09/02/2012

Ramón Ovidio García Rico Ph.D.

Lectura:
La evolución codificada
(Freeland & Hurst).

Cómo es un ribosoma?
http://biomodel.uah.es/model1j/rna-prot/ribosoma.htm

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El mRNA
eucariótico es
Sentido de avance: Carácter del mRNA procariótico: siempre
Mono o policistrónico monocistrónico
El mRNA se lee de 5’ a 3’

La proteína se
biosintetiza desde el
Amino terminal (NT)
hacia el Carboxilo
terminal (CT)

Etapas de la traducción: Activación de los aminoácidos

Se trata de la unión de los a.a. con los tRNA.
Se lleva a cabo mediante dos reacciones
catalizadas por la misma enzima:
aminoacil-tRNA sintetasa (aaRS).

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Activación Unión con el

del tRNA:
aminoácido:

Procariotas Procariotas
Eucariotas
Elección del punto de inicio Elección del punto de inicio

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Formación del metionil-tRNA iniciador: Complejo de iniciación:

tRNAi met / tRNAf met La subunidad menor del ribosomosa (30/40) se
une al mRNA (caperuza 5’ o RBS), y se desplaza a
través de él hasta reconocer el AUG.
Lo anterior se hace con ayuda de los IF 1,2,3
(procariotas) y 4 A
A,B,E (eucariotas), y la hidrólisis
B E (eucariotas)
Aminoacilación de ATP.

Todas las proteínas Formilación

procariotas inician por
una formil-metionina.
En eucariotas no hay
formilación.

Complejo de iniciación: Complejo de iniciación:

Los Factores protéicos de iniciación (IF) son
GTPasas que forman complejos binarios ya sea
con GTP o GDP-
El metionil-tRNAi forma un complejo ternario con
IF 2 GTP
IF-2:GTP.
Este complejo se une al mRNA en su codón de
inicio, formándose así el complejo de “pre-inicio”.
Finalmente, el IF2 hidroliza el GTP, liberándo los
IF participantes (1,2 y3), lo cual permite la unión
con la subunidad mayor: Complejo de “inicio”.

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Generalidades: Ubicación del aacil-tRNA en el sitio A:

Formación del complejo ternario:
Proceso cíclico que se repite tantas veces como a.a.-tRNA:EF-1:GTP
a.a. sean incorporados. El complejo difunde hasta el sitio A del ribosoma,
Cada ciclo consta de 3 pasos: si el apareamiento (codón:anticodón) es correcto,
• Ubicación
Ubi ió del
d l nuevo aa-tRNA
tRNA en ell sitio
iti A.
A se adopta una forma estable que induce un
• Formación del enlace peptídico. cambio conformacional en EF-1.
• Translocación. EF-1 hidroliza el GTP, formándose el complejo
GDP:EF-1, que no tiene afinidad por el ribosoma,
En la elongación intervienen 3 factores protéicos: por tanto se libera.
EF-1, EF-1, EF2 (Eucariotas) Al igual que IF-2, el complejo binario EF-1:GTP
EF-Tu, EF-Ts, EF-G (Procariotas) se reestablece con ayuda de EF-1, que cataliza
el intercambio de nucleótidos.

Ubicación del aacil-tRNA en el sitio A: Transpeptidación:

EF-1interacciona con cualquier aminoacil-tRNA
excepto con el Met-tRNAi, que solo se une al IF-2.
Formación del enlace peptídico entre el a.a.
entrante y el a.a. anterior.
Lo lleva a cabo una ribozima peptidiltransferasa,
de la que hace parte el rRNA 28S (23S) de la
subunidad
i mayor.

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Proceso que se repite,

Translocación: Translocación: cuantas veces sea
necesario.
Proceso en el que, el ribosoma se desplaza
(5’→3’) cada vez, un solo codón, desde el AUG
inicial.
Este evento es catalizado p
por el EF-2,, una
translocasa.
La energía para llevar a cabo el desplazamiento
se obtiene (como ya es común) de la hidrólisis de
GTP.

Implica: Unión del factor de liberación (RF)

• Liberación del polipéptido ya completo, de su
unión al tRNA en el sitio P.
• Disociación del ribosoma del mRNA.
Se da como respuesta a la presencia de un codón
de stop:
UAA, UAG o UGA (ADN genómico)
UAA, UAG, AGA, AGG (ADN mitocondrial)

Intervienen los siguientes factores proteicos:

Eucariotas: RF (releasing factor).
Procariotas: son 3 RF1, RF2 y RF3.

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Hidrólisis del peptidil tRNA Disociación

La unión del RF al ribosoma afecta la actividad
peptidil-transferasa, ocasionando la hidrólisis del
enlace éster del peptidil tRNA en el sitio P.
Este proceso se da gracias a la hidrólisis de una
molécula de GTP
GTP.
El complejo binario RF:GDP ya no tiene afinidad
por el ribosoma, liberándose y liberando al t-RNA
sin cargar que queda en el sitio P.
Finalmente, las subunidades mayor y menor se
separan,
separan liberando el mRNA.
mRNA

http://www.youtube.com/watch?v=5bLEDd-PSTQ

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Tráfico de las pps Tráfico de las pps

Hace referencia a la ruta, que sigue la proteína
hasta llegar al sitio de su accionar.
Eucariotas: En el RE se elaboran las proteínas de
membrana, de secreción y las destinadas al RE, A
golgi y los lizosomas.
lizosomas
A golgi: sitio donde algunas proteínas sufren
modificaciones (maduran) para funcionar y se
envían al sitio de destino según las señales
moleculares del caso.
En ocasiones se tratan de secuencias de aa.
Contiguos que luego son escindidos por
proteólisis.

Proteínas de secreción Proteínas de secreción

Péptido señal: corta secuencia peptídica ubicada Biosíntesis protéica en el lumen de Res
en el N-terminal.
Se caracteriza por: aa. De carga positiva seguido
de aa.s hidrofóbicos y finaliza con aa.s de cadena
lateral corta.
corta
Una proteasa de señal es la encargada de
procesar el péptido para que la pp. Sea
biológicamente activa.

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“Maduración” de proteínas.
Por modificación de aminoácidos: algunos aa. en
posiciones específicas sufren modificaciones
químicas.
Estas pueden ser: Formación puentes S-S.
Acetilación: del grupo amino del N-terminal
N-terminal, o
algún amino de una cadena lateral.
“Maduración” de proteínas.
Hidroxilación, Metilación.
Glicosilación: Glicoproteínas.
Modificación que aumenta la estabilidad de la pp.
y la resistencia a proteasas. Las hace más
hidrofóbicas aumentando su solubilidad. Además
se generan estructuras individualizada que
permiten interacciones específicas.
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“Maduración” de proteínas.
Por modificación de aminoácidos:
Carboxilación: en cadenas laterales de aa.s
ácidos.
Fosforilación: es la más frecuente y es reversible.
Catalizado
Catali ado por quinasas con la hidrólisis de una
molécula de ATP.
Sucede en el –OH de tyr, ser o thr.
Genera un incremento de la carga (−) de la pp.
El proceso contrario (defosforilación) es llevado a
cabo por fosfatasas.
“Maduración” de proteínas.
Tipos de Glicosilación: Glicosiltransferasas
O-glicoproteínas:
Cadenas laterales de Ser o
Thr.
N-glicoproteínas: La unión se
da en el grupo amida de Asn
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“Maduración” de proteínas. “Maduración” de proteínas.

Modificación con lípidos: Puede ocurrir en el N-terminal: formando un
Acilación (ácidos grasos): Aciltransferasas enlace amida: miristilación.
Modificación que aumenta la apolaridad
de la proteína.
Puede ocurrir en las cadenas laterales:
Enlaces éster con OH (Ser, Thr) o tioéster con SH
(Cys)
Prenilación (terpenos)
Principalmente son: geranilo (10 C), farnesilo
(15 C) y geranilgeranilo (20 C).

“Maduración” de proteínas. “Maduración” de proteínas.

Procesamiento proteolítico:
Algunas proteínas son sintetizadas como
“precursores” (pro-proteínas) denominadas
El radical farnesilo le zimógenos, que deben ser activadas.
sirve para anclarse a la
membrana y funcionar,
ocasionando cáncer.
Si se bloquea la farnesil-
transferasa se evita el
fenotipo canceroso.

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“Maduración” de proteínas. Plegamiento de proteínas.

Procesamiento proteolítico:
Insulina: se sintetiza como pre-pro-proteina.
En el RE se elimina el péptido señal y en el
Aparato de Golgi termina su “maduración” siendo
hidrolizada por proteasas y acumulada en los
gránulos de secreción.

Proteínas chaperonas Degradación de proteínas

Proteínas protectoras que proporcionan el tiempo
suficiente a una proteína para su correcto
plegamiento.
Se conocen de dos tipos:
HSP70: evita la formación de agregados por
interacciones hidrofóbicas intermoleculares.
HSP60: aisla la proteína del entorno
introduciéndola en una estructura cilíndrica para
que suceda su correcto plegamiento.
Mecanismo de control que identifica las proteínas
defectuosas o se marcan aquellas que ya no se
requieren para ser recicladas.
El mecanismo mejor conocido (eucariotas) es el
de la:
Ubiquitinación
Llamada así por ser “ubicua” y actúa uniéndose
covalentemente (marcando) a las proteínas que
serán degradadas.

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Degradación de proteínas Señales que promueven la ubiquitinación

El aa. ubicado en el N-terminal

Secuencias PEST
La presencia de regiones (12-60 aa.s) ricas en
Pro, Glu, Ser y Thr (PEST), promueven la
degradación de la proteína.

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