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Operaciones básicas
El termino operación básica se refiere generalmente a las etapas físicas del procesos. Las
transformaciones químicas o bioquímicas son objeto de la ingeniería de reacciones. Los
caldos de fermentación son mezclas complejas de componentes que contienen productos
en solución diluida. En el bioprocesamiento, cualquier tratamiento del caldo de cultivo
después de la fermentación se conoce como procesamiento posterior. El propósito del
procesamiento posterior es concentrar y purificar el producto para la venta; en la mayoría
de los casos, esto solo requiere una modificación física. Aunque cada esquema de
recuperación será diferente, el procesamiento posterior sigue una secuencia general de
pasos.
i. Eliminación de células:
Un primer paso común en la recuperación del producto es la eliminación de las células
del licor de fermentación. Esto es necesario si la biomasa en sí es el producto, o si el
producto está contenido dentro de las células. La eliminación de células también puede
ayudar a la recuperación del producto de la fase líquida. La filtración y la centrifugación
son operaciones típicas de la unidad para la eliminación de células.
iii. Purificación:
Los procesos para la purificación son altamente selectivos y separan el producto de las
impurezas con propiedades similares. Las operaciones típicas de la unidad son
cromatografía, ultrafiltración y precipitación fraccional.
El proceso de recuperación del producto puede constituir una parte sustancial del coste
de producción total de producción del producto de fermentación. Por ejemplo, la relación
del coste de fermentación y el de recuperación del producto es aproximadamente 60:40
para antibióticos como la penicilina. Para antibióticos más recientes, esta relación se
invierte de manera que la recuperación del producto es más costosa que la fermentación.
Muchos de los nuevos productos de biotecnología como las proteínas recombinantes y
los anticuerpos monoclonales requieren procesos muy caros de tratamiento posterior que
constituyen un 80-90% del coste total del proceso.
Cuanto mayor es la concentración de partida más barato resulta el producto final. Cada
etapa del proceso de recuperación incluye alguna pérdida. Si la concentración de partida
es muy baja se necesitan más etapas de recuperación, y por lo tanto, mayores pérdidas y
costes.
1. Filtración
En la filtración, las partículas sólidas se separan de una mezcla liquido-sólido forzando al
fluido a pasar a través de un medio filtrante o tela filtrante que retiene las partículas. Los
sólidos se depositan en el filtro y, a medida que el depósito o la torta de filtración
aumentan en espesor, presentan una mayor resistencia a la filtración. La filtración se
puede realizar usando equipos de vacío o de presión positiva. La diferencia de presión
ejercida a través del filtro para separar el fluido de los sólidos se denomina caída de
presión de filtración. La facilidad de filtración depende de las propiedades del sólido y
el fluido; la filtración de sólidos incompresibles cristalinos en líquidos de baja viscosidad
es relativamente sencilla. Por el contrario, los caldos de fermentación pueden ser difíciles
de filtrar debido al pequeño tamaño y la naturaleza gelatinosa de las células y al
comportamiento viscoso no newtoniano del caldo. La mayoría de las tortas de filtro
microbiano son compresibles, es decir, la porosidad de la torta disminuye a medida que
aumenta la caída de presión a través del filtro. Esto puede ser un problema importante
que causa tasas de filtración reducidas y una mayor pérdida de producto. La filtración de
caldos de fermentación generalmente se lleva a cabo en condiciones no asépticas; el
proceso debe, por lo tanto, ser eficiente y confiable para evitar la contaminación indebida
y la degradación de productos lábiles.
Los auxiliares de filtración, como la tierra de diatomeas, se han utilizado ampliamente en
la industria de la fermentación para mejorar la eficacia de la filtración. La tierra de
diatomeas, también conocida como kieselguhr, es el esqueleto fundido de las diatomeas.
Los lechos empaquetados de kieselguhr granulado tienen una porosidad muy alta; solo
alrededor del 15% del volumen total de kieselguhr empacado es sólido, el resto es espacio
vacío. Tal alta porosidad facilita el flujo de líquido alrededor de las partículas y mejora la
tasa de filtración a través del lecho de partículas. Los filtros se aplican de dos maneras.
Como se muestra en la figura 1 (a), el coadyuvante de filtración se puede utilizar como
una capa preliminar en el medio filtrante para evitar el bloqueo del filtro por sólidos que
de otro modo se encajarían en los poros de la tela.
Equipos de filtración
Los filtros de placa son adecuados para la filtración de pequeños lotes de fermentación;
este tipo de filtro acumula gradualmente biomasa y debe abrirse periódicamente y
eliminarse de la torta de filtración. Los procesos más grandes requieren filtros continuos.
Los filtros de vacío de tambor giratorio, como el que se muestra en la figura 1 (b), son los
dispositivos de filtración más ampliamente utilizados en la industria de la fermentación.
Un tambor horizontal de 0,5-3 m de diámetro se cubre con un paño de filtro y se gira
lentamente a 0,1-2 rpm. La tela se sumerge parcialmente en un recipiente agitado que
contiene material para filtrar. Cuando una sección del tambor entra al líquido, se aplica
un vacío desde el interior del tambor. Se forma una torta en la superficie de la tela mientras
el líquido pasa a través de tuberías internas hacia un tanque de recolección. A medida que
el tambor gira fuera del depósito, la superficie del filtro se aplica líquido de lavado que
se aspira a través de la tela y se recoge en un tanque de retención separado. Después del
lavado, la torta se deshidrata mediante la aplicación continuada del vacío.
Teoría de la filtración
La teoría de la filtración se usa para estimar la tasa de filtración. Para una caída de presión
dada a través del filtro, la tasa de filtración es mayor justo cuando comienza el filtrado.
Esto se debe a que la resistencia a la filtración es mínima cuando no hay sólidos
depositados. La orientación de las partículas en el depósito inicial de la torta es muy
importante y puede influir significativamente en la estructura y la permeabilidad de todo
el lecho filtrante. La caída excesiva de presión y las altas velocidades iniciales de
filtración pueden provocar el taponamiento de la tela filtrante y una resistencia muy alta
al flujo. La resistencia al flujo debido a la tela filtrante se puede considerar constante si
las partículas no penetran en el material; la resistencia debido a la torta aumenta con el
grosor.
Reemplazando:
Integrando:
Donde
Y,
2. Centrifugación
Separar materiales de densidad diferente, tamaño grande y viscosidad del líquido baja.
Favoreciendo también radio grande de centrifuga y alta velocidad de giro. En un bio
procesos, separa las células del caldo de fermentación, eliminando desechos, para recoger
precipitados y preparar medios de fermentación. Efectiva para partículas pequeñas no
filtrables. El lodo de células concentrado y espeso, tiene más líquido que la torta filtrada.
Teoría de la centrifugación
𝜌𝑝 −𝜌𝑡
Velocidad terminal de la centrifuga 𝑢𝑐 = 𝐷𝑝2 𝜔2 𝑟
18𝜇
𝜔2 𝑟
La relación entre 𝑢𝑐 y 𝑢𝑔 , se denomina efecto centrifugo o número g 𝑍= 𝑔
La sedimentación sucede cuando las partículas que se alejan del centro de rotación,
chocan con las paredes, aumentando la velocidad angular, el tamaño de la partícula, la
diferencia de densidades y disminuyendo la viscosidad, se mejora la velocidad de
sedimentación. Además del tiempo de exposición suficiente.
𝑄
El factor sigma es el rendimiento, en centrifugas continuas es ∑ = 2 𝑢 . Si dos equipos
𝑔
𝑄1 𝑄2
cumplen con una misma efectividad ∑ = ∑ , se puede hacer un cambio de escala.
1 2
𝜋𝜔 2 𝑏 2𝜋𝜔 2 𝑏𝑟 2
Para una centrífuga de cesta tubular ∑ = (3𝑟22 + 𝑟12 ) aproximarse a ∑=
2𝑔 𝑔
Una centrifuga de discos opera en continuo a 5000 rpm para la separación de levadura de
panadería. Con una velocidad de alimentación de 60 L/min, se recupera el 50% de las
células. A velocidad de centrifugación constante, la recuperación de sólidos es
inversamente proporcional al caudal.
a) ¿Qué caudal se necesitará para alcanzar una recuperación del 90% de las
células si la velocidad de centrifugación se mantiene a 5000 rpm?
50%
× 60 𝐿/ min = 33.31 𝐿/𝑚𝑖𝑛
90%
b) ¿Qué velocidad de operación se necesitará si se desea alcanzar una
recuperación del 90% con un caudal de 60L/min?
Recuperación del 90% con Q=33.31 L/min y 𝜔=5000rpm
𝑄1 ∑1 33,3 𝐿/𝑚𝑖𝑛
= = = 0,56
𝑄2 ∑2 60 𝐿/𝑚𝑖𝑛
Se utiliza la misma centrifuga y los parámetros geométricos son iguales
∑1 𝜔2
= 𝜔12 = 0,56
∑2 2
Por lo tanto
𝜔12 (5000 𝑟𝑝𝑚)2
𝜔22 == = 4,46 × 107 𝑟𝑝𝑚2
0,56 0,56
𝜔2 = 6680 𝑟𝑝𝑚
3. Dispersión de células
Centrifugación y filtración para recuperar el producto de los caldos de fermentación. La
biomasa es un subproducto. Este método sirve para desprender el material deseado como
enzimas y proteínas recombinantes que permanecen en la biomasa. Métodos mecánicos
como molienda con abrasivos, agitación a elevada velocidad, bombeo a alta presión y
ultrasonidos. Métodos no mecánicos como el choque osmótico, congelación y
descongelación, digestión enzimática de paredes celulares, disolvente y detergentes.
- Homogenización de alta presión
Fuerzas de cizalla altas para dispersar células. Incorpora una válvula ajustable con
una restricción a través de la cual las células son forzadas a pasar a 550 atm. Con
organismos filamentosos se producen taponamientos.
𝑅𝑚
Relación de la dispersión de células en el equipo: 𝑙𝑛 (𝑅 ) = 𝑘𝑁𝑝𝛼
𝑚 −𝑅
Temperaturas hasta 50°C, pero se recomienda enfriar el equipo a 0-4°C para minimizar
la desnaturalización.
Etapa ideal
Dos líquidos inmiscibles entran con caudales volumétricos diferentes. Cada una con
concentración única de A, concentraciones de no equilibrio. Mezcla vigorosa (fuerza
impulsora para el cambio de concentración). A se transfiere. La mezcla va a un
sedimentador donde hay separación gracias a la gravedad. Sale un líquido ligero u otro
pesado, con concentraciones de A diferentes, cercanas al equilibrio. Cambio de
concentración en etapa real menor a la ideal. Requiere más etapas de separación.
En etapa ideal, las dos corrientes de salida están en equilibrio y no se produce más
transferencia de materia de A aunque se pongan en contacto nuevamente las fases. Usada
para diseño de operaciones básicas, balances de materia, de energía y relaciones de
equilibrio entre fases.
𝑉𝑢 𝑉
Rendimiento máximo 𝑌𝑢 = 𝑉 y 𝑌𝑙 = 𝑉 +𝑉𝑙 𝐾
𝑉𝑢 + 𝑙 𝑙 0
𝐾
𝐶
Factor de purificación o concentración 𝛿𝑐 = 𝐶 𝐴𝑙 , cuando el producto se distribuye en la
𝐴0
𝐶𝐴𝑙
parte inferior, 𝛿𝐶 = 𝐶 , cuando el producto se distribuye en la fase superior.
𝐴0
5. Adsorción
La adsorción es un fenómeno superficial donde los componentes de un gas o líquido se
concentran en la superficie de partículas sólidas o en la interfase de líquidos. Es le
resultado de las fuerzas electrostáticas, de Van der Walls, de reacción o cualquier otra
fuerza de unión entre átomos individuales iones o moléculas.
Puede distinguirse 4 tipos de adsorción.: de intercambio, física, química y no especifica.
En el bioproceso se emplea varias operaciones diferentes de adsorción para la obtención
de productos médico y farmacéuticos. La adsorción de intercambio iónico se utiliza para
la recuperación de aminoácidos, proteínas, antibióticos y vitaminas. La adsorción sobre
carbono activo es un gran método para la obtención de acido cítrico y se utiliza tmbn para
el tratamiento de aguas residuales.
La adsorción presenta mayor selectividad, pero menor capacidad que la extracción. Este
proceso es idóneo para el aislamiento de proteínas. La sustancia que va a ser concentrada
en la superficie se denomina adsorbato mientras que el material al que se une el adsorbato
es el adsorbente. El material adsorbente ideal prosee una alta superficie pro unidad de
volumen lo cual se alcanza si el sólido tiene un entramado de finos poros en el interior.
Para la adsorción de moléculas biológicas se utilizan normalmente carbones y resinas
sintéticas basadas en polímeros de estireno, divinilbenceno o acrilamida.
KA: constante
Existen muchas otras isotermas de adsorción que dan lugar a curvas C*AS vs C*A. Pero
en todas ellas los datos de equilibrio de adsorción deben calcularse experimentalmente ya
que aún no se conocen con exactitud los mecanismos de adsorción.
Se han desarrollado varios equipos para las operaciones de adsorción entre los que se
incluyen:
Conforme continua el flujo de solución, la región del lecho donde existe la mayoría de
adsorción (zona de adsorción) va descendiendo ya que la resina de la parte superior se va
saturando de soluto en equilibrio con la concentración en el líquido CAi.
Finalmente, la zona de adsorción alcanza el fondo del lecho, la resina está casi saturada y
la concentración del efluente empieza a aumentar (este punto se llama punto de ruptura).
Cuando la zona de adsorción para atreves del fondo del lecho la resina no puede adsorber
más soluto y la concentración del efluente recobra su valor inicial. En este punto el lecho
esta totalmente saturado de adsorbato y debe ser regenerado. La curva de ruptura muestra
la concentración de soluto en el efluente o volumen de material procesado en función del
tiempo. La forma de esta curva influye en el diseño y operación delos adsorbente en lecho
fijo. La porción de la curva de ruptura entre dos tiempos la cantidad de soluto perdido en
el efluente (área bajo la curva entre esos dos tiempos). Para evitar esto las operaciones de
adsorción se paran generalmente antes de que el lecho este completamente saturado.
6. Cromatografía
La cromatografía es una técnica analítica comúnmente utilizada para separar una mezcla
de sustancias químicas en sus componentes individuales, de modo que los componentes
individuales puedan analizarse a fondo. La base de la cromatografía es migración
diferencial, es decir el retraso selectivo de las moléculas al pasar por un lecho de
partículas de resina.
Migración diferencial
Ve: Volumen del eluyente necesario para transportar el soluto a través de la columna hasta
que sale a su máxima concentración. Cada componente tiene su volumen de elución
diferente.
Vo: Volumen hueco. Volumen del líquido existente en la columna que no se encuentra en
el interior de las partículas.
k: Factor de capacidad
Estas ecuaciones son válidas para todos los tipos de cromatografía revisadas excepto para
la cromatografía de filtración por gel.
donde:
V0:Volumen hueco
Vi: Volumen interno de los poros
Donde:
Kp: Coeficiente de reparto del gel. La fracción de volumen interno disponible para el
soluto. Se calcula:
Donde:
Wr: Valor de ganancia de agua. Volumen de agua tomado por masa de gel seco.
EJEMPLO 5:
Para separar dos hormonas A y B se utiliza una columna de cromatografía de gel a escala
piloto empaquetada con resina Sephacryl. La columna tiene 5 cm de diámetro y 0,3 m de
altura. El volumen hueco es 1,9 x 10−4 m3. El valor de ganancia de agua del gel es 3
x10−3 𝑚3 𝑘𝑔−1 Sephacrul seco. La densidad del gel húmedo es de 1,25x103 kg 𝑚−3. El
coeficiente de reparto de la hormona A es 0,38 y el de la hormona B es 0,15. Si el caudal
de eluyente es de 0,71l /h,¿cuál es el tiempo de retenció para cada hormona.
Solución:
CONCLUSIONES
Las operaciones básicas son procesos físicos e individuales los cuales buscan recuperar,
concentrar y purificar el producto de interés a partir del caldo de fermentación.
La centrifugación y disrupción celular son procesos que se utilizan para aislar el producto
deseado que se encuentra mezclado con el caldo de fermentación; el objetivo es realizar
la operación con la mayor eficiencia y obtener pureza alta. Así como la extracción líquido-
líquido que utiliza disolventes inmiscibles para la transferencia de materia que se desea
separar.
La cromatografía es una técnica empleada para la resolución de mezclas y aislamiento de
componentes, basada en la migración diferencial de los solutos sobre una fase
estacionaria.