DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS POR CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA

RESOLUCION (HPLC)
Diaz Brigitte, Rivera Arantxa
4-781-183, 4-778-1566
Curso de Química Analítica (QM 228), Escuela de Química, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad Autónoma de
Chiriquí. David, Chiriquí, República de Panamá

Resumen:
El objetivo de esta experiencia fue entender el fundamento de la cromatografia liquida y determinar el
contenido de carbohidratos en muestras de mieles. Para la realización de la experiencia pesamos 0.1522
g de miel la disolvimos en agua grado HPLC y se aforo en un volumétrico de 100 ml, se filtró la dilución
con un filtro de jeringa de 0.22µm, luego se colocó el filtrado en un vial HPLC y se colocarla en el baño
ultrasónico durante 20 minutos, para la inyección de la muestra se lavó la jeringuilla con agua grado
HPLC, tres veces con la muestra y se inyectó 30 ml, obteniéndose en la muestra 2 un área de
242679.0313 e 273853.5938 y un tiempo de 15.256 e 16.280 en la muestra 4 el área fue de 281361.4688
e 378316.0625 y el tiempo de 15.255 e 16.277. Aprendimos el manejo de un equipo HPLC.
Palabras claves: área, tiempo, carbohidratos, HPLC, baño ultrasónico.
Objetivos: Según Skoog, 2008, los componentes básicos
de un cromatógrafo líquido de alta resolución
 Entender el fundamento de la son:
cromatografía líquida.
 Aprender el manejo de un equipo HPLC. Recipientes para la fase móvil: Un aparato
 Determinar el contenido de moderno de HPLC se equipa con uno o más
carbohidratos en muestras de mieles recipientes de vidrio o de acero inoxidable, cada
nacionales. uno de los cuales contiene unos 500 mL de un
disolvente. Los recipientes a menudo se equipan
Marco teórico: con un sistema para eliminar los gases disueltos
La cromatografía es una técnica de separación –en general oxígeno y nitrógeno- que interfieren
que se basa en el reparto entre dos fases. La formando burbujas en los sistemas de
separación se logra en base a la diferencia de detección.
velocidad de movilidad de los analitos entre una Sistemas de bombeo: Los requisitos para un
fase inmóvil denominada fase estacionaria y una sistema de bombeo en HPLC son rigurosos e
fase móvil o eluyente (Rubinson, 2008). incluyen: la generación de presiones por encima
En la HPLC la fase estacionaria esta de 400 kg/cm2, un flujo libre de pulsaciones, un
empaquetada dentro de una columna que está intervalo de caudales de 0.1 a 10 mL/min, el
conectada a un sistema continúo de flujo de la control y reproducibilidad del caudal mejor del
fase móvil (que no utiliza la gravedad, sino un 0,5% relativo y componentes resistentes a la
dispositivo para la introducción de la fase móvil), corrosión (juntas de acero inoxidable o teflón).
y a un sensor electrónico al final de la columna Sistemas de inyección de muestra: A
que detecta el o los analitos. Todo está menudo, el factor limitante en la precisión de las
incorporado en una sola unidad (instrumento) medidas en cromatografía de líquidos es la
usado para aplicaciones repetidas (Gary, 2009). reproducibilidad con que se puede introducir la
muestra en la columna. El problema se agrava
por el ensanchamiento de banda que acompaña
a la sobrecarga de las columnas. Homogenizar la muestra de miel, pesar 0.15
g.
Precolumnas: En muchas ocasiones, para
aumentar la vida de la columna analítica, se Diluir en 10 ml de H2O grado HPLC y aforar en un
coloca delante una precolumna que elimina la volumétrio de 100 ml
materia en suspensión y los contaminantes de
los disolventes. Además, en cromatografía
líquido-líquido, la precolumnas sirve para saturar
la fase móvil con la fase estacionaria y así filtrar 2 ml de la dilucion con un filtro de jeringa
minimizar las pérdidas de ésta en la columna 0.22µm
analítica.
colocar el filtrado en un vial HPLC, El vial que
Columnas: se construyen de ordinario con tubo contiene la muestra diluida y filtrada colocarla
de acero inoxidable de diámetro interno en el baño ultrasónico durante 20 minutos
uniforme. Cientos de columnas empaquetadas
que difieren en tamaño y relleno se
B. Inyección de muestra en HPLC.
comercializan por distintos fabricantes.
Detector: Los detectores en cromatografia de
líquidos son de dos tipos básicos. Los Lavar la jeringa de vidrio con agua grado HPLC.
detectores basados en una propiedad de la
disolución responden a una propiedad de la fase luego con la muestra tres veces
móvil, tal como el índice de refracción, la
constante dieléctrica, o la densidad, que se
modifica por la presencia de los analitos.
Registrador: registra la señal generada por el cargar 30 ml de la muestra con la jeringa de vidrio
detector y la presenta por medio de un en el inyector manual
Cromatograma.
Materiales y reactivos: luego mover a la posición inject

Material Capacidad Cantidad Resultados

Cromatógrafo ---------- 1
liquido Tabla 1. Muestra de miel 2.
Baño --------- 1 Numero Área Tiempo
ultrasónico
Baso químico 100 ml 3 1 242679.0313 15.256
volumétrico 100 ml 2 2 273853.5938 16.280
Filtro de jeringa 0,22 , 0.45µm 4
Agua grado --------- 450 ml
HPLC Tabla 2. Muestra de miel 4.
Miel --------- 4g
Numero Área Tiempo
1 281361.4688 15.255
Fase experimental:
2 378316.0625 16.277
A. Diluciones de las muestras de miel y
preparación para analizar en el HPLC.
Discusión:
Conclusión:
Bibliografía:
 Harvey, P. 2009. Química analítica
moderna, sexta edición. Editorial
McGraw-Hill, México.
 Gary D., C. (2009). Química analítica,
sexta edición. Editorial McGraw-Hill,
México.
 Skoog, A. D.; West M. D.; Holler F. J.
(2008). Química analítica, sexta edición.
Editorial McGraw-Hill, México.
 Rubinson, K; Rubinson, J. (2008).
Química analítica contemporánea.
Editorial Pearson Education, México.
 Harris, D.C. (2008). Análisis químico
cualitativo. Editorial Pearson, México.
 Borfitz, V. (2009). Química analítica
descriptiva. Séptimas edición. Editorial
McGraw-Hill, España