PRETATO DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO ALCALINO DE

CASHEW APPLE BAGASSE PARA LA PRODUCCIÓN DE ETANOL:

ESTUDIO DE PARÁMETROS

Abstracto

El pretratamiento con peróxido de hidrógeno alcalino (AHP) del bagazo de anacardo (CAB)

se evaluó basándose en la conversión de la celulosa resultante en glucosa. los

efectos de la concentración de peróxido de hidrógeno a pH 11.5, la carga de biomasa y

la duración del pretratamiento realizado a 35 ° C y 250 rpm se evaluó después de la

La sacarificación enzimática posterior de la biomasa pretratada utilizando un comercial

enzima celulasa. El CAB utilizado en este estudio contenía 20,56 ± 2,19 celulosa, 10,17 ±

0,89% de hemicelulosa y 35,26 ± 0,90% de lignina. El pretratamiento resultó en una reducción

contenido de lignina en los sólidos residuales. Aumentando la concentración de H2O2 (0 a 4.3% v / v)

dio como resultado una tasa más alta de hidrólisis enzimática. Las cargas más bajas de biomasa dieron mayor

rendimientos de glucosa. Además, no se observó furfural ni hidroximetil furfural cuantificables

producido en la fracción líquida durante el pretratamiento. Los resultados muestran que alcalina

el peróxido de hidrógeno es efectivo para el pretratamiento de CAB.

Monlau et al. (2012) comparado de dos

pretratamientos térmicos (55 y 170 ºC) y cinco pretratamientos termoquímicos (NaOH,

H2O2, Ca (OH) 2, HCl y FeCl3) en las características estructurales y la digestión anaerobia de

tallos de girasol. Para mejorar la digestibilidad enzimática del bagazo de sorgo dulce y

producción de bioetanol, Cao et al. (2012) evaluaron cinco pretratamientos (NaOH diluido

solución de autoclave pretratamiento, solución de NaOH de alta concentración inmersa

pretratamiento, autoclave de solución de NaOH diluido y pretratamiento de inmersión de H2O2,

pretratamiento con peróxido alcalino y pretratamiento en autoclave). Entre ellos, el mejor

El resultado fue obtenido cuando el bagazo de sorgo dulce fue enviado a NaOH diluido

solución de autoclave y pretratamiento por inmersión de H2O2 (Cao et al., 2012).

Este trabajo estudió el pretratamiento del bagazo de anacardo con peróxido de hidrógeno,

que se conoce como peróxido de hidrógeno alcalino (AHP). Durante el pretratamiento AHP,

El pH se fijó en 11.5 ya que la eliminación de lignina es fuertemente dependiente del pH. De acuerdo a

Gould (1985), la reacción tiene un pH óptimo de 11.5-11.6, que es el pKa para el

reacción de disociación de H2O2. Las especies oxidantes de lignina en estas reacciones son aparentemente

el radical hidroxilo altamente reactivo (HO-) que se forma durante la degradación del H2O2

en una reacción con el anión hidroperoxi (HOO-) (Lewis et al., 1987). Pretratamiento con
AHP tiene la gran ventaja de no dejar residuos en la biomasa porque

se degrada en oxígeno y agua (Rabelo et al., 2008). El peróxido de hidrógeno se disocia

en especies de oxígeno altamente reactivas: superóxidos y radicales hidroxilo. Los radicales

que se derivan de H2O2 exhiben una acción oxidativa que promueve la

despolimerización de lignina atacando las cadenas laterales de lignina y fragmentando la macroestructura de lignina
en varios compuestos de bajo peso molecular (Selig et al.,

2009). Este pretratamiento se aplicó al rastrojo de maíz (Selig et al., 2009; Banerjee et al.

al., 2011), bagazo de caña de azúcar (Rabelo et al., 2008), paja de trigo (Balat, 2011), cebada

paja (Saha y Cotta, 2010), bambú (Yamashita et al., 2009), paja de arroz (Patel y

Bhatt, 1992) y otras plantas herbáceas y de madera.

Se han evaluado diferentes métodos de pretratamiento para el tratamiento de CAB; estas

incluye ácido sulfúrico diluido (Rocha et al., 2011), una combinación de ácido diluido y álcali

pretratamiento (Rocha et al., 2009) y una combinación de microondas y álcali

pretratamiento (Rodrigues et al., 2011). Estudios previos con AHP han demostrado que

solubiliza la lignina, pero su efecto sobre la cristalinidad de la celulosa no está claro (Selig et al.,

2009). De acuerdo con Banerjee et al. (2011), el pretratamiento del rastrojo de maíz con AHP

satisface muchos criterios de un protocolo de pretratamiento ideal, particularmente los altos rendimientos de

Azúcares fermentables que se obtienen con bajas cargas de enzimas.

Los objetivos de este estudio fueron investigar los efectos del pretratamiento AHP en

la composición, estructura y digestibilidad enzimática de CAB usando diferentes peróxidos

concentraciones, tiempos de pretratamiento y cargas CAB.

2. Material y métodos

2.1. Materia prima

El bagazo de anacardo (Anacardium occidentale L.) (CAB) fue amablemente donado por

Jandaia Industry of Juice (Ceará, Brasil). Se lavó tres veces con agua, se secó a

60 ° C durante 24 hy molido en un molino de martillos de manera que pueda pasar a través de una malla con

un tamaño promedio de malla 20 - 80 (0.25 - 0.84 mm). El CAB molido se almacenó a 30 ° C.

2.2. Pretratamiento de CAB

El CAB molido se pretrató usando peróxido de hidrógeno alcalino. Los efectos de la

Se evaluaron los siguientes parámetros sobre el pretratamiento de CAB: peróxido alcalino

concentración de hidrógeno (0 - 4.3% v / v), carga CAB (2.5 - 10% w / v) y tiempo de incubación

(30 min - 24 h). La solución de H2O2 se ajustó a pH 11,5 usando 6 mol / l de NaOH. los

el pretratamiento se realizó en un agitador a 35 ° C con mezcla suave a una velocidad de 250

rpm Después del pretratamiento, las fracciones sólidas y líquidas se separaron por filtración.

Las fracciones sólidas se lavaron con agua destilada y se secaron en un horno a 60 ° C durante

24 h. La celulosa, hemicelulosas y lignina que estaban presentes en las muestras CAB

Luego se evaluaron usando el método descrito por Gouveia et al. (2009). los

extraíbles, sólidos totales y ceniza se analizaron de acuerdo con los métodos NREL (Sluiter)

et al., 2008). El resto de la fracción sólida se usó como sustrato en la subsiguiente

paso de hidrólisis enzimática.

3. Resultados y discusión

3.1. Materia prima

El CAB utilizado en este estudio contenía 20,56 ± 2,19% de celulosa y 10,17 ± 0,89%

hemicelulosa, que se suman al contenido total de carbohidratos de 30.73 ± 3.10%, y

35.26 ± 0.90% de lignina. Una extracción de disolvente adicional con etanol dio como resultado un 7,4%

composición de aceites, pigmentos y ceras. Se obtuvo una composición similar de CAB

por Rodrigues et al. (2011). Su contenido de celulosa hace CAB un sustrato prometedor para

producción de etanol Si el bagazo va a ser hidrolizado con enzimas, es

necesario pretratar el material para eliminar la hemicelulosa y la lignina. Alcalino

el peróxido se ha utilizado con éxito para el pretratamiento de lignocelulosa, y esto

se ha encontrado que el agente es efectivo para la eliminación de hemicelulosa y lignina (Chen

et al., 2008) basado en la acción oxidativa de los radicales derivados de H2O2 (Selig et al.,

2009).

3.2. Evaluación de la influencia de varios parámetros en el pretratamiento AHP de CAB

La relación entre la severidad del pretratamiento y la sacarificación enzimática de

el material sólido pretratado fue examinado. En un intento de identificar y describir el

se estudiaron variables clave, varias concentraciones alcalinas, cargas sólidas y tiempos. A

evitar emisiones de azúcar grandes y rápidas, que podrían enmascarar cualquier

variables de pretratamiento, las sacarificaciones se realizaron solo con la celulasa

enzima a una dosis de enzima relativamente baja (11,4 FPU de celulasa por gramo de celulosa).

El proceso de hidrólisis enzimática no fue diseñado para maximizar la liberación de azúcar sino para

aumentar e identificar los parámetros clave que resultan en un pretratamiento exitoso

procesos.
3.2.1. Influencia de la concentración de H2O2

El tratamiento de CAB con cantidades crecientes de APH a pH 11.5 dio como resultado una

reducción progresiva en el contenido de lignina y ceniza de los sólidos de CAB residuales (Tabla 1).

El análisis de los sólidos pretratados no reveló ninguna eliminación significativa de

hemicelulosa en los pretratamientos que se realizaron con 0.0, 0.645 y 2.15% v / v

AHP (Tabla 1), que indica una característica muy interesante del AHP investigado

pretratamiento. Por lo general, los pretratamientos de AHP eliminan, además de la lignina, una pequeña pero

parte no insignificante de la fracción de hemicelulosa.

El experimento con AHP al 4,3% v / v dio como resultado el rendimiento másico (35%) más bajo de la

sólidos pretratados, lo que indica que el 65% de la masa de bagazo se solubilizó (Tabla

1). La lignina fue el principal componente solubilizado bajo esta condición de pretratamiento. los

el rendimiento en masa de lignina en los sólidos pretratados fue solo de 6,97 g; porque el original

composición de lignina en el CAB sin procesar fue de 35.26 ± 0.9%, este resultado revela que 80.2%

de la lignina que estaba inicialmente contenida en el CAB se solubilizó.

Como resultado de la baja eficiencia de la hidrólisis de hemicelulosas, una baja xilosa

concentración (0,52 g / l) en la fracción líquida. Además, no hay furfural o

compuestos de hidroximetilfurfural fueron detectados en los líquidos de pretratamiento. Esta

el hallazgo está de acuerdo con los resultados informados previamente (Saha y Cotta, 2007; Karagöz

et al., 2012)

La Tabla 1 muestra un aumento de 37.6% en el porcentaje de celulosa en el CAB tratado

con 4.3% v / v AHP comparado con el CAB no tratado; este hallazgo corresponde a un

contenido de fibra de celulosa pretratada de 32.9% m / m. Sin embargo, el porcentaje de lignina

disminuyó, lo que se espera porque el pretratamiento con peróxido aumenta la

solubilidad de la lignina (Alvira et al., 2010). La reducción en el contenido de lignina era 77.8%, que es un resultado
bastante favorable en comparación con la literatura, por ejemplo, Selig et al.

(2009a) pretrataron un material lignocelulósico (rastrojo de maíz) con peróxido de hidrógeno y

redujo el contenido de lignina en un 19.6%. El contenido de hemicelulosa no exhibió

diferencias como resultado de este pretratamiento.

El efecto de la concentración de pretratamiento AHP alcalino (0 - 4,3% v / v) en el

La sacarificación enzimática de CAB (10% m / v) que se pretrató a 35 ° C durante 24 h fue

estudiado y se muestra en la Fig. 1A y 1B. Los experimentos sobre la hidrólisis enzimática

de los sólidos pretratados revelaron que el pretratamiento fue efectivo para mejorar la

convertibilidad enzimática de la celulosa. El pretratamiento dio lugar a conversiones superiores a

50.7% después de 72 h, mientras que solo 2.27% de la celulosa inicial del CAB no tratado fue

hidrolizado (Fig. 1A). Se observó un aumento en la digestibilidad enzimática con

aumentando la concentración de H2O2 y aumentando el tiempo de sacarificación. La hidrólisis de

El CAB pretratado con 4.3% v / v de H2O2 tuvo una tasa inicial más alta y 50.7% de celulosa

la conversión se logró después de 72 h. Sin embargo, no se observó un aumento significativo en

48 h, y las conversiones finales obtenidas con ambas condiciones de pretratamiento fueron

comparable. Bajo esta condición, el rendimiento de glucosa (en mg por g) para el enzimático

la hidrólisis del CAB sin tratar usando celulasa fue 73 ± 1,5 mg / gCAB (figura 1B). los

el rendimiento correspondiente (en mg por g) de CAB tratado fue 208,7 ± 0,5 mg / gCAB-AHP.

Sin embargo, no se obtuvieron diferencias significativas (al 95% de nivel de confianza) en el

rendimiento de glucosa por g de CAB sin tratar usando concentraciones de AHP de 0.645%, 2.13% y

4.3% v / v.

El pretratamiento optimizado consecutivo proporcionó el mayor rendimiento de glucosa

producción, es decir, 48.6 ± 6.2 mg / gCAB y 138.3 ± 6.2 mg / gCAB-AHP, con un menor

tiempo de incubación (24 h). Esta mejora se debe a los efectos de ambos

deslignificación y el cambio en la cristalinidad de la celulosa. La producción de glucosa

aumentado al aumentar el tiempo de incubación y alcanzó valores máximos de 73.3 ± 1.5

mg / gCAB y 208,7 ± 1,5 mg / gCAB-AHP después de una incubación de 72 h (Fig. 1B).

Los resultados obtenidos en el estudio de pretratamiento que evaluó la concentración de AHP son

de acuerdo con los resultados informados previamente. Karagöz et al. (2012) evaluó el AHP

pretratamiento de paja de colza y encontró que la concentración óptima de pretratamiento era

5% v / v H2O2. Saha y Cotta (2007) encontraron que el rendimiento máximo de azúcar se obtuvo

a través de la hidrólisis enzimática de cáscaras de arroz después del pretratamiento con 7.5% (v / v) de H2O,

pH 11.5, a 35 ° C durante 24 h.

La comparación de la lignina que se eliminó del bagazo (Tabla 1) con la

digestibilidad enzimática (Fig. 1A) y el rendimiento de glucosa (Fig. 1B) después de la enzimática

la hidrólisis mostró que una mayor eliminación de lignina daba una mejor digestibilidad y rendimientos.

Se esperaban estos resultados y están de acuerdo con los informes de la literatura sobre

eliminación de lignina y sus efectos sobre la digestibilidad de los sustratos lignocelulósicos (Selig et al.

al., 2009; Banerjee et al., 2011; Karagöz et al., 2012).

En base a este resultado, se utilizó una concentración de H2O2 de 4.3% v / v para la siguiente

condiciones de pretratamiento que fueron estudiadas.

3.2.2. Influencia de la carga de biomasa

El experimento que utilizó CAB al 2% p / v dio como resultado un rendimiento en masa de sólidos pretratados del 39%,

lo que indica que el 61% de los sólidos iniciales se solubilizaron (Tabla 2). La lignina era la

principal componente solubilizado. El rendimiento masivo de lignina en los sólidos pretratados fue 7,02

g, que disminuye desde su composición inicial de 35.26% en el bagazo crudo; esta

El resultado revela que el 92.27% de la lignina que inicialmente estaba contenida en la materia prima

fue solubilizado. Se obtuvieron resultados similares en el pretratamiento de CAB al 5% p / v.

Bajo esta condición, se obtuvo un rendimiento en masa de sólidos pretratados del 34%, que

indica que el 66% de los sólidos se solubilizaron (Tabla 2). En este caso, la lignina también fue

el principal componente solubilizado. El rendimiento masivo de lignina en los sólidos pretratados fue

2,66 g, que, en comparación con el contenido inicial de lignina en el bagazo crudo de 35,26%,

revela que el 92.44% de la lignina que inicialmente estaba contenida en la materia prima era

solubilizado. Usando una carga de biomasa de 10% p / v, 83.2% del contenido inicial de lignina

fue removido. Este hallazgo indica la efectividad del pretratamiento para el

eliminación de lignina. Porque la lignina es una barrera física que rodea las fibras de celulosa

y protege estas fibras del ataque enzimático (Karagöz et al., 2012; McIntosh y

Vancov, 2011; Selig et al., 2009), la eliminación de este componente indica el potencial

del método para la activación del bagazo para la posterior hidrólisis enzimática.

El análisis de los sólidos pretratados no reveló ninguna eliminación significativa de

hemicelulosa (Tabla 2) con cualquiera de las cargas de biomasa estudiadas, que es una muy

característica interesante del pretratamiento de hidrógeno con peróxido alcalino investigado.

Se estudió la digestibilidad enzimática de la biomasa pretratada con diferentes cargas

como una función del tiempo de digestión (Fig. 2A). Las digestibilidades medidas fueron similares

para todas las cargas de biomasa y aumenta con el aumento del tiempo de hidrólisis de 24 a 48 h;

sin embargo, no se obtuvo diferencia significativa (p <0,05) en el rendimiento de glucosa obtenido

después de 48 y 72 h de hidrólisis.

La Fig. 2B muestra el rendimiento de glucosa después de la hidrólisis enzimática de bagazo que fue

pretratado utilizando diferentes cargas de biomasa. Aumentando la carga de biomasa del 2% a

10% w / v disminuyó el rendimiento de glucosa de 103.9 ± 1.1 a 73.3 ± 1.5 mg glucosa / gCAB

después de 72 h de hidrólisis. Esta disminución se debe a la menor carga de celulosa en el

CAB pretratado y la pérdida de sólidos como resultado del pretratamiento. Los rendimientos de glucosa (en mg de
glucosa por g de CAB pretratados) fueron 267.4 ± 1.1 y 208.7 ± 1.5

mgglucosa / gCAB-AHP para cargas de biomasa de 2 y 10% p / v, respectivamente.

Esta disminución en la digestibilidad y el rendimiento de glucosa con el aumento de la carga de biomasa es

probablemente relacionado con la efectividad reducida de la actividad de peróxido de hidrógeno en

TAXI. Durante el proceso, se observó que las partículas de CAB experimentaron hinchazón.

De acuerdo con Selig et al. (2009a), la acción oxidativa de los radicales derivados de H2O2

(H3O + y HOO-) que se forman por la disociación de peróxido en agua da como resultado la

despolimerización de lignina atacando las cadenas laterales de lignina y fragmentando el

lignina macroestructura en una serie de compuestos de bajo peso molecular. Una escasez de
el agua en la biomasa resulta en la formación de un menor número de radicales. Esta

la producción disminuida de radicales reduce posteriormente la cantidad de fluido que se

transportado al interior de la biomasa, lo que da como resultado una pérdida de

eficiencia durante la hidrólisis.

Se obtuvieron diferentes resultados en el estudio realizado por Banerjee et al. (2011), quien

evaluó el efecto de las cargas de rastrojo de maíz y observó que el aumento de biomasa

las cargas aumentaron la efectividad del pretratamiento AHP.

En base a este resultado, una carga de biomasa de 5% p / v, una concentración de H2O2 de 4.3% v / v

se usó una temperatura de 35 ° C para los pretratamientos que se estudiaron posteriormente.

3.2.3. Influencia del tiempo de pretratamiento

El efecto de la duración del pretratamiento con peróxido alcalino sobre la composición de

el CAB pretratado se evaluó y los resultados se muestran en la Tabla 2.

los experimentos que se realizaron con diferentes tiempos de pretratamiento no afectaron el

recuperación de carga sólida. Los pretratamientos de 30 minutos y 2 horas muestran una menor eliminación de

lignina, pero la misma cantidad de contenido de celulosa se obtuvo después de 6, 12 y 24 h.

Como se muestra en la Tabla 3, un aumento en la duración del pretratamiento de 6 a 24 ha 35 ° C

con 4.3% de H2O2 no afectó el contenido de celulosa de los sólidos (de 44.2 ± 0.3% a

48.23 ± 3.97%, respectivamente). Sin embargo, el contenido de lignina aumentó de 2.9 ± 0.1% a

7.8 ± 0.1%, respectivamente. El pretratamiento durante 6 h dio como resultado la transferencia de 2,6 g

glucosa y 4,5 g de xilosa al líquido de pretratamiento a partir del contenido de carbohidratos del

Inicial 100 g de materia prima.

El efecto de la duración del pretratamiento con peróxido alcalino (24, 48 y 72 h) en el

digestibilidad de CAB a 45 ° C y pH 5.5 fue investigado. Los resultados se presentan en

Figs. 3A y 3B. Se obtuvo un porcentaje de digestibilidad del 60% en los primeros 30 min. Un

el aumento en el tiempo de pretratamiento a 12 h no afectó significativamente la digestibilidad;

sin embargo, un pretratamiento de 24 h disminuyó la digestibilidad.

Se observó una alta tasa de hidrólisis en las primeras 24 h de sacarificación. Creciente

el tiempo de pretratamiento disminuyó significativamente la velocidad de hidrólisis enzimática (Fig. 3B).

La estructura de la muestra que fue tratada bajo las condiciones más severas (mayor

tiempo de digestión) parece estar significativamente roto, lo que daría lugar a un indeseado

degradación de celulosa. Sin embargo, la muestra de celulosa (Tabla 3) obtenida bajo

el tratamiento de peróxido alcalino más severo probado tuvo una baja recuperación de sólidos (Tabla 3), y

este tratamiento severo no es óptimo para la producción de etanol debido a la indeseable

degradación de celulosa.
Se encontró que el pretratamiento de 6 h era suficiente para una hidrólisis eficiente. La glucosa

el rendimiento después de este pretratamiento fue de 161 ± 0,6 mg de glucosa / gCAB, que corresponde a 431 ±

0.6 mgglucosa / gCAB-AHP basado en la cantidad de bagazo que fue tratado.

Rabelo et al. (2011) estudiaron el pretratamiento con peróxido de hidrógeno alcalino de la caña de azúcar

bagazo utilizando un diseño factorial y demostró que un aumento en la concentración de peróxido maximiza el
rendimiento de glucosa y que el tiempo de pretratamiento no

influir en los resultados obtenidos con altas concentraciones de peróxido.

En base a este resultado, las siguientes condiciones de pretratamiento se consideraron óptimas: 6 h

pretratamiento utilizando una carga de biomasa de 10% p / v, una concentración de H2O2 de 4.3% v / v y una

temperatura de 35 ° C.

Para dilucidar los cambios físicos que ocurren durante este pretratamiento, la morfología

del CAB pretratado se investigó mediante SEM. El microscopio electrónico de barrido

de estos materiales revelaron superficies más texturizadas en las paredes de las células en bruto como resultado de la

pretratamiento deslignificante, que expone los carbohidratos estructurales que permanecen en el

material sólido residual después del pretratamiento.

Se puede observar que la superficie del material antes del pretratamiento AHP es

desigual y cubierto con pequeñas gotas y ceras. La muestra original tiene un compacto

estructura con pliegues de contracción ocasionales y no es adecuado para la enzima posterior

tratamiento, como se muestra en la Fig. 1B. No es sorprendente que las muestras tratadas tengan una apariencia más
suave

superficies debido a la eliminación de gotitas de lignina y la baja solubilización de

hemicelulosa. Está claro que una mejor deslignificación da como resultado una mayor individualización

paquetes de fibras y que una única forma de celda de fibra forma una estructura suelta. La eliminación

de la lignina elimina parcialmente la interferencia contra la acción de la celulasa. En adición,

las fibras bien separadas son beneficiosas para una mayor hidrólisis porque una mayor área activa

mejora el acceso a la celulosa. El tratamiento AHP altera la estructura de la

CAB fibras y aumenta el área reactiva, que en última instancia mejora la celulosa

accesibilidad.

Para avanzar en el reconocimiento de la estructura de la celulosa, los patrones de XRD de la

se esbozan los sólidos del bagazo de anacardo no tratado y pretratados. Se ha informado (Mulinari et al., 2009; Chen
et al., 2010; Chen et al., 2012) que un importante

El pico de difracción del plano cristalográfico de celulosa se puede identificar para 2θ en el rango

de 22-24 °. Para CAB, la estructura cristalina no es notable, probablemente debido a la

cobertura de celulosa por hemicelulosa y lignina (Mulinari et al., 2009; Chen et al.,

2012). Sin embargo, aumentó la celulosa cristalina de los materiales pretratados

observado.
Se obtuvieron los espectros FTIR de CAB sin tratar y CAB pretratados (datos no mostrados).

Una banda de absorción a 1500-1550 cm-1 para vibraciones de anillo aromático en ligninas reveló

que todas las preparaciones celulósicas están libres de lignina unida. Esto indicó que el

pretratamiento con AHP en las condiciones dadas, eliminó por completo la lignina

moléculas del bagazo de anacardo. Estos picos son similares a los resultados de Sun et

Alabama. (2003). Liu et al. (2006) resaltaron que la absorbancia en 897, 1030, 1064, 1106

y 1168 cm-1 se pueden identificar para celulosa con un número de onda que va desde 800

a 1300 cm-1. En los espectros FTIR de CAB pretratados, los picos antes mencionados fueron

también obtenido. Para el CAB no tratado, los picos a 1064 y 1106 cm-1 fueron menores

prominente. Sin embargo, una vez que el CAB se pretrata, los dos picos se incrementaron. De nuevo,

esto refleja la capacidad del pretratamiento para eliminar la lignina a fin de mejorar la

característica de la celulosa contenida en el bagazo de anacardo.

En base a los resultados obtenidos en este estudio, se concluyó que el pretratamiento de 6 h de

5% w / v CAB con 4.3% p / v H2O2, pH 11.5, a 35 ° C y 150 rpm fue el más

método de pretratamiento efectivo para la producción de glucosa de CAB por enzima

sacarificación.

Sin embargo, una vez que el CAB se pretrata, los dos picos se incrementaron. De nuevo,

esto refleja la capacidad del pretratamiento para eliminar la lignina a fin de mejorar la

característica de la celulosa contenida en el bagazo de anacardo.

En base a los resultados obtenidos en este estudio, se concluyó que el pretratamiento de 6 h de

5% w / v CAB con 4.3% p / v H2O2, pH 11.5, a 35 ° C y 150 rpm fue el más

método de pretratamiento efectivo para la producción de glucosa de CAB por enzima

sacarificación.

3.3. Efecto de las condiciones previas al tratamiento sobre la eliminación de lignina

El grado de deslignificación refleja la efectividad del peróxido alcalino

proceso de pretratamiento. Además, esta medición es fundamental para la mejora de la

degradación enzimática de lignocelulósicos y, en última instancia, está influenciada por la

severidad del pretratamiento (Sun y Cheng, 2002; McIntosh y Vancov, 2011). los

la eliminación de lignina es ventajosa desde una perspectiva de economía de proceso porque la lignina

impide el acceso de las enzimas a la celulosa y reduce la eficiencia de la

sacarificación (Yang y Wyman, 2008; Karagöz et al., 2012).

El efecto del pretratamiento AHP en la deslignificación de CAB fue cuantificado por

determinar la reducción de lignina soluble en ácido e insoluble en ácido en el pretratado

sólidos en función de la concentración de peróxido de hidrógeno alcalino, la concentración

del sólido y el tiempo de residencia. Esta medida se expresa como una reducción porcentual

con respeto al material de partida original.

Todos los parámetros probados contribuyeron a la deslignificación, particularmente el alcalino

concentración de peróxido de hidrógeno, que tuvo el efecto más significativo (p <0.05).

Utilizando una carga sólida de CAB al 10% p / v, el grado de deslignificación varió de 16.5 ±

0.9% (0.645% AHP, 24 h, 35 ° C) hasta un máximo de 80.2 ± 0.5% (4.3% AHP, 24 h, 35

DO). Usando un pretratamiento con 4.3% v / v AHP y 5% w / v CAB a 35 ° C, un similar

se alcanzó una reducción en el contenido de lignina para todos los tiempos de reacción probados. El máximo

la digestibilidad enzimática (a base de celulosa) del 87% se alcanzó después de 72 h de hidrólisis.

Aumentar la cantidad de materia prima (CAB al 10% p / v) en el pretratamiento

disminuyó significativamente el grado de deslignificación (p <0.05) en comparación con ese

obtenido con 2 y 5% w / v CAB.

A una baja carga sólida de CAB, la deslignificación se incrementó sustancialmente y se extendió

de 80.2 ± 0.5% (4.3% AHP, 10% w / v CAB, 24 h) a 96.7 ± 0.7% (4.3% AHP, 5%

w / v CAB, 24 h). Sin embargo, la máxima deslignificación se logró con un pretratamiento de 6 h a 35 ° C con AHP al
4,3%. Los pretratamientos de peróxido de hidrógeno alcalino

usando 0.645% y 2.15% de AHP con 10% p / v de CAB fueron generalmente incapaces de deslignificar

TAXI. Los niveles reducidos de deslignificación observados cuando el CAB se pretrató con

0.645% y 2.15% v / v AHP a 35 ° C corresponde a rendimientos reducidos de azúcar en el

hidrolizados sacarificados Estos hallazgos muestran una correlación entre el grado de

deslignificación y la sacarificación de la enzima del CAB pretratado. De hecho, varios

estudios han demostrado fuertes correlaciones negativas entre el contenido de lignina y

el azúcar que se libera por hidrólisis enzimática (Karagöz et al., 2012; McIntosh y

Vancov, 2011; Selig y otros, 2009; Guo et al., 2009). Varios investigadores han confirmado

que la lignina actúa directamente como una barrera física que restringe el acceso de la celulasa a

celulosa y reduce la actividad de la enzima a través de la unión no productiva (Karagöz et al.

al., 2012; Selig y otros, 2009; Jeoh et al., 2007).

El contenido de hemicelulosa en las muestras que fueron pretratadas con AHP fue en su mayoría

no asociado con la eliminación de la lignina; de hecho, el contenido de hemicelulosa permaneció

mayormente sin cambios. Los mismos resultados fueron obtenidos por otros investigadores (Selig et al.,

2009).

3.4. Balance total de masa

Se realizó un balance de masa del proceso (desde el pretratamiento hasta la hidrólisis enzimática)
calculado y se muestra en la Fig. 4. El CAB a una carga sólida del 5% (p / v) fue

pretratado en condiciones optimizadas para la máxima recuperación de azúcar (4.3%)

AHP, 6 horas, 35 ºC). La fracción sólida restante se separó del hidrolizado

antes de la sacarificación enzimática. La cantidad de material recuperado correspondió

al 37.3% del CAB no tratado y fue sometido a sacarificación. El rendimiento del azúcar

se registraron como 16 g de glucosa por 100 g de material de partida original. Este rendimiento (en g de glucosa por
100 g de CAB tratado) fue 42,9. En el presente estudio, el líquido

fracción después del pretratamiento con peróxido alcalino contenía aproximadamente 0,695 g de

glucosa, 0,957 g de xilosa y 0,590 g de celobiosa. Finalmente, el balance de masa

demuestra que las condiciones de pretratamiento con bajas dosis de enzimas dieron recuperaciones de

aproximadamente el 89% del azúcar total que teóricamente puede obtenerse de CAB.

4. Conclusiones

Un pretratamiento de 6 h a 35 ° C usando una concentración de H2O2 (pH 11.5) de 4.3% v / v y una

Se consideró que la carga de biomasa al 5% p / v era el pretratamiento óptimo de CAB. los

el pretratamiento de CAB con AHP aumentó significativamente el contenido de celulosa e hizo

la estructura del residuo rico en celulosa es más suave y suelta. En consecuencia, el

la hidrólisis enzimática mejoró significativamente del 3% al 87% de la digestibilidad,

que condujo a un rendimiento máximo de glucosa de 161 mg / gCAB (431 mg / gCAB-AHP) a bajo

cargas de enzimas. El pretratamiento AHP parece ser susceptible de más

mejoras que podrían conducir a su desarrollo como un paso viable en la producción de

etanol de CAB.

Expresiones de gratitud

Los autores agradecen el apoyo financiero proporcionado por la investigación brasileña

agencias CNPq y CAPES. Los autores desean agradecer al Grupo Novozymes por

proporcionando la enzima celulasa y el Laboratório de Espectroscopia Vibracional y

Laboratório de Raio X (LRX) de la Universidad Federal do Ceará para FTIR y XRD

análisis, respectivamente.

MESAS

Tabla 1- Composición química del bagazo en la naturaleza y composición del bagazo

fue pretratado utilizando diferentes concentraciones de H2O2 (0 - 4.3% v / v a pH 11.5). los

el pretratamiento se realizó a 35 ° C durante 24 h usando una carga de biomasa de 10% p / v.

Tabla 2- Composición química del bagazo en la naturaleza y composición del bagazo

pretratado utilizando diferentes cargas de biomasa (CAB de 2% a 10% p / v). El pretratamiento

se realizó a 35 ° C durante 24 h utilizando una concentración de H2O2 (pH 11.5) de 4.3% v / v.

Tabla 3- Composición química del bagazo en la naturaleza y composición del bagazo

pretratado para diferentes tiempos de pretratamiento (30 min a 24 h). El pretratamiento fue

realizado a 35 ° C durante 6 h con una concentración de 4.3% v / v H2O2 (pH 11.5) y cabina de 5% p / v

FIGURA SUBTÍTULOS

Figura 1. Efecto de la concentración de AHP utilizada para el pretratamiento (pH 11.5, 35ºC, 24

h y 250 rpm) de CAB en la digestibilidad de la celulosa (A) y rendimiento de glucosa (B) en

hidrólisis enzimática (45 ° C, 150 rpm y pH 4,8) de CAB y CAB sin tratar (10%

w / v) pretratado. Los valores con letras diferentes representan estadísticamente significativo

diferencias (p <0.05) entre los tiempos de sacarificación enzimática indicados.

Figura 2. Efecto de la carga de CAB sobre la digestibilidad de la celulosa (A) y rendimiento de la glucosa

(B) durante la hidrólisis enzimática de CAB pretratado con AHP (4,3% v / v) a 35 ° C

y 250 rpm durante 24 horas. Los valores con letras diferentes representan estadísticamente

diferencias significativas (p <0.05) entre la sacarificación enzimática indicada

veces.

Figura 3. Digestibilidad de la celulosa (A) y rendimiento de la glucosa (B) durante la hidrólisis enzimática

de CAB pretratados para diferentes tiempos (4.3% v / v, 5% CAB w / v, 35 ° C y 250 rpm).

Los valores con letras diferentes representan diferencias estadísticamente significativas (p <0.05)

entre los tiempos de sacarificación enzimática indicados.

Figura 4. Balance de masa del proceso de tratamiento de CAB.

Reflejos:

1. Mayor sacarificación eficiente lograda con pretratamiento a 35 ° C, 4.3% v / v

H2O2, CAB al 5% p / v durante 6 h.

2. El contenido de celulosa aumentó y el contenido de lignina disminuyó después del pretratamiento con PHA.

3. Se mejoraron los rendimientos de la hidrólisis de celulosa.

4. Una mayor eliminación de lignina dio una mejor digestibilidad y rendimientos.

5. CAB pretratado presentó cambios en la estructura de la molécula y la superficie.

Producción de compuestos de bioetanol y de valor agregado a partir de paja de trigo combinada

pretratamiento de peróxido alcalino / alcalino

Resumen: Se desarrolló un esquema eficiente para la conversión de paja de trigo (WS) en

bioetanol, sílice y lignina. El WS se preextrajo con 0.2 mol / L de hidróxido de sodio a 30 oC

durante 5 h para eliminar aproximadamente el 91% de la sílice inicial. Posteriormente, los sólidos pretratados
alcalinamente se

sometido a un pretratamiento con peróxido de hidrógeno alcalino (AHP) con 40 mg de peróxido de hidrógeno

(H2O2) / g de biomasa a 50 oC durante 7 h para preparar sustrato altamente digestible. Los resultados de enzimático

La hidrólisis demostró que la WS secuencial alcalina pretratada WS fue eficiente

hidrolizado a una carga de sólidos del 10% (p / v) usando una dosificación de enzima de 10 mg de proteína / g de
glucano. los

conversión total de azúcar del 92.4% se logró. Sacarificación y cofermentación simultáneas

(SSCF) se aplicó para producir etanol a partir del sustrato pretratado en dos etapas

utilizando la cepa SR8u de Saccharomyces cerevisiae. El etanol con una concentración de 31.1 g / L era

producido. A través del proceso propuesto, aproximadamente 86.4% y 54.1% de la sílice y lignina iniciales

fueron recuperados, respectivamente.

Palabras clave: extracción alcalina; Peróxido de hidrógeno alcalino; Bioetanol; Hidrólisis encimática;

Sacarificación simultánea y co-fermentación; Paja de trigo

1. Introducción

La producción del bioetanol de segunda generación generalmente requiere una etapa de pretratamiento en

qué material lignocelulósico está sujeto a tratamiento químico, biológico o mecánico

durante el cual se elimina una porción significativa de componentes de biomasa y la estructura de la pared celular

se revisa, a su vez, mejorando la eficiencia de la hidrólisis enzimática y los pasos de fermentación

(Mosier et al., 2005; Trajano y Wyman, 2013). Dado que cada tecnología de pretratamiento tiene un

efecto específico sobre la biomasa y los requisitos del reactor, la selección de un pretratamiento apropiado

La tecnología no solo debe basarse en las características de la materia prima sino también en la totalidad

configuración del proceso de biomasa a bioetanol. Además, un pretratamiento ideal y competitivo

enfoque también debe tener las características de reducir los costos de procesamiento, los costos ambientales, así
como

generar flujos de coproducto de valor agregado. Por lo tanto, es necesario desarrollar un eficiente y respetuoso del
medio ambiente

estrategia de pretratamiento que podría aumentar la digestibilidad del material para la posterior

hidrólisis enzimática y permite la recuperación de coproductos de alta pureza.

El tratamiento con peróxido de hidrógeno alcalino (AHP) es una tecnología de pretratamiento químico que tiene

demostrado ser altamente efectivo durante el tratamiento de varias materias primas lignocelulósicas tales como
madera, residuos agrícolas y pastos (Alvarez-Vasco y Zhang, 2017; Banerjee et al., 2012;

Cabrera et al., 2014; Song et al., 2016). Además, también hay algunas ventajas para usar AHP

pretratamiento para la deconstrucción de biomasa. En primer lugar, el proceso de pretratamiento AHP puede ser

llevado a cabo en condiciones suaves tales como baja temperatura y presión atmosférica; esto lleva a la

formación de concentraciones relativamente bajas de inhibidores que afectan negativamente a

hidrólisis enzimática y pasos de fermentación. Además, el producto químico, peróxido de hidrógeno

(H2O2) utilizado para el pretratamiento AHP, está disponible comercialmente y es ecológico (Mou

et al., 2013). Además, el pretratamiento suave con AHP de la paja de cereal también permite el aislamiento de

lignina de alta pureza con su estructura macromolecular original (Sun et al., 2002); esto es favorable

para la posterior utilización para producir derivados de lignina de valor agregado. Sin embargo, el cargo de

El H2O2 es relativamente alto (≥ 100 mg H2O2 / g de biomasa) al realizar el pretratamiento AHP en una etapa

(Bhalla et al., 2016; Mittal et al., 2017), a su vez, aumentando los costos de procesamiento (Menon y Rao,

2012). Por lo tanto, para mejorar la economía del proceso, otro paso de pretratamiento previo al AHP que

tiene el potencial de reducir los insumos químicos, así como mantener o aumentar los rendimientos de azúcar

ser identificado.

Entre los materiales lignocelulósicos utilizados para la producción de bioetanol, la paja de trigo (WS) es una

residuo agrícola que se considera una materia prima atractiva debido a su bajo costo, alto

abundancia, y facilidad de habilidad durante todo el año (Bondesson y Galbe, 2016; Saha et al.,

2015). Sin embargo, en comparación con los materiales leñosos, WS contiene un nivel mucho más alto de ceniza (6-
16%

w / w), de los cuales aproximadamente el 75% es sílice (Pekarovic et al., 2006; Staniforth, 1979). La altura

nivel de sílice interfiere la hidrólisis enzimática del sustrato pretratado y altas cantidades de

la sílice residual en la lignina recuperada también dificulta la conversión aguas abajo de la lignina a otra

productos de alto valor (Kadla et al., 2002; Khaleghian et al., 2017; Pye, 2008; Talukder et al.,

2017). En este contexto, la preextracción de sílice antes de las etapas de procesamiento posteriores podría ser una

estrategia prometedora para resolver los desafíos asociados a la sílice. Además, el sílice extraído

también podrían recuperarse como partículas de sílice amorfa, que pueden usarse para tratar aguas residuales como

así como producir productos farmacéuticos, catalizadores y rellenos compuestos (Mor et al., 2017; Morpurgo et al.

al., 2010; Zhang et al., 2013).

Para extraer la sílice de los residuos agrícolas, el tratamiento alcalino con hidróxido de sodio (NaOH)

o carbonato de sodio (Na2CO3) ha demostrado ser un enfoque eficaz (Khaleghian et al., 2017;

Peckarovic et al., 2006). Después de separar la sílice, el sustrato libre de sílice puede ser un excelente

fuente para la producción de bioetanol. Además, una fracción de los extractivos y la ceniza podría

también se extrae durante el tratamiento alcalino de la biomasa lignocelulósica (Bhalla et al., 2016;

Chandra et al., 2015); esto es favorable para el posterior pretratamiento AHP. Por ejemplo, el
la eliminación de ceniza podría disminuir la descomposición del H2O2 por los metales de transición (hierro, cobre,

manganeso) en la biomasa (Hage y Lienke, 2006; Liu et al., 2014). Por lo tanto, la secuencia

el pretratamiento en dos etapas, que comprende una preextracción alcalina seguida de pretratamiento con AHP, es
una opción viable para reducir la carga de H2O2 y generar una corriente de lignina de alta pureza en una biomasa:
bioetanol

proceso.

En el trabajo descrito en este documento, un esquema integrado de biorrefinería que puede generar

múltiples bioproductos, que incluyen bioetanol, lignina y sílice, se configuran en base a dos etapas

estrategia de pretratamiento a base de álcali. Dos reactivos alcalinos, hidróxido de sodio (NaOH) y

carbonato de sodio (Na2CO3), se utilizaron para extraer la sílice de WS. Entonces, el alcalino pretratado

WS fue sometido a pretratamiento AHP para generar una digestión altamente enzimática

sustrato. Después de la evaluación de la digestibilidad enzimática del sustrato, convencional

se aplicó el proceso simultáneo de sacarificación y co-fermentación (SSCF) para producir

etanol de WS usando una cepa de Saccharomyces cerevisiae SR8u diseñada metabólicamente (Kim

et al., 2013). Además, la sílice extraída y la lignina en los licores agotados se recuperaron como coproductos.

La lignina residual después de la separación de etanol podría usarse como fuente de combustible para el

generación de energía (consulte la Fig. 1).

2. Materiales y métodos

2.1. Materias primas

WS (Triticum aestivum L.) se recolectó en un campo en la provincia de Henan, China, en 2017 y

almacenado en condiciones ambientales. Las muestras se lavaron con agua desionizada y luego se secaron al aire

durante 72 ha temperatura ambiente. Posteriormente, la paja se cortó en tiras pequeñas (10-15 mm en

longitud) utilizando un helicóptero de paja. Las piezas obtenidas de WS se almacenaron a 4 oC hasta más

utilización. El contenido de humedad del WS fue aproximadamente 11%. Análisis composicional de

el WS crudo mostró que contenía 42.8% de celulosa, 25.0% de hemicelulosa (21.6% de xilano, 2.4%

arabinan, 0,7% de galactano y 0,3% de manano), 19,2% de lignina (suma de ácido soluble e insoluble

lignina) y 5,5% de sílice en base sólida seca. Todos los productos químicos eran de grado reactivo y se compraron de

Sigma-Aldrich (ON, Canadá).

2.2. Pre-extracción alcalina

Dos sustancias alcalinas, NaOH y Na2CO3, se utilizaron en este estudio. Preextracción alcalina

de WS se llevó a cabo con matraces Erlenmeyer de 500 ml a 30 oC usando una incubadora

(Lab-Line Instruments Inc., EE. UU.). La concentración de álcali varió de 0.15 a 0.35 mol / L

investigado en los experimentos de preextracción alcalina. La consistencia de sólidos se corrigió al 10%

(p / v) (p. ej., 10 g de biomasa en 100 ml de solución alcalina). Para cada carrera de preextracción alcalina, 20 g

secado en horno (o.d.) WS y el volumen calculado de agua desionizada y solución alcalina (stock
concentración de 1 mol / l) se mezclaron y se colocaron en un reactor. Posteriormente, el reactor fue

colocado en la incubadora para la preextracción alcalina durante 2-6 h. Al finalizar la extracción,

los sólidos restantes se recogieron mediante filtración y se lavaron con agua desionizada (1 l) para

eliminar todos los materiales solubles. El sustrato sólido recuperado se almacenó a 4 oC hasta más

utilización. El licor alcalino de preextracción junto con el licor de lavado se recogió y

almacenado a -20 oC hasta que se use para la experimentación. Todos los experimentos se realizaron al menos en

duplicar.

2.3. Pretratamiento con peróxido de hidrógeno alcalino (AHP)

Después de determinar el contenido de humedad, la WS pretratada alcalina fue sometida a AHP

pretratamiento. Las pruebas de pretratamiento AHP se llevaron a cabo en matraces Erlenmeyer de 250 ml a 50 oC
durante

3-15 h usando la misma incubadora que se usó para la preextracción alcalina. Los cargos de H2O2

se investigaron entre 20 y 80 mg de H2O2 / g de biomasa (en base a WS extraída previamente).

La relación de líquido a paja se mantuvo constante a 10 l / kg. El pH de la reacción fue periódicamente

ajustado a pH 11.5 usando 6 mol / l de NaOH. Después del pretratamiento AHP, la fracción sólida (agua

sólidos insolubles) y la fracción líquida (materiales solubles en agua) fueron separados y recogidos por

filtración. La fracción sólida se lavó a fondo con agua desionizada y se almacenó a 4 oC hasta que

utilizado para futuros experimentos y análisis. El sobrenadante combinado, licor de pretratamiento AHP

y el agua de lavado de sólidos, se recogió y almacenó a -20 oC hasta su posterior utilización. Todas

los experimentos se realizaron al menos por duplicado.

2.4. Recuperación de sílice y lignina de los licores de procesamiento

De acuerdo con nuestro estudio preliminar (Yuan et al., 2017), sílice disuelta en la preextracción alcalina

el licor se separó ajustando el pH del licor a 8 con dióxido de carbono a 60 oC. los

La sílice obtenida se secó al vacío a 45 oC durante 48 horas a peso constante y se quemó a 700 oC

durante 4 h para producir partículas de sílice pura. La lignina soluble en peróxido alcalino se precipitó a

pH 1,5 del sobrenadante correspondiente por acidificación con ácido sulfúrico al 72%. El aislado

la fracción de lignina se purificó mediante lavado con agua desionizada y luego se liofilizó para obtener más

análisis y experimentación.

Después de separar la lignina, el licor de pretratamiento AHP se concentró y se agregó

volver al sustrato sólido pretratado en dos etapas para la hidrólisis enzimática y la producción de etanol;

esto no solo puede utilizar azúcares disueltos en el licor sino también reducir la cantidad de agua utilizada en

Todo el proceso

3. Resultados y discusión

3.1. Impacto de la preextracción alcalina en la composición de WS

Para mejorar la eficacia de la hidrólisis enzimática de WS y recuperar sílice de alta pureza, un

paso alcalino de preextracción, con el objetivo de extraer sílice y preservar otras

componentes (celulosa, hemicelulosa y lignina), se llevó a cabo. Dos reactivos alcalinos diferentes,

NaOH y Na2CO3, se investigaron para la eliminación de sílice a diferentes concentraciones y

veces. La Tabla 1 muestra el rendimiento y la composición química del WS alcalino pretratado. Como

mostrado, el tratamiento con NaOH tuvo un menor rendimiento de biomasa en comparación con el de Na2CO3 bajo

las mismas condiciones de tratamiento Por ejemplo, tratar WS en una concentración de álcali de 0,25 mol / L

durante 6 h, los rendimientos de biomasa fueron 86.3% y 91.1% para los tratamientos con NaOH y Na2CO3,

respectivamente. Una posible razón podría ser que el álcali fuerte (NaOH) puede disociarse más

iones hidróxido que Na2CO3 bajo la misma concentración de ion sodio (Na +). Este alto

la concentración de ion hidróxido mejoró las tasas de saponificación de ésteres de ácido urónico y acetilo,

eliminación de grupos carboxilo, neutralización de productos ácidos formados por la degradación de

celulosa, hemicelulosa y lignina, y disolución de sílice durante el pretratamiento alcalino de WS

(Pavlostathis y Gossett, 1985). Por otra parte, el aumento del pH del tratamiento también aumenta la

solubilidad de xilano y lignina (de Assis Castro et al., 2016), lo que resulta en un menor rendimiento de sólidos del

preextracción con NaOH que la de Na2CO3.

Con base en el rendimiento de biomasa sólida y el análisis de composición química, la porción residual de

cada componente de WS podría calcularse (los cálculos no se muestran). Como se esperaba, preextracción alcalina

en las condiciones estudiadas se conservó más del 98% del glucano original en el tratamiento

sólidos (Tabla 1); esto está de acuerdo con estudios previos sobre la preextracción alcalina de arroz

paja de paja y trigo a temperatura ambiente (de Assis Castro et al., 2016; Pavlostathis y

Gossett, 1985). La pequeña cantidad de eliminación de celulosa podría atribuirse a su alta cristalinidad

y acceso limitado a productos químicos que hace que la celulosa sea muy recalcitrante para la degradación en
condiciones de extracción alcalina moderada, como las utilizadas en este estudio

(Engström et al., 2006; Sun et al., 2016). Además, la eliminación de la fracción de masa de la lignina fue

calculado para ser 0.5-3.4% (basado en la lignina inicial en biomasa sin procesar) durante la preextracción alcalina

(Tabla 1). Una posible explicación podría ser que la deslignificación alcalina comienza desde una

temperatura superior a 100 oC (Silverstein et al., 2007). La pequeña cantidad de lignina disuelta en

la preextracción alcalina permite la recuperación de partículas de sílice de alta pureza, así como de conservas

el rendimiento de lignina recuperada en las etapas posteriores. La extracción de hemicelulosa (principalmente

xilano) aumentó con el aumento en el pH y el tiempo de tratamiento (Tabla 1). Por otra parte, NaOH

extrajo más hemicelulosa que Na2CO3 bajo la misma concentración química y reacción

hora. Por ejemplo, 1.3-7.1% (p / p) de la hemicelulosa inicial se eliminó aumentando el

tiempo de tratamiento de 2 a 6 horas a una concentración de NaOH de 0,25 mol / l. Por el contrario, el tratamiento de
WS con

Se eliminó 0,25 mol / l de Na2CO3 durante 2-6 h, 0.8-4.0% (p / p) de hemicelulosa (Tabla 1).

La observación más importante de la preextracción alcalina fue la eliminación de sílice de WS.

Durante el tratamiento alcalino de WS, la sílice insoluble depositada en el tallo de la paja se convierte

en silicato de sodio soluble, que podría transferirse al licor a granel y eliminarse de

la biomasa de paja. Como se muestra en la Tabla 1, el tratamiento con NaOH (89,7%) eliminó más sílice

que el de Na2CO3 (52.3%) después del tratamiento bajo la concentración de álcali de 0.25

mol / L por 6 h. Esto podría atribuirse al hecho de que la tasa de disolución de sílice aumentó

significativamente al aumentar la concentración de ion hidróxido (pH) en el sistema de reacción

(Wijnen et al., 1989). Además, el aumento del pH también aumenta la solubilidad de la sílice, lo que resulta en

gran cantidad de eliminación de sílice de WS. Una temperatura más alta o una concentración alcalina más alta podría

se requerirá que Na2CO3 logre los niveles deseados de eliminación de sílice (Khaleghian et al., 2017).

La eliminación de aproximadamente el 90% de la sílice inicial de WS debería disminuir en gran medida el negativo
efecto causado por la sílice durante la hidrólisis enzimática, lo que permite una menor carga de la enzima

ser usado. Además, la preextracción de sílice también permite la recuperación de lignina con poca ceniza

contenido; esto es favorable para la posterior utilización para la fabricación de bioproductos de alto valor (Liu et al.

al., 2018).

En base a los resultados que se muestran en la Tabla 1, tanto NaOH como Na2CO3 podrían extraer sílice de WS

a temperatura ambiente. Comparado con la extracción de sílice con Na2CO3, el NaOH era más

efectivo bajo la temperatura suave estudiada. Además, aumentar la concentración de álcali

de 0,25 mol / l a 0,35 mol / l no dio como resultado una eliminación significativa de sílice durante la preextracción de
NaOH

de WS (Tabla 1). Por lo tanto, la preextracción alcalina de WS en un álcali (NaOH)

concentración de 0.25 mol / L durante 6 h fue adecuada para la eliminación de sílice preservando

carbohidratos y lignina

3.2. Pretratamiento con peróxido de hidrógeno alcalino de WS extraído alcalinamente

Para producir sustrato altamente digerible y fraccionar lignina de la paja, AHP

El pretratamiento con WS extraído con NaOH (0,25 mol / l de NaOH, 6 h) se realizó bajo varios

Cargas de H2O2, tiempos de reacción y algunas condiciones fijas (consistencia de sólidos al 10% p / v, pH 11.5)

y 50 oC). La Tabla 2 resume la composición química de dos etapas (pre-extracción alcalina

seguido de pretratamiento AHP) sustrato sólido pretratado. Como se muestra, más del 98% de

La sílice inicial en WS sin procesar se eliminó después del pretratamiento con AHP, lo que indica que la propuesta de
dosificación

el pretratamiento alivió sustancialmente los desafíos asociados con la sílice encontrados en

producción de bioetanol de WS (Gupta y Lee, 2010).

La adición de H2O2 mejoró significativamente la deslignificación de WS (Tabla 2). por

ejemplo, tratando el WS alcalino preextraído durante 15 h con una carga de H2O2 de 20 mg H2O2 / g

la biomasa (basada en la masa de paja pretratada con NaOH) dio como resultado la eliminación del 42,7% de
lignina residual en paja pretratada con NaOH; en contraste, solo alrededor del 19.5% de la lignina en NaOH se pretrató

la paja se eliminó usando NaOH solo para el pretratamiento AHP de la segunda etapa. Esta

podría atribuirse al anión hidroperoxilo generado por H2O2 elimina los grupos cromóforos

de la lignina, acelerando así el proceso de deslignificación (Michalska y Ledakowicz,

2016). Durante el pretratamiento con AHP, la eliminación de lignina aumentó al aumentar la carga de H2O2 y

tiempo de reacción (Tabla 2). Por ejemplo, tratar WS extraído con NaOH durante 12 h con cargas de H2O2 de

20 y 40 mg de H2O2 / g de biomasa, aproximadamente 35.2% y 58.1% de la lignina residual en NaOH-tratada

WS podría ser eliminado, respectivamente. Por el contrario, aumentar la carga de H2O2 a 60 y 80 mg

H2O2 / g de biomasa, hasta 60% de lignina en WS pretratado con NaOH podría eliminarse en 9 y 6 h,

respectivamente. Sin embargo, cuando se usa una carga alta de H2O2 (80 mg H2O2 / g de biomasa) para AHP

el pretratamiento, prolongando aún más el tiempo de tratamiento de 6 h a 15 h solo condujo a un 1.8% adicional

eliminación de lignina (basada en la lignina residual en paja tratada con NaOH). Una razón probable podría ser

la eliminación de aproximadamente el 60% de lignina fue el punto de "saturación" de la degradación de lignina de WS

durante el pretratamiento con AHP en las condiciones estudiadas (Alvarez-Vasco y Zhang, 2013). los

Se espera que la eliminación de alrededor del 60% de lignina con pretratamiento AHP no solo mejore la

digestibilidad enzimática del sustrato de biomasa pero también proporciona una corriente de lignina para el

producción de productos químicos y / o combustibles derivados de la lignina.

Durante el pretratamiento con AHP, la eliminación de hemicelulosa aumentó al aumentar el H2O2

tiempo de carga y tratamiento (Tabla 2). Esto podría atribuirse a la acción de los radicales hidroxilo

generado a partir de la reacción entre el ion hidroperóxido y el H2O2 solubiliza la hemicelulosa

(Michalska y Ledakowicz, 2016). Se observó un aumento del contenido de celulosa en la WS tratada

durante el aumento de la severidad del pretratamiento AHP (Tabla 2); esto está relacionado con la eliminación

de lignina y hemicelulosa. Se espera que el aumento del contenido de celulosa en el sustrato

reducir la dosificación de la enzima durante la hidrólisis enzimática y disminuir el tiempo de hidrólisis, los cuales

podría reducir los costos operativos y de capital. Sin embargo, aunque la solubilización de

hemicelulosa puede aumentar la digestibilidad del sustrato pretratado, la eliminación de

la hemicelulosa también afecta negativamente el rendimiento total de azúcar después de la hidrólisis enzimática y

interfiere la separación de la lignina solubilizada con peróxido alcalino de alta pureza del AHP

licor de pretratamiento. Además, al llevar a cabo el pretratamiento AHP por el mismo tiempo, aumente

la carga de H2O2 de 40 a 60 o incluso 80 mg / g de biomasa solo dio como resultado un ligero aumento de

contenido de celulosa en el sustrato tratado (Tabla 2). Por lo tanto, con el objetivo de reducir el H2O2

carga durante el pretratamiento de AHP, el tratamiento con 40 mg de H2O2 / g de biomasa (basado en o.d.

Masa de paja pretratada con NaOH) durante 15 h, lo que permite la eliminación de aproximadamente el 60% de la
lignina, podría ser

considerada como una condición de tratamiento adecuada para generar sustrato sólido para enzimática
hidrólisis y fermentación de etanol.

El licor de pretratamiento correspondiente se utilizó para

recuperación de lignina y otros componentes disueltos.

3.3. Recuperación de materiales disueltos de licores de pretratamiento

Para mejorar los beneficios económicos y minimizar los desechos del proceso, el disuelto

compuestos en los licores de pretratamiento tales como silicato de sodio, lignina y azúcares deben ser

recuperado para la conversión en "productos verdes" y combustibles (Minu et al., 2012; Zhang et al., 2015).

La Tabla 3 muestra la composición química de los dos licores de pretratamiento obtenidos de los dos

etapas de tratamiento, preextracción de NaOH (0.25 mol / L, 6 h) y pretratamiento AHP (40 mg de H2O2 / g

biomasa, 15 h). Como se muestra, el contenido sólido del licor alcalino previo a la extracción fue del 4,8% (p / p),

en el cual la sílice representó el 36.4% del contenido sólido total; esta alta concentración de sodio

los silicatos permitieron la separación de partículas de sílice de alta pureza. Además, en la preextracción alcalina

licor, inhibidores de la hidrólisis enzimática y la fermentación de etanol, como el sodio

acetato, extraíbles alcalinos extraíbles y compuestos fenólicos (categorizados como "otros") fueron

también detectado a alta concentración (Tabla 3). En el licor de pretratamiento AHP, la lignina y

se determinó que los azúcares eran 61.9% y 33.2% del contenido sólido total, respectivamente, mientras que

compuestos inhibidores tales como furfural e hidroximetilfurfural que afectan negativamente

La hidrólisis enzimática y la fermentación de etanol fueron indetectables con la metodología utilizada.

Los "otros" en el licor de pretratamiento AHP se componían principalmente de compuestos fenólicos y cenizas
inorgánicas.

El silicato de sodio solubilizado en el licor de preextracción alcalino se precipitó como silícico

ácido al reducir el pH del licor a 8 a 60 oC con dióxido de carbono (Yuan et al., 2017). Después

la combustión del precipitado a 700 oC, aproximadamente el 86,4% de la sílice inicial en WS sin tratar era

recuperado (Tabla 4). El análisis de composición del producto de sílice recuperado mostró que el

el contenido de impurezas fue inferior al 0,2% (Tabla 4), lo que indica que la sílice recuperada, principalmente

amorfo en la estructura, podría ser utilizado para la producción de productos de alto valor tales como

productos farmacéuticos que requieren sílice de pureza superior al 99,7% (Morpurgo et al., 2010). los

El licor libre de sílice, que contiene un alto contenido de inhibidores de la fermentación, se puede utilizar para la
recuperación

de productos químicos, como NaOH, a través del proceso de recuperación química tradicionalmente utilizado en un
kraft

fábrica de pulpa (Cardoso et al., 2009).

La lignina en el licor de pretratamiento AHP se separó a pH 1,5. El rendimiento de alcalino

la lignina soluble en peróxido era el 91,4% de la lignina solubilizada, lo que corresponde al 54,1% de la inicial

lignina en WS sin tratar (Tabla 4). El análisis de composición del producto de lignina recuperado mostró
que solo contenía 2.6% de ceniza y 1.8% de azúcar (p / p); esto es favorable para una mayor valorización de

productos químicos y / o combustibles (Bhalla et al., 2016). Por otra parte, la pequeña precipitación de azúcares
implícita

que la acidificación del licor de pretratamiento AHP para la recuperación de lignina tuvo poco impacto en la

recuperación de azúcar del licor de pretratamiento. Otro parámetro importante de la lignina recuperada es el peso
molecular, que influye en gran medida en sus propiedades fisicoquímicas en más

aplicaciones tales como la producción de materiales poliméricos (McClelland et al., 2017; Schmidt et al.,

2017). Los pesos moleculares promedio ponderado (Mw) y promedio numérico (Mn) de los recuperados

se determinó que la lignina es aproximadamente 4160 g / mol y 2570 g / mol, respectivamente; esta

indica que la lignina obtenida tenía un índice de polidispersidad relativamente bajo de 1,62, que puede ser

una buena materia prima para productos de valor agregado (Guo et al., 2017). Después de la separación de la lignina,
la

se mantuvo el licor de pretratamiento AHP contenía aproximadamente 9.6% de carbohidratos iniciales (suma de

celulosa y hemicelulosa) se añadió de nuevo a la WS en dos etapas pretratada para enzimática

hidrólisis debido a la baja concentración de inhibidores (Tabla 4); esto también podría reducir el general

consumo de agua del proceso.

4. Conclusiones

Un proceso de pretratamiento en dos etapas que combina pre-extracción alcalina y pretratamiento AHP

fue empleado para fraccionar WS. Llevando a cabo una preextracción suave de NaOH de WS, H2O2

la demanda podría reducirse a 40 mg / g de biomasa durante el pretratamiento con AHP. El sustrato obtenido

del pretratamiento en dos etapas se hidrolizó fácilmente con una carga enzimática relativamente baja de

10 mg de proteína / g de glucano. El bioetanol con una concentración de aproximadamente 31.1 g / L fue

producido a través del proceso de SSCF usando la cepa de ingeniería S. cerevisiae SR8u. Con el

el esquema propuesto, sílice de alta pureza y lignina también se recuperaron; esto se espera que se expanda

la utilización de WS en biorrefinerías