Facultad de Salud y Nutrición

Curso: Microbiología

Clase 3. Metabolismo y nutrición bacteriana

Docente: Roky Champi Merino

Contenido
 Metabolismo bacteriano.
 Tipos de nutrición
 Nutrición microbiana, Requerimientos, agua,
nutrientes.
 Factores de crecimiento
 Metabolismo
 Enzimas, Cofactores y coenzimas
 Fases del Crecimiento bacteriano
 Medios de cultivo
 Temperatura, pH, oxigeno
 Metabolismo Bacteriano
 Conjunto de reacciones bioquímicas catabólicas y
anabólicas, que transforman las sustancias nutritivas para
obtener energía.
 Anabolismo: reacciones de síntesis.
 Catabolismo: degradación de compuestos orgánicos.

Funciones especificas:
1. Obtener energía química del entorno y almacenarla, para
funciones celulares.
2. Convertir nutrientes exógenos en unidades precursoras
de macromoléculas.
3. Formar y degradar moléculas necesarias para funciones
especificas.
 TIPOS DE NUTRICIÓN
FUENTE DE FUENTE DE
CARBONO ENERGÍA

AUTÓTROFOS

Obtienen el C
celular por fijación
del CO2

HETERÓTROFOS

Obtienen el C de
Compuestos
orgánicos
Tipos Nutricionales
Tipo Fuente de Fuente de Ejemplos
energía carbono
Fotoautotrofas Luz CO2 Algas y
cianobacterias
Fotoheterotrofas Luz Compuestos Algas y bacterias
orgánicos fotosintéticas
Quimioautotrofas o Química Compuesto Pocas bacterias
Litotrofas inorgánicos: H2,
NH3, NO2, H2S,
CO2
Quimioheterotrofas Química Compuesto La mayoría de
o Heterotrofas orgánicos: bacterias
glucosa
Nutrición Microbiana

 Las células están compuestas de:

1. Macromoléculas: polisacáridos, lípidos,
ácidos nucleicos y proteínas (Las proteínas
son las mas abundantes).
2. Agua.
 Agua
 El agua es el solvente ideal para los organismos
vivos debido a su polaridad y a su cohesión

 Es el principal componente del protoplasma

bacteriano; el medio donde se producen las
reacciones químicas y sus productos.

 La disponibilidad se mide por un parámetro

denominado: actividad de agua (aw) o potencial
de agua. Valores normales entre 0.90- 0.99.
 Requerimientos Nutricionales
 Los microorganismos requieren para su desarrollo y
actividad celular compuestos químicos: nutrientes.

 Dependiendo de las cantidades que se requieran se

habla de macronutrientes, micronutrientes y factores
de crecimiento.

 Existen diferencias en cuanto a los requerimientos

nutricionales de cada microorganismo.
 Nutrientes
 MACRONUTRIENTES  MICRONUTRIENTES
 Carbono.  Cromo
 Nitrogeno.  Cobalto
 Fosforo.  Cobre
 Azufre  Manganeso
 Potasio  Molibdeno
 Magnesio  Niquel
 Sodio  Selenio
 Calcio  Tungsteno
 Cloro  Vanadio y Zinc.
 Hierro
Factores de crecimiento

 Se requieren en muy pocas cantidades y

solo por algunas células:
 Vitaminas,
 Aminoácidos,
 purinas y pirimidinas.

La mayoría de los microorganismos son

capaces de sintetizarlos.
 Nutrientes en solución
Factores de Moléculas
Crecimiento Macro- Micro- grandes
nutrientes nutrientes
aa
C, O, H, N. S, P, K, Co, Cu, Mn, Se
Ca, Mg, Fe. enzimas
Pur, vit
pir

Auxotróficos MEMBRANA
CELULAR:
responsable
del transporte
selectivo
 LOS NUTRIENTES PUEDEN SER:

NUTRIENTE BENEFICIOSO.- Cuando el nutriente es

metabolizado por el microorganismo. Ej. E. coli crece de manera
óptima en el medio de cultivo caldo glucosado de 5-10%

 NUTRIENTE ADVERSO.- Cuando a una bacteria se le

adiciona nutriente en mayores cantidades de las que
necesita, entonces el nutriente inhibe su crecimiento.
Ejemplo: Cuando en medio glucosado al 40% de glucosa se
siembra E. coli, entonces se inhibe su crecimiento, lo mismo pasa
con los antibióticos.

 NUTRIENTE INDIFERENTE.- Cuando la bacteria no

metaboliza el nutriente y solo le sirve de soporte para su
crecimiento. Ej. Agar-agar
 LOS NUTRIENTES PUEDEN SER:

 Nutriente beneficioso: Cuando el nutriente es

metabolizado por el microorganismo. Ej. E. coli crece de
manera óptima en el medio de cultivo caldo glucosado
de 5-10%
 Nutriente adverso: al adicionar nutriente en mayores
cantidades de las necesarias, entonces se inhibe su
crecimiento. Ej. En medio glucosado al 40% se siembre
E. coli, se inhibe su crecimiento.
 Nutriente indiferente: cuando la bacteria no metaboliza
el nutriente y solo le sirve como soporte para su
crecimiento. Ej. Agar- Agar.
Obtención de Energía

 La transformación de la energía, generación de

ATP, puede ser mediante 3 vías principales:
1. La respiración, que tiene lugar en presencia de
O2 y da como resultado: CO2 y H2O, es un
proceso de oxidación.
2. La fermentación: en condiciones sin oxigeno.
3. La fotosíntesis: que obtiene la energía por
absorción de luz visible a través de la clorofila.
Metabolismo
C ata b o l i s m o Anabolismo
Generación d e Reacciones
energ í a biosintéticas
Fuente de Nutrientes
energía

Precursores intracelulares
ATP

Intermediarios biosintéticos

ADP Biopolímeros

Productos
metabólicos Estructuras
•Los nutrientes pueden someterse a 2 sistemas:

• SISTEMA ANABÓLICO: El cual conduce a la biosíntesis

de nuevos constituyentes celulares.

• SISTEMA CATABÓLICO: En el que se dan como resultado

los compuestos de bajo peso molecular, que conforman los
productos de desecho del metabolismo y que son
excretados, mientras otros van a servir como precursores
en las reacciones biosintéticas, para lo que el sistema
proporciona energía (ATP).

• El conjunto de estos 2 sistemas muy interrelacionados e

integrados, se conoce como METABOLISMO INTERMEDIO
METABOLISMO: Catabolismo y anabolismo

NADH: Nicotín adenín dinucleótido

NADPH: Nicotín adenín dinucleótido fosfato
FADH2: Flavín adenín dinuleótido
Enzimas

 Catalizadores biológicos de naturaleza

proteica.
 Su accionar es esencial en el metabolismo
bacteriano.
 Actúan de manera especifica a través de un
sitio activo, produciendo un efecto catalítico
sobre las moléculas del sustrato,
convirtiéndola en un producto especifico.
 Funcionan en forma secuencial: sistema
multienzimatico.
 Productos de desecho

Nutrientes
Energía para el
movimiento,
transporte de
Energía para
nutrientes, etc
el desarrollo

Anabolismo
(biosíntesis)

Catabolismo
Componentes celulares

Fuente de energía
Enzimas
Sustra to Pro d uc to s

Complejo
Enzim a Enzim a
Enzima-Sustrato

Catalizadores biológicos de
naturaleza proteíca. Reducen la
energía de activación de una reacción
química. Son específicos para un
sustrato.
 C o f a c t o r e s y c o e n z i ma s

Apoenzima Cofactor o Holoenzima

(porción proteica) coenzima (toda la enzima)

 Moléculas no proteícas que pueden ser

orgánicas o inorgánicas, se unen a la
enzima y d a n afinidad al sustrato c o n la
enzima para catalizar la reacción.
Cofactores
sustrato

Co factor

Enzima

A l g u n a s enzimas requieren cofa ctore s :

Alcohol d e s h i d ro g e n a s a -Zn 2+
Ureasa -Ni 2+
Nitrogenasa -Mo
Purivato c i n a s a -K + y Mg 2 +
Coenzimas
Sustrato
oxidado Sustrato
reducido
Coenzima Coenzima
reducida oxidada

Enzim a

Las co en z ima s tienen u n a unión débil c o n la enzima.

Coenzimas d e oxido-reducción: N A D, NADP, FAD, FMN.
Otras coenzimas: C o A , Vitaminas.
N A D ↔N A D H

Nicotinamida Adenina Di-nucleótido (NAD), es la principal coenzima

de óxido-reducción.
 Enzim a s - clasificación
C la se Tipo d e re a c c i ó n
q u e cata liza
Oxidoreductasa Oxido-reducción, donde oxígeno e
hidrógeno son ganados o perdidos.
Eje m p lo s
Ci to cro mo oxidasa.
L a c ta to deshidrogena sa.

Transferencia de grupos funcionales

Transferasa A c e t a t o cinasa.
(amino, acetilo, fosfato)
Alanina des ami nas a.

Hidrolasa Hidrólisis (adición d e a g u a ) Lipasa. Sucrasa.

Lia sa Remo ci ó n d e grupos d e Oxalato descarboxilasa.

átomos sin hidrólisis. Isocitrato liasa.

Glucosa –fosfato isomerasa.

Iso m e ra sa Rearreglo d e átomos dentro
Alanina racemasa.
d e u n a molécula.

Lig a sa Unión de dos moléculas (empleando Acetil Co A sintetasa Ligasa.

energía
usualmente derivada del
rompimiento de ATP.
Actividad enzimática

E + S ↔ES ↔E + P

 Una enzima, por sí misma, no puede llevar

a cabo una reacción, su función es modificar
la velocidad de la reacción. La actividad
enzimática es la cantidad de producto
formado por unidad de tiempo.
 La actividad de una enzima es modificada
por factores que afectan a las proteínas,
ejemplo: la temperatura.
Modificación de la actividad
enzimática
Actividad de la
El pH al influir sobre las cargas enzima

eléctricas, puede alterar la estructura

del centro activo y, lo que influirá
sobre la actividad enzimática. pH

La temperatura elevada
Actividad de la
desnaturaliza las moléculas proteicas enzima

por lo que los sitios activos se ven

modificados.
Temperatura

La enzima se satura a cierta

Actividad de la
concentración del sustrato. enzima

Concentración
del sustrato
Fermentaciones

 Una fermentación en una reacción de

oxidación – reducción interna equilibrada
en la que algunos átomos de la fuente de
energía (donador de electrones) se
reducen, mientras otros se oxidan y la
energía se produce por fosforilación a
nivel de sustrato.
 Una ruta bioquimica muy usada para la
fermentacion de la glucosa es la
glucolisis,tambien denominada via de Embden-
Meyerhof .Es un proceso por el cual la
molécula de glucosa es convertida en 2
moléculas de piruvato, generando 2 ATP.
Ocurre en el citosol de la célula. Comprende 10
reacciones enzimáticas

 La glicolisis se puede dividir en 3 etapas

principales.
Compuestos fosforilados de alto contenido energético

ATP (trifosfato de adenosina)

 ATP es la moneda de intercambio energético entre el catabolismo y
anabolismo

 Células heterotróficas obtienen energía del catabolismo de los

nutrientes y lo usan para sintetizar ATP a partir de ADP + Pi

 ATP dona la Energía Libre almacenada en sus enlaces fosfato de alta

energía a los procesos endergónicos de síntesis (anabolismo), en el
transporte a través de las membranas en contra gradientes de
concentración
 Transferencia de electrones: reacciones de
óxido reducción
1. La transferencia de electrones es capaz de hacer trabajo (ΔG)

2. Diferencia de potencial de reducción, que se mide en celdas voltaicas.

Compuesto que se oxida: pierde electrones

Compuesto que se reduce: gana electrones

Pares redox conjugados:

Fe+2 + Cu+2  Fe+3 + Cu+

Fe+2  Fe+3 + e-

Cu+2 + e-  Cu+
La organización
del anabolismo:
Tres estados
del catabolismo:
Algunas Fermentaciones
Microbianas más
comunes:
 A
↓
B
↓
C →F→G
↓
H← D
↓
E

Vías metabólicas forman una red compleja

Glucolisis

Metabolismo aerobio de la
glucosa. La máxima cantidad
teórica de ATP que se puede
obtener a partir de una
molécula de glucosa es 38,
aunque el rendimiento real
depende del germen y de
otras condiciones.
Interacciones Microbianas:
Interacciones Microbianas:
Sintrofía (Nutrición Mutua):
Es el fenómeno por el cual dos microorganismos
cooperan para degradar una sustancia que ninguno de
ellos puede degradar por separado.

FERMENTACIÓN DE ETANOL:
2CH3CH2OH + 2H2O  4H2 + 2CH3COO- + 2H+ +19.36kJ/reacción

METANOGÉNESIS:
4H2 + CO2  CH4 + 2H2O -130.69 kJ/reacción

REACCIÓN ACOPLADA:
2CH3CH2OH + CO2  CH4 + 2CH3COO- + 2H+ -111.33 kJ/reacción
 Crecimiento de poblaciones

 Es el aumento en el numero de células de

una población.
 Velocidad de crecimiento es el cambio en el
numero de celulas o en la masa celular,
experimentado por unidad de tiempo.
 Durante el ciclo de division celular, todos los
componentes se duplican.
Tiempo de generación
 Tiempo de generaci{on: es el tiempo que se
requiere para que la poblacion se duplique.
 Los tiempos de generacion varian
ampliamente entre las diferentes bacterias.
Ej. 1 a 3 horas, 10 min, o varios dias.
Fases del Crecimiento bacteriano

 Fase LAG: El crecimiento es lento al principio,

mientras las bacterias se adaptan a los nutrientes que
están en su nuevo ambiente.
 Fase LOG: Una vez la maquinaria metabólica se ha
disparado, las bacterias se multiplican
exponencialmente, doblando su número cada pocos
minutos.
 Fase ESTACIONARIA: Al haber más y más m.o.
compitiendo por el alimento y los nutrientes, el
crecimiento acelerado se detiene y el número de
bacterias se estabiliza.
 Fase de MUERTE: Se forman productos tóxicos de
desecho, la comida se agota y las bacterias
comienzan a morir.
Curva de Crecimiento bacteriano
Fase 1: de adaptación o latencia.
El crecimiento de la población no inicia
inmediatamente, sino después de cierto
periodo de tiempo, el cual puede ser breve
o largo, dependiendo de varios factores.
Fase 2: de crecimiento exponencial o logarítmico
Es la consecuencia del hecho de que cada celula
se divide en dos. Las bacterias se encuentran en
un estado optimo.
Su velocidad esta influenciada por temperatura,
nutrientes.
Fase 3: estacionaria.
El medio de cultivo no se renueva, comienzan
a acumularse metabolitos tóxicos, se modifica
el pH, los nutrientes se agotan, la velocidad
de multiplicación se retrasa y hay un equilibrio
entre bacterias vivas y muertas.
 Fase 4: de Muerte.
Cuando continua el crecimiento en el medio de cultivo viejo
se produce una inversión numérica con respecto a la fase
exponencial.
En este periodo son más las bacterias muertas que las
vivas, hasta que se termina con la muerte de todas.
Si son bacterias con capacidad de esporular, se produce
la esporulación en esta fase.
 Medios de cultivo
 Satisfacen las necesidades nutritivas de los
microorganismos y pueden ser
químicamente definidos o complejos.

 Para el cultivo correcto de una bacteria es

necesario conocer sus exigencias nutritivas.
 Medio de Cultivo
Agua + Nutrientes Apropiados  Medio de Cultivo

•Fuente de energía o luz

•Fuente de carbono
•Fuente de Nitrógeno
*vitaminas

LÍQUIDO
Sin agar

SÓLIDO SEMISÓLIDO
1.5% agar 0.4% agar
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

• Sólido
POR SU ESTADO FÍSICO • Semisólido
• Líquido
• M. comunes
• M. de enriquecimiento
• M. selectivos
POR SU UTILIZACIÓN
• M. diferenciales
 Medios de transporte, M. de identificación,
M. inhbidores,etc.

POR SU COMPOSICIÓN • M. simples

• M.complejos

• M. natural
POR SU ORIGEN • M. sintético
• M. semisintético
REQUERIMIENTOS FUENTES NUTRITIVAS
NUTRICIONALES
Compuestos amino Peptona, hidrolizado de proteínas, infusiones,
nitrogenados extractos

Factores de crecimiento Sangre, suero, extracto de levadura, vitaminas

Fuentes de energía Alcoholes, carbohidratos

Buffers Fosfatos, acetatos, citratos
Sales minerales y metales Fosfato, sulfato, magnesio, calcio, hierro

Agentes selectivos Antimicrobianos, colorantes, químicos

Indicadores Rojo de fenol, rojo neutro

Agentes gelificantes Agar, gelatina, alginato, sílica gel
 AGAR NUTRITIVO:
Peptona de gelatina 5g
Extracto de carne 3g
Agar bacteriológico 15g
pH 6.8 +/- 0.2

AGAR Mc CONKEY:
Digerido pancreático de Peptona de gelatina 17 g
Digerido péptico de tejido animal 1.5g
Digerido pancréatico de caseína 1.5g
Lactosa 10g
Rojo neutro Sales biliares Cloruro de sodio 0.03g, 1.5g, 5.0g
Agar bacteriológico Cristal violeta 13.5g, 0.001g
pH 7.1 +/- 0.2
Preparación de un Medio de Cultivo
Pesar la cantidad
Reconstituir con agua
necesaria de
destilada, si es necesario
acuerdo al medio que
usar calor.
se preparará

Esterilizar Plaquear o verter en tubos

Preparación de un Medio de Cultivo
Siembra de microorganismos en medio
sólido
PRINCIPALES OBJETIVOS:
• Aislamiento de colonias bacterianas
• Identificación bioquímica

ALGUNOS MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS:

• AgarTripticasa de soya, Agar nutritivo
• Agar Mc Conkey ( aislamiento de gram negativos)
• Agar Manitol salado (aislamiento de Staphylococcus)
 Temperatura

 La temperatura es un factor ambiental

importante en el control de crecimiento
microbiano.
 Los M.O pueden agruparse según los
márgenes de temperatura que requieren.
 Se distinguen 4 grupos:
1. Psicrofilos 2. Mesófilos

3. Termofilos 4. Hipertermofilos.
Clases de M.O. según la temperatura optima
de crecimiento

Tipo Rango de Temperatura M.O.

Temperatura Optima

Psicrofilo 0 - 20 15 Algas

Mesofilo 20 - 40 38 E. coli

Termofilo 40 - 70 60 Bacillus
stearothermophillus

Hipertermofilos 90 - 115 106 Thermus acuaticus

 Temperatura

Clases de m.o. según la temperatura

pH

 La acidez o alcalinidad de un medio tiene

una gran importancia sobre el crecimiento
microbiano.
 La mayoría crecen a un pH entre 6 y 8.
 El pH intracelular debe permanecer
próximo a la neutralidad.
 pH y Capacidad Tampón

 La acidez o alcalinidad de un medio

tiene gran influencia en la
estabilidad de macromoléculas tales
como las enzimas
 Las bacterias crecen con mayor
rapidez en la escala de 6.0 – 8.0
 Las levaduras entre 4.5 – 6.0
 Los hongos filamentosos entre 3.5 –
4.0
 Presión osmotica

 Los solutos (sales y azúcares) disueltos se

desplazan a zonas de menor concentración.
 El agua se desplaza a zonas de mayor
concentración de solutos
 Una presión osmótica alta causa pérdida de agua
y plasmólisis de la célula
 Halófilas: bacterias que toleran altas
concentraciones salinas
 Halófilas facultativas : toleran hasta un 2 % de
sales
 PRESENCIA DE OXÍGENO EN EL MEDIO

 Los microorganismos pueden dividirse de

acuerdo a las necesidades de O2 en:

 Los aerobios crecen con tensión de O2

total.
 Los microaerófilos, pueden utilizar este
gas sólo cuando su tensión es más baja
que la del aire, por su limitada capacidad
de respirar.
 Los anaerobios carecen de sistemas
respiratorios y no pueden utilizar el
oxígeno como aceptor terminal de
electrones. Hay anaerobios facultativos
o aerotolerantes y anaerobios estrictos.
 Oxigeno

Los microorganismos son muy variables en

cuanto a la necesidad del oxigeno. Se dividen de
acuerdo a las necesidades de O2 :

1.Aerobios estrictos: los que requieren oxigeno

como aceptor terminal de electrones, no proliferan
en ausencia de O2. ej. Mycobacterium bovis.

2.Microaerofilos: utilizan O2 a niveles muy bajos.

Un 12%. No proliferan en la superficie de medios
sólidos. Usan O2 sólo cuando su tensión es más
baja que la del aire, por su limitada capacidad
de respirar. Ej. Campylobacter
Oxigeno

3. Anaerobios estrictos: no emplean oxigeno

para su metabolismo, sino que obtienen su
energía de reacciones fermentativas.
Carecen de sistemas respiratorios y no
pueden utilizar el oxígeno como aceptor
terminal de electrones. Ej. Clostridium tetani
4. Anaerobios facultativos o aerotolerantes: pueden
crecer en presencia o ausencia de oxigeno,
proliferan mediante procesos oxidativos, utilizando
oxigeno como aceptor terminal de electrones, o en
anaerobiosis, empleando reacciones de
fermentación para obtener energía. Ej.
Enterobacterias, Bacterias acidolacticas,
Streptococcus
Requerimientos de O2
Aerobio Anaerobio Anaerobio Microaerofílico
obligado obligado facultativo

Carencia de enzimas
Implicaciones en los procesos infecciosos y Dx por el laboratorio
 Cultivo de microorganismos en el Laboratorio

Para estudiar un microorganismo

Roberto Koch debe estar en cultivo axénico

Para ello desarrollaron varios métodos

ingeniosos para obtenerlos, el más
útil es el aislamiento de colonias
individuales sobre medios sólidos

colonia “clon” a partir de un solo

microorganismo se forma
una población

Se busca que las

colonias estén separadas
unas de otras:
“aislamiento”

Medio de cultivo
Colonias microbianas
Características de las colonias

OBSERVACIÓN:
Se visualizan macroscópicamente
 Gracias por su atención 74