DETERMINACION DEL TAMAÑO DE

PARTICULA DE LOS INSOLUBLES EN EL

AZUCAR
OBJETIVO
Realizar una descripción del proceso que se lleva a cabo en Incauca para la determinación de la
distribución de tamaño de partícula de los insolubles en el azúcar con el fin de estandarizar el
método propuesto, asegurar la repetitividad del mismo y analizar los rangos entre los cuales se
encuentra la mayoría de estas partículas insolubles.

DESCRIPCION GENERAL
La muestra de azúcar se filtra a través de una membrana de éster de celulosa de 0.45 µm de poro
y 47mm de diámetro para posteriormente analizar el residual que queda en el filtro con ayuda de
un microscopio. El microscopio usado es L3000 Biological Microscope y la cámara CANON EOS
Rebel T3i. Se usa el lente de 10x para la toma de 16 campos para posteriormente analizarlo en el
software de imágenes IMAGE PRO ANALYZER.

EQUIPOS Y MATERIALES
 Calentador Halógeno HB43-S Marca Mettler Toledo
 Línea de vacío proveniente de los tachos de refinería
 Sistema de Filtración: Manifold para tres portafiltros
 Sistema de Filtración (Kitasato y embudo graduado con soporte de membrana de 47mm)
 Filtros de ester de celulosa de 0,45 μm de poro y 47 mm de diámetro, color blanco,
superficie cuadriculada
 Recipiente para almacenar agua destilada previamente filtrada a 0,45 micras
 Pinzas para membrana en acero inoxidable
 Cajas de Petri de vidrio o desechables
 Mangueras de goma o plástico para vacio
 Microscopio L3000 Biological Microscope con cámara integrada CANON EOS Rebel T3i.
 Software IMAGE PRO ANALYZER para análisis de imágenes
 PROCEDIMIENTO

Preparación de la Muestra
Para la preparación de la muestra se usa un medio de filtración al vacío y membranas de 0.45
micras de poro y 47mm de diámetro para retener todas las partículas insolubles en la solución
preparada.

A partir de 100 g de azúcar se prepara un jarabe a 61.7 °Brix . Se debe usar para esto agua
destilada filtrada previamente a través de una membrana de 0,45 micras. Para disolver los
cristales de azúcar, se recomienda calentamiento lento ó en baño Maria, lo importante es lograr
la disolución completa del azúcar.

Se procede a realizar la filtración al vacío colocando la membrana con el lado que contiene la
cuadrícula hacia arriba para que haya una clara identificación de los bordes de la cuadricula a la
hora de analizar el filtro en el microscopio y evitar errores en la medición. Posterioremente, se
enjuaga la membrana con abundante agua destilada con el fin de eliminar trazas de material
azucarado que hayan quedado retenidas en la membrana. Luego se remueve la membrana de la
unidad de filtración y se coloca a secar el filtro durante 4 minutos en un unidad de calentamiento
halógena integrada que permite evaporar la humedad contenida en el filtro dejando
completamente seca la muestra para poderla analizarla en el microscopio. Finalmente se guarda
el filtro en una caja petri para su posterior caracterización.

TOMA DE IMÁGENES
Para la toma de imágenes es importante que se distingan muy bien las partículas insolubles del
fondo de la imagen. Preferiblemente las imágenes deben tomarse a blanco y negro (monocromo)
para una mayor facilidad a la hora de realizar el análisis, logrando disminuir la brecha de colores
cuando se tenga que escoger de manera manual los objetos de interés. También debe tenerse en
cuenta a la hora de tomar las imágenes, excluir los puntos o bordes de las cuadriculas de los
filtros, puesto que estas al ser oscuras se pueden incluir en el conteo de manera errónea

Se ubica la membrana en el microscopio sujetándose con

portaobjetos (arriba y abajo) para evitar que la membrana se
doble. Se enfoca con el lente objetivo de 10x para una mayor
visibilidad de los objetos que se quieren analizar. Las fotografías se
toman aleatoriamente a lo largo de la superficie de la membrana
para un total de 16 campos con el fin de obtener buena
representación de la distribución existente en el filtro.

ANALISIS DE LAS PARTICULAS EN EL MICROSCOPIO

Para el conteo se deben seleccionar manualmente los colores que correspondan a los insolubles en
las imágenes (puntos negros) para que el software de imágenes descarte los otros puntos que no
debe tener en cuenta a la hora de realizar este. Tener cuidado al rellenar todas las partículas de
interés, ya que se pueden estar rellenado otro puntos en la imagen que no correspondan a
partículas insolubles y pueden afectar el resultado. (La mayoría de veces sucede esto, pero dichos
puntos no se pueden identificar plenamente por sus dimensiones, por tanto se recomienda realizar
el análisis a partir de 1 o 2 micras de longitud).

Para el conteo, se procede a cargar las imágenes en el software IMAGE PRO ANALYZER y
unirlas para analizarlas todas en conjunto, pues todas representan un mismo filtro. Luego se
señalan las medidas de nuestro interés (Largo) y los rangos en micras que queremos evaluar (1-
100µm). Se desea abarcar el rango de 0 a 100 micras, sin embargo, las mediciones deberían
tomarse a partir de 1 o 2 micras debido a errores inherentes en el software que toma muchas veces
puntos que no son insolubles y que están en el rango de 0 a 2 micras aproximadamente Se realiza
el conteo de las partículas que hemos señalado previamente y finalmente se analizan los
resultados obtenidos.

Para el análisis se subdivide el rango de 1 a 100 micras en rangos menores, iniciando (1µm, 10 µm,
20 µm, 50 µm, 100 µm) para analizar los porcentajes de partículas que se encuentran en cada uno
de estos, en especial de 1 µm a 10 µm. Realizar en Excel una tabla donde se especifique para cada
muestra (conjunto de fotografías analizadas) la cantidad de partículas existentes, el promedio de
las longitudes de las partículas, tamaños máximos y mínimos y los porcentajes de partículas que
se encuentran en cada uno de los rangos establecidos. (Anexo 1)
Anexo 1. Formato para reportar resultados

FECHA

LOTE/TEMPLA:

Intervalos (µm) Cantidad de Objetos % Objetos

1-10
10-20
20-50
50-100
TOTAL

Tamaño Minino
Tamaño Máximo
Promedio
Desviación Estándar