Compuestos poliméricos basados en silicio-ciclodextrina porosa para aplicaciones de

administración de fármacos

Resumen

Una de las principales aplicaciones del silicio poroso (PSi) en la biomedicina es la liberación del fármaco, ya sea como un solo material
o como parte de un compuesto. Los compuestos de PSi son candidatos atractivos para los sistemas de suministro de fármacos porque
pueden mostrar nuevas características químicas y físicas, que no son exhibidas por los componentes individuales por sí solos. Dado que
los polímeros basados en ciclodextrina han demostrado ser materiales eficientes para la administración de fármacos, en este trabajo se
usó la polimerización in situ de b-ciclodextrina-ácido cítrico para funcionalizar dos tipos de PSi (nanoporoso y macroporoso). Los
compuestos sintetizados se caracterizaron por técnicas de microscopía (SEM y AFM), métodos fisicoquímicos (ATR-FTIR, XPS,
ángulo de contacto con el agua, titulación TGA y TBO) y se realizó un ensayo biológico preliminar. Ambos sistemas se probaron como
plataformas de administración de fármacos con dos fármacos modelo diferentes, a saber, ciprofloxacina (un antibiótico) y prednisolona
(un antiinflamatorio), en dos medios diferentes: agua pura y solución de PBS. Los resultados muestran que ambos tipos de compuestos
de polímero de ciclodextrina PSi / b-ácido cítrico, nano y macro, proporcionan control de liberación mejorado para aplicaciones de
suministro de fármacos que las muestras de PSi no funcionalizadas.

1. Introducción

El silicio poroso (PSi) es un biomaterial excelente debido a su gran área superficial (Bisi, Ossicini y Pavesi, 2000), la biocompatibilidad
(Martin-Palma, Manso-Silvan y Torres-Costa, 2010), la biodegradabilidad (Tanaka et al. , 2010) y bioresorbilidad (Hernández
Montelongo, Muñoz-Noval, Torres Costa, Martín-Palma y Manso Silvan, 2012). En vista de estas propiedades, se han desarrollado
diferentes bioaplicaciones PSi tales como: biosensores (Dhanekar y Jain, 2013a), ingeniería de tejidos (Coffer et al., 2005), imágenes de
tumores (Martin-Palma et al., 2010), plataforma de biorreactores (Stewart y Buriak, 2000) y entrega de medicamentos (Anglin, Cheng,
Freeman, & Sailor, 2008). Cuando se usa PSi como un sistema de administración de fármacos, los fármacos se cargan en su matriz
porosa o se inmovilizan en su superficie después de una derivación de superficie adecuada (Stewart y Buriak, 2000). Sin embargo,
cuando se combina con biopolímeros, funciona como sustrato para materiales compuestos, proporcionando nuevas características
químicas y físicas ventajosas, que no son exhibidas por los constituyentes individuales, como un mejor control sobre la cinética de
liberación del fármaco y estabilidad mejorada en solución acuosa (Anglin et al. al., 2008). De hecho, PSi se ha combinado previamente
con biopolímeros como polilactida, polidimetilsiloxano, polietileno, poliestireno, policaprolactona y poli (isopropilacrilamida) para ese
fin (Anglin et al., 2008; Mukherjee et al., 2006; Segal et al., 2007; ) Aquí, nos centramos en la funcionalización de PSi por -
cyclodextrin (CD). Las ciclodextrinas (CD) son oligosacáridos cíclicos con una superficie externa hidrófila (grupos C-OH) y una
cavidad apolar hidrófila (enlaces C-O-C y C-H) (Davis y Brewster, 2004) (figura 1). Debido a su cavidad característica y su capacidad
para formar complejos reversibles con medicamentos, los CD se han utilizado como portadores de entrega eficientes (Leprêtre et al.,
2009). Los CD también se han reticulado, produciendo una red polimérica tridimensional adecuada para aplicaciones de administración
de fármacos. Dicha estructura de volumen presenta interacciones prolongadas con fármacos, prolonga el tiempo de residencia en el
medio y / o aumenta la eficiencia y la especificidad hacia sitios específicos (Trotta, Zanetti y Cavalli, 2012). Algunos ejemplos de
reticulantes usados para polimerizar CD son alginato (Izawa et al., 2013), poli (óxido de etileno) (Liu et al., 2011; Li, Ni y Leong,
2003), camptotecina (Davis, 2009), epiclorhidrina (Davis y Brewster, 2004) y ácido cítrico (Martin et al., 2013), que es el que se usa
aquí, entre otros. Además, los polímeros basados en CD se han utilizado para funcionalizar diferentes biomateriales para aplicaciones
de liberación de fármacos, tales como prótesis vasculares (Blanchemain et al., 2012), polipropileno (Degoutin et al., 2012), placas
inguinales de poliamida (El Ghoul et al., 2008), hidroxiapatita (Leprêtre et al., 2009) y prótesis de cadera (Taha et al., 2013).

Todas estas características hacen que los CD sean interesantes para combinarse con PSi para otras aplicaciones de administración de
fármacos. En este trabajo, se investigó la funcionalización de PSi nanoporoso y macroporoso (nPSi y mPSi, respectivamente) mediante
polimerización in situ de ácido cítrico CD (CTR). Para probar su viabilidad como sistemas de administración de fármacos
(Thrimawithana, Young, Bunt, Green y Alany, 2011), estos compuestos se han cargado con dos fármacos modelo: ciprofloxacina (CFX,
un antibiótico) (Oliver, Strube, Mohan, y Slomovic, 2005; Ravindran et al., 2009) y prednisolona (PDN, un antiinflamatorio) (Lane &
Holland, 2012; Struck & Bariszlovich, 2001), en dos medios: agua pura y solución de PBS.

2. Materiales y métodos
2.1. Preparación de silicona porosa
2.1.1. Silicio nanoporoso

Silicio nanoporoso (nPSi) fue fabricado por grabado electroquímico de obleas de silicio tipo p + (boro dopado, orientación 1 0 0,
resistividad 0.01-0.02 cm) en una solución de HF: EtOH (1: 2), HF a 48% en peso . Se aplicó una densidad de corriente de 60 mA cm-2
durante 90 s bajo iluminación con una lámpara halógena de 150 W (Hernández-Montelongo et al., 2012). Posteriormente, nPSi se oxidó
químicamente (nPSi-COx) por H2O2 (30%, v / v) durante 2 h (Naveas et al., 2012), se enjuagó con EtOH y se secó con un flujo de
nitrógeno. Se calculó una porosidad del 60% para estas muestras mediante análisis gravimétrico.
2.1.2. Silicio macroporoso

El silicio macroporoso (mPSi) se fabricó mediante grabado electroquímico de obleas de silicio de tipo p + (boro dopado, orientación 1 0
0, resistividad 29-31 cm) en una solución de HF: DMF (1: 6), HF a 48 % en peso (Föll, Christophersen, Carstensen y Hasse, 2002). En
este caso, la densidad de corriente aplicada fue de 20 mA cm-2 durante 600 s bajo iluminación con la misma lámpara halógena de 150
W. Las muestras de mPSi también se oxidaron químicamente (mPSi-COx) por H2O2 (30%, v / v) durante 2 h, enjuagar con EtOH y
secar con nitrógeno. En estas muestras, se determinó una porosidad del 40% mediante análisis gravimétrico.

La superficie PSi preparada (fresca) está compuesta principalmente por enlaces Si-H (Bisi et al., 2000; Mawhinney, Glass, y Yates,
1997; Tolstoy, Chernyshova, y Skryshevsky, 2003). El post-tratamiento químico de PSi por H2O2 es un proceso de oxidación que
implica diferentes reacciones; Los enlaces Si-H pueden transformarse en Si-OH, Si-O-Si u OySi-Hx. El proceso de oxidación está
representado por Eq. (1) (Dhanekar y Jain, 2013b; Naveas et al., 2012):

2.2. Funcionalización de PSi con ciclodextrina modificada

El método propuesto para funcionalizar ambos tipos de PSi es directo y accesible (figura 2). Se preparó una solución de monómero con
10 g de ciclodextrina (Roquette, Lestrem France), 3 g de NaH2PO2 · H2O (Aldrich, Saint Quentin Fallavier, Francia) como catalizador
y 10 g de ácido cítrico (Aldrich, Saint Quentin Fallavier, Francia) en 100 mL de agua destilada. Las muestras de nPSi-COx y mPSi-
COx se sumergieron en esta solución durante 15 minutos mientras se agitaba. Después, el exceso de solución de monómero se eliminó
cuidadosamente por capilaridad usando un tejido celulósico suave, dejando una película delgada en la parte superior. Las muestras se
secaron, primero a temperatura ambiente, y luego a 90 ◦C durante 1 hora en cada caso.

La polimerización de CD CTR (Martel, Ruffin, Weltrowski, Lekchiri y Morcellet, 2005) en muestras de PSi se llevó a cabo a 140 ◦C
durante 25 minutos, obteniendo de este modo las muestras nPSi-CD y mPSi-CD. Posteriormente, se lavaron con agua destilada durante
15 minutos mientras se agitaban, se enjuagaron con EtOH y se secaron a 90 ° C durante 1 h. La polimerización lograda entre CD y CTR
puede explicarse por un mecanismo de poliesterificación entre grupos hidroxilo de CD y grupos carboxílicos de CTR, que contiene tres
grupos carboxílicos como se detalla en la siguiente ecuación (Ec. (2)) (Martel et al. , 2005). El polímero resultante se denominó
policCTR-CD.

2.3. Caracterización microscópica

Se estudió la morfología de las capas de PSi y polímero utilizando un microscopio electrónico de barrido de emisión de campo
(FESEM; Philips XL-40FEG) y un microscopio electrónico de barrido convencional (SEM; Hitachi S-3000N), operado a 10 keV y 20
keV , respectivamente.

La rugosidad y la topografía de las capas de PSi, antes y después de la funcionalización con policCTR-CD, se evaluaron mediante
microscopía de fuerza atómica (AFM) en el modo de tapping. Se usó un Solver NT-MDT equipado con una cabeza Smena y voladizos
de Si (fuerza constante de 5 N / m, frecuencia de primer armónico de 158 kHz). Para generar imágenes topográficas y calcular la
rugosidad de la muestra, se utilizó el software NT-MDT SPM en áreas de escaneo de 4 um × 4 um, respectivamente. Un filamento (I =
1.9 A, V = 3.2 V) insertado en el sistema de lente magnética actúa como neutralizador para la compensación de carga superficial. Todos
los espectros de nivel de núcleo se cambiaron a una energía de enlace común del componente de hidrocarburo del espectro C1s de 285,0
eV. Los datos se procesaron utilizando el software Vision2 (Kratos, Reino Unido) y CasaXPS v3.15 (Casa Software, Reino Unido).

Con el fin de evaluar la humectabilidad de la superficie de las muestras, se utilizó un sistema de medición del ángulo de contacto con el
agua (KSV CAM-101) en el modo de caída sésil estática. Los datos estadísticos fueron procesados por Statgraphics Centurion XV.

Los análisis termogravimétricos (TGA) se realizaron en un sistema TA-Q50 (TA Instruments) para determinar la cantidad de policCTR-
CD orgánico fijado en las muestras de PSi. Las mediciones se registraron en el rango de temperatura de 30-700 ◦ C con una velocidad
de calentamiento de 10 ◦C / min en una atmósfera de 90% de O2-10% de N2.

Como polyCTR-CD presenta grupos carboxilato libres transportados por los enlaces cruzados de citrato, la densidad del grupo
carboxílico en la superficie PSi (mol COOH / cm2 y mol COOH / mg) se calculó usando titulación de azul de toluidina (TBO)
(Degoutin et al. ., 2012) que se detectó usando un espectrómetro UV-1800 (Shimadzu) a 634 nm. La densidad de los grupos COOH en
los soportes PSi modificados se calculó de acuerdo con un complejo molar-a-mol entre TBO y grupos COOH accesibles.

2.5. Citocompatibilidad

Como primer estudio preliminar de la citocompatibilidad de los materiales compuestos, se seleccionó el cultivo de células epiteliales
humanas (L132). Primero, las células se cultivaron en medio esencial mínimo de Eagle (MEM, ATCC®) con glutamax (Gibco BRL)
suplementado con suero de ternera fetal al 10% (FCS, Gibco); 50 g / ml de gentamicina (Gibco) y 1 g / ml de anfotericina B (Gibco).
Más tarde, las células se incubaron a 37 ° C y 5% de atmósfera de CO2 y 100% de umidity relativa. Las células en la fase de
crecimiento exponencial se sembraron en las muestras y se cultivaron durante 24 h. Para la observación de la adhesión celular y la
morfología celular con microscopía electrónica de barrido (SEM), las muestras se fijaron con glutaraldehído al 2,5% en tampón de
fosfato de sodio 0,1 M (pH 7) y luego se lavaron dos veces en tampón de fosfato de sodio 0,1 M. A partir de entonces, las muestras se
fijaron posteriormente con 1% de tetróxido de osmio (OsO4) en una solución saturada. HgCl2 para obtener la mejor morfología celular.
Después de una deshidratación gradual en etanol, las muestras se secaron en punto crítico con CO2 y se examinaron en un SEM J-SM-
5300 (Jeol), operado a 30 keV.

2.6. Perfiles de liberación de fármaco

Se cargaron muestras con base de ciprofloxacina (CFX, un antibiótico) y prednisolona (PDN, un antiinflamatorio) (ambos en la Fig. 3),
mediante una solución acuosa saturada de cada fármaco (60 mg / ly 200 mg / l, respectivamente) durante 24 h de agitación a 100 rpm.
CFX se obtuvo de Bayer Health Care (Leverkusen, Alemania) y PDN se adquirió de Sigma Aldrich (Saint Quentin Fallavier, Francia).
Las muestras cargadas con fármaco se colocaron en viales llenos con 5 ml de agua destilada o PBS en un agitador horizontal (100 rpm)
(Innova® 40, New Brunswick Scientific, Le Pecq, Francia). En intervalos de tiempo predeterminados, la solución sobrenadante se
renovó por completo y el contenido de fármaco en el fluido a granel retirado se determinó mediante espectrofotometría UV (UV-1800
Shimadzu) (Leprêtre et al., 2009): se detectó CFX a 275 nm y el PDN a 245 nm. Todos los experimentos se realizaron por triplicado y
las muestras no cargadas se usaron como controles en estos experimentos cinéticos.

Para determinar el mecanismo de liberación del fármaco, se ajustó el modelo semiempírico de Korsmeyer-Peppas (Korsmeyer, Gurny,
Doelker, Buri y Peppas, 1983) a los perfiles de liberación:
𝑀
= 𝑘𝑡
𝑀∝
Mt / M∞: liberación fraccionada del fármaco
t: tiempo de liberación
k: constante cinética característica del sistema fármaco / polímero
n: exponente que caracteriza el mecanismo de liberación.
Eq. (3) es útil para un análisis generalizado de los datos de liberación, aunque solo se puede usar hasta en un 60% del fármaco liberado
(Lucht & Peppas, 1987). El modelo de ajuste se realizó con el software OriginPro 8.

3. Resultados y discusión

3.1. Funcionalización de PSi por polyCTR-bCD

Para determinar la composición química de las muestras, se llevaron a cabo los análisis FTIR de ATR como se muestra en la Fig. 4. Los
espectros representados en la Fig. 4a corresponden a nano-series. El espectro correspondiente a nPSi presenta bandas de absorción a
2141, 2115 y 2090 cm-1, que se atribuyen a modos de estiramiento Si-Hx (x = 1, 2, 3), respectivamente (Mawhinney et al., 1997). La
asignación de banda al modo de tijera SiH2 también se detectó a 906 cm-1 (Tolstoy et al., 2003). Como se mencionó en la Sección 2.1,
los enlaces Si-H son una característica de PSi reciente. Después del tratamiento químico (nPSi-COx), las bandas correspondientes a los
enlaces Si-H se transformaron en bandas asignadas a la superficie -OySi-Hx, debido al proceso de oxidación: a 2250 cm-1 para el modo
de estiramiento y a 880 cm-1 para modo de flexión (Tolstoy et al., 2003; Mawhinney et al., 1997). Además, se puede observar una
banda débil a 835-795 cm-1 del enlace Si OH (Naveas et al., 2012) así como la banda de estiramiento O-H de los grupos SiOH a 3350
cm-1 (Tolstoy et al. , 2003). Las bandas relacionadas con el modo de estiramiento superficial de Si-O-Si a 1170 y 1060 cm-1 también se
observaron (Tolstoy et al., 2003; Mawhinney et al., 1997). Estos resultados están de acuerdo con la ecuación. (1) de la Sección 2.1.

Las muestras nanoporosas funcionalizadas con policCTR-CD (nPSIC) exhiben las mismas bandas que policCTR-CD puro. Se puede
observar la banda principal correspondiente a las vibraciones de enlace del polímero CD-CTR (Martin et al., 2013; Zhao, Zhao, Zhu,
Tian y Shen, 2009): estiramiento O-H a partir de grupos hidroxilo y carboxilo (3435 cm) -1), estiramiento asimétrico de CH2 (2933 cm-
1), estiramiento de CO (1736 cm-1), estiramiento de C-O-C (1155 cm-1) y estiramiento de C-OH (1026 cm-1). Esto indica que el PSi
nanoestructurado se funcionalizó correctamente.

Los espectros FTIR de muestras macroporosas se representan gráficamente en la Fig. 4b. En el espectro mPSi, una banda débil a 2100
cm-1 es apreciable. Esta banda también está relacionada con los enlaces Si-H de PSi reciente (Gorbanyuk, Evtukh, Litovchenko,
Solnsev y Pakhlov, 2006). En este caso, la banda se puede descomponer en tres bandas cerca de 2140, 2110 y 2080 cm-1 (Gorbanyuk et
al., 2006). Sin embargo, los picos de absorción principales corresponden a Si-O-Si a 1108 cm-1 y 870 cm-1 (Mawhinney et al., 1997;
Ogata, Niki, Sakka y Iwasaki, 1995), lo que confirma que mPSi es más susceptible a oxidación que a la hidrogenación durante su
formación (Föll et al., 2002; Gorbanyuk et al., 2006). Después de la oxidación química, la señal de Si-H se desvaneció y los grupos de
SiOH no se detectaron. Como en el caso de nPSi-CD, las muestras de mPSi-CD se funcionalizaron adecuadamente, como lo muestra el
hecho de que sus espectros coinciden con los del polímero de CD-CTR puro.

Dado que la profundidad de sondeo XPS en nuestras condiciones experimentales fue de aproximadamente 10-12 nm, el estudio de la
evolución de la química de superficie se realizó en las muestras de la serie nPSi (la rugosidad cuadrática media de la raíz de 1-10 nm
está por debajo de la profundidad de análisis). La composición de la superficie elemental de nPSi, nPSi-COx y nPSi-CD se obtuvo de
los espectros de la encuesta XPS y se presentan en la Tabla 1.
Se puede ver que el sustrato nPSi inicial muestra contaminación C, parte de las señales esperadas de Si y O. Además, también se
detectó una ligera presencia de otros residuos de síntesis superficial, como F. Después de la oxidación, el contenido de C y Si se redujo
drásticamente, pero el contenido de O aumentó en un factor de 2,1. Esto indica la oxidación exitosa de la superficie PSi. Este resultado
también se confirmó mediante el análisis de los espectros de nivel del núcleo Si 2p (figura 5a), donde se puede observar que el doblete a
aproximadamente 99,6 eV (Si2p3 / 2), correspondiente al estado de oxidación del SiO, disminuye fuertemente. Paralelamente,
aumentan los otros componentes a energías de enlace superiores, correspondientes a diferentes estados de oxidación. En particular, para
el nPSi desnudo, se obtuvieron tres componentes relacionados con SiO (100.7 eV), SiOx (x <2, 102 eV) y SiO2 (103.6 eV) por ajuste
de curva (Seah et al., 2004). Después de la oxidación, el componente principal de nPSi-COxis se relaciona con los grupos SiO2, que
representan aproximadamente el 40% de la señal de Si (figura 5b). Además, la posición del SiO2peakshift hacia energías de unión más
elevadas (0.6 eV respecto del barenPSi), lo que indica el crecimiento de una capa de óxido denso (Ulgut y Suzer, 2003). Sin embargo,
debe tenerse en cuenta que las intensidades de señal de los componentes correspondientes a estados de oxidación de Si inferiores y a los
enlaces de SiOx de oro estequiométricos también aumentaron después del proceso de oxidación.

La polimerización in situ de CD y CTR cambia aún más la composición de la superficie (Tabla 1). De hecho, la señal Si desapareció, la
señal O disminuyó y se convirtió en el elemento dominante, lo que indica el crecimiento exitoso de una capa de polímero uniforme y
continua. Este resultado también es corroborado por el espectrum de nivel de núcleo C1s presentado en la Fig. 6. La envolvente C1s
puede equiparse con cuatro componentes correspondientes a CC / CH (285.00 eV), C-O (286.5 eV), CO / O-C -O (287,5 eV) y COOH /
R (289,2 eV) (Bemason, 1992; Ulgut y Suzer, 2003). La polimerización superficial exitosa fue posible debido al proceso de oxidación
anterior, que estabiliza el PSi y posibilita la interacción con los CD polimerizados. La humectabilidad de la superficie de las muestras se
evaluó mediante mediciones de contacto con agua (Fig. 7). Como era de esperar, nPSi y mPSi mostraron un comportamiento
hidrofóbico (126◦ y 84◦, respectivamente) debido al comportamiento. 6. Espectros del nivel del núcleo C1s de los grupos de superficie
nPS-CD.to Si-H (Low, Williams, Canham y Voelcker, 2006). Después de la oxidación química, las muestras nuevas cambiaron su
humectabilidad a un comportamiento hidrofílico fuerte, 7.7◦ para nPSi-COxand 14,7◦formPSi-COx, debido a Si-O, H-Si-O (Low et al.,
2006) y enlaces Si-OH (Noval et al., 2012). En el caso de muestras funcionalizadas, la capacidad de humectación fue prácticamente la
misma en ambos (31◦ para nPSi-CD y 33◦ para mPSi-CD) ya que la capa de polímero presentaba una composición muy similar a la
mostrada previamente por FTIR (Fig. 4). )

La rugosidad y la topografía de la superficie de las muestras se determinaron mediante análisis de AFM. Las imágenes obtenidas se
muestran en la Fig. 8. Las muestras nPSi y nPSi-COx (Fig. 8a1 y aa2) mostraron una rugosidad cuadrática media diferente: 0,584 nm y
1,050 nm, respectivamente. Esto se refleja en la morfología texturizada de nPSi COxsurface, que es más redonda que nPSi, que puede
atribuirse al tratamiento post químico. En el caso de mPSiand mPSi-COx (figura 8b1 y b2), ambos valores de cuadratura medios de raíz
son similares: 0,218 my 0,251 m, respectivamente. Por lo tanto, no mostraron un cambio morfológico significativo después de la
oxidación química.

Las imágenes de AFM de muestras funcionalizadas con el polímero de CD-CTR se muestran en la figura 8a3 (nPSi-CD) y la figura 8b3
(mPSi-CD). Es de suponer que las superficies de ambas muestras fueron cubiertas por el polímero formando una topografía diferente.
Tienen una rugosidad cuadrada similar a la raíz: 1.89 nm para nPSi-CD y 3.27 nm para mPSi CD.Se realizaron análisis de MEE para
completar el estudio de la morfología de los materiales en las diferentes etapas de fabricación (Fig. 9). No se detectaron cambios
morfológicos entre las muestras no oxidadas y las muestras oxidadas.

Las imágenes SEM de muestras oxidadas, nPSi-COx y mPSi COx, se muestran en la figura 9a1 y b1, respectivamente. Se puede
observar que nPSi-COxlayer tiene un grosor de 3,4 my un diámetro medio de poro de 30 nm. En el caso de mPSi-COx, el espesor es de
alrededor de 6.5 my el diámetro de poro es de 0.6-1.2 m. En ambos casos, los poros eran columnares.

Las imágenes SEM de muestras funcionalizadas, nPSi-CD y mPSi-CD, se muestran en la figura 9a2 y b2, respectivamente. La capa de
polímero sintetizado en la superficie superior de ambas muestras tenía el mismo espesor (aproximadamente 2,5 m). Además, es
apreciable que el polímero se infiltre en la matriz porosa de ambos sustratos PSi.

La unión entre las estructuras PSi (nano y macro) y el polímero CD CTR puede entenderse en relación con los resultados de
caracterización anteriores. En primer lugar, como las muestras oxidadas tenían un comportamiento hidrofílico, la solución acuosa de
monómero (Sección 2.2) penetraba fácilmente en ambos sustratos porosos (nPSi-COx y mPSi-COx). Luego, durante la polimerización
in situ, se formó el polímero CD-CTR y se quimisorbió en las paredes de esporas hidroxiladas. Por lo tanto, el polímero CD-CTR se
adhirió bien a PSipores por medio de enlaces de hidrógeno. Además, la porosidad de las muestras funcionó como un ancla que contiene
la película de polímero (Figuras 8 y 9)

Para medir el grado de funcionalización de polyCTR-CD en las muestras tratadas con nPSi y mPSi, fue necesario recuperar la
contribución del sustrato de silicio al peso total (véase la Fig. 9). Esto se logró mediante mediciones gravimétricas y TGA. Las
densidades superficiales y las estimaciones de polimeras fijadas se muestran en la Tabla 2. Los resultados indican un aumento de peso
de la superficie de muestras oxidadas a funcionalizadas de 0,49 a 1,16 mg / cm2 (+ 136,74%) y de 1,79 a 2,64 mg / cm2 (+ 47,79%). )
para nPSi y mPSi, respectivamente. Las cantidades calculadas de policCTR-CD fueron 0,67 y 0,85 mg / cm2, respectivamente. Por lo
tanto, la composición del polímero por área superficial de PSi (mg / cm2) fue 1,27 veces mayor en mPSi-CD en comparación con nPSi-
CD. Sin embargo, se observó una inversión en la CD acumulada en masa al considerar el peso de policCTR-CD por unidad de peso de
nPSi y mPSi. Los valores fueron 1,37 y 0,47 mg / mg, respectivamente (columna derecha de la Tabla 2). En este último caso, la
composición ponderal de nPSi-CD en policCTR-CD fue 2,91 veces la de mPSi-CD. Este efecto resulta de la gran diferencia de masa de
superficie entre ambos materiales PSi, como se ve en la columna izquierda de la Tabla 2.

La cantidad de polímero inmovilizado sobre superficies de PSi también se probó indirectamente mediante la detección de grupos
COOH mediante valoración con TBO (Tabla 3). Sin embargo, los datos se informaron como una función del área y la masa del PSi
desnudo o compuesto, de acuerdo con cada caso. Para los compuestos (nPSi-CD y mPSi-CD), el polímero y PSi se consideraron como
un todo. La TBO cargada por los sustratos PSi desnudos fue escasamente detectable, lo que denota la ausencia de grupos -COOH, que
corresponden a estudios químicos previos (ATR-FTIR y XPS). El TBO cargado por área superficial en mPSi CD (975 nmol / cm2) fue
110% mayor que en nPSi-CD (463 nmol / cm2) pero la carga por unidad de masa PSi fue casi la misma en ambos casos; solo un 8%
más en nPSi-CD (400 nmol / mg) que mPSi CD (370 nmol / mg).

3.2. Evaluación biológica

Como una evaluación biológica preliminar, la citocompatibilidad de las muestras de PSi-CD se ensayó in vitro estudiando la adhesión
de las células L132 después de 24 h de cultivo (Fig. 10). Las células se adhirieron a las superficies de todas las muestras, dando una
primera estimación positiva de la biocompatibilidad (Blanchemain et al., 2008). Sin embargo, las células adherentes en las muestras
también presentaron fuertes diferencias en la morfología, lo que indica que la evolución de las células en términos de crecimiento
celular en experimentos de cultivo más largos podría ser considerablemente diferente (Blanchemain et al., 2011). En nPSi, las imágenes
SEM muestran que las células se aislaron y presentaron una forma semiesférica contraída (Fig. 10a1) y se identificaron pocas y cortas
adherencias focales (flechas blancas en la Fig. 10a2). Estas dos características denotan que las células no se adhieren por completo al
sustrato (Khung, Barritt y Voelcker, 2008). En el caso de las células en nPSi-CD, los cuerpos de las células eran ovales con lamelipodia
extendida (figura 10b1). Numerosas adherencias focales se extendieron alrededor del cuerpo anclando la célula a la superficie (flechas
blancas en la figura 10b2). Esos signos implican una mejor adhesión a la superficie y su citoesqueleto alargado puede interpretarse en
términos de un estado migratorio (Khung et al., 2008). Las células en mPSi se extendieron y se contactaron estrechamente con la
superficie (figura 10c1). Además, se observan algunas adherencias focales en la imagen de mayor aumento en la figura 10c2 (flechas
blancas), lo que confirma que mPSi es más adecuado para células de soporte que nPSi (Sun, Puzas, Sheu, Liu y Fauchet, 2007).
Finalmente, se encontró, en el caso de mPSi-CD, que la capa de revestimiento de polímero en la superficie superior no era lo
suficientemente fuerte como para resistir el cultivo celular o el proceso de preparación de muestra de SEM. La capa de polímero
superior se desprendió del sustrato (imagen SEM insertada de la Fig. 10d1) y probablemente se llevó las células adherentes. En
consecuencia, las células se observaron solo en áreas dispersas de la muestra. De manera relevante, a pesar de la ausencia de una capa
superior, había poros rellenados por polyCTR-CD. La célula alargó drásticamente y repelió ligeramente el sustrato en su área central,
minimizando el contacto con la superficie (Fig. 10d1). Aunque no hubo filopodios observables (Fig. 10d2), su forma alargada sugiere
un estado migratorio (Low et al., 2006). A pesar de su comportamiento de crecimiento celular diferente, los cultivos celulares sugirieron
la biocompatibilidad de los diferentes compuestos probados, ya que las células epiteliales pueden adoptar una forma alargada o
polarizada en cultivo cuando su actividad laminar protrusiva se restringe a una región limitada de la célula (Middleton, Brown, Brown ,
Y Roberts, 1988).

La restricción de la actividad laminar en estas células puede implicar un mecanismo diferente para cada caso, que puede vincularse a la
química de la superficie de los sustratos (Low et al., 2006). Además, las características físicas del sustrato, incluidas la nanoestructura y
la microestructura, juegan un papel crucial en la determinación del comportamiento de las células en un contexto biológico dado
(Reemann et al., 2013).

3.3. Estudios de entrega de medicamentos

Con el fin de probar el potencial del compuesto estratificado como un sistema de administración de fármacos, las muestras se cargaron
con CFX y PDN. Después de la carga del fármaco, no se observaron cambios morfológicos ni por SEM ni por AFM. Sin embargo, se
detectaron cambios en sus composiciones químicas. Las composiciones de la superficie elemental del nPSi-CD antes y después de la
carga del fármaco se obtuvieron a partir de los espectros de la encuesta XPS y se presentan en la Tabla 4.

La carga de CFX se demuestra por la aparición de N y la aparición de señales F (tres y un átomo por molécula de CFX,
respectivamente, Fig. 3) y no se detecta en las muestras descargadas (Tabla 4). Los análisis muestran también una ligera contaminación
superficial por silicio y, en el caso de nPSi-CD-PDN, también nitrógeno. El análisis del espectro del nivel del núcleo C1s (Fig. 11b)
respalda esta conclusión. De hecho, después de la carga de CFX, la intensidad del componente de hidrocarburo a 285 eV aumenta
ligeramente. Además, el FWHM de los componentes C1 y C2 aumenta, lo que indica la presencia de enlaces C-N, CN (O) y C-F
(esperados a aproximadamente 287 eV). Además, el componente C3 se desplaza hacia una energía de enlace inferior (aproximadamente
0,22 eV) que también apoya la formación de enlaces COO. Por otro lado, en el caso de la carga PDN, el análisis XPS no es tan
indicativo ya que no hay elementos adicionales en PDN a los presentes en la superficie nPSi-CD. Sin embargo, el aumento de los
componentes C3 (CO) y C0 (CC) en los espectros del nivel del núcleo C1s (Fig. 11c) son compatibles con un enriquecimiento en PDN
en vista de la presencia de dos carbonos CO y 13 carbonos C-C en la molécula de PDN.

Aunque este estudio analítico se refiere a la superficie de las muestras, los trabajos anteriores han demostrado la formación de
complejos de inclusión estables entre CD y CFX (Blanchemain et al., 2012; Jianbin, Liang, Hao y Dongpin, 2002) y PDN (Challa ,
Ahuja, Ali y Khar, 2005; Larsen, Aachmann,
immer, Stella y Kjolner, 2005), lo que sugiere que estos complejos también pueden formarse en la mayor parte de la matriz PSi-CD.

En un último paso para evaluar la funcionalidad de suministro de fármaco de los materiales compuestos, las muestras se analizaron con
CFX y PDN en agua destilada y lotes de PBS bajo agitación. Los materiales compuestos son estables en estos medios debido al pH
neutro de las soluciones, que se mantuvo en alrededor de 7 (Degoutin et al., 2012). Los medios de pH alto se evitaron específicamente
debido a que PSi se graba (Anderson, Elliott, Wallis, Canham y Powell, 2003) y el policCTR-CD se vuelve soluble mediante la
hidrólisis de los enlaces éster (Martel et al., 2005).

Los perfiles de liberación CFX se muestran en la figura 12. Los perfiles de la figura 12a1 corresponden a la liberación del fármaco en
función del área de muestra y los perfiles de la figura 12a2 informan la liberación del fármaco en función de la masa de muestra, ambos
en agua destilada. Los perfiles equivalentes obtenidos en PBS se muestran en la figura 12b1 y b2.

Los cuatro perfiles de liberación en la figura 12 muestran claramente que las muestras de PSi funcionalizadas con CD funcionaron
mucho mejor que las muestras de control de COx. Las muestras de COx retuvieron bajas cantidades de fármaco, que se liberaron
durante los primeros minutos. En el caso de muestras funcionalizadas, el rendimiento máximo de fármaco cargado por área de muestra
fue 140% mayor en mPSi-CD que nPSi-CD. Con respecto a la liberación del fármaco en función de la masa de la muestra, el aumento
fue un 19% mayor en mPSi-CD que en nPSi CD. Estos resultados coinciden con los obtenidos por titulaciones TBO. El tiempo de la
liberación de CFX fue 40 veces más rápido en medio PBS (5 h) que en agua destilada (200 h). Esto podría originarse por tres efectos
principales (Blanchemain et al., 2012): (a) El papel competidor de los iones en el PBS hacia el complejo de inclusión del fármaco CD
(los iones desplazan al fármaco del anillo CD). (b) Las posibles interacciones iónicas entre las funciones amino protonadas de CFX y
los grupos carboxilato de policCTR-CD. De hecho, estas interacciones pueden ser rastreadas por los contraiones exagerados traídos por
PBS. (c) Debido a que a pH neutro, los grupos carboxílicos de CD se convierten en grupos carboxilato que repelen iónicamente el
grupo carboxilato de CFX de la red polimérica. Una combinación de estos tres aspectos probablemente tenga en cuenta la liberación
acelerada de CFX en PBS en comparación con un medio de agua pura.

Los perfiles de liberación de PDN se muestran en la Fig. 13 (en el mismo orden que en la Fig. 12). Como en los experimentos descritos
anteriormente, las muestras funcionalizadas con CD retuvieron significativamente más fármaco que las PSi cuando se compararon en
función del área superficial. Sin embargo, cuando se traza como una función de la masa de la muestra, nPSi-COx lanza más y más
rápido que nPSi CD. Sin embargo, la publicación de muestras funcionalizadas está más controlada que en las de COx. El rendimiento
del fármaco por área de muestra fue 220% mayor en mPSi-CD que en nPSi-CD, y por muestra la masa fue 40% mayor en mPSi-CD que
en nPSi-CD. Esta tendencia también es similar a lo que se observó para CFX y durante la titulación de TBO. Los grados de
funcionalización por área de muestra aumentan las tasas de administración a favor de mPSi-CD, aunque los datos expresados como
función de la masa no muestran tales diferencias significativas. El tiempo de liberación también se vio afectado por el medio de
lanzamiento. La liberación de PDN fue aproximadamente 30 veces más rápida en medio PBS (2,5 h) que en agua destilada (75 h).

De las Figs. 12 y 13, es posible afirmar que CFX es más compatible con ambos compuestos (nPSi-CD y mPSi CD) que PDN. La carga
de CFX fue 10 veces más que la correspondiente a PDN. Por otro lado, el tiempo de liberación también fue más largo para CFX que
para PDN en ambos compuestos: 2.7 veces más en agua destilada y 2 veces más en PBS. La mayor afinidad de los composites por CFX
que por PDN se puede explicar por la presencia de un fluor aromático, un piperazinilo y un sustituyente de ciclopropano en CFX. Por lo
tanto, CFX puede interactuar con el polyCTR-CD no solo por interacciones huésped-huésped, sino también por intercambio iónico con
los grupos carboxílicos del polímero de acuerdo con: sustrato-COOH / CFX-piperaz → sustrato-COO- / CFX piperaz- H +. En un
artículo anterior, revelamos que CFX fue adsorbido en su mayoría a través de interacciones iónicas con el policCTR-CD, en
comparación con la complejación del anfitrión-anfitrión (Blanchemain et al., 2012).

Con respecto a la constante de inclusión del complejo de formación: (3479 y 270 M-1 para PDN y CFX, respectivamente (Jianbin et al.,
2002; Larsen et al., 2005), ambos valores indican claramente que la mayoría de las cavidades CD en el polyCTR - Los CD están
ocupados por ambos huéspedes en equilibrio, pero no se puede afirmar que las tasas de ocupación de cavidad para ambas drogas sean
proporcionales a las constantes dadas. Para concluir, en el caso de CFX, la adsorción por el policCTR-CD es principalmente conducida
por interacciones iónicas, por el contrario para PDN, ocurre principalmente la complejación del huésped huésped. Esto explica por qué
la adsorción / desorción de CFX es diez veces la correspondiente a PDN. Con el fin de obtener una visión más profunda de los
mecanismos que rigen el lanzamiento de CFX y PDN en agua destilada y PBS de ambos composites, el modelo semiempírico de
Korsmeyer-Peppas se ajustó a los datos de lanzamiento. Este estudio no se aplicó a los sustratos PSi desnudos debido a su liberación
rápida e incontrolada de medicamentos en la mayoría de los casos. Sus datos no estaban disponibles para manipular matemáticamente
de acuerdo con la restricción del modelo (datos Mt / M∞ en el rango 0.1-0.6).

Cuando el Korsmeyer-Peppas se aplica a películas delgadas (Lucht & Peppas, 1987; Lin & Metters, 2006; Costa, 2001) el exponente de
liberación n = 0.5, o n ≤ 0.5 (Glisoni et al., 2013; Chime Salome, Onunkwo Godswill, & Onyishi Ikechukwu, 2013; Souza, Ardisson, y
Sousa, 2009), corresponde a una liberación de difusión Fickian durante la cual la penetración del solvente es el paso limitante de la
velocidad; 0.5 <n <1.0 está relacionado con la liberación no Fickian, esto significa que la liberación del fármaco siguió mecanismos de
difusión y control de la erosión, y n = 1 corresponde a la liberación de orden cero, donde la liberación del fármaco es independiente del
tiempo. La Tabla 5 muestra los resultados logrados aplicando el modelo de Korsmeyer-Peppas a los compuestos. De acuerdo con el
exponente de liberación n obtenido en la mayoría de los casos (0.5 o menos), la cinética de liberación del fármaco de los sistemas se
regía por un proceso de Fickian. Sin embargo, hubo una diferencia importante entre los valores k cuando se comparan como una
función del medio. Los perfiles de fármaco en PBS mostraron valores de k significativamente mayores que en agua destilada, lo que es
coherente con una liberación más rápida. Además, como k está relacionado con la interacción fármaco / polímero, estos resultados
confirmarían la función competidora de los iones en el PBS hacia el complejo de inclusión de fármaco CD, previamente expuesto.

Este trabajo se centra principalmente en problemas de síntesis y caracterización fisicoquímica. Aunque se llevó a cabo una prueba
preliminar de citocompatibilidad en los compuestos obtenidos, se deben realizar caracterizaciones biológicas adicionales para asegurar
su uso para aplicaciones in vivo, tales como ensayos MTT y CCK-O8. Sin embargo, como los materiales compuestos se probaron con
dos medicamentos que podrían usarse en la cirugía post-oftálmica (Oliver et al., 2005; Ravindran et al., 2009), su uso como sistema de
administración de fármacos intraoculares podría preevaluarse en función del requerimiento concentración de drogas para terapia
médica. Además, los materiales compuestos basados en PSi se han usado recientemente con éxito en la cirugía oftálmica (Muñoz Noval
et al., 2012).

Se informa que la concentración mínima inhibitoria de CFX requerida para inhibir el crecimiento del 90% de los microorganismos
(MIC90) va de menos de 0,25-2 g / ml (Yu-Speight, Kern, y Erb, 2005) (menos de 0,25). g / ml para Bacillus sp. y Escherchiacoli,
mientras que 0,5 g / ml para Corynebacterium sp. y Staphylococcussp., y 2 g / ml para Streptococcus sp.). Como el volumen medio de
un ojo humano adulto es de 6,5 ml (Festa et al., 2012), la cantidad requerida de CFX en el ojo para un tratamiento médico es de
alrededor de 13 g, un valor no solo alcanzado sino superado con solo 1 mg de ambos Compuestos de PSi CD sintetizados. En el caso
del uso de NDP como antiinflamatorio anular, se necesita una concentración mínima de 25 ng / ml para suprimir la inflamación y
minimizar los efectos secundarios de los esteroides oftálmicos como la perforación bulbar, la inyección coroidea, la oclusión de la
arteria central de la retina y otros (McGhee). , 1992). Por lo tanto, podemos estimar que se requieren 0,16 g de PDN para una terapia
médica. Este valor también lo alcanzan ambos composites PSi-CD en los estudios cinéticos. Por otro lado, debido a la morfología en
capas delgadas de los compuestos, podrían inyectarse intravítreamente (MuñozNoval et al., 2012) durante cualquier cirugía ocular para
reducir la inflamación del ojo derivada de un agente infeccioso. después de la cirugía (Olson, 2004).

4. Conclusiones

Los resultados de FTIR, XPS y el ángulo de contacto con el agua indicaron que las capas PSi nanoporosas y macroporosas se
estabilizaron apropiadamente mediante oxidación química y se funcionalizaron adicionalmente mediante CD en la sitolopolimerización
usando CTR como agente de reticulación. La caracterización microscópica mostró cambios topográficos claros de las superficies
posteriores al paso (AFM) y que un polímero está integrado en los poros PSi y en la superficie superior (SEM). La amalgama entre la
matriz porosa de las muestras y el polímero fue generada por dos fenómenos principales: la compatibilidad hidrofílica del PSi con la
pared externa de la oxidación post-química CD, y el efecto de anclaje de la matriz porosa. Por otro lado, como una evaluación biológica
preliminar, la deposición y la proliferación in vitro de células L132 en ambas muestras de referencia y en ambos composites sugirieron
su citocompatibilidad, a pesar de sus diferentes comportamientos de crecimiento celular en cada muestra.

Los perfiles de liberación del fármaco muestran que las muestras funcionalizadas liberaron fármacos durante más tiempo que las
COxonas. También se logra una carga de fármaco más alta y proporcionan una liberación mejor controlada. Los pro-archivos se
informaron de dos maneras, se normalizaron a área y se normalizaron a la masa de la muestra. Los resultados favorecen
significativamente mPSi-CD con respecto a nPSi-CD cuando se normaliza en el área, pero cuando los resultados están normalizados en
masa, son similares.

Los estudios también indican que CFX es más compatible con ambos compuestos (nPSi-CD y mPSi-CD) que PDN: la carga de CFX
fue 10 veces mayor que la carga de PDN en ambos compuestos. Por otro lado, el tiempo de liberación para CFX fue más largo que para
PDN en ambas com posiciones: una semana en agua destilada y 5 h en PBS para CFX; tres días en agua destilada y 2.5 h en PBS para
PDN. La liberación más rápida en PBS se debe a la fuerza iónica de las sales en solución. Según el modelo semiempírico de
Korsmeyer-Peppas, la liberación del fármaco se rige por un proceso de Fick.

En resumen, las técnicas de caracterización y los estudios de liberación de fármacos in vitro mostraron el potencial de los compuestos
en capas del polímero PSiand -CD-CTR como dispositivos funcionales para la aplicación de fármacos.