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I. INTRODUCCION
Las proteínas forman con el agua soluciones coloidales por su gran tamaño, formándose
coágulos al ser calentados a temperaturas superiores a 70°C al ser tratadas con
soluciones salinas, ácidos, alcohol entre otras.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan
por la destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria Entre las reacciones
coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por lo tanto para su identificación,
descarta la reacción de biuret.
Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se
debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los
aminoácidos.
El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) en medio alcalino y el cobre en un medio
fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de
color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas
II. OBJETIVO
Determinar proteínas de harina de frijol panamito por el método Biuret.
ESPECTOFOTÓMETRO AGITADORES
TUBO
CENTRIFUGA PIPETAS
4.2 REACTIVOS
NaCl 0,15 M
NaOH
Sulfato de Cobre
Reactivo de Biuret
Albúmina de suero Bovina
V. PREPARACION DE MUESTRAS
-Tomar 50 gr de frijol y moler hasta una granulometría 60 mesh. Reservar una
porción para proteína por el método de Lowry 1/20
Universidad Privada de Tacna
Escuela de ing, Agroindustrial
Laboratorio de análisis agroindustrial
PROCEDIMIENTO DEL MÉTODO DE BIURET.
A partir del extracto salino obtenido, se forma alícuotas de 0,1 ml (muestra) y 0,2 ml
(muestra 2). Seguidamente completar a 1,0 ml con agua destilada, adicionar 4,0 ml del
reactivo de biuret y realizar la lectura después de 30 min a 540 nm.
Del mismo modo se preparan una curva padrón a partir del suero de albúmina bovina
en la concentración de 0,1 g/10 ml.
1. Solución Padrón de Albúmina Bovina.
Pesar 1000 mg de suero albúmina bovina y 0,1 ml de NaOH 1N
Disolver con agua destilada y completar para 100 ml (sin mucha agitación)
Esta concentración equivale a 0,1 g/10 ml ó 1,0 g/100 ml
2. Preparación del reactivo de Biuret
SOLUCION A
Pesar 1,5 g de Sulfato de Cobre (CuSo4.5H2O)
6,0 g de tartrato de sodio y potasio
500 ml de agua destilada
SOLUCION B
300 ml de NaOH al 10% (30 gr NaOH/300ml de agua destilada
Agregar 1,0 g Kl
MEZCLA
Mezclar ambas soluciones
Completar para un litro en balón volumétrico
V. CALCULOS Y RESULTADOS
10g / 100 mL
78 mL
0,2 mL = A = 0.210
APLICANDO:
1. Ecuación de la recta
Utilizando el método de la recta en ajuste de curvas o por regresión lineal, donde se
introdujeron todos los datos se obtuvo el siguiente porcentaje:
Y = a + bx
x = 7,648 mg
7,648 mg 0,2 mL
X 78mL
X = 0.78 mg 78 mL
X 100 mL
X = 1,248g 10 g
X 100 g
X = 12,48% de proteína
VI. DISCUSION
VII. CONCLUSIONES