CONTROL HIGIENICO DE

SUPERFICIES VIVAS
MICROBIOLOGIA

PROFESORA:
• Ing. Sonia Herrera Sanchez.
INTEGRANTES:
• Flores Garay, Saray.
• Flores Mansilla, Micaela
• Pebes Cabrera, Ivette
• Vasquez Condor, Rosa

2017 B
CONTROL HIGIENICO DE SUPERFICIES VIVAS

INTRODUCCION

El lavado de manos es el método más efectivo para prevenir la transferencia de

microorganismos entre el personal y pacientes dentro del hospital.

Los microorganismos patógenos son transportados por las manos del personal desde pacientes
colonizados o infectados, y representan un importante modo de transmisión de gérmenes y de
dispersión de infecciones. Esta situación se ve claramente representada en estudios que
evaluaron la flora normal del tracto respiratorio y gastrointestinal en los pacientes internados
en una unidad de cuidados intensivos, la cual rápidamente es reemplazada por patógenos
circulantes en la unidad. Se calcula que las concentraciones de microorganismos resistentes
crecen en billones por mililitro en secreciones respiratorias o en la materia fecal en pocos días.
El principal problema con el lavado de manos, no está relacionado con la posibilidad de obtener
buenos productos, sino con la falta de cumplimiento de la norma.

Hay numerosos estudios publicados con relación a la práctica de lavado de manos, y la mayoría
concluye que el personal de salud lava sus manos la mitad de las veces de las que está indicado
y en general con menor duración que la recomendada. Generalmente el personal de salud
sobrestima la frecuencia y tiempo del lavado de manos.

Si bien es cierto que muchas instituciones de salud de nuestro país no cuentan aún con
suficientes piletas, o tienen mala ubicación de las mismas, no cuentan con toallas adecuadas
descartables, o no hay jabones para el lavado de manos, constantemente observamos que en
unidades que cuentan con estos recursos, el personal tampoco lava sus manos.

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OBJETIVOS

• Establecer los criterios microbiológicos destinados a evaluar las condiciones higiénicas sanitarias
de las superficies vivas que entran en contacto con los alimentos y bebidas.

• Uniformizar los procedimientos que se deben aplicar para la selección y toma de muestras y
para los ensayos microbiológicos de superficies vivas.

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MARCO TEORICO
Es cada vez más frecuente que dentro de las normativas de control de calidad se incluya
un control microbiológico ambiental y de superficies y se hace prácticamente
imprescindible en actividades relacionadas con productos destinados a sanidad o
alimentación.
En el cumplimiento de las normas ISO se exige la recopilación
del mayor número de datos posibles, que relacionen un
producto con todo su proceso de fabricación y distribución. Un
parámetro importante sería el control ambiental y de superficie.
El acopio de datos en este sentido y la calidad del producto
final, nos ayudará a crear nuestros propios criterios de
valoración.

1. ¿PORQUE REALIZAR EL CONTROL MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIES?

 Los alimentos pueden contaminarse con microorganismos provenientes de

utensilios, equipos, superficies y del medio ambiente que no han sido
adecuadamente limpiados.
 Un recuento alto de microorganismos en las superficies a analizar indica una falta
de higiene en las áreas de preparación de alimentos.
 Contaminaciones cruzadas en alimentos pueden ser el resultado de una limpieza
y desinfección inadecuada de las superficies de trabajo.
 Partículas secas de residuos de alimentos en áreas de difícil acceso en los
equipos sirven como una fuente excelente de nutrientes para los
microorganismos.

2. METODOS DE MUESTREOS PARA SUPERFICIES

2.1. Método de la placa de contacto (Placa Rodac)

El método de contacto directo del agar con los microorganismos que se multiplican
(RODAC= Replicate Organisms Direct Agar Contact) utiliza placas Petri
especiales, ideales para la investigación de gérmenes en superficies. Se usa
medio de cultivo TSA o diferentes medios selectivos a conveniencia. Se añade a
una placa de Rodac, un medio de cultivo sólido (seleccionado en función de los
microorganismos buscados), en ligero exceso, para que la superficie quede
convexa. Las superficies a controlar suelen ser limpiadas periódicamente con
detergentes y/o desinfectantes.

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Para realizar el recuento total de microorganismos en superficie, es aconsejable

neutralizar los restos de detergentes y desinfectantes ya que podrían inhibir el
crecimiento. Para ello se utilizará preferentemente un medio de cultivo que
contenga polisorbato, histidina y lecitina (a veces llamados Tween 80 y lecitina)
que funcionan como neutralizantes de aldehídos, compuestos fenólicos y amonios
cuaternarios, que suelen ser utilizados como desinfectantes y detergentes con
actividad antibacteriana. Con esta neutralización se consigue evitar interferencias,
debido a que estas sustancias no pueden inhibir el crecimiento colonial durante el
periodo de incubación y por tanto no afectan a la ulterior lectura e interpretación
de resultados. Es el método ideal para examinar superficies lisas, duras y no
porosas, pero no es muy recomendable en casos de superficies muy
contaminadas, donde es más práctico el uso de medios selectivos. Si se desea
controlar un grupo de microorganismos en concreto, también recurriremos a
medios selectivos. La placa de Rodac es muy laboriosa de preparar y además se
deshidrata y contamina muy fácilmente. Por ello Scharlab le suministra la placa
de Rodac ya preparada, en cajas de 30 unidades repartidas en 5 blister de 6
placas cada uno. Cada blister va a su vez introducido en una bolsa totalmente
sellada. Este embalaje prolonga la vida de las placas, evitando la deshidratación
y contaminación. En el proceso de fabricación se utilizan todos los materiales
estériles, pero si el medio lo permite, una vez terminado el proceso se irradian las
cajas completas. Este proceso garantiza su estabilidad y nos permite poder entrar
el material en salas blancas sin riesgo de introducir contaminación. El mismo
blister, utilizado como bandeja, nos facilitará también el transporte de las placas
desde el lugar de muestreo hasta la estufa de incubación.

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2.2. Laminocultivos

La utilización de sistemas analíticos cada vez más rápidos y más prácticos es una
exigencia común en todos los laboratorios de control microbiológico. Los
laminocultivos son sistemas prácticos,
estudiados y diseñados especialmente para la
determinación cuantitativa y cualitativa de los
microorganismos en todos aquellos sectores
productivos en los cuales es necesario el
control de la microbiota contaminante. Este
sistema analítico ofrece las siguientes ventajas:

• Permiten la determinación cualitativa y cuantitativa de los

microorganismos.
• La presencia de dos medios de cultivo en un solo soporte permite efectuar
muestreos separados con un solo laminocultivo.
• El cierre hermético con tapón roscado disminuye la posibilidad de
contaminación accidental y mejora la estabilidad del producto.
• Su reducido volumen facilita el transporte, almacenamiento y permite una
mejor gestión del espacio siempre escaso de la estufa de incubación.

Los laminocultivos se presentan en dos versiones:

Una estudiada para el muestreo y control de líquidos, laminocultivos con dos o

tres medios de cultivo, y otra pensada para el control de superficies, laminocultivos
con dos superficies. En este caso poseen un soporte flexible que con la simple
presión de la mano puede doblarse en ángulo de 90° respecto al tapón,
permitiendo así una posición perfectamente paralela con la superficie a muestrear.

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2.3.Método del escobillón o frotis

Se utilizan torundas estériles de algodón; es un método

especialmente indicado para superficies de difícil acceso
para las placas de contacto o los laminocultivos, como
superficies flexibles, irregulares o muy contaminadas. La
recuperación de los microorganismos depende de la
textura de la superficie, de su naturaleza y del tipo de flora.
A pesar de sus limitaciones, este método es rápido, sencillo
y barato para calcular la flora microbiana de superficies y
herramientas.

Se coloca una plantilla estéril en la superficie a examinar y

se refriega con cuidado la zona expuesta con un escobillón
humedecido en solución de Ringer, o en Agua de Peptona
Tamponada, para facilitar la toma de muestra. En este caso
si la superficie ha sido limpiada con detergentes o
desinfectantes se recomienda usar medios de cultivo con
neutralizantes, como por ejemplo el Agar Letheen
Modificado, o TSA+Polisorbato+Histidina+Lecitina).

A continuación se introduce el escobillón en un tubo con 10 ml de solución salina

y se agita. Se obtiene una dilución 1/10. Si se
sospecha que la superficie esta muy contaminada,
se prepara un banco de diluciones con 9 ml de
Ringer. Las placas se inoculan con alícuotas de 0,1
ml en placa s de TSA. Se hace un duplicado como
mínimo por siembra. Con el asa de Drigalsky,
previamente esterilizada a la llama con alcohol, se
reparte el inóculo por toda la superficie, efectuando
movimientos de rotación hasta que el líquido queda
completamente absorbido. Otra opción es realizar
siembras directamente en medio sólido, haciendo
girar la torunda por toda la superficie del agar. Las
placas sembradas se incuban en posición invertida,
Cerrar e invertir la placa para su incubación, a
temperatura y tiempo adecuados según el medio y
determinación realizada.

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PARTE EXPERIMENTAL

• MATERIALES

MATERIALES GRÁFICO DESCRIPCIÓN

La placa de Petri es un
recipiente redondo,
de cristal o plástico, con una
cubierta de la misma forma
PLACA PETRI que la placa, pero algo más
grande de diámetro, para que
se pueda colocar encima y
cerrar el recipiente, aunque
no de forma hermética.

La pipeta es un
instrumento volumétrico de
laboratorio que permite medir
PIPETA
la alícuota de un líquido con
mucha precisión. Suelen ser
de vidrio.

La probeta es un
instrumento volumétrico que
consiste en un cilindro
PROBETA graduado de vidrio pyrex que
permite contener líquidos y
sirve para medir volúmenes
de forma aproximada.

El uso principal de los

GUANTES
guantes descartables es de
DESCARTABLES
protección.

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Se puede utilizar un diluyente

isotónico para diluir las
células bacterianas con el fin
de proporcionar una
concentración adecuada para
SOLUCIÓN observación al microscopio,
SALINA 0.8% determinar recuentos de
células, analizar propiedades
genéticas o metabólicas, lavar
las células en preparación
para su estudio o preparar
inóculos normalizados.
Al principio fue desarrollado
para el aislamiento
de Salmonella typhi, pero
ahora es usado mayormente
como un medio para
AGAR ENDO coliformes. Mayoría de los
organismos Gram negativos
crecen bien en este medio,
mientras que otros
organismos Gram positivos
son inhibidos.

• PROCEDIMIENTO

Preparación de la muestra

Primero preparamos la solución salina (8gr/litro), que pasara a ser repartido

1 100ml por grupo, el cual se colocara en una bolsa ziploc.

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Un integrante del grupo enjuagara su mano en la solución salina contenida

2 en la bolsa ziploc.

Aparte colocaremos el Agar ENDO en un vaso precipitado de 250ml a baño

3 maría, para someterlo a calor y así fusionar al agar.

Luego colocaremos un mililitro de la solución salina que contiene a las

4 superficies vivas en la placa y vertemos 15ml del AGAR ENDO alrededor
de la placa Petri y lo dejamos enfriar con suaves movimientos hasta que
cuaje.

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Colocamos a la incubadora por un tiempo de 48 horas.

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Después de 48 horas sacamos nuestra muestra de la incubadora.
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Finalmente hacemos la lectura en el contador de colonias y contrastamos
con los límites permisivos de la norma R.M 461-2007 MINSA (método del
enjuague).

RESULTADOS

Análisis: Superficies Vivas

Lugar: Laboratorio de Microbiología
Fecha de muestreo: 17-10-2017
Fecha de ejecución: 19-10-2017

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RESULTADO MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIES VIVAS

LIMITE
TIPO DE ENSAYO RESULTADO PERMISIBLE

COLIFORMES AUSENCIA/ <10 UFC/ MANO

MANO

“El análisis microbiológico para identificar la presencia de COLIFORMES, el resultado

obtenido SE ENCUENTRA EN EL RANGO PERMISIBLE que indica la norma R.M 461 -
2007 MINSA en las disposiciones específicas de Análisis Microbiológicos de Superficies
vivas (método del enjuague)”.

ANTES DESPUES

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CONCLUSIONES

• Según la norma RM-461-2007 como máximo deberíamos encontrar <10 UFC/MANO y en

nuestra hubo ausencia, eso nos quiere decir que las manos de nuestra compañera están
debidamente lavadas y esterilizadas y están aptas para realizar cualquier trabajo dentro del
laboratorio.

RECOMENDACIONES

• Esterilizar y limpiar todos los materiales a usar

• Preferentemente dejar que el medio de cultivo caliente alcance una temperatura entre 55 y
65 ° C, para luego echar los 20 mL de este en la placa petri, porque si lo echamos muy caliente
podemos matar los microorganismos presentes en la muestra analizada.
• Dejar que alcance la temperatura ambiente la placa petri con el inoculo y el medio en su
interior, además si se formase vapor en la tapa de la placa petri, lo mejor es cambiar esa tapa
por otra nueva.
• Se recomienda realizar los procesos de higienización como son una correcta limpieza de
todas las superficies donde se llevarán a cabo procesos de producción de alimentos así
también la correcta desinfección de ambientes en el cual se podrían utilizar aspersores con
algún tipo de desinfectante para este fin sin afectar directamente a los alimentos o a la
materia prima que allí se encuentre.

BIBLIOGRAFIA

• Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. CDC/NIH. U.S. Department of

Health and Human Services, Public Health Service (4ª ed.). Washington; 1999.
• http://www.cienytech.com/catalogos/Microbiologia/Controlsup.pdf
• http://sanipes.gob.pe/normativas/8_RM_461_2007_SUPERFICIES.pdf
• http://es.slideshare.net/tigerland/control-superficies-29

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CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son los microorganismos patógenos que se encuentran en las manos de los
manipuladores de alimentos?

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2. ¿Cuáles son los LMP de los microorganismos que se encuentran presentes en las
manos de los manipuladores de alimentos en EEUU y la Comunidad Europea?

LMP EN EEUU:

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LMP EN EUROPA:

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