FACULTAD DE SALUD

LABORATORIO DE BIOLOGÍA

GUÍA DE TRABAJOS PRÁCTICOS DE BIOLOGÍA

PRIMER SEMESTRE 2018
ENFERMERÍA

Biología-2018 1
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REGLAS GENERALES DEL LABORATORIO.

NORMAS DE USO, SEGURIDAD, E HIGIENE EN LABORATORIOS

DE LA PRESENTACIÓN PERSONAL
1. La presentación exige: higiene personal y uso de delantal blanco.
2. Pelo largo tomado y ordenado, chasquilla moderada, uso de pinches de color negro. No se
permite el uso piercing en zonas visibles.
3. El alumno debe contar con los siguientes útiles personales: lápiz de pasta azul y rojo, libreta de
apuntes, calculadora.
4. Tabla de composición química y carpeta de apuntes necesarios para realizar eficientemente su
trabajo.
DE ORDEN Y SEGURIDAD:
Antes de comenzar las actividades los alumnos deberán leer con atención las instrucciones que
correspondan al laboratorio a realizar.
1. Cuando se trabaje en equipo los alumnos deberán verificar, que cada integrante tenga claro su rol
en la actividad experimental.
2. Los alumnos deben mantenerse en su lugar de trabajo, ya que es un riesgo de accidentes, que se
muevan dentro del laboratorio.
3. La mesa de trabajo debe estar siempre limpia y ordenada.
4. Los residuos inservibles y los productos sólidos de desecho no deben abandonarse sobre la mesa
ni arrojarse al suelo o al desagüe, sino únicamente a la basura o a los recipientes habilitados
para ello.
5. Si alguna sustancia salpica al cuerpo, manos, ojos, se debe informar de inmediato al profesor(a).
6. Se deben usar guantes o lentes de seguridad cuando se indique.
7. Nunca se debe calentar con el mechero un líquido que produzca vapores inflamables. Cuando se
calienta un tubo de ensayo, debe cuidarse que la boca del tubo no se dirija hacia ninguna persona
cercana. En estos casos los tubos de ensayo deben ser tomados con una pinza de madera
para evitar quemarse los dedos.
8. Los mecheros deben ser encendidos solo por personal a cargo del laboratorio o profesor, lo que
usted no debe manipular
9. Los reactivos, nunca deben dejarse cerca de una fuente de calor.
10. Cualquier situación imprevista informar de inmediato al profesor(a); por ejemplo: derrame de
sustancias, quiebre de material de vidrio o cualquier duda que surja durante la actividad.
11. No tomar ningún producto químico que el profesor(a) no haya proporcionado.
12. No oler, probar o tocar ningún reactivo.
13. Los ácidos requieren un cuidado especial. Cuando quiera diluirlos, mézclelos cuidando que el
ácido sea depositado sobre el agua lentamente.
14. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) no deben estar cerca de fuentes de calor. Si
hay que calentar tubos con estos productos, se hará a baño maría, nunca directamente a la
llama.
15. Existen símbolos que se utilizan en las etiquetas de los envases que contienen los reactivos para
indicar el grado de peligrosidad de los mismos:
a. Explosivas: Sustancias que pueden explosionar bajo el efecto de la llama.
b. Comburente: Sustancias que, en contacto con otras, originan una reacción fuertemente
exotérmica, es decir, liberando calor.
c. Tóxicas: Sustancias que por inhalación, ingestión o penetración cutánea pueden entrañar
riesgos graves, agudos o crónicos e incluso la muerte.
d. Irritantes: Sustancias no corrosivas que por contacto inmediato, prolongado o repetido con la
piel o mucosas pueden provocar una reacción inflamatoria.
e. Inflamables: Subdivididas como:

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• Extremadamente inflamables: Sustancias cuyo punto de ignición sea inferior a 0°c y su

punto de ebullición inferior o igual a 35°C.
• Fácilmente inflamables: Sustancias que a temperatura ambiente en el aire pueden
inflamarse.
f. Corrosivas: Sustancias y preparados que en contactos con los tejidos vivos puedan ejercer
sobre ellos una acción destructiva.
17. Bajo ninguna circunstancia ingiera alimentos o tome bebidas en el laboratorio.
18. El estudiante debe conocer dónde está y aprender a usar el lavador de ojos, las duchas y los
extintores.
19. En la realización de una experiencia no sustituya un reactivo por otro sin consultar con el
profesor.
20. Cuando trabaje con aparatos eléctricos verifique que los cables no estén cerca de sus pies y no
los desenchufe tirando el cable.
21. Podrán ser retirados de la práctica los estudiantes que incumplan las normas de seguridad.
22. Si el estudiante no asiste a la práctica el día señalado, no podrá repetir la experiencia, salvo
debida justificación (Documentada) al Director de Escuela y Profesor titular de la cátedra y
siempre que exista una actividad práctica similar previamente programa.
23. Está prohibido consumir alimentos, el uso de celulares, mp3, walkman,  o cualquier equipo de
audio que pueda distraer al estudiante durante las prácticas de laboratorio.
24. Use zapatos cerrados para ir al laboratorio.
25. No se deben rayar las mesas ni paredes ni destrozar voluntariamente el mobiliario del
laboratorio.
26. Al terminar su trabajo con el microscopio debe dejarlo en “posición de descanso” (aspecto
explicado por el profesor).
27. Finalmente, cuando termine de trabajar:
a. Deseche los reactivos según las indicaciones que se sugieren en el texto y/o consulta al
profesor/a.
b. Limpie o lave los materiales, según corresponda.
c. Deje limpio su lugar de trabajo.
d. Lávese las manos.
• Los microscopios deben dejarse limpios, apagados y desenchufados.
• Al iniciar y al finalizar el práctico debe lavarse las manos con jabón.
• Todo material deteriorado deberá ser repuesto por el alumno.
• No se permiten atrasos ni inasistencias. Esta última deberá ser Justificada con certificado
médico.

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PROGRAMACIÓN DE SESIONES DE LABORATORIO BIOLOGÍA 2018.

SESIÓ
Días Actividad Práctica. Tema
N
Presentación del
19- 23
1 Presentación del Laboratorio. curso. Normas de
marzo
seguridad.
INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO
26- DE
Aprender a utilizar el
2 marzo BIOLOGÍA
Microscopio
6-abril LABORATORIO PRÁCTICO 1
MICROSCOPIA
LABORATORIO PRÁCTICO 2
2-13 Procedimientos
3 CÁLCULO DEL DIAMTERO DEL
abril básicos
CAMPO VISUAL
Técnicas de tinción
LABORATORIO PRÁCTICO 3
9-20 bacteriana y
4 TINCIONES CELULARES
abril observación al
1 CONTROL DE LABORATORIO
microscopio
Recolección y análisis
de muestras desde el
16-27 LABORATORIO PRÁCTICO 4
5 medio ambiente y
abril
desde el cuerpo
humano

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Análisis y observación
23-abril LABORATORIO PRÁCTICO 5 práctico 4.
6
4-mayo Observación de
hongos.
30-abril Exposición de
SEMINARIO Bacterias Gram
7 11- publicaciones
positivo y Gram negativo
mayo científicas

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EVALUACIÓN DEL LABORATORIO.

1.- Antes de iniciar cada trabajo práctico se realizará un Test de entrada en relación a la
actividad a realizar, estudiar de la guía entregada.

El alumno que llegue 5 min. atrasado al control NO lo podrá rendir y tendrá la nota
mínima (1.0)

2.- Se trabajará en grupos. Es obligación traer la guía impresa y deberá ser completada en la
sesión.

3.- Se realizará una jornada de seminarios de laboratorio en los cuales se evaluará la

exposición y el dominio de los contenidos.

La inasistencia o no preparación de éste llevará la nota mínima (1,0).

Las actividades que se realizan en el laboratorio son complementarias a la actividad teórica

de cátedra. Esta actividad pondera un 20% de la nota final de la asignatura.

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PAUTA PARA LA REALIZACIÓN DEL SEMINARIO.

Consiste en el análisis y presentación de artículos científicos relacionados con los contenidos
del curso. Su asistencia es obligatoria.

Se realizarán en grupos.

Exposición del seminario:

• Duración de 10 a 12 min. por grupo.

• En la exposición deben participar todos los integrantes del grupo.

• Todos deben dominar el tema. Al final habrá una ronda de preguntas.

• La exposición consiste en explicar con sus propias palabras el trabajo o

tema que les corresponde.
• No se debe copiar el paper textual en la exposición. Pueden realizar resúmenes,
tablas, mapas conceptuales, videos, animaciones, imágenes, etc.

• La exposición debe contener (máximo 15 diapositivas):

o Título del artículo.

o Introducción (marco teórico),

o Objetivos,

o Metodología,

o Resultados (explicar tablas y gráficos relevantes),

o Discusión,

o Conclusión del trabajo.

NOTA: Esto puede variar levemente según el tipo de publicación entregado.


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Rúbrica para evaluar Presentación Oral Fecha: ______________ Calificación:

_________

Estudiante(s) expositora/or (es):______________________________________________________________

_________________________________________________________________________________________

Evaluación
3 puntos 2 puntos 1 punto Puntaje
Total
Indicador

Utiliza un lenguaje técnico,

Lenguaje No utiliza un lenguaje
formal y apropiado, demuestra Utiliza un lenguaje formal, pero su
dominio léxico. Evita dominio léxico es regular.
apropiado ni demuestra /6
Ponderación x2 dominio léxico.
repeticiones.

Tiene buena postura, se ve

Actitud corporal La mayor parte del tiempo tiene
relajado y seguro de sí mismo. Tiene mala postura y/o no
y contacto visual una buena postura y establece
Establece contacto visual con
contacto visual con todos en el
mira a las personas /3
todos los presentes en la durante la exposición.
Ponderación x1 salón durante la exposición.
exposición.

Evidencia parcialmente la
Organización de
Se evidencian la coherencia, la coherencia, síntesis y organización Presenta evidentes fallas
la presentación
síntesis y la organización de la de la información. en la organización /6
información. conceptual.
Ponderación x2

Contenido
Demuestra un completo Demuestra un buen entendimiento No parece entender muy
entendimiento del tema. del tema. bien el tema.
/9
Ponderación x3

Límite-Tiempo

Se ciñe al tiempo establecido: Se excede en extensión, hasta 25 Extensión superior a 25

Ponderación x1 /3
Máximo 20 minutos. minutos. minutos.

El/la estudiante usa de

El/la estudiante usa
Apoyo visual
adecuadamente el apoyo visual,
este es organizado,
Ponderación x2
claramente presentado así
como de fácil seguimiento.
El/la estudiante no usa
manera excesiva el apoyo
adecuadamente el apoyo visual,
visual, muy sobrecargado
está bien focalizado pero no
suficientemente organizado.
de información. /6
Cuadro impreciso y poco
claro

La respuesta es débil en su
coherencia y/o claridad y/o no La respuesta carece de
Preguntas La respuesta es coherente,
contesta en su totalidad la claridad y/o coherencia o
clara y contesta en su totalidad /6
pregunta. no contesta directamente
Ponderación x2 la pregunta.
la pregunta.
.

TOTAL /39

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Puntaje total: 39 puntos Fórmula:

Resultados de aprendizaje del Laboratorio de

biología
Al término de los trabajos prácticos, el/la alumno/a deberá ser capaz de:

1.- Identificar el material habitual utilizado en la práctica de biología por medio de su

utilización.

2.- Manipular correctamente material de laboratorio y cultivos de microorganismo

mediante su manipulación.

3.- Aislar y propagar microorganismos tanto de muestras como a partir de cultivos puros .

4.- Identificar correctamente formas y agrupaciones bacterias por observación

microscópica.

5.- Emplear distintas formas de tinción para identificar microorganismos o estructuras

importantes.

6.- Utilizar la información derivada de la actividad metabólica de microorganismos sobre

distintos sustratos, con fines de identificación.

7.- Realizar estudios de diversidad celular para diferenciar modelos celulares.

8.- Reconocer y diferenciar la morfología macroscópica y microscópica por medio de

Tinciones.

9.- Reconocer y diferenciar la morfología microscópica de organismos Eucariontes y

Procariontes.

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Laboratorio 2: Microscopía y Funcionamiento

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INTRODUCCIÓN.
Desde la formulación de la Teoría celular, el conocimiento de la célula,unidad básica de los
seres vivos, ha estado estrechamente ligada a los avances tecnológicos relacionados al
desarrollo del instrumentos que permitan superar el limitado poder de resolución del ojo
humano. En efecto,éste no logra visualizar o resolver,puntos que se encuentran a una
distancia menor a 0,1 mm. (100 um), Esto significa que la mayoría de las células son
invisibles a ojo desnudo porque su tamaño es generalmente menor.
La etimología de la palabra implica (micro:pequeño y scopio: observar), entre los cuales el
de uso más frecuente es el microscopio compuesto binocular.

PODER DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

• Poder de aumento: es el producido entre el tamaño de la imagen que produce el
microscopio y el tamaño original del objeto observado. Este valor se obtiene
multiplicando el aumento de los oculares por el aumento del objetivo en uso.

• Poder de definición: Es la capacidad del microscopio para formar imágenes nítidas y

de bordes definidos. Esta capacidad aumenta desde el lente lupa hasta el lente de
inmersión, pero se debe tomar en cuenta que el manejo de la luz incidente es de vital
importancia, por lo que este aspecto recae en el manejo del microscopio por parte
del observador.

• Poder de penetración: Es la capacidad para visualizar los diferentes planos de una

preparación y está dado por el ajuste de precisión que se logra con el tornillo
micrométrico. Este es un valor dependiente de la calidad de la muestra, ya que
aquellas deficientemente teñidas y muy gruesas presentan mayor problema para su
definición visual.

• Poder de Resolución: Permite distinguir como objetos separados mediante dos puntos,
los cuales se encuentran muy cercanos entre sí. El lente de inmersión presenta el
mayor poder de resolución, pero depende de un cambio en el medio. Se debe añadir
aceite de inmersión sobre la muestra para aumentar la confluencia de rayos luminosos
sobre ella, ya que presenta mayor índice de refracción del aire. Además, es necesario
que la muestra sea permanente, ya que si se trata de muestras en fresco, por el
hecho de contener agua no se les puede añadir aceite.

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NORMAS DEL MANEJO DEL MICROSCOPIO

Para transportar el microscopio se toma con las dos manos,con una se sujeta el brazo y con la palma
de la otra se sostiene el pie.

Para enfocar:

• Girar el revolver para seleccionar el objetivo menor.

• Colocar la preparación en la platina, centrarla y sujetarla con las pinzas.
• Observando por el ocular elevamos la platina con el tornillo macrométrico.
• Sin dejar de observar, girar el micrométrico hasta conseguir la máxima nitidez.
• Cuando ya hemos observado la imagen con el menor objetivo, cambiamos a los
superiores sucesivamente, ajustando con el tornillo micrométrico.

DEFECTOS FRECUENTES EN EL MANEJO DEL MICROSCOPIO

1. En la iluminación.
• Condensador bajo o descendido en la montura.
• Diafragma muy cerrada o lateralizado.
• Filtros inconvenientes o en exceso.

2. Por imágenes extrañas.

• Corpúsculos de polvo u otros elementos extraños.
• En el ocular. Se reconocen al hacer girar el ocular.
• En el objetivo. Se reconocen porque persisten en el campo aunque se observe
sin la preparación.
• Con el cubreobjetos. Se reconocen porque se desplazan al mover la preparación
y están en un plano focal diferente al objeto.
• Burbujas de aire. Se reconocen porque tienen forma de círculo con bordes
negros y cambian de aspecto según el foco.
• Gotas de grasa. Se reconocen porque son muy refringentes con el centro
brillante y contornos oscuros.

ACTIVIDADES

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1. Examina cuidadosamente el microscopio de luz instalado en el mesón y con la ayuda

del esquema adjunto, reconozca sus componentes.

ACTIVIDADES PRACTICAS

Microscopía: Muestra de Letras

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Observe y dibuje preparaciones que contienen letras impresas en los aumentos objetivo 4X -
10X. -40X Anote sus observaciones.

DIFERENCIA DIFERENCIA DIFERENCIA

4X
10X

40X

2. Microscopía célula eucariota vegetal: Epidermis de cebolla con tinción

Utilizando una hoja de bisturí y pinzas, extraiga un trozo pequeño de la epidermis de

cebollín (lo más delgado posible) y colóquelo en un portaobjetos limpio, añada 2 gotas de
azul de metileno. Deje actuar el colorante durante 2-3 minutos y cubra con un cubreobjetos
limpio. Observe y dibuje la preparación en aumento objetivo de 40X. Anote sus
observaciones. (RECUERDE ROTULAR SU DIBUJO)

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PRÁCTICO N°2:
Procedimientos Básicos en biología para Cultivo
celular

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INTRODUCCION:
El objetivo principal del práctico es la adquisición de conocimientos básicos en lo que respecta a
la manipulación de cultivos bacterianos. Esto incluye manejo del concepto de esterilidad, siembra en
medios líquidos, en medios sólidos (diferenciales, selectivos, etc.) y siembra en condiciones
anaeróbicas.

El cumplimiento de las tareas en microbiología de alimentos exige la realización de tres

actividades: la primera de ellas, aislamiento e identificación de microorganismos, se inicia con el
cultivo, de las muestras procedentes de alimentos, en medios específicos y en condiciones definidas,
y va seguido de examen microscópico y pruebas bioquímicas al microorganismo aislado; la segunda
actividad, involucra el conocimiento de la resistencia o sensibilidad a antibióticos, biotipificación y
serotipificación; y por último, la tercera actividad involucra la identificación epidemiológica o
comparación de los aislamientos de la misma especie con el fin de hacer el control de la infección o
análisis de población.

Para poder realizar la primera de estas actividades, es imprescindible contar con un cultivo puro
que debe ser mantenido en condiciones de laboratorio, para esto es necesario e indispensable
emplear material completamente estéril (Tabla Nº 1).

Para poder mantener las bacterias en condiciones de laboratorio se utiliza otro procedimiento
importante en el área de la microbiología que es la siembra o cultivo. Esta consiste en colocar a los
microorganismos en un ambiente adecuado para que se desarrollen y multipliquen. En el laboratorio
este medio ambiente lo constituyen los medios de cultivo corrientes o básicos y especiales,
operación que debe realizarse en forma aséptica.

Generalmente las muestras contienen una flora mixta, que se manifiesta por el desarrollo de
distintas especies bacterianas: algunas son saprófitas (flora normal) o contaminantes del proceso de
muestreo y otras son las que tienen un rol patógeno.

Obtener una cepa bacteriana aislada significa, por lo tanto, obtener un cultivo en estado de
pureza, condición indispensable para poder estudiar sus características morfológicas y bioquímicas y
lograr así su identificación correcta.

Si en la placa de agar ha crecido más de un tipo de bacterias, se debe realizar el aislamiento de

UNA colonia a otro medio de cultivo semejante o a medios selectivos.

En el caso de los medios líquidos, una vez obtenido el crecimiento bacteriano, se debe realizar un
aislamiento de UNA gota o UNA “asada” del cultivo a un medio sólido para obtener colonias aisladas y
puras (Tabla Nº 2).

Nota: La “asada” es el volumen que se encuentra retenido en el extremo curvo del filamento del asa
de platino.

Si fuese necesario, las colonias se someterán a uno o más re-aislamientos, hasta obtener cultivos
puros, es decir que todas las colonias sean similares, presenten la misma morfología y
microscópicamente correspondan a un solo tipo de bacteria.

Sólo en este momento se puede proceder a la identificación de la especie bacteriana mediante el

traspaso de UNA sola colonia a una batería de medios de identificación.

Objetivos:
1. Identificar material empleado en la práctica bacteriológica.

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2. Adquirir destreza para manipular materiales y cultivos, cuidando la esterilidad.

3. Conocer el concepto de siembra y aislamiento de bacterias.
4. Practicar diferentes tipos de siembra.
5. Practicar diferentes tipos de aislamiento bacteriano.

Material:
Medios de Cultivo Cultivos Bacterianos por grupo
➢ 2 Tubos con Agar Nutritivo tendido. ➢ 1 Cultivo en Placa Petri.
➢ 2 Tubos con Agar Nutritivo. ➢ 1 Cultivo Bacteriano en Medio Líquido.
➢ 5 Placas Petri con Agar Nutritivo.
➢ 5 Tubos con Medio Líquido
Material:
➢ 4 Tórulas estériles ➢ Solución de Yodo; Solución de Cloro

Tabla Nº 1 : Material de uso común en el Laboratorio de Microbiología

Esterilización
Material Tipo esterilización Tipo de material
Antes de ser Después de ser
utilizada utilizada
Directo a la llama del
Asa de platino mechero
Sí Sí Re-utilizable

Pipetas aforadas de D i r e c t o a l a l l a m a d e l
mechero
Sí Sí Re-utilizable
vidrio*
Pipetas aforadas de
Química No No Desechable
plástico
Pipetas Pasteur de
Autoclave No Si Desechable
vidrio*
Autoclave
Tubos estériles** Si Si Re-utilizable
Llama Mechero

Placas Petri de vidrio Autoclave Si Si Re-utilizable

P u n t a s d e Pa p e l
Autoclave No No Desechable
Absorbente
P l a c a s Pe t r i d e
Química No Si Desechable
plástico

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* Este material se pueden encontrar en cilindros metálicos o envueltas en papel, ya estériles. En

el primer caso, se debe poner el cilindro en forma horizontal, destaparlo y sacar una pipeta sin
tocar con los dedos las otras, en el segundo caso se debe desenvolver la pipeta, de manera de
no tocar su extremo inferior.
** Cada vez que se destape un tubo estéril, se debe flamear su boca y repetir la operación
inmediatamente antes de volver a cerrarlo. Este procedimiento pretende evitar la entrada de
microorganismos del aire al interior del tubo.

PASOS A SEGUIR PARA TRABAJO DIARIO DE UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

La calidad en nuestro trabajo en un laboratorio de Microbiología depende de una secuencia de pasos

a seguir estrictamente por todo el personal que labora. Para ello sugerimos seguir los siguientes
pasos para tratar de uniformar criterios.

PASOS A SEGUIR:

1.- PREPARACIÓN DEL ÁREA DE TRABAJO

2.- PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

3.- PREPARACIÓN DE REACTIVOS

4.- PREPARACIÓN DE MATERIAL

5.- PROCEDIMIENTO PARA LA TOMA, MANEJO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS PARA SU ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO

6.- REALIZACIÓN DE LA TÉCNICA

7.- INCUBACIÓN DE LA MUESTRA

8.- RECUENTO

9.- REALIZACIÓN DE LOS CÁLCULOS

10.- PRESENTACIÓN DEL INFORME.

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Actividades Prácticas:
1. Siembra desde medios Sólidos a medios Sólidos.
1.1.Desde placa Petri a tubo con Agar tendido:
a. Rotular el tubo de agar con los datos correspondientes
(Nombre del microorganismo, Grupo y Fecha).
b. Flamear el asa para su esterilización.
Nota: Flamear el asa implica mantenerla en contacto con la llama
del mechero hasta que el filamento se vea completamente rojo.
Después se deja enfriar al lado del mechero.

c. En la placa Petri con la muestra, enfriar el asa en las zonas

del agar donde no existan colonias.
d. Tomar una muestra con el asa desde el medio sólido con la
bacteria en estudio (Con solo tocar la colonia estará tomando
la cantidad de bacteria suficiente para poder sembrar).
e. Destapar el tubo con agar tendido y flamear la boca del
tubo.
f. Introducir el asa hasta el fondo. Posteriormente, en un sólo
movimiento, deslizar el asa con movimientos en zigzag
ascendentes por la superficie del medio de cultivo.
g. Flamear y tapar la boca del tubo.
h. Flamear el asa para su esterilización.
i. Incubar el tubo recién sembrado a la temperatura
adecuada.
Figura Nº 1: Siembra desde agar en placa Petri a
Tubo con agar tendido.

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De medios Sólidos a medios Líquidos.

1.2.Desde placa Petri a tubo con medio de cultivo líquido:

a. Rotular el tubo de caldo con los datos correspondientes (Nombre microorganismo, Grupo,
Fecha).
b. Flamear el asa para su esterilización.
c. Enfriar el asa en las zonas del agar donde no existan colonias.
d. Tomar una muestra con el asa desde el medio sólido con la bacteria en estudio (Con solo
tocar la colonia estará tomando la cantidad de bacteria suficiente para poder
sembrar).
e. Flamear la boca del tubo con medio líquido.
f. Introducir el asa dentro del tubo con caldo y agitar vigorosamente.
g. Flamear la boca del tubo y el asa para su esterilización.
h. Tapar el tubo e incubar a la temperatura adecuada.

A B

C D

18 – 24

De medios Líquidos a medios Sólidos

1.3.Desde tubo
Figura Nº 2: con cultivo
Siembra desde bacteriano líquido
agar en placa Petri a con
a Tubo placas
caldode
de Petri:
cultivo.

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a. Rotular la placa en el reverso (por donde se encuentra el agar) con los datos
correspondientes.
b. Flamear el asa para su esterilización.
c. En la placa Petri con la muestra, enfriar el asa en las zonas del agar donde no existan
colonias.
d. Destapar el tubo que contiene el cultivo bacteriano, flamear la boca del tubo e introducir
el asa hasta el fondo. Posteriormente, agitar suavemente el asa y retirarla.
e. Flamear y tapar la boca del tubo.
f. Colocar la tapa de la placa sobre el mesón cerca del mechero.
g. Tomar la placa por su base y realizar la siembra mediante estrías, para ello:
i. Deslizar el asa con la muestra en forma de zigzag en un pequeño sector de la placa.
Flamear el asa.
ii. A partir del sector ya sembrado en la placa, deslizar el asa hacia el sector contrario
de la placa nuevamente en forma de zigzag. Flamear el asa.
iii.A partir de las últimas líneas realizadas, deslizar el asa hacia el sector contrario de la
placa en forma de zigzag. Flamear el asa.
iv.Repetir el procedimiento descrito en iii.) hasta completar la placa. Tener cuidado de
que cuando se hacen las estrías en ii.) y iii.) no tocar las que ya se encuentran en la
placa.
h. Tapar la placa y flamear el asa para su esterilización.
i. Incubar la placa a la temperatura adecuada.

A B C

18 – 24 Hrs.

Figura Nº 3: Siembra desde cultivo bacteriano líquido a agar en placa Petri.

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1.4.Desde tubo con cultivo bacteriano líquido a tubo con agar (Por
picadura).
a. Rotular el tubo con los datos correspondientes.
b. Flamear el asa para su esterilización.
c. Enfriar el asa en las paredes internas.
d. Tomar un inóculo del tubo problema.
e. Efectuar la siembra del tubo problema al tubo estéril; para ello:
i.- Destapar el tubo estéril e introducir el asa cargada sin tocar las paredes, picando el
medio de cultivo al centro sin llegar al fondo del mismo.

ii.- Retirar el asa con precaución para producir el menor desgarro posible.

f. Flamear la boca del tubo y tápelo.

g. Flamear el asa para su esterilización.
h. Incubar el tubo sembrado a la temperatura adecuada.

A B

C D

Figura Nº 4: Siembra desde cultivo bacteriano líquido a Tubo con agar

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3. Desde tubo con cultivo bacteriano líquido a tubo con agar (Zigzag
superficie).
a. Rotular el tubo con los datos correspondientes.
b. Flamear el asa para su esterilización.
c. Enfriar el asa en las paredes internas o en el líquido de condensación.
d. Tome un inóculo del tubo problema.
e. Destapar el tubo con agar tendido y flamear la boca del tubo.
f. Introduzca el asa hasta el fondo. Posteriormente, en un sólo movimiento,
deslizar el asa con movimientos en zigzag ascendentes por la superficie del
medio de cultivo.
g. Flamear y tapar la boca del tubo.
h. Flamear el asa para su esterilización.
i. Incubar el tubo recién sembrado a la temperatura adecuada.

A B

C D

Figura Nº 5: Siembra desde cultivo bacteriano líquido a tubo con agar tendido.

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4. Desde medios Líquidos a medios Líquidos.

1. Desde tubo con cultivo bacteriano líquido a tubo con medio de cultivo
líquido.

a. Rotular el tubo con los datos correspondientes.

b. Homogenizar el tubo problema por agitación.
c. Flamear el asa para su esterilización.
d. Enfriar el asa en las paredes internas del tubo.
e. Tomar un inóculo del tubo problema procurando que quede una película en el asa.
f. Destapar el tubo estéril e introducir el asa cargada sin tocar las paredes, agitar en el
medio de cultivo y retirar con cuidado.
g. Flamear la boca del tubo y tápelo.
h. Flamear el asa para su esterilización.
i. Incubar el tubo sembrado a la temperatura adecuada.

A B

C
18 - 24 hrs.

Figura Nº 6: Siembra desde cultivo bacteriano líquido a tubo con medio de cultivo.
Tabla Nº2: Cuadro Resumen Actividad Técnicas de Siembra.

Biología-2018 25
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Desde Medio A Medio Toma de muestra

Siembra en Tipo Siembra
Tipo Tipo desde

Tubo con Agar Tendido Zigzag superficie

Sólido Placa Petri
Sólido Tubo con Agar Pinchadura

Líquido Placa Petri Tubo con Medio de cultivo Agitación con asa

Placa Petri En cuadrantes

Tu b o c o n c u l t i v o
Sólido Tubo con Agar Pinchadura
líquido
Líquido
Tubo con Agar Tendido Zigzag superficie

Tu b o c o n c u l t i v o
Líquido Tubo con Medio de cultivo Agitación con asa
líquido

5. Técnicas de Esterilización

5.1. Flameado
a. Dividir una placa por la mitad.
b. Tomar un asa y abrir una placa de agar nutritivo y
deslizarla suavemente por una mitad del agar. Cerrar la placa.
c. Flamear el asa para su esterilización, enfríela en la tapa y
deslícela suavemente por la otra mitad del agar.
d. Cerrar la placa.
e. Incubar la placa a 37ºC.

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6.- Preparación del material para el trabajo en biología

Limpieza y Esterilización
En el trabajo del laboratorio de Microbiología tienen importantísima aplicación los procedimientos,
técnicas y productos que suprimen o disminuyen la vitalidad de los microorganismos patógenos.

No existe un procedimiento de esterilización y desinfección aplicable a todos los casos. El

método de esterilización será seleccionado para cada caso teniendo en cuenta la naturaleza
física del objeto y la naturaleza biológica del contaminante. Como rara vez se conoce la
población de microorganismos sobre un objeto que debe ser tratado, debemos presuponer que
se encuentran presentes las formas microbianas más resistentes: las endosporas.

ACTIVIDADES:

1. Esterilizar el material usado presuntamente infeccioso en autoclave.

2. Limpiar los materiales reutilizables.

3. Acondicionar el material limpio para ser esterilizado.

a) placas de Petri

b) pipetas

c) tubos de ensayos

a. Placas de Petri: se envuelven en papel kraft.

b.Tubos de ensayos: se confecciona un tapón de algodón y se cubre con un capuchón de papel
aluminio o papel kraft.
c. Pipetas: se obtura el extremo superior con un filtro de algodón y luego se envuelven con
tiras de 4 a 5 cm. de ancho de papel kraft comenzando por la punta de la misma. Debe
rotularse cada una con la capacidad y graduación correspondiente.

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Autoclave: (Vapor a presión) Para lograr una esterilidad confiable el método estándar es el vapor
saturado, en autoclave, a una temperatura de 121 °C durante 15 minutos.

Los recipientes a colocar en la autoclave no deben estar totalmente llenos y deben tener tapas flojas
o estar tapados con algodón con una sobretapa para permitir la ebullición libre y la liberación del
aire disuelto.

Para grandes volúmenes de líquidos se debe permitir un mayor tiempo de purgado. Este método se
utiliza para esterilizar medios de cultivos y soluciones. En el caso de líquidos, éstos no deben formar
emulsiones con el agua como Ej.: aceite o vaselina.

También se utiliza para esterilizar ropa de cama o material textil en general, siempre que la
autoclave esté provista de un sistema de secado por vacío.

Normas de uso generales de la autoclave:

La utilización de la autoclave comprende los siguientes pasos:

a. Controlar el nivel de agua: en caso necesario, completar con agua destilada.

b. Introducir el material a esterilizar.
c. Cerrar la tapa
d. Encender la fuente de calor
e. Cuando se alcanza la presión (15psi) (indicadora de la temperatura) deseada se comienza a contar
el tiempo de esterilización (15 min).
f. Una vez concluido el proceso, apagar la fuente de calor y dejar disminuir la presión
espontáneamente. No enfriar artificialmente la autoclave.
g. Cuando el manómetro indica que la presión ha llegado a cero abrir la espita a fin de equilibrar la
presión. Abrir la autoclave y retirar el material estéril.

Cuando la autoclave no está en uso, la tapa debe permanecer apoyada sobre el cuerpo de la
autoclave.

En la siguiente figura se muestra el proceso para la preparación de medios de cultivo:

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TRABAJO PERSONAL:

CUESTIONARIO:

➢ SEGÚN LO REALIZADO, CONFECCIONE UN MAPA CONCEPTUAL CON LOS PASOS REALIZADOS AL UTILIZAR
CADA UNA DE LAS TÉCNICAS DE SIEMBRA.

➢ INVESTIGUE SOBRE EL PORQUÉ EN BIOLOGÍA SE TRABAJA CON LA LLAMA DEL MECHERO. ¿QUÉ OTRAS
OPCIONES EXISTEN PARA PODER TRABAJAR BAJO CONDICIONES DE ESTERILIDAD?

➢ QUE ES Y DE DONDE SE EXTRAE UN AGAR?

➢ QUE FUNCIONES CUMPLE EL AGAR EN EL MEDIO DE CULTIVO?

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Actividad Número 3

MORFOLOGÍA CELULAR Y TINCIONES

Introducción:

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Para la observación de microorganismos es necesario poder crecerlos en el laboratorio. Para

esto se utilizan las técnicas de siembra en medios de cultivo seleccionado según los objetivos
deseados. Luego se continúa con la visualización de la morfología colonial (macroscópica) y la
realización de diferentes tinciones (microscópico)

Un medio de cultivo es una preparación sólida o líquida hecha específicamente para el

crecimiento, almacenamiento o transporte de bacterias. Los medios líquidos pueden ser usados en
tubos de ensayo o en botellas de vidrio. Los medios sólidos se obtienen de una solución de nutrientes
solidificada con agar (polisacárido obtenido de ciertas algas marinas que actúa como agente
gelificante) o gelatina y se usan en placas de Petri. El agar es el agente gelificante más comúnmente
usado ya que no es atacado por la mayoría de las bacterias y no se funde a 37ºC (Tº usada para la
incubación de las bacterias).

Los componentes esenciales, cualquiera sea el medio de cultivo y la variedad de

microorganismos que se desea cultivar, son: agua, componentes nitrogenados (proteínas, aminoácidos
y/o sales inorgánicas que contengan nitrógeno) y fuentes de energía (carbohidratos, proteínas o sales
inorgánicas).

Algunos Medios de cultivo muy utilizados en clínica:

- Agar nutriente (corriente): Es un medio básico usado con propósitos generales para el cultivo de
muchos tipos de bacterias. Puede enriquecerse o hacerse selectivo por la adición de sustancias
adecuadas.

- Agar sangre: Es un medio en base a agar nutriente enriquecido con 5-10% de sangre. Es usado para
el cultivo de bacterias nutricionalmente exigentes, como Bordetella pertussis (agente causal de tos
convulsiva) y también para detectar hemólisis. Al calentar el agar sangre a 70-80ºC hasta obtener un
color café se obtiene otro medio de cultivo denominado Agar chocolate, que es más apropiado que
el agar sangre para el crecimiento de ciertos patógenos, como por ejemplo Neisseria gonorrhoeae.

- Agar McConkey: Es un medio selectivo y diferencial, ya que contiene sales biliares y cristal violeta
para inhibir el crecimiento de Gram + (selectivo) y lactosa para distinguir aquellas bacterias que la
fermentan de las que no (diferencial). En agar McConkey las 18 bacterias entéricas que utilizan
lactosa (tales como E. coli) forman colonias rojas debido a que los productos acídicos que se forman
a partir de lactosa afectan el indicador de pH del medio (rojo neutro); en cambio, las especies
entéricas que no usan lactosa (por ejemplo muchas cepas de Salmonella) forman colonias incoloras.

Clasificación de los medios de cultivo

1.- Según estado físico los medios de cultivos preparados pueden ser:

a. Líquidos: Se emplean fundamentalmente para: Cultivar los microorganismos y obtener grandes

cantidades de los mismos o bien la producción de metabolitos específicos. Estimular y
promover la selección de algún o algunos microorganismos e impedir que otros se
multipliquen. Identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bioquímicas. NO
contienen agar.

b. Semisólidos: Se utilizan para identificaciones bioquímicas y averiguar si el germen estudiado

es móvil. Los medios semisólidos tienen una consistencia blanda.
Sólidos (solidificados por adición de agar al medio líquido o de alguna proteína coagulada). Se
utilizan para obtener colonias aisladas de microorganismos. Los medios sólidos constituyen la mayor
parte de los medios de cultivo que se emplean en Microbiología.

Tinción de Gram

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ACTIVIDADES PRÁCTICAS

OBJETIVOS

1. Sembrar y describir colonias bacterianas desarrolladas en medios de cultivo sólido (Placas de Agar)
de acuerdo a criterios macroscópicos.

2. Practicar diferentes tinciones de frotis bacterianos: tinción de Gram.

3. Análisis Microscópico mediante tinción de Gram

1. Realice tinción de Gram a las muestras que Ud. sembró y observe al microscopio. Preparación de
frotis bacteriano a partir de una colonia.

PASOS:

a. Flamear el asa para su esterilización.

b. Colocar con el asa una gota de agua en el centro de la lámina (aprox. 0,5 cm de diámetro).

c. Flamear el asa para su esterilización.

d. Enfriar el asa en un sector del agar donde no existan colonias.

e. Obtener una pequeña muestra desde la placa.

f. Mezclar la muestra con la gota de agua y esparcirla por la superficie del portaobjeto.

g. Fijar el frotis exponiéndolo a la llama del mechero hasta que se seque. Tinción frotis mediante
Gram

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a. Verificar, con el dorso de la mano, que el vidrio no esté demasiado caliente.

b. Cubrir el frotis completamente con cristal violeta y dejar en reposo por 2 min.

c. Dejar escurrir el cristal violeta y agregar sobre la muestra una solución de Lugol. Dejar

con lugol por 1 min.

d. Lavar el lugol alternativamente con alcohol-acetona y agua dejando escurrir suavemente, hasta
que se decolore completamente. (Debe primero lavar con el decolorante alcohol- acetona y luego
con agua)

e. Cubrir con colorante de contraste, Safranina al 1%, por 1 min.

f. Lavar con agua, dejar escurrir y secar suavemente con papel absorbente.

2. Observar en el microscopio óptico con aumento de 100X y aceite de inmersión. Caracterizar según

criterios m

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LABORATORIO Nº 4

DIVERSIDAD CELULAR EN ANIMALES

Introducción

Existe una gran diversidad de células, en cuanto a forma y tamaño, producto de la

especialización de sus funciones. Por ejemplo, los tejidos y órganos humanos contienen
aproximadamente 200 tipos de células somáticas y un tipo de células sexuales.
Si analizamos aún más en profundidad las características citológicas de otros seres vivos
tales como protozoos, hongos y bacterias nos daremos cuenta que la diversidad celular se
multiplica inmensamente, no existiendo a la fecha estudios científicos decisivos que nos dan
a conocer la totalidad de la diversidad celular existente.
Sin embargo, las células conocidas, presentan similitudes básicas asombrosas, cada célula es
una unidad independiente, en su mayor parte autosuficiente rodeada de una membrana que
controla y regula la entrada y salida de sustancias hacia y desde el interior celular. Esto le
faculta a la célula, un contenido diferencial con respecto al medio externo.
En general la mayoría de las células Eucariontes (Eukaria) presentan uno o más núcleos en
su estado adulto, no así las Eubacterias ( Bacterias) y Arqueobactarias (Arquea) no presentan
núcleo.

Forma celular

La forma de una célula depende de variados factores, aquí se dan a conocer los más
relevantes.
• Tensión superficial
• Viscosidad del protoplasma
• Acción mecánica de células contiguas
• Rigidez de la membrana plasmática

Las formas que presentan las células son múltiples pero por razones de orden didáctico se
adoptarán solo los siguientes criterios de clasificación:

• Variables: como las amebas y leucocitos

• Estables: como la mayoría de las células de un organismo

Las células estables se pueden clasificar en:

a)Asimilándose a cuerpos geométricos.

• Esféricas: como algunos unicelulares y células de tipo embrionario.

• Cúbicas: células de los túbulos renales.

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• Planas: células epidérmicas de la piel y las de las hojas de vegetales.

• Prismáticas: células del epitelio de las vellosidades intestinales
• Poliédricas: células hepáticas.

b) Comparándolas a esquemas estructurales conocidos.

• Estrelladas: células motoras del asta anterior de la médula espinal.

• Fusiformes: células del tejido muscular liso.
• Arácniformes: células de la neuroglia y osteocitos.

Actividades

Cada una de las preparaciones microscópicas que te serán entregadas y/o preparadas por
ti,enfócadas hasta utilizar el mayor aumento( 40x para preparaciones en fresco y 100x para
preparaciones permanetes).Realiza los dibujos correspondientes, en detalle, colocando el nombre al
máximo de estructuras que reconozcas .

Dibujo de la muestra 1 (Mucosa Bucal) Observaciones

Dibujo de la muestra 2 (Glóbulos rojos)

Observaciones

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