Zubía

23-24 27-58 Logroño 2005-2006

AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN

ECOLÓGICA DE NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA
RIOJA

Raquel CAMPOS-HERRERA*1,2
Miguel ESCUER*
Sonia LABRADOR*
Carmen GUTIÉRREZ*2

Resumen
El ecosistema edáfico es un sistema complejo con un alto grado de
diversidad, donde los organismos interactúan en complejas redes tróficas de
las que depende la productividad de los ecosistemas naturales y agrarios.
El aislamiento, identificación y estudio bioecológico de algunos de estos
organismos puede proporcionar las bases para desarrollar nuevas tecnolo-
gías para el control de insectos plaga. La finalidad de este estudio es rea-
lizar las investigaciones básicas para identificar las poblaciones autóctonas
de nematodos entomopatógenos (NEPs) de La Rioja que proporcionen las
bases para su desarrollo como productos de biocontrol, compatibles con
el medioambiente. Se estudió la distribución, frecuencia de recuperación y
abundancia de los NEPs en los tipos de hábitat naturales y márgenes de los
cultivos más representativos de La Rioja y el efecto de las variables ambien-
tales, de vegetación y edáficas en las poblaciones de NEPs en quinientas
muestras de suelo procedentes de cien localidades, utilizando la técnica de
la trampa de Galleria. La presencia de NEPs fue registrada en un 14% de
las localidades y en un 5,4% de las muestras estudiadas, identificándose un
total de 11 poblaciones de Steinernema feltiae, 2 de S. kraussei y 2 de S.
carpocapsae. El género Heterorhabditis no fue recuperado en este estudio.

* Departamento de Agroecología, Centro de Ciencias Medioambientales, CSIC. C/ Serrano 115 Dpdo,

28006, Madrid, España. Tlf: 91 745 25 00, fax: 91 564 08 00.
1. Investigador agregado del IER, Área de Recursos Naturales.
2. Autores para la correspondencia:
- Carmen Gutiérrez: e-mail de contacto: carmen.g@ccma.csic.es
- Raquel Campos-Herrera: e-mail de contacto: raquel.campos@ccma.csic.es
Artículo presentado en formato resumido en el XXVII European Society of Nematologysts (ESN)
Internacional Symposium, celebrado del 14 al 18 de junio de 2004 en Roma (Italia), bajo el título
“Distribution of entomopathogenic nematodes in La Rioja, Spain”, de los mismos autores.
Subvenciones:
• Ayuda para la realización de estudios de temática riojana convocatoria de 13 de junio de 2002, BOR
nº 72.
• Proyecto CICYT, Plan Nacional De Recursos Naturales 2002, REN2002-02550/ GLO.
• Beca FPU del Ministerio de Educación, Cultura y Deportes (2002-2005).

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y Carmen GUTIÉRREZ

Se observó una mayor presencia de NEPs en las zonas de márgenes de

cultivo de tipo anual, aunque esta tendencia no resultó estadísticamente
significativa ni en el estudio de la abundancia ni en la frecuencia de recupe-
ración, sugiriéndose un incremento del esfuerzo de muestreo para mejorar
el análisis estadístico.
Palabras clave: Steinernema carpocapsae, Steinernema feltiae, Steiner-
nema kraussei, distribución, agricultura ecológica, España, La Rioja.

The soil ecosystem is complex with a large degree of biodiversity. Orga-

nisms interact in complex trophic webs, which depend on the productivi-
ty of natural and agricultural ecosystems. The isolation, identification and
bioecological study of some of these organisms could lead to the development
of new technologies for insect pest control. The aim of this study is to perform
basic studies to isolate native strains of entomopathogenic nematodes (EPNs)
from La Rioja, which provide a basis for the development of biocontrol agents
which are environmentally friendly. We studied the distribution, recovery
frequency and abundance of EPNs in natural habitats and crop field ed-
ges, taking into account environmental, vegetation and soil variables. Five
hundred soil samples from hundred sites were assessed for the occurrence
of EPNs using the Galleria baiting technique. Entomopathogenic nematodes
were recorded from 14% sites and 5.4% samples, and they were identified 11
Steinernema feltiae strains, 2 S. kraussei strains and 2 S. carpocapsae stra-
ins. Heterorhabditis genus was not recovered in this survey. It was observed
higher EPN occurrence in annual crops field edges, although this trend was
not statistical significant neither abundance nor recovery frequency study.
Increasing sample effort is suggested to improve the statistical analysis.
Key words: Steinernema carpocapsae, Steinernema feltiae, Steinernema
kraussei, distribution, organic agriculture, Spain, La Rioja.

0. INTRODUCCIÓN
El grave impacto ambiental y sanitario ocasionado por la utilización
indiscriminada de fitosanitarios de síntesis en la agricultura convencional
(Edwards, 1993; Georghiou, 1990; Metcalf, 1993), ha dado lugar a que la
Unión Europea trate de adaptar su producción agrícola a la de la agricultura
sostenible, cuyo objetivo es producir alimentos de calidad a un costo acep-
table para la sociedad y el medioambiente (Wijnands y Kroonen-Backbier,
1993). Este sistema de producción evita, en el caso de la agricultura ecológi-
ca, o restringe, en el caso de la producción integrada, la utilización de fito-
sanitarios, y se basa en el uso de prácticas agrícolas tales como la rotación
de cultivos, la utilización de variedades resistentes y fechas de siembra, el
empleo de fertilizantes orgánicos y residuos de restos de cosecha, el manejo
de enemigos naturales, etc., con el fin de mantener la producción, la estruc-
tura y fertilidad del suelo y controlar las plagas de insectos.
En la actualidad se están desarrollando nuevas tecnologías con gran po-
tencial para el control de insectos que se basan en la búsqueda de enemigos

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naturales como virus, bacterias, hongos y nematodos, producción masiva de

los mismos y desarrollo de formulaciones para su aplicación en campo. De
estos grupos, los nematodos entomopatógenos (NEPs) están considerados
actualmente como una de las alternativas con más futuro para el control de
insectos ya que poseen características comunes a depredadores, parasitoi-
des y patógenos (Gaugler y Kaya, 1990; Poinar, 1990). Estos organismos son
capaces de localizar activamente a su hospedador, resultan muy virulentos a
muchas especies de insectos provocando su muerte en 24-48 horas, tienen
un alto potencial reproductivo, pueden criarse masivamente in vitro, son
fáciles de aplicar y no presentan riesgos sanitarios ni medioambientales.
Los NEPs se incluyen en las familias Steinernematidae y Heterorhabdi-
tidae, que presentan una asociación simbióntica con bacterias entéricas de
los géneros Xenorhabdus y Photorhabdus, respectivamente, que les confiere
una gran virulencia frente a insectos (Boemare, 2002; Boemare et al., 1997).
Los juveniles infectivos que se corresponden al tercer estadío juvenil ( J3),
se encuentran de forma natural en el suelo. Cuando localizan a un insecto
hospedador, penetran por los orificios naturales (boca, ano y espiráculos),
hasta localizar el hemocele donde liberan la bacteria simbionte que portan
en la parte anterior del tubo digestivo. La bacteria digiere los tejidos del
insecto, se multiplica y provoca su muerte por septicemia. El nematodo se
alimenta de los tejidos degradados, completa su desarrollo y se reproduce
durante 2 o 3 generaciones dentro del hospedador en función del alimento
disponible. Los juveniles infectivos ( JIs) de la última generación vuelven a
incorporar las bacterias en su tubo digestivo y salen al exterior en busca de
un nuevo hospedador (Adams y Nguyen, 2002; Boemare, 2002).
La supervivencia, virulencia y potencial reproductivo de estos organis-
mos son características que dependen de la especie e incluso de la pobla-
ción, estando además influenciadas por las condiciones ambientales (Ehler,
1990). Por ello, el aislamiento e identificación de poblaciones autóctonas de
NEPs adaptadas a las condiciones locales es considerado una parte esencial
dentro de los estudios encaminados a su utilización como agentes de bio-
control (Bedding,1990). Además se evitarían los desequilibrios ecológicos
que pudiesen ocasionarse al introducir NEPs foráneos que podrían afectar
a otros organismos del suelo o desplazar parcial o totalmente a los NEPs
autóctonos (Bathon, 1996; Ehlers y Hokkanen, 1996; Lynch y Thomas, 2000;
Millar y Barbercheck, 2001).
Estudios recientes muestran que los NEPs tienen una distribución mun-
dial, aunque no han podido detectarse en la Antártida (Adams et al., 2006;
Griffin et al., 1990; Hominick, 2002). Las especies identificadas en España
se corresponden con Steinernema feltiae, S. carpocapsae, S. affine, S. kraus-
sei, una especie del grupo de S. glaseri y Heterorhabditis bacteriophora en
Cataluña (De Doucet y Gabarra, 1994; García del Pino y Palomo, 1996a, b;
García del Pino, 2005), S. feltiae y S. arenarium (= anomali) en Salamanca
(García del Pino, 1994; García del Pino y Palomo, 1995), y una especie del
grupo de S. bicornotum, Steinernema spp. y Heterorhabditis spp. en Cana-
rias (García del Pino, 2005; García del Pino y Palomo, 1996c; Nogueroles et

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al., 1992). Recientemente, se ha descrito el aislamiento directo de una pobla-

ción de S. feltiae a partir de una agregado de larvas de Bibio hortulanus L.
(Diptera: Bibionidae) en La Rioja (Campos-Herrera et al., 2006a). En nuestro
país, se han realizado diversos estudios sobre la utilidad de los NEPs en el
control biológico de insectos (De Doucet y Gabarra, 1994; García del Pino,
1988, 1994; García del Pino y Morton, 2005; Jiménez, 2002; Jiménez et al.,
2002; Santos Lobatón et al., 1998), su tolerancia a insecticidas (García del
Pino y Jové, 2005; Palomo y García del Pino, 2000) y su foresis mediante
lombrices de tierra (Campos-Herrera et al., 2006b). Los estudios encamina-
dos a conocer la ecología de los NEPs en España son escasos (García del
Pino y Palomo, 1996a, 1997), y sin embargo aportan una valiosa información
para estimar su eficacia como agente de biocontrol en condiciones de cam-
po, por lo que es aconsejable realizar este tipo de investigaciones cuando
se realiza el aislamiento de poblaciones autóctonas.
En La Rioja, la agricultura convencional es mayoritaria, aunque en los
últimos años se está incrementando la superficie de producción en manejo
ecológico. Por tanto, proporcionar las herramientas adecuadas para combatir
las plagas resulta determinante para su consolidación y expansión. Teniendo
en consideración la eficacia demostrada por los NEPs en el control de in-
sectos, el auge mundial de su estudio para su integración en programas de
control biológico, y dado el desconocimiento general sobre este tema en la
región, con la excepción de la publicación reciente sobre un aislamiento di-
recto (Campos-Herrera et al., 2006a), con este trabajo se pretende realizar las
investigaciones necesarias para el aislamiento, identificación y caracterización
ecológica de los NEPs de La Rioja como base para el desarrollo, producción y
formulación de nuevos bioinsecticidas adaptados a las condiciones locales.

1. MATERIAL Y MÉTODOS
1.1. Toma de muestras de suelo
Las muestras de suelo se tomaron de Marzo a Abril de 2003, ya que
García del Pino y Palomo (1997) observaron fluctuaciones en la presencia
de NEPs en Cataluña a lo largo del año y algunos autores han sugerido que
durante la primavera se registran los valores más elevados (Mrá#ek, 1980;
Puza y Mrá#ek, 2005; Rio y Cameron, 2000). Se seleccionaron 100 localida-
des distribuidas en las tres regiones bioclimáticas de La Rioja: oro-, supra- y
mesomediterránea, que incluyen 10 series de vegetación potencial (Rivas-
Martínez, 1987, Rivas-Martínez et al., 2001, 2002) y 11 tipos de suelo (Soil
Survey Staff, 1994) (Figura 1). La selección de la zona para la toma de mues-
tras dentro de cada localidad se ha realizado siguiendo las recomendaciones
de Hominick (2002). La vegetación real observada en cada localidad (prado,
matorral o bosque) se asoció a tres grupos de intensidad de manejo agríco-
la: zona natural (nula intensidad), margen de cultivo de tipo perenne (frutal,
olivo y viña) (media intensidad) y margen de cultivo de tipo anual (cereal
y hortícola) (alta intensidad). De cada localidad de muestreo se registraron
las coordenadas UTM (GARMIN® GPS 12 Personal Navigator), la altitud y el
tipo de zona (natural o margen de cultivo), determinado la temperatura y
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Figura 1. Mapas de La Rioja. A. Series de vegetación potencial: 1, Vaccinio myrtilli-Junipereto

nanae S., 2, Ilici-Fageto S., 3, Festuco heterophyllae- Querceto pyrenaicae S., 4, Luzulo forste-
ri-Querceto pyrenaicae S., 5, Junipero oxycedri-Querceto rotundifoliae S., 6, Cephalanthero
longifoliae-Querceto faginiae S., 7., Junipero thuriferae-Querceto rotundifoliae S., 8., Spiraeo
obovaeta-Quercetum rotundifoliae S., 9, Asparago acutifolii-Quercetum rotundifoliae S., 10,
Rhamno lycioidi-Querceto cocciferae S. B. Tipo de suelo: 1. Calcisol háplico, CLh, 2.Cambisol
Calcárico, CMc, 3. Cambisol Dístrico, CMd, 4. Fluvisol Calcárico, FLc, 5. Leptosol Litico, LPq,
6. Leptosol Renzico, LPk, 7. Luvisol Calcárico Crómico, LVkx, 8. Phaeozems Calcárico, PHc, 9.
Regosol Calcárico, RGc, 10. Regosol Dístrico, RGd, 11. Cambisol Húmico, Mu.

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precipitación media anual (TMA y PMA, respectivamente) según los mapas

del Gobierno de La Rioja (2001a, b). También se incluyeron las característi-
cas de vegetación potencial y real de la zona, así como el tipo de suelo (Soil
Survey Staff, 1994), de forma que se obtuviera una visión completa de las
características ambientales de cada punto en estudio (Tabla 1).
En cada una de las localidades, se establecieron 5 unidades de mues-
treo (A-E), separadas 2 m a lo largo de un transepto lineal y cada una enu-
merada de forma consecutiva de la A a la E. En cada unidad de muestreo
se tomó una muestra de suelo de aproximadamente de 1 kg, tomada a una
profundidad de 2-20 cm. Las muestras de suelo se recogieron en bolsas de
polietileno para evitar la pérdida de humedad y se llevaron al laboratorio en
contenedores aislados térmicamente. Las muestras se almacenaron en el la-
boratorio a 15 ºC hasta que fueron procesadas, no transcurriendo más de 15
días desde su llegada al laboratorio hasta que terminó su análisis. De cada
muestra de suelo se tomaron 200 g para determinar el contenido en hume-
dad, pH y el porcentaje de arena, limo y arcilla. Cada unidad de muestreo
fue tratada individualmente tanto para el aislamiento de NEPs como para el
análisis del suelo, contabilizándose un total de 500 muestras de suelo.
Tabla 1
Características ambientales de las localidades correspondientes a zonas naturales y
márgenes de cultivos en La Rioja
Serie de Número Media anual
Región Vege- Tipo de Vegeta- de loca- Altitud Tempera- Precipi-
bioclimá- tación Suelob ción realc lidades (msnm) tura del tación
tica Potenciala (réplicas) aire (ºC) (mm)
Oromedi- 1 RGd Np 2 1700-1800 5-6 1000-1100
terráneo
Suprame- 2 CMc Np 1 1000-1600 6-9 800-1000
diterráneo
CMd Nb 6
RGd
UM
3 CMc Np 1 900-1100 7-10 700-900
CMd Nm 1
UM Nb 2
Nmp 4
Nbm 2
4 CMc Np 1 700-1100 9-11 500-700
CMd Nm 2
CLh Nmp 2
PHc Nbm 5
RGd Ap 3
UM Pm 1
5 CMc Nm 1 700-1000 9-11 500-600
CMd Nmp 2

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PHc Nbm 2
Ap 1
Amp 2
Pm 1
Pmp 1
6 CMc Nm 1 600-900 9-12 400-700
LPq Nmp 2

LPk Nbm 1
LVkx Ap 5
PHc Amp 5
RGc Am 1
RGd
7 CLh Nmp 3 700-800 10-12 300-600
CMc Am 3
PHc Pp 1
RGc Pm 1
RGd Pmp 1
8 PHc Nm 1 600-700 12 400-500
Am 1
Mesome- 9 CLh Nm 1 400-700 12-13 400-500
diterráneo
FLc Ap 6
LPq Amp 3
LVkx Abm 5
PHc Pp 5
RGc Pm 2
RGd Pmp 3
10 CLh Ap 1 300-400 13 300-400
FLc Amp 2
LVkx Pp 2
RGc Pmp 1

a
Series de Vegetación potencial: 1, Vaccinio myrtilli-Junipereto nanae S., 2, Ilici-Fageto S., 3, Festuco
heterophyllae- Querceto pyrenaicae S., 4, Luzulo forsteri-Querceto pyrenaicae S., 5, Junipero oxycedri-
Querceto rotundifoliae S., 6, Cephalanthero longifoliae-Querceto faginiae S., 7., Junipero thuriferae-
Querceto rotundifoliae S., 8., Spiraeo obovaeta-Quercetum rotundifoliae S., 9, Asparago acutifolii-Quer-
cetum rotundifoliae S., 10, Rhamno lycioidi-Querceto cocciferae S.
b
Tipos de suelo: Calcisol háplico, CLh, Cambisol Calcárico, CMc, Cambisol Dístrico, CMd, Fluvisol Cal-
cárico, FLc, Leptosol Litico, LPq, Leptosol Renzico, LPk, Luvisol Calcárico Crómico, LVkx, Phaeozems
Calcárico, PHc, Regosol Calcárico, RGc, Regosol Dístrico, RGd, Cambisol Húmico, CMu.
c
Tipos de vegetación real según el código según su naturaleza: área natural, N, margen de cultivo anual,
A, margen de cultivo perenne, P; y según la estructura de la vegetación, prado, p, matorral, m y bosque,
b.

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1.2. Aislamiento de las poblaciones de nematodos entomopató-

genos
El aislamiento de NEPs se realizó mediante el método de la “Trampa
de Galleria” (Bedding y Akhurst, 1975). Para ello, las muestras de suelo se
dejaron a temperatura ambiente durante 24 h y se homogeneizaron antes
del análisis. De cada muestra de suelo, se prepararon tres réplicas dispo-
niéndolas en placas de Petri de 9 cm de diámetro (Stuart y Gaugler, 1994).
La humedad fue corregida, en los casos en los que fue necesario añadiendo
agua mQ (Milli-Q Water System, Millipore S.A. Molsheim, France). En la
superficie de cada placa se depositaron diez larvas de último estadío de
Galleria mellonella L. (Lepidoptera: Pyralidae). Las placas se cerraron y se
incubaron invertidas en cámara de ambiente controlado a 24 ± 1 ºC, 55%
de humedad y sin fotoperiodo durante 6 días. Transcurrido ese periodo, las
larvas encontradas muertas fueron lavadas y depositadas individualmente
en placas de Petri de 5 cm de diámetro con papel de filtro húmedo sobre
un soporte que le permita estar en contacto con una película de agua mQ
depositada en la base de la placa, de forma que los JIs que salgan del cadá-
ver se desplacen activamente hasta el agua (White, 1927). En caso de que
los resultados del aislamiento fueran negativos, el ensayo se repitió una vez
más extrayendo otras tres réplicas de la muestra de suelo para confirmar
los resultados (Hominick, 2002). Los JIs que emergieron del cadáver, fueron
multiplicados en nuevas larvas de G. mellonella para producir nematodos su-
ficientes para su identificación y mantenimiento en el laboratorio, utilizando
la técnica de producción in vivo de Woodrig y Kaya (1988) modificada. Para
ello, se depositan 5 larvas de último estadío de G. mellonella en placas de
Petri de 5 cm de diámetro, forradas ambas partes con discos de papel de fil-
tro a los que se les añaden 300 µl de una suspensión de 6.542 JIs/ml del ais-
lado que se desea multiplicar, de forma que se obtenga una concentración
de 100 JIs/cm2. En todos los casos, siempre se realizaron dos inoculaciones
por cada población de NEPs para evitar la pérdida de la población. Las pla-
cas se etiquetan con la fecha en la que se produce la muerte de las larvas
durante el aislamiento, la población de NEPs que contienen y se incuban en
las condiciones señaladas anteriormente. A los 2-3 días se extraen las larvas
muertas y se lavan en agua destilada. Los JIs son recolectados mediante el
método de White (1927), descrito anteriormente.

1.3. Distribución de los nematodos entomopatógenos de La Rioja

La presencia de NEPs en la Rioja se analizó en función del tipo de
vegetación real asociada en cada localidad: áreas naturales (nº de locali-
dades = 43) y márgenes de cultivos (nº = 57), de los cuales se estudiaron
38 correspondientes a cultivos anuales (cereal y hortícola) y 19 a cultivos
perennes (frutal, olivo y viña) que conforman tres unidades experimentales
que definen distintos grados de presión antrópica. Se valoró la frecuencia
de recuperación (nº muestras positivas/nº muestras totales) y la abundan-
cia (nº localidades positivas/nº localidades totales) (Liu y Berry, 1995). El
estudio de las diferencias estadísticas en la frecuencia de recuperación y la

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NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA RIOJA

abundancia de los NEPs en los tres hábitat considerados (natural, margen

de cultivos anuales y margen de cultivos perennes) se realizó mediante una
prueba de Chi-cuadrado de Pearson a un nivel de significación de p ≤ 0,05,
utilizando el programa estadístico SPSS (SPSS, 2003). La distribución espacial
de los NEPs en cada uno de los transeptos que resultaron positivos para su
presencia se analizó mediante un estudio cuantitativo, en el que se evaluó
el porcentaje de mortalidad larval de G. mellonella medio en cada una de
las muestras del transepto, calculando los valores descriptivos (media y
desviación típica) de las tres réplicas estudiadas. Además, se calculó dicho
valor para cada unidad experimental (zona natural, margen de cultivo anual
y margen de cultivo perenne).

1.4. Identificación de los nematodos entomopatógenos

Para la determinación taxonómica de NEPs se observaron los machos
de la primera generación (MPG), que fueron obtenidos a partir de disección
de larvas de G. mellonella tras 3-4 días de su exposición a los JIs, así como
los JIs (Adams y Nguyen, 2002; Hominick et al., 1997; Stock et al., 2000).
De forma excepcional, se han realizado preparaciones de algunas hembras
para verificar los caracteres que en ocasiones son requeridos en las claves
dicotómicas o que pueden proporcionar más información cuando la identi-
ficación es dificultosa. Los nematodos fueron fijados y procesados siguiendo
la metodología propuesta por Gómez et al. (2004) y Steinhorst (1966). Se
realizó la observación y biometría de un total de 25 M1G y 25 JIs, así como
algunas H1G, en cada población de referencia, utilizando un microscopio
óptico Leica DML provisto con interferencia diferencial y cámara clara (Nor-
marsky, 1955). Las medidas realizadas para el estudio de los machos y de
los juveniles se muestran en la Tabla 4. También se han realizado fotografías
con el microscopio óptico de aquellas regiones más relevantes en el estudio
de los M1G, H1G y de los JIs.
El estudio de los detalles de la morfología de la región caudal de los
M1G, como la presencia y disposición de las papilas genitales, y el recuento
de las bandas laterales de los juveniles se realizó mediante la observación
de los ejemplares en un microscopio electrónico de barrido. Los ejemplares
a estudiar se mantienen en fijador I hasta el momento de su estudio, en el
que se preparan in situ, mediante su congelación con nitrógeno líquido
(Crio-SEM) sin ningún tratamiento físico-químico previo (Robards y Wilson,
1993). Para su observación se siguió el protocolo descrito por Aballe et al.
(1996) utilizando un microscopio electrónico de barrido marca Zeiss DSM
960, equipado con Crio-SEM modelo Crio CT 1500 Oxford G, a 5-10 kV.

1.5. Tendencias ecológicas de los nematodos entomopatógenos

en La Rioja
Se determinaron las condiciones ambientales y físico químicas del sue-
lo en donde fueron aisladas las poblaciones de NEPs autóctonas de La Rioja.
Las tendencias ecológicas de estos organismos en La Rioja se determinaron
a partir de la evaluación de la relación entre las variables ambientales y

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físico-químicas del suelo con las especies de NEPs encontradas mediante

un análisis multivariante CAPTA (del inglés, Categorical Principal Compo-
nents Analysis, análisis de componentes principales para datos categóricos).
El análisis aporta valores de correlación entre las variables en estudio de
forma que cuanto más se aproxime este valor a 1 en valor absoluto, mayor
es la relación entre ambas variables, de forma positiva o negativa. El análisis
estadístico de los resultados fue realizado mediante el programa estadístico
SPSS (SPSS, 2003).

2. RESULTADOS

2.1. Distribución de los nematodos entomopatógenos de La Rioja

Se aislaron NEPs en un 14% de las localidades muestreadas y en un
5,4% de las muestras estudiadas. La situación de las localidades positivas se
muestran en la Figura 2 y la caracterización ambiental y físico-química de
cada localidad positiva se muestra en la Tabla 2. Se han aislado NEPs en
muestras de suelo de diferentes localidades, registrándose la presencia de

Figura 2. Mapa de la distribución de los puntos de muestreo, indicando mediante símbolos la

presencia (•) o ausencia (o) de nematodos entomopatógenos. Los números se corresponden
con el código establecido para la localidad de muestreo, mostrándose únicamente aquellas
localidades que fueron positivas para la presencia de NEPs, que a su vez coinciden con los
valores presentados en la Tabla 2. Este número se mantuvo como código de identificación de
las poblaciones de NEPs obtenidas.

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 Tabla 2
Localización y caracterización ambiental y físico-química de las localidades con nematodos entomopatógenos.
Características ambientales Características físico-químicas
UTM
Codigoa Localidad Vegeta- Vege-
Altitud PMA Tipo de % Hume-
(Zona 30T) TMA (°C) ción Po- tación pH % Arena % Limo % Arcilla
(msnm) (mm) Sueloc dad
tencialb reald

Zubía
x: 0585610
17 Yerga 494 10 500 5 8 Pp 17 7,7 49 40 11
y: 4670438
x: 0567712
23 Préjamo 699 10 500 9 1 Pp 9,6 7,9 70 18 12
y: 4671463

ISSN 0213-4306
Ruedas de x: 0564669
37 812 12 400 4 10 Nbm 21 5,3 55 36 9
Ocón y: 4683256
x: 0564420
38 Pipaona 695 12 400 9 1 Abm 20,4 5,7 54 33 13
y: 4684873
Viniegra de x: 0516579
58 1569 6 1000 2 2 Nb 38,9 7,9 40 43 17
Arriba y: 4660706

núm. 23-24 (2005-2006), pp. 27-58

X: 0509965
63 Villarejo 785 10 600 4 11 Ab 20,6 8,3 40 45 15
y: 4693638
x: 0500564
66 Valdezcaray 1754 5 1100 1 10 Np 35,2 6,6 53 44 3
y: 4678707
x: 0522823
75 Camprovín 686 11 500 7 1 Pp 9,7 7,8 52 37 11
y: 4689688
x: 0506143
88 Pazuengos 1115 9 700 4 3 Nm 29,6 4,9 55 36 9
y: 4686463
x: 0504908 y:
89 Santurdejo 916 9 700 3 3 Nbp 42,8 6,0 43 52 5
4689665
Santo x: 0503815
91 639 11 500 6 9 Ap 7,1 7,1 58 37 5
Domingo y: 4699437
x: 0500764
96 Ochánduri 602 11 400 6 8 Ap 11,9 7,6 26 44 30
y: 4707432
x: 0498205
98 Grañón 677 11 500 6 2 Ap 14,9 7,9 27 41 32
y: 4701270
Santo x: 0504346
100 651 11 500 6 10 Amp 13,5 6,5 37 45 18
Domingo y: 4698908

a: nº de localidad en el muestreo, cuya situación se corresponde con la Figura 2.

b: nº correspondientes con la leyenda de la figura 1.A.
c: nº correspondientes a la leyenda de la figura 1.B.
NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA RIOJA
AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN ECOLÓGICA DE

d: Tipo de vegetación real según su naturaleza: área natural, N; margen de cultivo anual, A; margen de cultivo perenne, P y según la estructura de la vegetación, prado, p; matorral, m y bosque, b.

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y Carmen GUTIÉRREZ

NEPs en las tres regiones bioclimáticas estudiadas (oro-, supra- y mesome-

diterráneas), aunque de forma mayoritaria en la región mesomediterrénea,
probablemente debido a su mayor extensión con relación a las otras dos
regiones. De las localidades positivas para la presencia de NEPs, el 35,7%
corresponden a zonas naturales (prado, matorral y bosque), el 42,9% a zo-
nas de márgenes agrícolas de cultivos anuales (prado, matorral y bosque) y
un 21,4% a márgenes de cultivos perennes (prado). En cuanto a las muestras
positivas, el 44,4% del total lo fueron tanto para las zonas naturales como
en los márgenes de cultivos anuales, mientras que sólo un 11,2% lo fueron
para los márgenes de cultivos perennes.
Los resultados de la abundancia y la frecuencia de recuperación en fun-
ción del número de localidades muestreadas para cada tipo de hábitat, se
muestran en la Tabla 3. Se observó que, en el caso de la abundancia, tanto
los márgenes de cultivos anuales como los de cultivo perenne, alcanzan un
valor de 0,158, superior al estimado para las zonas naturales, que fue de
0,116. Sin embargo, no existieron diferencias estadísticamente significativas
entre la abundancia de los tres tipos de hábitat (Chi2-Pearson = 0,353; gl =
2; p = 0,868). En el caso de la frecuencia de recuperación, el mayor valor
fue registrado en los márgenes de cultivos anuales (0,063), seguido de las
zonas naturales (0,056) y por último por los márgenes de cultivos perennes
(0,032), aunque las diferencias entre los tipos de hábitat tampoco fueron
estadísticamente significativas (Chi2-Pearson = 1,261; gl = 2; p = 0,556).
Tabla 3
Abundancia y frecuencia de recuperación de nematodos entomopatógenos en diferen-
tes tipos de hábitat de La Rioja.
Localidades Muestras Frecuencia Re-
Hábitat Abundanciaa cuperaciónb
Total Positivos Total Positivas
Natural 43 5 0,116 215 12 0,056
Margen 38 6 0,158 190 12 0,063
Anual
Margen 19 3 0,158 95 3 0,032
Perenne
a: nº localidades positivas /nº localidades totales
b: nº muestras positivas/nº muestras totales

La distribución espacial de los NEPs en el suelo presentó una gran

heterogeneidad en los tres tipos de hábitat estudiados. Las localidades co-
rrespondientes para la zona natural fueron las codificadas como 37, 58, 66,
88 y 89. El porcentaje de mortalidad larval medio para la zona natural fue
de 3,2 ± 2,68%, registrándose el mayor porcentaje de mortalidad larval en
la muestra 88C (16,7± 15,30%). Las localidades positivas para el margen de
tipo perenne fueron la 17, 23 y 75. El porcentaje de mortalidad medio para
este tipo de zona fue de 2,2 ± 1,02% y el mayor valor de porcentaje de mor-
talidad larval fue registrado en la muestra 75C (16,7± 28,90%). Por último,
las localidades positivas para el margen de cultivo de tipo anual fueron las
codificadas como 38, 63, 91, 96, 98 y 100. El porcentaje de mortalidad larval
medio fue de 10,4 ± 15,90% y el mayor valor de porcentaje de mortalidad
larval fue registrado en la muestra 96C (96,3 ± 6,40%).

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NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA RIOJA

2.2. Identificación de las poblaciones de nematodos entomopa-

tógenos
Se han aislado un total de 27 muestras positivas para NEPs y se han
identificando 20 de ellas a nivel específico (74,1%). La identificación del
resto no fue posible debido a que los aislados no se pudieron mantener en
condiciones de laboratorio para obtener el material suficiente para proceder
a su identificación morfológica, aunque fue posible la observación de M1G
y H1G en el interior de las larvas de G. mellonella parasitadas por los NEPs
no identificados y la emergencia de JIs del cuerpo del cadáver. Basándose
en las características morfológicas y morfométricas estudiadas en el mi-
croscopio óptico y el microscopio electrónico de barrido, se identificaron
11 muestras correspondientes a S. feltiae (Filipjev) Wouts, Mrá#ek, Gerdin
and Bedding, 1982 (Figura 3 y Figura 6.A, B), 2 muestras correspondientes
a S. kraussei (Steiner) Travassos 1927 (Figura 4 y Figura 6.C, D) y 7 mues-
tras correspondientes a S. carpocapsae (Weiser) Wouts, Mrá#ek, Gerdin and
Bedding, 1982 (Figura 5 y Figura 6.E, F). Para establecer el número de
poblaciones autóctonas de las especies de NEPs aisladas en La Rioja, se
determinó que en aquellas localidades en las que varias muestras fueron
positivas para la misma especie, se consideró que se trataba de la misma
población, más ampliamente distribuida. Por lo tanto, el número total de
poblaciones autóctonas obtenidas a partir del estudio de NEPs en esta re-
gión fue de 15, correspondientes a 11 de S. feltiae, 2 de S. carpopcasae y 2
de S. kraussei.
En la Tabla 4 se presentan los valores correspondientes a la morfome-
tría característica de cada especie obtenidos a partir de las poblaciones estu-
diadas, tomando en consideración una población de referencia por especie:
la 63 para S. feltiae, la 58C para S. kraussei y la 96 para S. carpocapsae. Los
JIs de las especies S. feltiae y S. kraussei poseen una morfología y morfo-
metría similar. Sin embargo, S. feltiae se caracteriza por presentar los JIs una
longitud del cuerpo ligeramente menor y ocho bandas laterales en la región
media ventral (Figura 6.B). Los MPGs presentan mayor longitud total del
cuerpo, una espícula alargada y de gran tamaño (75 µm) y un mucrón pro-
minente (Figura 3.C). La longitud total del cuerpo de los JIs de S. kraussei
es ligeramente superior a los de S. feltiae y presentan ocho bandas laterales,
aunque en la Figura 6.D sólo son visibles las cuatro bandas impares debido
a que éstas están replegadas sobre las pares. Los MPGs de S. kraussei son
más pequeños que los machos de S. feltiae, siendo además la forma de la
espícula diferente, menor su longitud (57 µm), por lo que el valor del índice
SW en S. kraussei (1,56) es menor que el obtenido para S. feltiae (1,91). Sin
embargo, el mucrón es ligeramente inferior que el de S. feltiae (Figura 4.C).
La vulva de las hembras de S. kraussei presenta la particularidad de que uno
de los labios está cabalgando ligeramente sobre el otro (Figura 4.E). Los JIs
de S. carpocapsae se caracterizan por ser de pequeño tamaño y presentan
seis bandas laterales (Figura 6.F). Los MPGs tienen un tamaño similar a los
de S. kraussei con un mucrón poco apreciable y una espícula de tamaño
intermedio (Figura 5.C).

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Figura 3. Morfología de Steinernema feltiae vista al microscopio óptico. A, D: Región anterior y caudal
del juvenil infectivo. B, C: Región anterior y caudal del macho de primera generación. E: región vulvar
de la hembra. F: Región caudal de la hembra (1.000x)

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NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA RIOJA

Figura 4. Morfología de Steinernema kraussei vista al microscopio óptico. A, D: Región anterior

y caudal del juvenil infectivo. B, C: Región anterior y caudal del macho de primera generación.
E: región vulvar de la hembra. F: Región caudal de la hembra (1.000x).

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Figura 5. Morfología de Steinernema carpocapsae vista al microscopio óptico. A, D: Región

anterior y caudal del juvenil infectivo. B, C: Región anterior y caudal del macho de primera
generación. E: región vulvar de la hembra. F: Región caudal de la hembra (1.000x).

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NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA RIOJA

Figura 6. Morfología de los nematodos entomopatógenos vista en el microscopio electrónico

de barrido. A. Parte posterior de un macho de primera generación de S. feltiae. B. Bandas late-
rales de un juvenil infectivo de S. feltiae. C. Parte posterior de un macho de primera generación
de S. kraussei. D. Bandas laterales de un juvenil infectivo de S. kraussei. E. Parte posterior de
un macho de primera generación de S. carpocapsae. F. Bandas laterales de un juvenil infectivo
de S. carpocapsae.

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Tabla 4
Medidas en μ m e índices de los JIs y los M1G de una población de referencia de las tres
especies de NEPs aisladas en La Rioja. Valores medios ± la desviación típica (rango)
Población 63 Población 58C Población 96
Medidas/ S. feltiae S. kraussei S. carpocapsae
índicesa
JIs M1G JIs M1G JIs M1G
L 776 ± 65,2 1508 ± 140,6 849 ± 44,3 1398 ± 202,9 501 ± 24,4 1388 ± 324,8
(684-922) (1243-1776) (770-918) (1101-1666) (474-548) (853-1882)
A 30 ± 2,5 118 ± 17,6 33 ± 1,6 125 ± 17,7 22 ± 2,7 124 ± 44,0
(25-35) (85-150) (29-35) (101-145) (18-27) (64-189)
ES 104 ± 11,7 148 ± 9,2 116 ± 8,2 152 ± 14,0 95 ± 7,1 153 ± 10,3
(86-131) (125-163) (103-131) (133-168) (83-104) (136-171)
AN 74 ± 8,6 85 ± 7,2 62 ± 6,9
(58-89) (74-99) (50-76)
PE 62 ± 7,9 97 ± 6,6 56 ± 5,6 85 ± 7,8 42 ± 7,6 71 ± 12,7
(45-75) (82-109) (52-68) (75-94) (31-56) (48-97)
C 74 ± 6,3 87 ± 5,7 54 ± 4,5
(61-86) (76-97) (47-66)
LE 75 ± 5,5 57 ± 3,4 66 ± 5,9
(66-85) (52-60) (58-73)
LG 47 ± 4,0 34 ± 4,0 40 ± 3,3
(40-52) (30-37) (36-47)
ACA 39 ± 4,2 38 ± 6,3 39 ± 4,4
(31-47) (25-45) (32-46)
a 26 ± 2,8 13 ± 2,0 26 ± 1,7 11 ± 1,1 23 ± 2,6 12 ± 2,5
(22-33) (10-17) (21-28) (9-13) (18-28) (10-19)
B 7,4 ± 0,82 10,2 ± 0,80 7,3 ± 0,50 9,5 ± 0,99 5,4 ± 0,49 9,2 ± 1,44
(5,9-9,2) (8,3-12,1) (5,3-8,3) (8,1-11,2) (4,8-6,6) (7,1-11,6)
C 10,7 ± 0,89 9,9 ± 0,71 9,5 ± 0,82
(8,8-12,6) (8,5-11,2) (8,0-11,1)
D 61 ± 8,0 66 ± 5,3 48 ± 5,2 58 ± 2,1 44 ± 8,3 47 ± 7,9
(50-74) (55-75) (41-59) (54-60) (30-57) (35-66)
E 81 ± 10,8 63 ± 6,9 77 ± 13,7
(62-96) (53-78) (63-105)
GS 0,63 ± 0,06 0,60 ± 0,09 0,62 ± 0,09
(0,52-0,74) (0,50-0,74) (0,50-0,89)
SW 1,91 ± 0,27 1,56 ± 0,22 1,70 ± 0,23
(1,41-2,39) (1,33-2,06) (1,41-2,27)

a: Medidas: L, longitud total del cuerpo, A, anchura total del cuerpo, PE, distancia del extremo anterior
al poro excretor, AN, distancia del extremo anterior al anillo nervioso, ES, longitud del esófago, LE, largo
de la espícula, LG, largo del gubernáculo, ACA, anchura de la cola al nivel del ano. Índices: a (L/A),
b (L/ES), c (PE/ES), D% (PE/ES x 100), E% (PE/C x 100), GS (LG/LE), SW (LE/ACA). MUC, mucrón, P,
presente, n = 25.

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NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA RIOJA

2.3. Tendencias ecológicas de los nematodos entomopatógenos

en La Rioja
Las características ecológicas asociadas a cada especie se muestran en
la Tabla 5. La especie de mayor distribución fue S. feltiae, que representa
el 73,4 % de las poblaciones identificadas (n = 11), y se aisló en 11 de las
localidades muestreadas y 11 muestras de suelo. La especie S. carpocapsae
representa un 13,3% de las poblaciones de NEPs identificadas (n = 2), y se
aisló en 7 muestras de suelo de 2 localidades, por lo que se consideró que
las dos poblaciones aisladas presentaron una distribución más amplia en
cada localidad de muestreo. Por último, S. kraussei también representa un
13,3% de las poblaciones identificadas (n = 2), localizándose en 2 localida-
des y 2 muestras de suelo.
Tabla 5.
Rango de valores de las características ambientales y físico-químicas asociados a cada
especie de NEPs

S. feltiae S. kraussei S. carpocapsae

Variables ambientales
Altitud (msnm) 494-1754 1115-1569 602-677
TMA (ºC) 5-12 6-9 11
PMA (ºC) 400-1100 700-1000 400-500
Vegetación Potenciala 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 2, 4 6
Tipo de suelob 1, 2, 3, 8, 9, 10, 11 2, 3 2, 8
Nb, Nbm, Nm, Np, Pp,
Vegetación realc Nb, Nm Ap
Ab, Abm, Amp, Ap
Variables físico-químicas
% Humedad 7,1-38,9 29,6-38,9 11,9-14,9
pH 4,9-8,3 4,9-7,9 7,6-7,9
% Arena 37-70 40-55 26-27
% Limo 18-45 36-43 41-44
% Arcilla 3-18 9-17 30-32

a
: nº correspondientes a la leyenda de la figura 1.A.
b
: nº correspondiente a la leyenda de la figura 1.B.
c
: Tipo de vegetación real según su naturaleza: área natural, N; margen de cultivo anual, A; margen de
cultivo perenne, P y según la estructura de la vegetación, prado, p; matorral, m y bosque, b.

Como se aprecia en la Tabla 5, la especie S. feltiae presenta un amplio rango

de distribución ecológica, ya que aparece tanto en zonas de altitud media
como alta, con temperaturas y precipitaciones medias anuales que oscilan
de 5 a 12 ºC y de 400 a 1100 mm, respectivamente. Se encuentra dentro de
7 tipos de suelos diferentes y de 7 series de vegetación potencial. Además,
se ha aislado en los tres tipos de hábitat (natural, margen de cultivo anual y
margen de cultivo perenne). En cuanto a las características físico-químicas
del suelo cabe decir que también presentan un amplio rango de valores ya
que se encuentra tanto en suelos secos como muy húmedos, de pH ácido y
básico, y con porcentajes de arena, limo y arcilla muy variados.

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La especie S. kraussei se ha aislado en localidades de elevada altitud,

asociada, por tanto, a zonas frías y húmedas, siendo el tipo de vegetación
potencial más restringida, así como el tipo de suelo. En general, el porcen-
taje de humedad resultó elevado, aunque el rango de pH osciló de ácido a
ligeramente básico y el porcentaje de arena, limo y arcilla fue poco homo-
géneo.
La especie S. carpocapsae se ha aislado en localidades de caracterís-
ticas ecológicas más homogéneas. Las variables ambientales asociadas se
corresponden con zonas de altitud media (unos 600 m), de temperatura y
precipitación media anual semejante, lo que implica su asociación a una
única serie de vegetación potencial, aunque están presentes en dos tipos de
suelos diferentes. El hábitat asociado ha sido el margen de cultivos anuales,
con una humedad relativamente baja, un pH básico no muy acentuado y un
porcentaje de arcilla elevado.
Por último, el análisis de la asociación de las variables ambientales y
físico-químicas con las especies define la afinidad de cada una de ellas con
dichas variables, lo que permite conocer las tendencias ecologicas de estas
especies en La Rioja (Figura 7). El estudio realizado para las variables am-
bientales incluyó los valores de altitud, temperatura (TMA) y precipitación
media anual (PMA), tipo de vegetación potencial, tipo de vegetación real
y tipo de suelo asociadas a cada especie aislada en La Rioja (Figura 7.A).
El modelo explica el 70,33% de la varianza, de forma que la dimensión I
resume el 48,57% y la dimensión II, el 21,76%. Se observó que la especie
S. feltiae no estuvo asociada a ninguna de las variables en estudio, ya que
los valores de correlación obtenidos fueron muy bajos (raltitud = 0,016, rTMA =
0,103, rPMA = -0,077, r Veg potencial = 0,108, r Veg real = 0,000 y r SueloO = 0,237). Como
ya se había indicado en la descripción ecológica de las poblaciones riojanas,
esta especie fue aislada en localidades muy diferentes entre sí, lo que denota
su gran adaptabilidad al medio. Las poblaciones riojanas de S. carpocapsae
se aislaron en lugares no muy elevados, con temperaturas suaves y no muy
húmedas (raltitud = -0,422, r TMA= 0,269, rPMA = -0,327). Así mismo, existe una
correlación positiva con la variable tipo de vegetación potencial (r = 0,207)
y con el tipo de vegetación real (r = 0,439) lo que indica su asociación con
las series supramediterránea de zonas con influencia agrícola. Por último,
la especie S. kraussei presentó los valores de correlación más elevados con
respecto a las variables ambientales en estudio, mostrando una asociación
con lugares de cierta altitud (r = 0,402), de temperaturas más bien frescas
(r = -0,403) y con una mayor precipitación (r = 0,428). Su asociación con el
tipo de suelo, vegetación potencial y vegetación real (rsuelo = -0,203, r Veg poten-
cial
= -0,347, r Veg real = -0,439, respectivamente) indica una alta relación con la
vegetación supramediterráneas, suelos de tipo Cambisol y zonas naturales.
El análisis CAPTA realizado para las variables físico-químicas del suelo
a partir del cual se aislaron las poblaciones riojanas incluyó los valores co-
rrespondientes al porcentaje de humedad del suelo, el pH, y el porcentaje
de arena, limo y arcilla (Figura 7.B). El modelo explica sólo el 65,83% de
la varianza, de forma que la dimensión I resume el 42,92% y la dimensión

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Figura 7. Diagrama de dispersión biespacial para las especies riojanas de NEPs. A. Asociación con las variables ambientales: altitud, temperatura (TMA) y
precipitación media anual (PMA), tipo de suelo (Suelo), vegetación potencial (Veg potencial), vegetación real (Veg real). B. Asociación con parámetros físico-
químicos del suelo: % Humedad, pH y porcentaje de arena, limo y arcilla.
NEMATODOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA RIOJA
AISLAMIENTO, IDENTIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN ECOLÓGICA DE

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y Carmen GUTIÉRREZ

II, el 22,93%, por lo que el ajuste del modelo fue inferior que en el caso
del estudio de las variables ambientales. La especie S. feltiae no presentó
valores de correlación muy elevados con las variables estudiadas, debido a
que fue aislada en lugares muy heterogéneos. La presencia de esta especie
parece ser independiente del pH (r = -0,093) y del porcentaje de humedad
(r = -0,129), ya que como se señaló anteriormente, esta especie fue aislada
en suelos tanto ácidos como básicos así como en suelos secos y húmedos.
Sin embargo, se observó una ligera asociación a suelos con elevado por-
centaje de arena (r = 0,428) y baja proporción de arcilla (r = -0,485), siendo
muy baja la asociación con el contenido en limo (r = -0,174). La especie S.
carpocapsae presentó una ligera asociación con el pH (r = 0,230) y con el
porcentaje de humedad (r = -0,269). Sin embargo, se observó la tendencia a
ser aislada en suelos con bajo contenido en arena (r = -0,604) y elevado por-
centaje de arcilla (r = 0,644), siendo el contenido en limo poco determinan-
tes (r = 0,267). Por último, los resultados para la especie S. kraussei fueron
en general bajos, tanto para el pH (r = -0,110), como para los porcentajes de
arena (r = 0,048), limo (r = -0,041) y arcilla (r = -0,013), por lo que en prin-
cipio la textura del suelo y su acidez o alcalinidad no estarían restringiendo
su presencia. Sin embargo, obtuvo un valor de correlación bastante elevado
respecto a la variable porcentaje de humedad de la muestra de suelo (r =
0,437), mostrando su tendencia a asociarse a lugares con mayor humedad.

3. DISCUSIÓN
El estudio de distribución de NEPs realizado en La Rioja evaluó su
presencia en tres tipos de hábitat diferentes: natural, márgenes de cultivos
anuales y márgenes de cultivos perennes, abarcando la variabilidad eda-
foecológica de esta región en función de las series de vegetación potencial
y los tipos de suelo. Se obtuvo un 5,4% de muestras positivas, resultado que
está dentro del rango obtenido en otros países de clima mediterráneo como
Grecia (5%, Menti et al., 1997) e Italia (5%, Ehlers et al., 1991; 14%, Tarasco
y Triggiani, 1997), así como en otras regiones bioclimáticas como las islas
Azores (4%, Rosa et al., 2000), Hawaii (7%, Hara et al., 1991), Irlanda (11%,
Griffin et al., 1991) y Japón (10%, Yoshida et al., 1998). Los resultados pre-
vios registrados en España son variables, oscilando de un 3% (De Doucet
y Gabarra, 1994) al 11,9% (García del Pino, 1994), mientras que en Galicia
se registró un 26%, en Mallorca un 6,5% y en las Islas Canarias osciló entre
un 0,66 y un 11% (García del Pino, 2005) de muestras positivas. Esta varia-
bilidad en la presencia de NEPs se puede atribuir a la propia tendencia de
agregación o distribución en parches de estos organismos en el suelo (Stuart
y Gaugler, 1994), la formación de agregados de los insecto que parasitan
estos nematodos (Mrá#ek y Becvar, 2000), o al esfuerzo de muestreo o el
método de aislamiento de los NEPs (Hominick, 2002).
Diversos estudios sobre la preferencia de hábitat de los NEPs indican
que está relacionada con la densidad de población de sus posibles insectos
hospedadores, las condiciones del suelo y con el equilibrio dinámico de la
relación hospedador-parásito (Barberchek, 1992; Mrá#ek et al, 2005; Nielsen

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y Philipsen, 2003; Peters, 1996; Puza y Mrá#ek, 2005). En este trabajo se ha

evaluado la presencia de estos nematodos en función del hábitat (natural,
margen de cultivos anuales y margen de cultivos perennes). Se ha observa-
do que la abundancia y frecuencia de recuperación de estos organismos en
los márgenes de cultivo anuales fue mayor que en las áreas naturales, aun-
que las diferencias no fueron estadísticamente significativas. Esta tendencia
podría explicarse sobre la base de que las zonas naturales proporcionan un
hábitat muy estable donde puede desarrollarse una relación hospedador-pa-
rásito equilibrada, con un nivel de población de insectos regulado por dicho
equilibrio, mientras que en las zonas de cultivo con un laboreo del suelo
muy intenso, como el caso de zonas con producción de dos cultivos anua-
les, no se pueden mantener de forma continua las poblaciones de insectos
susceptibles de ser parasitados por NEPs, originando que los insectos super-
vivientes pasan a refugiarse en los márgenes próximos al campo de cultivo,
permitiendo así un aporte de hospedadores más intenso y masivo que pro-
piciaría la explosión poblacional de los NEPs. En los cultivos perennes, don-
de el laboreo es menos intenso, los insectos pueden refugiarse en el propio
cultivo (vid, olivo, frutal), por lo que los márgenes pueden recibir un aporte
de insectos menos intenso. Sin embargo, es posible que este fenómeno no
se esté produciendo con la suficiente intensidad como para ser detectado
con las pruebas estadísticas realizadas en este estudio. Además, debido a la
baja probabilidad de aislar NEPs en muestras de suelo, para comprobar esta
hipótesis sería necesario aumentar el número de localidades de muestreo e
incluir además en el estudio los cultivos asociados a dichos márgenes para
aportar más datos al análisis estadístico. Además, tal y como propone Puza
y Mrá#ek (2005), se debería tener en cuenta la entomofauna asociada con el
fin de detectar especies de insectos que puedan actuar como hospedadores
de NEPs, tanto en la parcela del cultivo como en el margen.
El análisis del porcentaje de mortalidad larval de G. mellonella mostró
que a lo largo del transepto lineal estudiado existió una gran variación, y en
la mayor parte de los casos sólo una de las muestras resultó positiva. Estos
datos concuerdan con el comportamiento descrito para estos nematodos en
el campo (Campbell et al., 1998; Stuart y Gaugler, 1994), que se distribuyen
en agregados, lo que produce estos resultados tan variables. El valor medio
de porcentaje de mortalidad larval de G. mellonella en el margen de cultivo
anual fue muy superior al observado tanto en las zonas naturales como en
el margen de tipo perenne, lo que reforzaría de forma cuantitativa la hipó-
tesis anteriormente mencionada sobre la presión antrópica y la presencia
de NEPs. Sin embargo, la distribución en agregados de estos organismos
impide la realización de estudios estadísticos satisfactorios debido a la gran
variabilidad de los datos obtenidos, por lo que de nuevo se recomienda un
estudio más amplio.
En este estudio sólo se han aislado, en las 14 localidades positivas,
nematodos del género Steinernema resultando ausente el género Heteror-
habditis, que presenta un menor número de especies (Stock y Reid, 2004)
pero tiene mayor diversidad a nivel intraespecífico (Hominick, 2002). Su

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baja proporción respecto a la presencia de steinernemátidos se ha obser-

vado en muchos trabajos, tanto del ámbito mediterráneo como de otras
zonas bioclimáticas: 1,3% de Heterohabditis vs 22,0% de Steinernema en
Cataluña (García del Pino y Palomo, 1996a), 5,3% de Heterohabditis vs 8,5%
de Steinernema en Italia (Tarasco y Triggiani, 1997), 9,0% de Heterohabditis
vs 23,0% de Steinernema, en California, USA (Stock et al., 1999) y 0,2-1,3%
de Heterohabditis vs 49,0-37,0% de Steinernema en Japón (Yoshida et al.,
1998). La baja presencia del género Heterorhabditis en los suelos podría ser
una explicación para los resultados obtenidos en este estudio, donde sólo se
aislaron NEPs de 5,4% de las muestras, aunque también se podría explicar
en base a la preferencia de hábitat descrito para las especies de este género,
asociadas en su mayoría a zonas costeras y arenosas (Griffin et al., 1999; Liu
y Berry, 1995; Rosa et al., 2000). No obstante, este hecho no implica necesa-
riamente que no exista dicho género en esta región. Futuras investigaciones
que incluyan una mayor proporción de suelos arenosos, podrían confirmar
esta hipótesis.
Las especies identificadas fueron S. feltiae, S. kraussei y S. carpocap-
sae, caracterizadas por su amplia distribución mundial (Hominick, 2002).
La morfometría y morfología características de las mismas están dentro del
rango de las especies de referencia descritas por Adams y Nguyen (2002).
En las poblaciones de S. feltiae se han observado ligeras diferencias en la
longitud total del cuerpo, que influyen en las medidas relativas al esófago,
anillo nervioso, poro excretor y cola. Sin embargo, este tipo de variaciones
morfológicas también han sido descritas en poblaciones de diferentes regio-
nes bioclimáticas e incluso entre poblaciones aisladas en diferentes tipos de
hábitat de una misma región (Poinar, 1992; Stock et al., 2000), por lo que
se puede atribuir estas diferencias dentro de las poblaciones riojanas a su
heterogeneidad en su distribución ambiental. El estudio molecular posterior
de estas poblaciones mediante análisis de RFLP o secuenciación confirmaría
estos resultados (Stock y Reid, 2004).
Hominick (2002) considera a S. feltiae y S. carpocapsae como ubiquis-
tas, siendo además muy frecuentes en las zonas templadas, fenómeno que
podría estar relacionado con lo observado por Peters (1996), tras su estudio
sobre los hospedadores naturales de los NEPs, en el que determinó que
estas dos especies desarrollaban un tipo de ciclo biológico generalista. La
caracterización ecológica realizada en este trabajo concuerda con estas ob-
servaciones previas encontrándose que S. feltiae muestra gran plasticidad
en su distribución, aislándose tanto en zonas frescas y húmedas como en
zonas templadas o secas dentro de la región, en 7 tipos diferentes de suelos
y series de vegetación y a pH tanto ácidos como básicos. Debido a la gran
diversidad de condiciones en los que esta especie aparece, los valores de
correlación del análisis CAPTA resultaron muy bajos para la mayor parte
de las variables en estudio. La distribución de S. kraussei está más limitada
a zonas húmedas y frías, encontrándose en altitudes superiores a los 1000
m, donde la precipitación media anual es de 700-1000 mm y la temperatu-
ra media anual no sobrepasa los 9 ºC. Además, los valores de correlación

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obtenidos en el análisis CAPTA tanto de las variables ambientales como

físico-químicas del suelo corroboraron estos resultados. Estos valores co-
inciden con los obtenidos por otros autores, que han observado que tiene
una distribución holártica (Stock et al., 2000) y que está presente en zonas
con un clima templado-frío (Hominick, 2002). S. carpocapsae también está
ampliamente distribuido en el mundo (Hominick, 2002) y muestra un am-
plio rango de hábitat. Sin embargo, las poblaciones riojanas aisladas resul-
tan muy interesantes, ya que están asociadas a suelos con un contenido en
arcilla muy elevado, tal y como mostró el análisis multivariante. Los suelos
arenosos o franco arenosos son los suelos en los que con mayor frecuencia
se han aislado NEPs, (Griffin et al. 1991, Hara et al. 1991; Kaya, 1990; Kung
et al. 1990; Stock et al. 1999), por lo que el aislamiento de dos poblaciones
riojanas asociadas a suelos arcillosos resulta de gran interés para el desarro-
llo y formulación de bioplaguicidas.
El estudio de carácter básico realizado en La Rioja ha permitido aislar,
identificar y caracterizar poblaciones autóctonas de NEPs, adaptados a con-
diciones ambientales y físico-químicas del suelo muy diferentes que consti-
tuyen los primeros aislamientos a partir de muestras de suelo realizados en
la región hasta la fecha. Debido al interés agronómico y socioeconómico
que suscitan estos organismos, es de esperar que futuros estudios sobre
la biología de estas poblaciones y su eficacia frente a insectos de interés
regional (Anónimo, 2003; Pérez-Marín, 2005) permitirán determinar su po-
tencial como agentes de control biológico susceptibles de ser desarrollados
comercialmente.

AGRADECIMIENTOS
Los autores desean expresar su agradecimiento a los compañeros del
Centro de Ciencias Medioambientales (CSIC) D. Fernando Pinto, por la ayu-
da con las fotografías del microscopio electrónico, a D. Octavio Cedenilla y
Dña. Margarita Pérez-Peñasco por los análisis físico-químicos del suelo, a D.
Manuel Fernández por su apoyo técnico y a los Dres. Lee Robertson y Ana
Piedra Buena por su revisión inicial del manuscrito. También quieren agra-
decer a los compañeros de la UAGR/COAG y a Dña. Milagros Herrera su
apoyo logístico durante los muestreos, a Dña. Laura Ezquerro y D. Alejandro
Peláez por su apoyo en la toma de muestras de suelo y a D. Rubén Blanco
por su apoyo en el estudio de morfometría. También desean agradecer al
Instituto de Estudios Riojanos y al Ministerio de Ciencia y Tecnología por
la ayuda financiera aportada para la realización de este trabajo, así como al
Ministerio de Educación, Cultura y Deportes por la beca FPU concedida. Los
resultados presentados en este trabajo de investigación son parte de la Tesis
Doctoral presentada por Raquel Campos Herrera.

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