PRÁCTICA #6 ACCIÓN ENZIMÁTICA

Sergio Anaya Toledo, Edis Díaz Badel, Cristian Hoyos de Hoyos, José Mórelo
Presentado a: M.sc Carolina Arango Rivas

Universidad de Córdoba
Facultad de ciencias básicas
Departamento de química
2015

RESUMEN

Las enzimas son moléculas que ayudan a catalizar las reacciones químicas que se dan en el
organismo de un ser humano. En la práctica anterior se observaron los diferentes
mecanismos de acción de la amilasa sobre el almidón, la renina en la caseína, y la catalasa
sobre el peróxido de hidrógeno. Además, se utilizaron los reactivos de Lugol y Benedict
para confirmar la actividad de la enzima.

Palabras claves: enzima, acción enzimática, renina, peróxido de hidrógeno.

ABSTRACT

Enzymes are molecules that help catalyze chemical reactions that occur in the body of a
human being. Previous practice was observed the different mechanisms of action of
amylase on starch, casein renin, and catalase for hydrogen peroxide. Furthermore we used
iodine reagents and Benedict to confirm enzyme activity.

Keywords: enzyme, enzyme action, renin, hydrogen peroxide.

productos necesarios para su existencia;

OBJETIVOS
 Observar la actividad enzimática
sobre los diferentes sustratos.
 Analizar los factores que afectan
la acción de las enzimas.
INTRODUCCION
Para su funcionamiento, todos los seres
humanos necesitan de algunas moléculas
que ayuden a facilitar la formación de
estas son las enzimas. Dentro de sus
funciones está la de modificar la energía
necesaria para que se den reacciones
químicas a nivel celular. Su aplicación a
llevado a la formación de grandes
industrias como la del queso, vino y
cerveza.
MARCO TEORICO
Las enzimas son generalmente proteínas
globulares que pueden presentar tamaños
muy variables, desde 62 aminoácidos
como en el caso del monómero de la 4-
oxalocrotonato tautomerasa, hasta los 2
500 presentes en la sintasa de ácidos
grasos. Las actividades de las enzimas
vienen determinadas por su estructura
tridimensional, la cual viene a su vez
determinada por la secuencia de
aminoácidos.
Sin embargo, aunque la estructura
determina la función, predecir una nueva
actividad enzimática basándose
únicamente en la estructura de una
proteína es muy difícil, y un problema
aún no resuelto.
Casi todas las enzimas son mucho más
grandes que los sustratos sobre los que
actúan, y solo una pequeña parte de la
enzima (alrededor de 3 a 4 aminoácidos)
está directamente involucrada en la
catálisis. La región que contiene estos
residuos encargados de catalizar la
reacción es denominada centro activo.
Las enzimas también pueden contener
sitios con la capacidad de unir cofactores,
necesarios a veces en el proceso de
catálisis, o de unir pequeñas moléculas,
como los sustratos o productos (directos o
indirectos) de la reacción catalizada. Estas
uniones de la enzima con sus propios
sustratos o productos pueden incrementar
o disminuir la actividad enzimática,
dando lugar así a una regulación por
retroalimentación positiva o negativa,
según el caso.
Las enzimas suelen ser muy específicas
tanto del tipo de reacción que catalizan
como del sustrato involucrado en la
reacción. La forma, la carga y las
características hidrofílicas, hidrofóbicas
de las enzimas y los sustratos son los
responsables de dicha especificidad.
Las enzimas también pueden mostrar un
elevado grado de estéreo-especificidad,
regio-selectividad y quimio-selectividad.
Algunas de estas enzimas que muestran
una elevada especificidad y precisión en
su actividad son aquellas involucrados en
la replicación y expresión del genoma.
Estas enzimas tienen eficientes sistemas
de comprobación y corrección de errores,
como en el caso de la ADN polimerasa,
que cataliza una reacción de replicación
en un primer paso, para comprobar
posteriormente si el producto obtenido es
el correcto.
selección de los aminoacil-tRNAs.
Aquellas enzimas que producen
metabolitos secundarios son denominadas
promiscuas, ya que pueden actuar sobre
una gran variedad de sustratos. Por ello,
se ha sugerido que esta amplia
especificidad de sustrato podría ser clave
en la evolución y diseño de nuevas rutas
biosintéticas.
MATERIALES Y METODOLOGIA
Se utilizaron tubos de ensayo, goteros,
una gradilla, papa, leche y saliva.
Reactivos: Lugol, Benedict, HCl, H2O2 ,
almidón.
PROCEDIMIENTO 1: ACCION DE LA PROCEDIMIENTO 2: ACCIÓN
AMILASA SOBRE EL ALMIDON ENZIMÁTICA DE LA RENINA SOBRE
CASEÍNA
Se rotuló dos
tubos de ensayo
como A Y B. Se toman 2 tubos de
ensayo (1 y 2) y se
agregan 5mL de
leche a cada uno
Se agregó a un
tubo A 1ml saliva
y tubo B 3ml de
saliva (se calentó
hasta ebullición).

Al tubo 2 se agregan
2 gotas de HCl 10%
Se rotuló 4 tubos
de ensayo, y se
le adicionó 4ml
de almidón 1%.

Se agregan 10 gotas
Se extrajo de una solución de
muestra del tubo
A y se le agregó renina a los 2 tubos
2 gotas al tubo 1, luego se observan
10 gotas al tubo los resultados
2.

Se extrajo
muestra del tubo
B y agregó 3
gotas al 3 y 10
gotas al tubo 4.

Luego de 5min,
se hizo la pruba
conl lugol y
benedict.

Se anotó cada
resultado.
 PROCEDIMIENTO 3: ACCION DE
LA CATALASA
En un tubo se corta un
trozo de papa y se le
agregan 3 gotas de H2O2
y se observan resultados
En otro tubo se corta un
trozo de papa parecido al
anterior, se le agregan 3
gotas de HCl y 3 gotas de
H2O2. Se observan
resultados
En el tercer tubo se
coloca un trozo de papa
parecido a los anteriores
pero cocida y se le
agregan 3 gotas de H2O2.
Se observan resultados
RESULTADOS Y ANALISIS
Procedimiento No. 1
Tubos T1 T2 T3 T4
Lugol - + - +
Benedict - - - -
(-) prueba negativa y (+) prueba positiva
Como ya sabemos la amilasa es un
enzima hidrolasa que tiene la función de
digerir el glucógeno y el almidón para
formar azúcares simples, se produce
principalmente en las glándulas salivares.
Se analizó que la prueba con lugol la cual
resulto ser negativa debido a que la
amilasa entro en contacto con el almidón
desdoblándolo en unidades de
monosacáridos llamados glucosa.
A mayor concentración de la enzima
mayor aumento en la velocidad
enzimática hacia cierto límite por eso en
el tubo 1 la reacción con el reactivo de
Benedict dio negativa debido a que no se
formó un precipitado rojo ladrillo lo que
indica que no hay la presencia de
azúcares como la glucosa y la maltosa
pues había muy poca concentración de
amilasa en la muestra
En el tubo numero 2 nos tenia que haber
dado la prueba positiva, porque había
mayor concentración, pero esta nos dio
negativa, debido a que se cometio algún
error en la prueba, ya sea por el mal
manejo del reactivo de benedict, por la
condiciones del laboratorio, etc.
En los tubos número 3 y 4 la prueba con
el reactivo de benedict nos dios negativa.
El calor es un factor que desnaturaliza las
proteínas por lo tanto si la temperatura se
eleva demasiada, la enzima pierde su
actividad.
La enzima fue calentada esta perdió su
actividad enzimática, ya que al ser
hervida esta se desnaturalizo por lo cual
no puede actuar sobre el almidón para
hidrolizarlo y por eso se presenta el color
morado, lo que sucede es que la α-
amilosa del almidón se disuelve en agua y
de esta manera adquiere una estructura
secundaria característica de forma
helicoidal, en la que cada vuelta de hélice
comprende seis unidades glucosa y los
grupos hidroxilo quedan hacia afuera,
esta estructura secundaria es la que
permite que el yodo penetre en el interior
del helicoide y esto a la ves es lo que le
da el color morado a la solución, lo cual
permite la identificación del almidón, lo
que quiere decir que la enzima no
degrado el almidón por lo tanto está
inactiva, dado que ha ebullido esta prueba
no puede ser reversible, la amilasa se ha - ¿En qué tubo se demuestra la
desnaturalizado, pierde sus estructuras actividad de la enzima de la
iniciales y pierde sus propiedades como saliva? ¿Cómo lo has demostrado?
catalizador. Por eso las pruebas con el
En el tubo número 2 se demuestra la
reactivo de Benedict dan negativas pues
actividad de la enzima de la saliva, la cual
no hay presencia de azucares simples en
las muestras. se ha demostrado mediante la prueba de
benedict, donde la amilasa digiere el
almidón para formar azucares más
simples como la glucosa, estas son tan
pequeñas que pueden atravesar las células
que forman la pared intestinal, para
después llegar a la sangre, de aquí se
parte para demostrar la actividad de la
enzima de la saliva, ya que al formar
azucares simples como la glucosa, el cual
es un azúcar reductor que se puede
determinar por la prueba de benedict.

- ¿En qué tubo se ha inactivado la

enzima? ¿Por qué no ha actuado?

Se inactivó la enzima en el tubo 3 debido

a que en esta parte la saliva se calentó a
ebullición directamente, donde la
temperatura actúo sobre la enzima
desnaturalizando la misma.
Procedimiento No. 2

N° de tubos Descripción
1 No se observan
Leche + Renina cambios inmediatos,
después de un tiempo
se observa una
pequeña cantidad de
precipitado.
2 Se observa un
Leche + Renina + precipitado de
HCl manera muy rápida.

¿Cuál es la función del HCl en esta

Análisis reacción?
La renina es una enzima que se encarga La función del HCl en esta reacción es
de precipitar a la caseína, una proteína acelerar el proceso de coagulación por
presente en la leche, para formar un parte de la enzima de renina.
precipitado llamado paracaseína. Este
proceso no es instantáneo, razón por la
cual no se observó un inminente cambio
en el tubo número 1.

Cuando la renina precipita a la caseína en

medio acido, el proceso se acelera Procedimiento No. 3
notablemente porque se favorece la
acción enzimática. Por eso se observó una N° de tubos Descripción
1 Formación de
precipitación mucha más rápida en el burbujas.
tubo número 2, al cual se le agrego ácido 2 No hubo formación
clorhídrico. de burbujas.
3 No hubo formación
de burbujas.

Análisis

En el primer tubo, como era de esperarse,

se observa un burbujeo, lo que indica que
la enzima catalasa, presente en la papa
actuó normalmente descomponiendo el
peróxido de hidrogeno.
En el segundo tubo no se observó
burbujeo. Esto se debe a que la acción de
la catalasa fue desactivada por efecto del
gran aumento en la temperatura.
En el tercer tubo tampoco se observaron
burbujas. Esta vez, la acción enzimática
fue desactivada por una disminución del
ph, es decir, la enzima se encontraba en
medio ácido y en este medio no pudo
actuar.
- ¿Cuál es el efecto del HCl sobre la
catalasa?
En este caso el HCl afecta al pH de la
solución, donde este a su vez puede
alterar la forma de la molécula de enzima,
dificultando, o incluso impidiendo su
unión con el substrato sobre el que actúa.
Como afecta a la enzima es tipico de cada
una de ellas en este caso afecta a la
catalasa de forma inhibidora de la acción
enzimática.
- Al cocinar los alimentos
demasiado ¿Cómo influye en la
actividad de las enzima?
Al cocinar los alimetos demasiado se está
aplicando un exeso de temperatura lo que
causa una alteracion de la estructura de la
enzima (un cambio en la molecula de
proteina que es la enzima) y cuando se
alcanza un cierto valor la enzima empieza
a dejar de funcionar, incluso puede
desnaturalizarse, es decir, alterarse de
modo irreversible y no volver a funcionar.
- Cuando el H2O2 es agregado a
heridas produce burbujas ¿Qué
indica esto?
El peróxido de hidrógeno es un
compuesto que se descompone fácilmente
en agua y en oxigeno (H2O y O). Cuando
el oxígeno se libera, se encuentra en
forma de radicales libre de oxígeno. Eso
significa que los átomos de oxígeno
tienen una carga negativa. Esto es
altamente reactivo, y se produce una
reacción química llamada oxidación. Este
proceso se refiere cuando los radicales de
oxígeno se combinan con otras sustancias
para romper las moléculas. Mientras esto
sucede, el oxígeno se libera. Esto produce
la reacción de la espuma o de las
burbujas. El peróxido de hidrógeno mata
las bacterias por oxidación, haciendo que
las bacterias se descompongan y se
convierten en inofensivas. La oxidación
hace que las moléculas de proteína se
rompan y se desnaturalicen de modo que
ya no puedan funcionar.
CUESTIONARIO
1. Qué cambios puede sufrir, en
relación a la estructura química y el
número inicial de moléculas, el sustrato y
la enzima en una reacción química?
R/ los cambios que sufren los sustratos
pueden ser: reducidos u oxidados, se les
puede transferir grupos funcionales,
romper varios enlaces e introduciendo
radicales -H y –OH o bien adicionan
grupos funcionales a los dobles enlaces,
también convierten los sustratos isómeros
unos en otros, entre varían mas. El
sustrato tiende a disminuir su
concentración, ya que es modificado por
la enzima. La enzima suele permanecer
constante ya que solo actúa como
catalizador de la reacción.
2. Si usted hace reaccionar la amilasa
con el almidón y espera hasta que termine
la reacción. ¿Cómo comprobaría que la
enzima no ha sufrido alteración catalítica?
R/ utilizando un método consiste en
analizar como varía la velocidad de las
reacciones catalizadas enzimáticamente
en función de algunos parámetros
experimentales como la concentración del
sustrato o la del propio enzima.
3. Relacione los siguientes conceptos
en un párrafo de no más de diez
renglones: enzima alostérica, interacción
alostérica y efector alostérico.
R/ Los enzimas alostéricos son enzimas
que cambian su conformación al unirse
un efector, lo que conduce a un cambio
aparente en la afinidad de unión de otro
ligando en un sitio distinto de la
molécula. La interacción alostérica
consiste en el cambio estructural de una
proteína, es decir, sus receptores
cambiaran. Efector alostérico es molécula
que se une a un lugar distinto del centro
activo, modificando la función de la
proteína a la cual está unido.
4. Cite cinco ejemplos de enzimas
con sus sustratos respectivos.
R/ 1. Maltasa – maltosa (sustrato)
2. Amilasa – almidón
3. Lipasas – Ac. Grasos
4. catalasa – en agua
5. Sacarasa – sacarosa
CONCLUSIÓN
Tras haber realizado todas las pruebas
pertinentes con cada una de las enzimas
se puede decir de manera general que el
papel que cumplen estas moléculas en
todos los seres vivos es de suma
importancia y si ellas no sería posible la
supervivencia en la gran mayoría de los
casos.
El poder de las enzimas se ve afectado
por distintos factores fisicoquímicos
como la temperatura o el pH del medio,
así como, la presencia de otras sustancias
químicas. Estos factores tienen efectos
tan importantes que pueden acelerar las
reacciones notablemente o pueden
inhibirlas por completo, por ejemplo, al
agregar ácido clorhídrico a la leche y la
renina se pudo observar como la reacción
se aceleró notablemente.
BIBLIOGRAFÍA
•Avers j Charlotte. Biología celular 1º.
Edic. México, Iberoamericana. 1989
•CURTIS, helena BARNES, n. sur. Edic.
Al. Biología. México: 2000. 1490p.