l 1.5 1.6 N/A 15.5 NI
280 l 2.0 1.67 0.79 (R) 19.4 11.3 (R)
0.88 (M) 10,5 (M)
800 l 2.0 1.0 0.67 (R) 8.6 7.4 (R)
0.54 (M) 6,8 (M)
0,70 (A) 6,3 (A)
1000 l 3.4 1.6 0.55 (R) 12.8 6.0 (R)
0,69 (A) 5,3 (A)
1200 l 3.0 1.33 0,67 (A) 13.8 7,5 (A)
1900 l 2.8 1.0 0.49 (R) 9.3 7.2 (R)
0.80 (M) 8,0 (M)
19000 l 8.1 1.0 0.45 (R) 10.3 6,5 (M)
0.93 (M) 10,4 (M)
0,74 (A) 8,8 (A)
el 1000 l fermentador de escala era típicamente a cabo a 600 lpm en lugar de en 1.200 caudal de aire máximo lpm que se utilizó para obtener los valores calculados y medidos. 9a ecuación utilizado
para 30 l escala y Eq. 9b utilizado para 100 l -19000 l escamas. Medidas de potencia realizaron a 25 C en agua y a presión ambiente. No hay dispositivos de medición de potencia instalados en 30 l o 100 l escamas.
R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315. NI, dispositivo de medición de potencia no está instalado. NA, no aplicable cálculo.

escalas eran notablemente diferente (mayor de 4.5 a 9.5 SD de la media). El velocidad peller y diámetro del impulsor para el recipiente i ( 8 ). Tabla 2
funcionamiento de los 19.000 l fermentador de escala a un volumen de trabajo muestra que las velocidades en el extremo del impulsor instalados típicos variaban de

inferior trae su similitud geométrica más cerca del valor medio de los vasos más 3.8 a 7.6 m / s sin una tendencia clara observada con la escala, pero un aumento
pequeños. de aproximadamente 25-37% con la hidroala (A315 y Maxflo T) impulsores que la
Constante velocidad de la punta del impulsor (ITS) o de cizallamiento ITS es turbina de disco Rushton () impulsores para la misma escala fermentador
expresado como principalmente debido a su mayor diámetros.

norte 2 / norte 1 re T1 / re T2 ( V T1 / V T2) 1/3 (2)

velocidad de la punta se utiliza como una regla para la ampliación cuando no hay una
lo que supone que sus norte yo re ii dónde norte yo y re ii son los im- buena comprensión de la relación entre el esfuerzo cortante y
352 JUNKER J. B IOS CI. segundo IOENG.,

la morfología de cultivos miceliales. Una regla empírica es que el daño celular puede ocurrir
a velocidades en el extremo por encima de 3,2 m / s, pero el valor exacto es influenciada
por muchos factores tales como la reología caldo ( 28 ). velocidades en el extremo
calculados por lo general son mayores que 3 m / s para fermentadores de producción ( 29 )
Y osciló de 5-7 m / s de una encuesta de fermentadores industriales (Einsele, A., Abstr.
Quinta Intern. Ferment. Symp., P. 69, 1976). Una velocidad de la punta constante en el
intervalo de 5-7 m / s se ha encontrado para ser utilizado para la escala de arriba para las
fermentaciones de antibióticos (Einsele, Abstr. Quinta Intern. Ferment. Symp., 1976).
Aunque es útil en la levadura ramificado, bacterianas filamentosas y fermentaciones
fúngicas para estimar el potencial de rotura hifas y por lo tanto la alteración de la morfología
de caldo, velocidad de la punta es menos útil para células individuales fermentaciones
bacterianas o de levadura.
Si ampliación se lleva a cabo usando la velocidad punta constante (con similitud
geométrica), a continuación, a menudo el valor de PAG gramo/ V L se baja lo que puede afectar
negativamente a la eficiencia de aireación. Es posible recuperarse de esta deficiencia
finales de los valores en Tabla 7 , Esto explica por qué el 30 l y
19000 l Los valores fueron sustancialmente diferentes a los valores instalados y por
qué los valores para el 30 l base ampliación no estaban de acuerdo también.
Constant ungassed o (más a menudo) gaseados entrada de alimentación
por volumen de líquido ( PAG o / V L o PAG gramo/ V L) diseños escala-up
también puede incluir la entrada de potencia ungassed, PAG O, que se expresa como
5
PAG o norte PAG norte 3 re yo (3)
dónde norte PAG, el número de potencia, es un factor de proporcionalidad basado en el
diseño del impulsor (entre otros factores) y es la densidad de caldo ( 8 ), Que se considera
típicamente para que sea ligeramente mayor que el agua. El número de alimentación
generalmente se mantiene constante, con escala de arriba si se utiliza el mismo tipo de
impulsor.
ungassed de potencia constante, ( PAG o / V L) i, para el recipiente, i, se expresa como

utilizando más impulsores en el recipiente más grande y de esta manera puede ser posible
para mantener tanto la velocidad punta y PAG gramo/ V L constante ( 30 ). Tip influencias velocidad
del impulsor de cizallamiento que es proporcional al producto de la velocidad de la punta del
impulsor y el diámetro del impulsor, DAKOTA DEL NORTE yo
2,
para condiciones de flujo turbulento ( 29 ). Como se muestra en Tabla 7 , Para el 280 l baseSymp., 1976). Una relación similar se puede aplicar para entradas de alimentación
ampliación, hubo un acuerdo razonable (a menos de 2-24%) entre lo esperado y
real total y el volumen de trabajo para el 280 l - 1900 l escalas, pero los valores
esperados fueron sustancialmente más bajos (58-69%) en el 19 000 l escala y
groseramente superior (97- 355%) para el 30 l y 100 l escamas. Para el 30 l base
escala arriba, todos los valores estimados fueron sustancialmente más bajos (40-
85%) que los valores instalados, a excepción de la 100 l buque que era
sustancialmente más alta (131 a 175%), debido a su velocidad de agitación pico
más alto. Desde que se usa similitud geométrica para calcu-
( PAG o / V L) 2 / ( PAG o / V L) 1 ( V L1 / V L2) c o PAG o / V L F 1 V L
do
(4)
donde se encontró c ser 0,37 en la práctica basan en un estudio de las plantas
industriales de diversas escalas y procesos (Einsele, Abstr. Quinta Intern. Ferment.
gaseados. valores generales de PAG o / V L son 1-3 kW / m 3 ( 1.3-4 hp / 1000 l) para
embarcaciones de hasta 300 m 3 ( 300.000 l) Volumen de trabajo (Einsele, Abstr.
quinto Intern. fermentar. Symp., 1976), y una regla de oro es que PAG o / V L es 2-4
kW / m 3 ( 2.7 a 5.4 hp / 1000 l) en la escala de producción con ningún rango de
volumen dado por Kossen y Oosterhuis ( 29 ).
Si ampliación se lleva a cabo usando constante PAG o / V L con similitud geométrica, a
continuación, el tiempo de circulación, el tiempo de mezclado y im-

TABLA 7. Escala-up basado en la velocidad del impulsor constante

TABLA 6. Escala en marcha basándose en la similitud geométrica
a. caso 280 Base l ( escala piloto) Escala
a. caso 280 Base l ( escala piloto) Escala (volumen nominal) Volumen Volumen El volumen volumen de
(volumen nominal) Volumen Volumen El volumen volumen de total, real, total, de trabajo, trabajo, que se
total, real, total, de trabajo, trabajo, que se espera, real, espera,
espera, real, espera, V T ( l) V T ( l) V L ( l) V L ( l)
V T ( l) V T ( l) V L ( l) V L ( l)
30 l 35 69 20 42
30 l 35 51 20 31 100 l 100 455 75 274
100 l 100 117 75 71 280 l 299 Base 180 Base
280 l 299 Base 180 Base 800 l 852 754 600 454
800 l 852 905 600 545 1000 l 1000 1078 750 649
1000 l 1000 1100 750 661 1200 l 1271 1298 900 781
1200 l 1271 1304 900 785 1900 l 2044 2392 1500 1440
1900 l 2044 2086 1500 1256 19000 l 18887 7815 15000 4705
19000 l 18887 13216 15000 7956
segundo. caso de 30 bases l ( escala de laboratorio)
segundo. caso de 30 bases l ( escala de laboratorio) Escala (volumen nominal) Volumen Volumen El volumen volumen de
Escala (volumen nominal) Volumen Volumen El volumen volumen de total, real, total, de trabajo, trabajo, que se
total, real, total, de trabajo, trabajo, que se espera, real, espera,
espera, real, espera, V T ( l) V T ( l) V L ( l) V L ( l)
V T ( l) V T ( l) V L ( l) V L ( l)
30 l 35 Base 20 Base
30 l 35 Base 20 Base 100 l 100 231 75 132
100 l 100 81 75 46 280 l 299 152 180 87
280 l 299 206 180 118 800 l 852 382 600 218
800 l 852 624 600 357 1000 l 1000 547 750 312
1000 l 1000 758 750 433 1200 l 1271 658 900 376
1200 l 1271 900 900 514 1900 l 2044 1214 1500 693
1900 l 2044 1439 1500 822 19000 l 18887 3965 15000 2266
19000 l 18887 9120 15000 5211
Relación: norte 2 / norte 1 re T1 / re T2 ( V T1 / V T2) 1/3 ( V L2 / V L1) 1/3 ( asume similitud geométrica).
Relación: re T2 / re T1 ( V T2 / V T1) 1/3 ( V L2 / V L1) 1/3.
V OL. 97, 2004 METODOLOGIAS ESCALA en marcha de procesos de fermentación 353

aumento de la velocidad punta peller ( 30 ), Pero el tamaño de los remolinos no cambia ( 29 ). TABLA 8. Escala-up basado en una potencia constante por unidad de volumen
para Rushton impulsores de flujo radial
los PAG o / V L requerida para proporcionar un cierto OTR generalmente disminuye con la
escala ( 2 ). Ampliación de la base de constante PAG o / V L puede resultar en una más grande a. caso 280 Base l ( escala piloto) Escala

que el tamaño del motor necesario. Además, es difícil tener alta potencia por unidad de (volumen nominal) PAG o / V L PAG o / V L PAG gramo/ V L PAG gramo/ V L

volumen entradas en el gran escala ( 27 ) Debido a las limitaciones prácticas en el tamaño medido a norte esperado en norte medido a esperado en
norte máx y Q máx norte máx y Q máx
del motor. máx máx

(Hp / 1000 l) (Hp / 1000 l) (Hp / 1000 l) (Hp / 1000 l)

30 l NI 53.9 NI 42.4
Suponiendo vasos geométricamente similares en los que re T1 / re T2
100 l NI 33.0 NI 26
( V T1 / V T2) 1/3 ( 5 ), Entonces escalado basado en potencia constante ungassed o gaseados
280 l 23.9 Base 18.8 Base
por unidad de volumen ( PAG o / V L o PAG gramo/ V L, respectivamente) se simplifica a 800 l 15.0 15.3 10.0 12.0
1000 l 7.7 14.1 4.3 11.1
1200 l N/A 13.2 N/A 10.4
norte 2 / norte 1 ( V T1 / V T2) 2/9 (5)
1900 l 13.9 10.9 6.8 8.6
Esta expresión es muy similar a norte 2 / norte 1 ( V T1 / V T2) 1/3 utilizada en 19000 l 4.4 4.65 2.0 3.7

Tabla 7 que fue derivada para la escala arriba sobre la base de velocidad de la punta segundo. caso de 30 bases l instalado CV (escala de laboratorio) Escala

constante y similitud geométrica ( 5 ). A pesar de la influencia tasa de gasificación se (volumen nominal) PAG o / V L PAG o / V L

incorpora en el valor de PAG gramo medido a norte esperado en norte

basado en mediciones o disminuciones esperadas en la pérdida de potencia en la máx máx

(Hp / 1000 l) (Hp / 1000 l)

gasificación, puede ser un reto para tener en cuenta con precisión para la eficiencia
de gasificación (aireación). Además, esta relación es más eficaz para flujos 30 l NI Base
turbulentos observados durante sola célula E. coli y cultivos de levadura y menos 100 l NI 30.7
280 l 23.9 22.2
eficaz para alta viscosidad cultivos miceliales ( 5 ). Como se vio en Tabla 4 , Valores
800 l 15.0 14.2
medidos de PAG gramo/ V L a la máxima aireación ( Q max) y agitación ( norte max) tarifas de
1000 l 7.7 13.1
los volúmenes de trabajo establecidos oscilaron entre cerca de 19 CV / 1000 l hasta 1200 l N/A 12.2
2 hp / 1000 l como la escala aumentó de 280 l a 19.000 l. 1900 l 13.9 10.1
19000 l 4.4 4.3

Relación: ( V L1 / V L2) 0,37 ( PAG o / V L) 2 / ( PAG o / V L) 1 o ( PAG gramo/ V L) 2 / ( PAG gramo/ V L) 1. Measure

Los valores medidos de PAG o / V L eran superiores a los de PAG gramo/ V L Sured PAG o y PAG gramo valores utilizados en los cálculos excepto para 30 l caso base instalada en el
valor de PAG o de 1 hp utilizado. NI, dispositivo de medición de potencia no está instalado. NA, no
debido a la disminución de potencia a la formación de gases, y la relación de PAG gramo/ PAG o
aplicable cálculo.
variado según el tipo de impulsor, escala fermentador y la geometría del distribuidor
de rociado / impulsor ( Tabla 5 ; 24 ). 8a tablas (Por Rushton impulsores de flujo radial)
y 9 (para Maxflo T y impulsores de flujo axial A315 hidroalas) muestran que
TABLA 9. Escala-up basado en una potencia constante por unidad de volumen
escala-up basado en medido PAG o / V L y medido PAG gramo/ V L los valores acordados para impulsores de flujo hidroala axiales
razonablemente bien (a menos de 26%) con los valores esperados para el 800 l, 1900
caso 280 Base l ( escala piloto) Escala
l y 19.000 l escamas. La notable excepción fue el 19.000 l escala con impulsores
(volumen nominal) PAG o / V L PAG o / V L PAG gramo/ V L PAG gramo/ V L
Rushton para el que el valor esperado era más alto que el valor medido por 85%.
medido a norte esperado en norte medido a esperado en
Los valores esperados para el 1000 l y 1200 l fermentadores escala eran
máx máx
norte máx y Q máx norte máx y Q máx
notablemente más alto en alrededor de 83 a 180% debido a la baja que típico (Hp / 1000 l) (Hp / 1000 l) (Hp / 1000 l) (Hp / 1000 l)
medido PAG gramo/ V L para este recipiente de escala (en comparación con la potencia
30 l NI 42.6 NI 37.7
del motor instalado). Los valores medidos para el 30 l y 100 l escalas no pudieron ser 100 l NI 26.1 NI 23.1
comparados desde que se instaló ningún dispositivo de medición de potencia. 280 l 18,9 (M) Base 16,7 (M) Base
800 l 16,3 (M) 12.1 8,8 (M) 10.7
11,2 (A) 7,8 (A)
1000 l 5,1 (A) 11.2 3,5 (A) 9.8
1200 l 10,1 (A) 10.4 6,8 (A) 9.2
Tabla 8b muestra el uso de valores instalados para PAG o / V L para el 30 l fermentador
1900 l 10,0 (M) 8.6 8,0 (M) 7.6
como base para la ampliación. Acuerdo de los valores esperados y reales a dentro de 19000 l 4,4 (M) 3.7 4,1 (M) 3.3
aproximadamente 30% fue evidente para todas las escalas, excepto el 1000 l escala que 4,4 (A) 3,2 (A)
fue superior en un 70%. Usando el 1000 l escala como base (datos no mostrados), los Relación: ( V L1 / V L2) 0,37 ( PAG o / V L) 2 / ( PAG o / V L) 1 o ( PAG gramo/ V L) 2 / ( PAG gramo/ V L) 1. Measure
valores esperados fueron más bajos para todas las escalas en al menos 40%, una Sured PAG o y PAG gramo valores utilizados en los cálculos. M, Maxflo T; A, A315.
tendencia que es también debido a la baja que típico medido

Para las condiciones máximas de operación de agitación ( tabla 1 ), Los números de

PAG gramo/ V L. Reynold impulsor variaron desde 0,48 hasta 8,8 10 6
Similar impulso número de Reynold ( norte Re) Aumentar proporcionalmente
para el agua (o para sola célula E. coli y caldos de levadura con viscosidades
puede llevarse a cabo en base a un impulsor constante de Reynold similares a agua), lo que sugiere que para caldos filamentosos con el flujo de
número, norte Re: viscosidades más altas pueden cambiar de turbulento a laminar. El uso del
2/
norte Re DAKOTA DEL NORTE yo (6) número constante de Reynold en general no ha funcionado bien para la
fermentación escalado ya que el efecto de la aireación en el proceso no fue
dónde es la viscosidad de caldo ( 8 , 31). Por el mismo caldo,
incorporada ( 2 ), Y el número de Reynolds del impulsor aumenta generalmente
esta expresión se simplifica a
de diseños exitosos de escalado ( 26 ). Otras dimensiones
norte 2 / norte 1 ( re I1 / re I2) 2 (7)
354 JUNKER J. B IOSCI. segundo IOENG.,

Tabla 10. Comparación de la típica calor, mantenga el tiempo y enfríe veces, así como F o y R o valores
para esterilizaciones medio como una función de la escala

Tiempo de Tiempo Tiempo de Enfriarse Fo Ro

Calentar (% Enfríe (% del
Escala (volumen nominal / tipo chaqueta) calentamiento de retención tiempo total total
de área) área)
(min) retención (min) (% del área) (min) (min) (min)

100 l ( hoyuelo, bucle chaqueta) 29 24.3 40 65.5 18.6 10.2 75.0 61.6
280 l ( Derecho) 15,5-16,2 15-16 40 74.9 26-29,4 9.6 74.9 57.0
800 l ( hoyuelo) 20-21 13-15,6 45 74,3-78,6 17,7-18,6 8,2-10,0 73.7 63.6
1000 l ( hoyuelo, bucle chaqueta) 34-38 19-20 45 70-71 27-27,5 9-10 108,8 74.1
1200 l ( tubo de media bobina) 24-30 19-22 45 65-66 33-35 12-14,5 85.4 66.2
1900 l ( tubo de media bobina) 35-42 24-27 45 61,8-63,3 30-32 11-13 86.7 72.8
19000 l ( tubo de media bobina) 83-88 37 45 46.4 95-110 16.4 91.2 86.6

temperatura de mantenimiento media del 123,5 C para la esterilización por lotes. Mantenga temperaturas de 124 C para 1000 l y 123 C durante 100 l escala. F o y R o los valores calculados de acuerdo con Junker et
al. ( 38 ). Sólo temperaturas por encima de 60 C fueron incluidos en la suma. Calentar y enfriar los tiempos calculados a partir de 40 C. A 19000 l buque escala utiliza agua de la torre de refrigeración para el agua
de enfriamiento y no refrigerado. % De área es el área bajo la temperatura frente al tiempo para la etapa dividido por el área total. Calentar y enfriar porcentajes de área calculadas para temperaturas por encima
de 60 DO.

grupos también han sido examinados para la ampliación con un éxito limitado,
resultando a menudo en equipo y los parámetros técnicamente poco realistas.
Como es difícil mantener todo
parámetros adimensionales constante sobre la ampliación, los más
importantes para el proceso deben ser identificados con precisión.
Constante de velocidad de consumo de oxígeno (OUR), el coeficiente de transferencia de
scale-up, pero sobre todo entre las etapas a escala piloto y de producción. Lo más común
es cuando se cambia el poder sólo mediante el aumento de la velocidad de agitación, a
continuación, Eq. 9c simplifica a
K L af 2 ( PAG gramo/ V L) 0,50 para recipientes de producción ( 33 ) (9d)
En fermentadores a escala de laboratorio donde las mediciones de PAG gramo/ V L

masa ( K L un) o el oxígeno disuelto (OD) son difíciles de obtener con precisión, a continuación, los componentes clave de la cantidad de
Aumentar proporcionalmente

basado en constante NUESTRO supone que la OUR es igual a la OTR: potencia ( N, D YO) puede ser usado:

2) 0,42 para vasos de laboratorio ( 34 )

OTR K L C.A sab do L) NUESTRA X / Y X / O2
dónde do sab está el caldo Concentración de oxígeno en saturación, do L es el caldo
medido Concentración de oxígeno, es la específica
tasa de crecimiento, X es la densidad celular medida y Y X / O2 es el rendimiento celular
calculada por cantidad de oxígeno consumido ( 32 ). Los cambios en la presión de
retorno y la presión hidrostática con la ampliación influyen en los valores de do sab ( y
posteriormente do L).
También es posible utilizar la media logarítmica de la diferencia de concentración de OD.
Dado que para la mayoría de las fermentaciones aeróbicas la concentración crítica de DO
que afecta negativamente a la tasa de crecimiento es muy baja, do L se supone que es cero.
Varios correlaciones de la forma general
K L af 2 ( norte 3 re yo (9e)
(8)
donde, aunque el exponente de 0,42 se estableció por un 0,6 l volumen de trabajo, el
rango de la literatura es 0,16 a 0,68. Dado que por lo general son más aplicables en o
cerca de las condiciones utilizadas para determinar los exponentes, estas correlaciones
se podrían usar mejor para sólo una orientación cualitativa en los cálculos de escalado
( 28 ). Como se muestra en Tabla 5 , Los valores calculados de ( PAG gramo/ V L) una V s
segundo
utilizando los valores medidos de PAG gramo/ V L y Eq. 9a y 9b son razonablemente
similares (media [ave]: 7,8 1,9; desviación estándar relativa [rsd]: 24%) a partir de
la 280 l a 19.000 l ( 180 l -
15000 l volumen de trabajo) las escalas. Cuando los valores de diseño de
son ob-
PAG o / V L son utilizados, valores mucho más altos de ( PAG gramo/ V La V s
segundo

CONTENIDAS como era de esperar, siendo los valores razonablemente similares

K L af 2 ( PAG gramo/ V La V s
segundo
(9)
(promedio: 11.0 2,2; rsd: 20%) a partir de la 800 l a 19.000 l escalas y mucho más alto por
existen para estimar K L un utilizar la energía de gaseado por volumen de líquido, debajo del 800 l escala (600 l Volumen de trabajo). Sólo una fracción de estos valores de
PAG gramo/ V L, y la velocidad superficial del gas, V s, para fermentaciones (similares a la diseño en realidad pueden ser entregados al caldo de fermentación con la cantidad
correlación Van Riet para la transferencia de masa): depende de la geometría del vaso / agitador, reología, velocidad del agitador, y la
velocidad superficial ( 28 ).
0.67
K L af 2 ( PAG gramo/ V L) 0,95 V s

para la escala de laboratorio (8 l) (vasos 5 ) (9a) A partir de una encuesta de fermentadores industriales de hasta 100.000 l
en volumen, K L un valores oscilaron entre 400-800 h -1 ( Einsele, Abstr. Quinto Intern.
0.67
K L af 2 ( PAG gramo/ V L) 0,67 V s Fermentar. Symp., 1976). los K L un valores obtenidos en Las tablas 11 y 12 son

para la escala piloto (400 l) (vasos 5 )
0.50
K L af 2 ( PAG gramo/ V L) 0,50 V s
para la producción (23.000 l -46000 l) (vasos 5 ) (9c)
dónde F 2 es una constante de proporcionalidad en todas las ecuaciones cuyo valor
varía dependiendo del proceso específico y las unidades de K L a, P gramo/ V L y V s utilizado
en los cálculos. Todos los volúmenes citados en Eq. 9a-c están operando volúmenes.
Por estas correlaciones, la dependencia de K L un en PAG gramo/ V L es menor a medida que
aumenta la escala recipiente ( es decir, el exponente disminuye). Del mismo modo, la
dependencia de K L un en V s también disminuye a
(9b) generalmente dentro de este rango suponiendo constante de la ley de Henry de 1 mmol / l-
Cajero automático. los K L un
varía más o menos con la inversa de la viscosidad aparente caldo ( 15 ). aireación superficial
puede ser un contribuyente sustancial para fermentadores de menor escala, específicamente
alrededor del 33% para 5 l buques y aproximadamente el 10% para 50 l (vasos 15 ). fermentadores a
escala piloto por debajo de 250 l en volumen por lo general tienen aireación superficial significativa
en comparación con los vasos de mayor escala, por lo que es generalmente mejor para
escalar-up de los vasos más grandes de aproximadamente 500 l -1000 l
( 8 ). aireación superficial disminuye notablemente con la escala ( 27 ); Así, para
embarcaciones más grandes, K L un los valores se pueden interpretar más fácilmente.
Ampliación basa en K L un se complica por el hecho de
V OL. 97, 2004 METODOLOGIAS ESCALA en marcha de procesos de fermentación 355

TABLA 11a. Representante histórica (1992 hasta mediados de 2001) comparación de las condiciones de procesamiento alcanzables
como una función de escala para E. coli cultivos

de oxígeno pico Rango del velocidad del poder Calculado Valor de F 2

Fermentación
Cultivo / Scale tasa de flujo de aire, Presión (kg impulsor, gaseados, PAG gramo/ V L K L un en el utilizando Eq. 9b
volumen ( l)
(volumen nominal) absorción Q / cm 2) norte PAG gramo (Hp / 1000 l) pico NUESTRO K L a / [(P gramo/ V L) 0,67
(Tipo impulsor)
(Mmol / l- h) ( l / min) (Rpm) (Hp) (Mmol / l- h-atm) ( V s) 0,67]

E. coli DH5 / 280 l 180 (R) 260 300 1.8 400 NI NI 685 N/A
E. coli DH5 / 280 l 150 (M) 172 190 1.25 400 NI NI 624 N/A
E. coli PF436 / 280 l 175 (M) sesenta y cinco 80 0.6 383 NI NI 346 N/A
E. coli RR1 / 280 l 160 (M) 77 80 0.3 409 NI NI 472 N/A
E. coli OP50 / 280 l 175 (R) 39 100 0.5 213 NI NI 186 N/A
E. coli K12 / 800 l 605 (M) 94 400 0.7 287 6.3 10.4 434 76
E. coli DH5 / 1000 l 600 (M) 141 600 1.0 300 4.1 6.8 738 143
E. coli PF436 / 1900 l 800 (M) 38 400 0.7 178 5.6 7.0 167 55
E. coli RR1 / 1900 l 760 (M) 95 450 0.3 229 11.2 14.7 596 111
E. coli OP50 / 1900 l 810 (R) 49 500 0.7 125 2.7 3.3 303 143
E. coli Polym./1900 l 1080 (M) 101 600 1.2 225 9.0 8.3 486 110
P. aeruginosa / 1900 l 1200 (M) 47 510 0.3 132 7.4 6.2 186 57

Los valores en negrita son en / cerca (a menos de 20%) de las condiciones máximas de esa escala particular. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315. NI, dispositivo de medición de potencia no se ha
instalado. NA, no aplicable cálculo.

TABLA 11b. Representante histórica (1992 hasta mediados de 2001) comparación de las condiciones de procesamiento alcanzables
como una función de escala para cultivos de levadura

de oxígeno pico Rango del velocidad del poder Calculado Valor de F 2

Fermentación
Cultivo / Scale tasa de flujo de aire, Presión (kg impulsor, gaseados, PAG gramo/ V L K L un en el utilizando Eq. 9b
volumen ( l)
(volumen nominal) absorción Q / cm 2) norte PAG gramo (Hp / 1000 l) pico NUESTRO K L a / [(P gramo/ V L) 0,67
(Tipo impulsor)
(Mmol / l- h) ( l / min) (Rpm) (Hp) (Mmol / l- h-atm) ( V s) 0,67]

C. sorbophila / 280 l 150 (R) 54 100 0.7 223 NI NI 226 N/A

C. chilensis / 280 l 180 (R) 141 180 1.5 400 NI NI 297 N/A
S. cerevisiae QC2B / 280 l 180 (R) 74 80 0.7 354 NI NI 350 N/A
S. cerevisiae 1375/280 l 180 (R) 64 90 0.5 315 NI NI 324 N/A
C. sorbophila / 800 l 475 (R) 105 505 0.7 320 > 7.5 * > 15.8 465 N/A
475 (M) 90 475 0.7 286 > 7.5 * > 15.8 386 N/A
C. chilensis / 800 l 600 (R) 106 335 1.2 245 4.2 7.7 325 77
500 (M) 117 490 1.7 220 3.2 7.0 318 62
S. cerevisiae QC2B / 800 l 570 (M) 93 220 0.7 265 2.4 4.2 463 218
S. cerevisiae 1375/800 l 530 (R) 63 250 0.5 266 5.2 9.8 344 84
S. cerevisiae 1375/1000 l 600 (M) 60 400 0.34 308 4.2 7.0 844 211
C. chilensis / 1900 l 1500 (M) 49 530 0.83 175 3.1 2.1 252 155
S. cerevisiae 1375/1900 l 1400 (M) 53 700 0.5 173 5.5 3.9 264 89

Los valores en negrita son en / cerca (a menos de 20%) de condiciones de máxima. Los valores marcados con un asterisco denotan las lecturas de medición de potencia saturados.
R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315. NI, dispositivo de medición de potencia no se ha instalado. NA, no aplicable cálculo.

que es específica del proceso y que cambia en el transcurso de la fermentación ( 35 número de flujo de gas constante ( norte UN), velocidad de flujo volumétrico de gas por
), Por lo que es difícil de cuantificar de forma fiable. unidad de volumen de líquido (vvm o Q / V L), o de la velocidad superficial ( V s)
Expansión también se puede realizar en base
Alternativamente, un valor óptimo para do L puede ser determinado a partir de estudios sobre el número de flujo (aireación), norte UN Q / ND yo
3, dónde Q es el

de laboratorio y se utiliza para la escala-up ( 2 ). ecuación 8 a continuación, puede
reordenarse para calcular K L un los valores durante la fermentación a diferentes edades.
Escalado basado en la DO constante puede ser un método atractivo. A pesar de que K L un y
nuestro puede cambiar dramáticamente en el transcurso de la fermentación, el valor
mínimo aceptable de do L por lo general se conoce a partir de estudios de laboratorio. UN do L por 19000 l fermentador con un impulsor Rushton ( Tabla 4 ). los números de aireación
encima de 30-70% de saturación generalmente asegura DO adecuada en las regiones
menos mixtos de una fermentación micelial viscoso; para un menos viscoso E. coli o la
levadura de fermentación, una do L por encima de un límite inferior de 10-30% de saturación
puede ser adecuada. Escala-up basado en DO constante debe tener en cuenta la
ampliación de los métodos para controlar hacer, como la agitación, la presión y velocidad
de flujo de aire ( 19 ). Control en cascada de DO por la agitación, la presión y el caudal de
aire puede ser eficaz en el mantenimiento de DO por encima de los valores críticos ( 35 ).
tasa de flujo volumétrico. Un rango típico para el número de flujo para
fermentadores de producción es 0,1-0,15 ( 29 ) Que se compara favorablemente
con los valores de desde 0,12 hasta 0,13 para el 19 000 l fermentadores con
impulsores hidroalas y es mucho menor que el valor de 0,3 obtenido para el
de los demás buques a escala piloto (100 l -1900 l) varió de 0.027-0.14 con un
número de aireación de 0.032 obtenido para el 30 l vaso de laboratorio ( Tabla 4 ).
Escala-up basado en la velocidad de flujo volumétrico de gas por unidad de volumen
de líquido ( Q / V L o vvm) también debe ser examinado para asegurar que los valores
resultantes de la velocidad superficial son razonables. Para un proceso específico, se
debe lograr un equilibrio. Si el caudal volumétrico de gas por unidad de volumen de
líquido,
Q / V L, permanece constante a escala-up, entonces V s puede aumentar hasta el punto de
inundación en tanques a escala de producción ( 2 ). simi-
356 JUNKER J. B IOSCI. segundo IOENG.,

TABLA 12a. Comparación de la reciente (mediados de 2001 a 2002) las condiciones de procesamiento alcanzables típicos como una función de escala para E. coli cultivos

Rango del velocidad del poder Calculado Valor de F 2

Escala Fermentación pico
flujo de aire, Presión (kg impulsor, gaseados PAG gramo/ V L K L un en el utilizando Eq. 9b
(volumen volumen ( l) NUESTRO
Q / cm 2) norte PAG gramo (Hp / 1000 l) pico NUESTRO K L a / [(P gramo/ V L) 0,67
nominal) (Tipo impulsor) (Mmol / l- h)
( l / min) (Rpm) (Hp) (Mmol / l- h-atm) ( V s) 0,67]

280 l 180 (R) 155 300 1.2 460 3.25 18.1 572 51
180 (M) 158 300 1.2 460 3.4 18.9 475 41
800 l 600 (R) 142 500 1.4 330 9.2 15.3 391 46
600 (M) 115 500 1.5 330 9.2 15.3 354 42
600 (A) 126 470 1.5 330 6.2 10.3 330 40
600 (HE) 127 500 1.2 338 8.6 14.3 393 48
600 (MC) 124 500 1.2 338 9.0 15.0 364 40
600 (CC) 136 500 1.25 330 7.2 12.0 527 70
1200 l 900 (A) 116 1200 1.3 280 5.5 6.1 296 42
1900 l 1500 (R) 96 1500 1.0 230 11.4 7.6 354 46
1500 (A) 116 1500 0.9 230 13.2 8.8 465 55

Los valores en negrita son en / cerca (a menos de 20%) de las condiciones máximas de esa escala. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315; HE, HE-3 / Maxflo T; MC, Maxflo T / CD-6; CC, CD-6 / CD-6.

12b TABLE. Comparación de la reciente (mediados de 2001 a 2002) las condiciones de procesamiento alcanzables típicos como una función de escala para cultivos de levadura

de oxígeno pico Rango del velocidad del poder Calculado Valor de F 2

Escala Fermentación
tasa de flujo de aire, Presión (kg impulsor, gaseados, PAG gramo/ V L K L un en el utilizando Eq. 9b
(volumen volumen ( l)
absorción Q / cm 2) norte PAG gramo (Hp / 1000 l) pico NUESTRO K L a / [(P gramo/ V L) 0,67
nominal) (Tipo impulsor)
(Mmol / l- h) ( l / min) (Rpm) (Hp) (Mmol / l- h-atm) ( V s) 0,67]

280 l 180 (M) 98 235 1.0 338 1.7 9.6 430 69

800 l 600 (R) 93 500 0.7 325 7.7 12.8 453 60
500 (M) 97 268 1.1 276 5.0 9.9 490 114
600 (A) 82 500 0.7 327 5.0 8.3 577 101
600 (MC) 92 500 0.7 271 4.6 7.7 461 85
1200 l 900 (A) 94 1000 1.1 226 2.8 3.1 390 99
1900 l 1500 (R) 79 925 0.97 172 5.0 3.3 385 120
1500 (M) 88 980 0.97 170 6.0 4.0 450 119
19000 l 14.600 (M) 78 7800 0.89 96 16.2 1.1 380 136
14600 (A) 82 9300 0.95 106 16.2 1.1 343 109
14 600 (R) 74 8400 0.90 115 29.5 2.0 343 78

Los valores en negrita son en / cerca (a menos de 20%) de las condiciones máximas de esa escala. R, Rushton; M, Maxflo T; A, A315; HE, HE-3 / Maxflo T; MC, Maxflo T / CD-6; CC, CD-6 / CD-6.

larmente, si se desea mantener V s constante a escala-up, los valores más grandes de logrado mediante el mantenimiento de tiempos de mezcla estimadas constante.
entonces Q / V L deben ser implementadas en la escala más pequeña ( 36 ). Los valores Varias relaciones se han derivado o empíricamente desarrollado
típicos de Q / V L variar desde 1,67 hasta 1,0, con los valores generalmente la
disminución en la escala más grande ( Tabla 4 ). Aunque la tasa de flujo volumétrico de 0.3
T mezcla F 3 V L (10 a)
aire tiene relativamente poco efecto sobre la K L un valor, mayor flujo de aire
a partir de una encuesta de fermentadores industriales de 50 l a 100.000 l
las tasas pueden causar la formación de espuma dramática ( 27 ) Y mayor retención de gas en el volumen (26;.... Einsele, Abstr quinto Intern Ferment Symp,
en el fermentador. Si la velocidad superficial, V s, y PAG gramo/ V L son constantes, la 1976) y
retención de gas no cambia con la ampliación ( 29 ). Las inundaciones sucede
T mezcla F 3 ( PAG gramo/ V L) -0,37 (10b)
cuando la velocidad del aire superficial, V s,
se aproxima a 25-50% de la velocidad de ascenso de burbujas ya que el volumen de para un proceso de tetraciclina hasta 52.000 l en volumen (Einsele, Abstr. quinta
retención de gas fermentador sólo puede ser de aproximadamente 20% o menos ( 15 ). En el Intern. Ferment. Symp., 1976), donde k es una constante de proporcionalidad en
caso de agua con una velocidad media subida de burbujas de 22 cm / s, la inundación se ambas ecuaciones. Para los buques geométricamente similares en la región de flujo
produce a 5-10 cm / s ( 15 ). Cuando se produce la inundación, el impulsor no puede dispersar turbulento:
todo el gas suministrado, el gas se eleva como grandes burbujas a la superficie del líquido y - 1/6 constante ( 5 )
T mezcla norte 2/3 re yo (10c)
disminuye la acción del impulsor de bombeo ( 2 ). Como se muestra en Tabla 5 , V s varía de
0.66-3.4 cm / s para los buques de entre 30 l y 1900 l en el volumen total, saltando a 8,1 cm / s Por lo tanto, la solución de Eq. 10c suponiendo tiempos iguales de mezcla da
para el 19000 l escala. Sobre la base de estas directrices, posiblemente los 19.000 l escala Q máx Eq. 10d ( 5 ):
condiciones pueden ser propensas a las inundaciones. Tenga en cuenta que las inundaciones
norte 2 / norte 1 ( re I2 / re I1) 1/4 (10d)
también pueden ocurrir a bajas velocidades de agitación con demasiado alto de un caudal de
aire para todas las escalas. y las entradas de potencia correspondientes están dadas por Eq. 10e
( 5 ):
3 re I22) / ( norte 31 re I12)
( PAG o / V L) 2 / ( PAG o / V L) 1 ( norte 2 (10e)
Constante tiempo de mezclado Alternativamente, la ampliación puede ser
V OL. 97, 2004
Para los buques geométricamente similares en la región de flujo turbulento donde tanto PAG
o/ V L y el tiempo de mezclado son constantes, eq .
10e se convierte en ( 12 )
norte 1 / norte 2 ( re I2 / re I1) 2/3
La entrada de energía volumétrica necesaria para mantener la igualdad de tiempo de mezclado
2/3. Por lo tanto, utilizando la relación de
aumenta a medida V L
Eq. 10f , PAG gramo/ V L puede llegar a ser prohibitivamente alto de la ampliación y por lo
general se sobreestimado. Esta técnica generalmente no ha funcionado bien para las
fermentaciones ( 2 ). Un índice de lo mestizo, yo metro, También se ha propuesto ( 7 ) cual
no asume similitud geométrica:
yo metro F 3 ( SUS)( re T / H T) ( re T) -2/3
Esta expresión puede ser particularmente útil para la escala arriba para los buques ya
construidos en los que puede no haber sido mantenidos similitud geométrica. Los tiempos de
mezcla deben ser evaluados en relación con las tasas de transferencia de masa de nutrientes
para cultivos por cargas alimentado en presencia de la absorción de nutrientes celular. Por
una cultura (no especificado pero probablemente sea una levadura) con una densidad celular
de 20 g / l creciendo a una tasa de 0,2 h -1 ( tiempo de 3,5 h de duplicación), si la DO ( do L) está
en 20% de saturación, el oxígeno en el caldo se agotaría en 2,5 s ( 32 ). En el caso en el que
la glucosa era el nutriente limitante, la glucosa se podría agotar tan rápido como 4,5 s ( 32 ).
Longer tiempos de mezcla pueden causar tasas localmente altos de glucosa que a su vez
pueden causar localmente niveles bajos de OD debido a un mayor metabolismo de la célula.
Como consecuencia, las áreas locales de ácido mixto E. coli fermentaciones pueden dar como
resultado, produciendo en general más bajos rendimientos de biomasa sobre escala-up ( 9 ).
Por lo tanto, la ampliación basada en el tiempo de mezcla puede ser relevante para fed-batch E.
coli y cultivos de levaduras, especialmente a altas densidades celulares.
El análisis de tiempo característica anterior puede extenderse más allá y
dividido en tiempos característicos para los fenómenos de transporte
(transferencia o suministro) y tiempos característicos para la conversión (consumo
o reacción) (tasas 11 ). Transporte
fenómenos incluyen la transferencia de oxígeno (incluyendo trans- oxígeno
fer de la burbuja de gas al líquido), la circulación de líquido, de residencia del gas, y la
transferencia de calor. Las tasas de conversión incluyen las tasas de orden cero y primero
para el oxígeno y el consumo de sustrato, el crecimiento celular y la producción de calor.
Puede ser importante comparar las tasas de consumo y de transferencia de nutrientes
entre sí, así como con tiempos de circulación para establecer si los gradientes es probable
que existan ( 11 ). En concreto, para la fermentación de ácido glucónico en un tanque agitado
por un cultivo de hongos, la limitación de oxígeno puede ocurrir si el consumo y de
transferencia de las tasas son similares en magnitud. Si los tiempos de circulación de líquido
son también este mismo orden de magnitud, a continuación, se ven favorecidos gradientes
de oxígeno. En contraste, los gradientes de temperatura son menos probable que ocurra, ya
que, aunque las tasas de producción de calor y de transferencia son similares, a menudo
son sustancialmente mayor que los tiempos de circulación de líquido. Este análisis es
aplicable a alta densidad celular discontinuo alimentado E. coli y cultivos de levadura.
Existen tiempos de mezcla observados de varios segundos para fermentadores
de laboratorio, 20-30 s para 1000-2000 l fermentadores a escala piloto y 70-140 s para
60000 l -120000 l fermentadores de producción ( 4 ). tiempos de mezcla específicas
para estas escalas de 5 s para 10 l, 20 s para 1000 l, 29 s para 1800 l, 67 s para 60 000 l,
100 s de 100.000 l y 140 s para 120 000 l buques han sido re-
METODOLOGIAS ESCALA en marcha de procesos de fermentación 357
(10f)
(10 g)
HIGO. regresión 3. lineal de los tiempos de mezclado de la bibliografía ( Eq. 10h ) re-
portado para laboratorio, escala piloto y los procesos de producción ( 4 , 14, 20).
portado ( 14 ). Por último, los tiempos de 15 s de mezclar durante 120 l, 40 s para 1200 l y
60 s de 12.000 l buques han sido reportados ( 20 ). se informaron Estos tiempos de
mezcla para ambos fluidos / caldos newtonianos y no newtonianos.
Estas estimaciones de tiempo de mezclado pueden ser graficados ( Fig. 3 ).
La regresión lineal de estos puntos de datos disponibles de la literatura se obtiene
la ecuación
T mezcla 17,5 registro 10 ( V L) 19,4 (10 l a 60.000 l, r 2 0.876)
(10h)
T mezcla 223,5 registro 10 ( V L) 1004,6 (60.000 l a 120.000 l, r 2 0,902)
(10i)
dónde T mezcla es el tiempo de mezclado en segundos y V L es el volumen de trabajo líquido en litros.
Es evidente que el aumento de tiempo de mezclado con el volumen es más pronunciada una vez
que el volumen de trabajo está por encima
60000 l. Ecuación 10 h se utilizó para estimar los tiempos de mezcla para cada escala
fermentador existente ( Tabla 4 ). Las magnitudes relativas de estos tiempos pueden
ser comparados con los obtenidos a partir de los tiempos estimados usando Eq. 10 a y
10b suponiendo que la constante de proporcionalidad, F 3, permanece constante con la
escala.
otras influencias Después se implementan las estrategias iniciales expuesto
anteriormente, el diseño del recipiente resultante debe tener en cuenta otras influencias
para asegurar un rendimiento óptimo.
tasas de transferencia de calor evolución de calor es la combinación de
calor mecánico del agitador y el calor metabólico del cultivo. La relación de la
evolución de calor metabólico a
el consumo de oxígeno es de aproximadamente 115 kcal de calor evolucionaron
por mol de oxígeno consumido para seleccionado E. coli, cultivos de levaduras y hongos ( 32 ,
37). La cantidad total de oxígeno consumido por el cultivo puede ser estimado por
integración del valor NUESTRO frente a la curva de tiempo a continuación, la multiplicación
por el volumen de trabajo del tanque. La zona de coeficiente de transferencia de calor y la
chaqueta deseado puede entonces ser evaluada utilizando caudales de fluido de
refrigeración previstos y las temperaturas de entrada / salida. Los requisitos para el tipo
jacket ( p.ej, hoyuelo, medio-bobina) y el área de la chaqueta a continuación se establecen.
Para grandes fermentadores más de 5000 l,
que puede ser difícil de sostener OURs por encima de 300 mmol / l- h desde
surgen problemas de transferencia de calor.
efectos medio de esterilización A medida que aumenta la escala de fermentador, el calor
y enfriamiento veces convertido en una más grande
358 JUNKER
proporción del ciclo global tiempo de esterilización como se muestra en
Tabla 10 . La porción de tiempo de calentamiento hasta aumenta de aproximadamente
15% a aproximadamente 37%, y la parte de enfriamiento aumenta de 10% a 16% como la
escala se eleva desde 280 l a 19.000 l.
el 100 l y 1000 l escalas son excepciones a esta tendencia, ya que requieren un poco más
largo que los intervalos esperados, ya que están equipadas con un bucle de recirculación
de la chaqueta con calentamiento indirecto y refrigeración a través de intercambiadores de
calor. Los valores de F o aumentó de aproximadamente 75 a aproximadamente 91 min y los
valores de R o aumentado de alrededor de 57 a alrededor de 87 min durante este mismo
rango de escalas ( Tabla 10 ; 38 ). Estos aumentos de F o y R o traducir directamente a un
aumento en el nivel de exceso de esterilización y el estrés de calor del medio,
respectivamente, a medida que aumenta la escala. El impacto adverso de estrés de calor
del medio es un proceso dependiente y se puede minimizar con el uso de continua (alta
temperatura, tiempo corto) de esterilización medios de comunicación.
Los factores biológicos Los factores biológicos, tales como el número de
generaciones a través del cual el organismo de progreso en el curso de las
fermentaciones de semillas y producción, necesitan ser considerados en la selección
de la escala de producción final. Suponiendo un crecimiento exponencial, el número
de generaciones, norte gramo, se puede expresar como ( 12 )
norte gramo 1,44 (ln V L En X norte En X No) (11)
dónde X norte es el número final de células (o masa) y X No es el número de células del
inóculo inicial (o masa). La estabilidad del inserto de ADN recombinante y el requisito
de un agente para ejercer necesidad presión selectiva para ser evaluados para el
número de generaciones que se esperan en el proceso además de un cómodo
margen de seguridad.
generalizada enfoques para ampliar las varios autores
tienen enfoques recomendados o combinaciones de enfoques para ampliar las
basadas en las ecuaciones y principios descritos anteriormente. Ningún método
parece ser adecuada para todas las fermentaciones con una alta probabilidad
de éxito ( 5 ), Y la aplicabilidad de un método sobre otro es processspecific. El
éxito a menudo depende de la fiabilidad de las correlaciones empíricas de
escalado y la integridad de los datos a pequeña escala. Unos pocos ejemplos se
destacan a continuación.
Método de Hubbard Este método ( 39 ) fue desarrollado
como una combinación de enfoques de otros autores. Durante la fermentación a
escala de laboratorio, se miden las tasas de flujo de aire, velocidad del impulsor, el
rendimiento y fermentador dimensiones geométricas. propiedades de caldo básicos
tales como la densidad, la viscosidad, tensión superficial, y el coeficiente de difusión
de oxígeno se determinan. (De estas propiedades caldo, es probable que sea más
importante para entender el comportamiento reológico de caldo de cultivos de
micelio.) Varias cantidades, tales como Q / V L, norte Re,
SU, y norte UN, se calculan a partir de las condiciones del fermentador a escala de
laboratorio en base a las cantidades medidas.
Para el fermentador a escala de planta, se selecciona un volumen basado en el
rendimiento del producto y la capacidad de la planta. similitud geométrica continuación, se
utiliza para calcular dimensiones de la embarcación. Ampliación se basa en la coincidencia K L
un valores y luego proceder ya sea en una de dos maneras. La primera manera es calcular el
caudal,
Q, por cualquiera de sujeción Q / V L o velocidad superficial, V s, constante, entonces para calcular la
velocidad del impulsor, NORTE, Residencia en PAG gramo/ V L
versus K L un (correlaciones Eq. 9a-c ). La segunda manera es establecer
norte el uso constante de velocidad de la punta del impulsor, a continuación, para calcular Q
J. B IOS CI. segundo IOENG.,
de PAG gramo/ V L y K L un correlaciones.
Una aplicación de este método es el uso de K L un para expandir la cobertura de
una bacilo turingiensico fermentación. Esta escala-up se realizó utilizando la
segundo
ecuación, K L un constante norte un V s
(Obtenido mediante la combinación de Eq. 9 , La relación esperada de PAG gramo/ V L,
y Eq. 3 ) Con la ampliación de la base de K L aP T dónde PAG T es la presión total en la
presión de cabeza del recipiente incluyendo ( 40 ). Otra aplicación es el uso de una
estrategia iterativa basada en las tasas de flujo de aire incrementales para calcular
resultante parámetros de escala-up y luego a examinar cada conjunto de parámetros
para un caudal particular, para optimizar aún más los requisitos de compresor y de
potencia agitador ( 36 ).
Método de Ju y Chase / Díaz y Acedevo Este método ( 2 , 41) se centra en la
Ampliación de la base en OTR no equivale K L a. En primer lugar, se selecciona el
volumen escala-up, entonces similitud geométrica se utiliza para obtener re T. Constante
de velocidad punta del impulsor se asume para obtener NORTE. Utilizando la relación,
c( Eq. 4 ), PAG gramo/ V L a continuación, se estima y, usando
PAG gramo/ V L F 1 V L
relaciones empíricas entre PAG gramo/ V L y K L un ( Eq. 9a-c ), el
K L un valores para el fermentador de escala-up están decididos. Por último, la tasa
de OTR para la gran fermentador se corresponde con la de la fermentador a
pequeña escala y la contrapresión para la gran fermentador se calcula suponiendo do
L es 0 mmol / l.
El elemento clave de este método es que hay tres grados de libertad
para la ampliación. Estos son comúnmente N, Q
y re YO/ re T ( es decir, geometría del reactor). Por lo tanto, sólo tres artículos pueden ser
especificados a ser constante para la ampliación. Si se añade otro grado de libertad,
tales como la presión parcial de fase de gas, entonces este valor también se puede
especificar para mantener constante la máxima OTR. Para determinar el efecto sobre el
cultivo, es generalmente útil para ejecutar fermentaciones a pequeña escala utilizando la
mezcla de gas para variar este oxígeno de entrada de presión parcial.
Método de Wang et al. En este método ( 42 ), Dos claves
Los valores se mantienen constantes en la escala de arriba: K L un ( calculado por Eq.
9a-c ) y es. La relación de re YO/ re T a continuación, se ajusta a dentro de límites
razonables para completar el diseño. Aunque similitud geométrica no se mantiene, la
variación resultante de la re YO/ re T relación con la escala a menudo todavía puede
proporcionar dispersión de gas adecuada. Esta técnica aporta flexibilidad para
instalaciones de fermentadores existentes.
Las propuestas para la mejora de los cálculos de escalado Esta
método simplificado ( 27 ) Evalúa cantidades clave de interés escalado basado en dos
variables: norte y re YO. El impulsor número de Reynold está representado por DAKOTA
2, el nú- Froude
DEL NORTE yo
3, el poder gaseados
ber por norte 2 re YO, el número Weber por norte 2 re yo
2, la velocidad punta del impulsor por
por volumen de líquido por unidad norte 3 re yo
DAKOTA DEL NORTE YO, y Q / H T por re YO/ N ( dónde H T es específicamente la altura del
fermentador y no a la altura del volumen de líquido). Se combina el análisis grupo
adimensional relevante con otros parámetros empíricamente aplicables.
Ampliación análisis utilizando uno o más de estos métodos anteriores ha
sugerido métodos para operar fermentadores de laboratorio para el mejor
rendimiento a escala reducida. Por ejemplo, se recomienda aire nitrógeno diluido
para ser utilizado en el 10 l
escala para apropiadamente imitador escala-hasta el 10000 l escala ( 2 ). Los estudios a
escala reducida diseñados para simular las condiciones de operación a gran escala han
tenido un gran éxito en algunos casos en la predicción del comportamiento y la
identificación de causas para un rendimiento óptimo a gran escala ( 43 -46).
V OL. 97, 2004
Las prácticas actuales de escalado para E. coli y cultivos de levadura se basan en gran
parte en el mantenimiento de equivalente do L, K L un o el rendimiento OTR como un primer
pase. En estas fermentaciones, el suministro de oxígeno está limitando a escala arriba
debido a la alta demanda de oxígeno celular y no debido a la alta viscosidad de caldo como
en el caso de cultivos de hongos. Posteriormente una evaluación de los efectos de tiempo de
mezcla, ya que afecta DO y distribución de nutrientes puede llevar a cabo, que se
recomienda especialmente para alta densidad celular cultivos discontinuos alimentados.
II. Las condiciones de fermentación PROCESO
Para evaluar el rendimiento operativo de los buques a escala piloto, las condiciones
existentes fermentador (volumen, caudal de aire, presión, velocidad del impulsor, el
consumo de energía gaseados, coeficiente de transferencia de masa, NUESTRO trabajo)
fueron compilados basa en registros históricos para varios E. coli ( Tabla 11a ) Y cultivos
de levadura ( Tabla 11b ). NUESTRO se calculó sobre la base de mediciones de la
composición del gas de escape por un espectrómetro de masas ( 47 ). Los datos se
tomaron en el momento de pico NUESTRA que no necesariamente se corresponde con
el momento del coeficiente de transferencia de masa máxima. Cultivos se llevaron a cabo
en el 280 l a 1900 l
escalas durante la última década. Además, se realizaron estudios recientes
específicos en las diversas escalas (280 l -19000 l) para un ejemplo E. coli (E. coli DH5,aire, la agitación y la presión. OURs pico oscilaron desde 38 hasta 260 mmol / l- h
Tabla 12a ) Y un ejemplo proceso de levadura ( chilensis Candida, Tabla 12b )
Utilizando medios de fermentación diseñada para promover la alta pico OTR.
datos tabulados son representativos de fermentaciones típicos de ese proceso
específico a esa escala seleccionado.
Parámetros de control para cada fermentación variarse de acuerdo con los
objetivos de desarrollo. Después de su descenso inicial de los niveles de
pre-inoculación, DO se controla generalmente entre 30% y 80% de saturación,
calibrado para aire a presión ambiente, utilizando diversas estrategias. En algunos
casos, la fermentación se inició con la agitación, de nuevo a la presión y / o caudales
de aire en el control en cascada con DO. En otros casos, cuando la necesidad de
controlar DO en su punto de ajuste dado lugar a la velocidades de agitación y flujo
de aire que llega a los ajustes máximos, estos dos parámetros se colocaron en
modo automático en sus puntos de máximo establecido y luego de vuelta a la
presión se colocan en el control en cascada. Otras estrategias se utilizaron en
función de los requerimientos específicos del proceso. Por ejemplo, si la formación
de espuma se produjo en la fermentación o una mayor dCO 2
La concentración se desea, la parte de atrás a la presión se elevó a típicamente de 1-1,5 kg
/ cm 2 más temprano en el proceso.
descripciones de procesos específicos se han publicado para algunos
de los procesos descritos ( E. coli RR1 [ 48 , 49], E. coli OP-50 [ 50 ], E. coli PF436
[ 51 ], Saccharomyces cerevisiae QC2B [ 52 ], S. cerevisiae 1375 [ 53 ], Pseudomonas
valores calculados en el pico NUESTRO variaron de 2,1 hp / 1000 l
aeruginosa MB5001 [ 54 ], Y Candida sorbophila [ 55 -57]).
Otras descripciones de procesos no se publican ( E. coli ADN polimerasa, E. coli K12, E.
coli DH5, C. chilensis), pero son consistentes con los procedimientos actuales del
estado de la técnica. procesos exactos corren se basaron en estas descripciones,
pero se desviaron significativamente en muchos casos para lograr los objetivos de
desarrollo del proceso.
METODOLOGIAS ESCALA en marcha de procesos de fermentación 359
III. RESULTADOS scale-up para las
fermentaciones anterior (1992 hasta
mediados de 2001)
Una encuesta de procesamiento se llevó a cabo en esta planta piloto de
fermentación de 1992 hasta mediados de 2001 para obtener información sobre las
condiciones del proceso alcanzables para E. coli
( Tabla 11a ) Y levadura ( Tabla 11b fermentaciones). valores en negrita representan la
operación dentro de 20% de las máximas condiciones de agitación y aireación para
los fermentadores de la planta piloto mostrados en la tabla 1 . En el caso de
fermentador de contrapresión,
el valor máximo deseado se fija en 1,5 kg / cm 2, a pesar de que
durante este período de funcionamiento (principios de 1990) algunas fermentaciones se
llevaron a cabo a presiones tan altas como 1,8 kg / cm 2,
una contrapresión encontró posteriormente a afectar adversamente el agitador doble
longevidad del sello mecánico. También durante este periodo, las lecturas de consumo de
energía no estaban disponibles en 280 l
transductores de escala y el vatio instalado en 800 l escala, que no se corrigieron para
las pérdidas de la caja de cambios ( 24 ), Se saturó en una mayor potencia de llama.
Tabla 11a ilustra que histórica E. coli cultivos desafiados predominantemente la
velocidad máxima impulsor principalmente en el 280 l y 1000 l escamas. Sólo unos
pocos 280 l cultivos acercaron simultáneamente condiciones de pico de caudal de
con la nuestra por encima de 90 mmol / l- h alcanzó para cada una de las cuatro
escalas ensayadas. PAG gramo/ V L y K L un valores calculados en el pico NUESTRO
oscilaron entre 3.3-14.7 hp / 1000 l y 167 a 738 mmol / l- h-atm, respectivamente.
Aunque hubo una amplia experiencia en el 280 l y 1000 l escalas con altos
NUESTROS fermentaciones, el grado de desafío a la capacidad operativa de los
buques en las otras escalas fue limitada. K L un
valores alcanzados en el más pequeño 280 l escala eran generalmente alcanzable a
escala-hasta el 1000 l ó 1900 l escalas para aquellos procesos en los que se trataba
de un objetivo de desarrollo ( E. coli DH5, E. coli RR1). Los valores de la constante de
proporcionalidad, F 2, de Eq. 9b varió de 55 a 143, que indica una variabilidad esperada
en el rendimiento de cualquier correlación scaleup empírica debido a los parámetros
específicos del proceso, aumento a escala y de funcionamiento.
Tabla 11b resume los datos históricos comparables para la levadura
cultivos. Como se observó en el caso de la E. coli procesamiento, se hicieron algunos
retos para las condiciones óptimas de funcionamiento, excepto en el 280 l y 1000 l escamas.
OURs pico eran notablemente más bajos que en el caso de la E. coli fermentaciones,
oscilaban entre 49 y 141 mmol / l- h con la nuestra por encima de 50 mmol / l- h alcanzó
para cada una de las cuatro escalas ensayadas. PAG gramo/ V L y K L un
a más de 15 CV / 1000 l y 226 a 844 mmol / l- h-atm, respectivamente. Estos
rangos fueron similares a los observados para E. coli procesos. Una vez más la
amplia experiencia en el 280 l y 1000 l
escalas no fue acompañado en las otras escalas. En el caso de estos procesos
de levadura ( C. sorbophila, C. chilensis, y S. cerevisiae 1375), el K L un valores
alcanzados en el 280 l escala fueron en general capaz de ser obtenida a la más
grande 800 l, 1000 l
y 1900 l escamas. Los valores de la constante de proporcionalidad, F 2,
de Eq. 9b generalmente van desde 62 a 218, indicando de nuevo variabilidad
esperada en el rendimiento debido al proceso, la ampliación y parámetros de
funcionamiento. Para un proceso específico en una escala específica, el rango fue
sustancialmente menor.
360 JUNKER
IV. RESULTADOS scale-up PARA ESTUDIOS EN CURSO
En base a este análisis histórico del rendimiento de los procesos, estudios recientes
(mediados de 2001 hasta la actualidad) se llevaron a cabo para mejorar el reto de
fermentador condiciones óptimas de funcionamiento para E. coli y fermentaciones de
levaduras. En el caso de E. coli
fermentaciones, carbono inicial y las concentraciones de nitrógeno se
plantearon para aumentar el pico NUESTRO allá de lo que normalmente podría
ser observado con este proceso. Se desea llevar a cabo estudios específicos
en el 800 l, 1200 l, 1900 l
y 19.000 l escalas para obtener información más completa acerca de las
capacidades del equipo a escala piloto instalada. variadores de frecuencia
mejoradas (VFD) fueron instalados en todo, pero el 19.000 l vasos escala
(que retiene sus transductores vatios) en la que el consumo de energía se
controló directamente de la corriente eléctrica VFD (Altivair 66; Schneider
Electric, Palatine, IL, EE.UU.) Esto dio lugar a la nueva capacidad de medir
el consumo de energía en el 280 l escala y un rango de medición ampliado
para el 800 l escala.
Tabla 12a resume las condiciones de procesamiento alcanzables para el E. coli DH5
proceso para un proceso de mayor escala basada en el mantenimiento mínimo
análogas niveles. Para estos procesos aeróbicos, DO estaba obligada a estar por
encima de su valor crítico para maximizar el crecimiento y la productividad. OURs pico
disminuyeron ligeramente de aproximadamente 155-158 mmol / l- h a alrededor de 96
116 mmol / l- h a escala-up de la 280 l a 1900 l escamas.
PAG gramo/ V L disminuido con la escala como se esperaba que varía de aproximadamente
18-19 hp / 1000 l en el 280 l escala a 6/1 a 8/8 hp / 1000 l en el 1200 l y 1900 l escamas.
Calculado K L un valores disminuyeron sólo ligeramente con la escala, decreciente desde
475-572 mmol / l-
h-atm en el 280 l escalar a 354-465 mmol / l- h-atm en el 1900 l escala. Valores de F 2 Los valores obtenidos parecen ser consistentes tanto para E. coli
en Eq. 9b fueron sustancialmente más uniforme que el encontrado con los datos
históricos, que van de 40 a 70, que coincide con el rango más bajo encontrado
con el histórico
E. coli procesar datos. Los valores fueron relativamente consistentes con las condiciones
de escala y de funcionamiento, lo que sugiere una relación empírica fiable puede ser
obtenible.
condiciones de procesamiento realizables para la levadura C. chilen-
sis proceso se resumen en Tabla 12b , De nuevo basado en la Ampliación de la usando
mínimos similares niveles de OD. Al incremento de escala de la 280 l a 19.000 l escala, la
nuestra pico disminuyeron ligeramente desde aproximadamente 98 mmol / l- h a alrededor de
74-82 mmol / l- h. Como se esperaba, PAG gramo/ V L disminuido con la escala que varía de
aproximadamente
9,6 hp / 1000 l en el 280 l escala a 1,1-2,0 hp / 1000 l en el
19000 l escamas. Tanto el pico y NUESTRO PAG gramo/ V L valores fueron notablemente más
baja para el proceso de levadura que para el E. coli proceso. Calculado K L un valores
disminuyeron sólo ligeramente con la escala, la disminución de aproximadamente 430
mmol / l- h-atm en el 280 l escalar a 343-380 mmol / l- h-atm en el 19000 l escala. Valores de F 2 menudo ha sido más útil para estos cultivos. Para instalaciones con equipo instalado
en
Eq. 9b registró entre 60 y 136 y eran menos uniformes con las condiciones de escala y
de funcionamiento que el encontrado con corriente E. coli procesar datos. Esta
diferencia puede haber sido debido a la tendencia de esta cultura a agruparse e
incluso ramificarse durante el crecimiento. El rango de F 2 valores también fue menor
que la observada con los datos históricos de levadura.
V. Tendencias e implicaciones para ESCALA EN MARCHA
relaciones que se establecen para la ampliación pueden ser difíciles de usar debido a la
falta de datos suficientes sobre un rango de procesamiento
J. B IOSCI. segundo IOENG.,
condiciones de los conjuntos de datos de proceso de desarrollo típico. A menudo
la gama de condiciones de proceso que se necesita en conflicto con la forma de
ejecutar de manera óptima los procesos, lo que hace difícil obtener datos y copia de
calcular. Puede ser difícil de variar las condiciones dentro de un solo cultivo como se
hizo anteriormente ( 58 ) Sin afectar negativamente a los datos posteriores. En
consecuencia, no todos los procesos / escalas fueron capaces de ser analizado si las
condiciones de funcionamiento en el pico de nuestros valores para cultivos individuales
no varían suficientemente.
Tabla 13a resume la relación entre el pico NUESTRO
y K L un:
NUESTRA UN 1 K L un B 1 (12a)
para los procesos históricos y actuales seleccionados en diversas escalas
para el cual el caldo de DO niveles fueron similares. La pendiente, UN 1,
varía 0,075 a 0,46, lo que indica una gran dependencia de proceso y de las condiciones
de funcionamiento en la transferencia de masa. Para un proceso específico, sin
embargo, los valores cuando alcanzables eran razonablemente constante a escala.
Estudios previos de escalado en los vasos escala piloto se han basado en la
fermentación de metabolitos secundarios en los que se encontró un acuerdo general
con lo establecido K L un y PAG gramo/ V L
(tendencias 58 ). Desde el más reciente enfoque de los estudios de planta piloto ha
sido el escalado de E. coli y cultivos de levadura, datos de los picos de estudios
recientes escala-up han sido analizadas y resultados presentados en Tabla 13b . El
exponente de PAG gramo/ V L en Eq. 9b , UN 2, se calculó para procesos históricos y
actuales seleccionados a varias escalas de acuerdo con
Iniciar sesión K L a una 2 Iniciar sesión( PAG gramo/ V L) segundo 2 (12b)
y los procesos de levadura y están a punto 0,96-0,98, en comparación con
0,58 a 0,8 encontrado previamente para un bacteriana filamentosos y el cultivo de
hongos ( 23 , 58). Los valores más altos reflejan el impacto de un mayor K L un cambio
con nuestra para éstos E. coli
y cultivos de levadura, lo más probable debido a su menor viscosidad caldo y la
morfología celular en gran medida única. Curiosamente, el mayor valor del
exponente parece ser más consistente con la correlación escala de laboratorio ( Eq.
9a ) Que la correlación escala piloto ( Eq. 9b ).
Para caldos de micelio, las características reológicas influyen en el rendimiento a
escala. las tasas de transferencia de calor y el oxígeno son 5-50% de las fermentaciones
bacterianas y mezcla en masa es el principal más pobre para bajar homogeneidad caldo ( 28
). Como consecuencia de ello, su a menudo ha sido una regla útil para la ampliación ( 27 ).
La reología es menos importante para células individuales fermentaciones bacterianas y
de levadura en comparación con las magnitudes relativas de las tasas de absorción y el
suministro de nutrientes. De este modo, la ampliación basada en DO, o NUESTRO K L un a
existente, fiable ampliación es más fácilmente logrado en base a la selección de las
condiciones de funcionamiento tales que el mínimo DO sigue siendo similar entre las dos
escalas. Implicaciones para otros parámetros clave tales como nuestro y K L un a
continuación, se puede evaluar fácilmente.
Debido a la disponibilidad de recombinante E. coli y cultivos de levadura con altas
productividades específicas, volúmenes de producción típicos para las proteínas
recombinantes a menudo no se extienden por encima de 5000 l y / o puede no requerir
procesos de alta densidad celular. Como la demanda de aumento de la capacidad, se
pueden hacer esfuerzos adicionales para mejorar la productividad volumétrica y por lo tanto
empujar el
V OL. 97, 2004 METODOLOGIAS ESCALA en marcha de procesos de fermentación 361

TABLA 13a. Comparación de la relación entre nuestros y K L un para cultivos históricos y actuales seleccionados

Nuestro rango K L un rango utilizado

Coeficiente de Número
Escala UN 1 utilizado para la para la regresión
Cultivo regresion, de
(Volumen nominal) (Cajero automático) regresión (mmol / l- (mmol / l- h-atm)
r2 cultivos
h)

Histórico (1992 a mediados de 2001)

C. sorbophila 280 l 0.22 0.97 30-53 120-230 11

800 l 0.22 0.94 50-105 230-470 11
C. chilensis 280 l 0.46 0.99 75-140 160-300 4
800 l 0.32 0.99 65-118 155-320 3
S. cerevisiae QC2B 800 l 0,19 0.98 40-92 180-460 22
S. cerevisiae 1375 280 l 0,19 0.91 25-66 140-340 33
800 l 0.17 0.84 53-67 285-370 11
1900 l 0.17 0.99 51-60 258-308 4
E. coli RR1 280 l 0.16 0.90 31-86 190-500 20
1900 l 0.18 0.88 25-97 151-596 5
E. coli DH5 1000 l 0.17 0.99 80-150 412-780 dieciséis
E. coli OP50-1 1900 l 0,075 0.95 39-49 177-303 3

Reciente (de mediados de 2001 a 2002)

C. chilensis 280 l 0.31 0.97 71-158 230-535 7

1200 l 0.18 0.92 73-95 296-445 5
E. coli DH5 280 l 0.39 0.96 50-98 250-373 4

La ecuación 12a : NUESTRA UN 1 K L un B 1. Sobre la base de pico NUESTRO medido durante la fermentación (no pico necesariamente nuestra capacidad de los equipos).

TABLA 13b. Relación entre K L un ( mmol / l- h-atm) y PAG gramo/ V L ( hp / 1000 l) los resultados históricos y actuales

velocidad PAG gramo/ V L rango K L un rango

Escala Coeficiente de Número
superficial, utilizado para la utilizado para la
Cultivo (Volumen nominal) UN 2 segundo 2 regresion, de
Vs regresión regresión
(Tipo impulsor) r2 cultivos
(Cm / s) (Hp / 1000 l) (Mmol / l- h-atm)

Los resultados individuales de escala

S. avermitilis un 800 l ( R) 0,667 0.58 1.8 N/A 0,67-8,0 35-90 1

(Convertido a HP / 1.000 l 800 l ( METRO) 0,667 0.59 2.2 N/A 0,33-2,0 50-180 1
de kw / 1000 l)
A. terreus segundo 800 l ( R) 0.5-1.0 0.6 1.9 N/A 0,38-5,6 30-200 1
(Convertido a HP / 1.000 l 0.8 1.2 N/A 0,31-4,4 4-45 1
de kw / 1000 l)
S. cerevisiae 1375 1000 l ( R) 01.13 a 01.07 0.96 0.97 0.92 3,7-7 485-897 6
E. coli RR1 1900 l ( METRO) ,75-0,84 0.96 1.6 0,81 4,1-14,7 150-600 5
E. coli DH5 280 l ( METRO) 2.0 0.98 1.5 0.89 8,3-18,9 230-535 7

ecuación de escala múltiple

9b ecuación tal como se aplica a los 100 l -19000 l 1.5 a 8.1 0,67 NA N/A 1-20 N/A N/A
buques de instalaciones

12b ecuación : Iniciar sesión K L a una 2 Iniciar sesión( PAG gramo/ V L) segundo 2. Rango de velocidades superficiales supone constante para los valores calculados. (Base 10) logaritmo común utilizado. R, Rushton; M,
Maxflo T; A, A315. NA, no aplicable cálculo.
un Ver Árbitro. 58 .
segundo Ver Árbitro. 23 .

límites de la capacidad de diseño fermentador actuales y futuros. Cuando do : Exponente ( Eq. 4 )

más experiencia ampliación se obtiene a través de una amplia gama de CC: Chemineer CD-6 superior / inferior de CD-6 con- impulsor
volúmenes, la utilidad de las diversas metodologías de escalado mejor se puede figuración
evaluar. A lo largo de estas evaluaciones, un modelo eficaz a escala reducida es do L : Concentración medida de oxígeno disuelto en el caldo, mmol / l o
clave para problemas efectiva disparar a gran escala, y su desarrollo debe ser una saturación%
prioridad. do sab : Concentración de oxígeno disuelto en caldo a saturación, mmol / l o%
de saturación dCO 2: dióxido de carbono disuelto

NOMENCLATURA
re yo : Diámetro de impulsor, m
un : Exponente ( Eq. 9 ) HACER: oxígeno disuelto
segundo : Exponente ( Eq. 9 ) re T : Diámetro del recipiente, OD, m
UN 1, segundo 1: constantes de pendiente y la intersección ( Eq. 12a ) re Ti : Diámetro del recipiente, i, OD, m
UN 2, segundo 2: constantes de pendiente y la intersección ( Eq. 12b ) F1 : proporcionalmente constante ( Eq. 4 )
UN : Lightnin A315 impulsor (bombeo hacia abajo) de configuración F2 : proporcionalmente constante ( NCA. 9 , 9a-e)
F3 : proporcionalmente constante ( NCA. 10a-g )
362 JUNKER J. B IOSCI. segundo IOENG.,

Fo : Kill equivalente para observado temperatura de esterilización en relación : Tasa de crecimiento, h -1

con que al 121 C, min : Densidad, g / cm 3

gramo do : Factor de conversión aceleración de la gravedad, 1 kg m / Ns 2 : Viscosidad, g / cm-s (poise)

HE: Chemineer HE-3 superior / inferior de CD-6 con- impulsor

figuración
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