PRÁCTICA N° 02

I. FUNDAMENTO:
El examen microscópico es el primer paso para el estudio de las muestras
microbiológicas. Es un examen que nos proporciona datos como la presencia de
bacterias, su morfología, movilidad y características tintoriales y estructurales.
Los microorganismos obtenidos a partir de una muestra clínica pueden verse vivos
o muertos, aunque para la investigación de algunas características biológicas
como la movilidad, es necesario observarlos vivos. Existen dos métodos de
observación de microorganismos que son: Preparación en fresco y preparación en
seco.

II. MATERIALES
a. Material biológico
Suspensión mixta bacteriana: Bacillus sp. y Escherichia coli.
Láminas montadas de organismos procariotas (bacterias grampositivas) y
eucariotas.
Cultivo fúngico
Agua estancada
b. Material de vidrio
Laminillas portaobjetos
Laminillas cubreobjetos
Mechero de alcohol
Pipetas
Asa bacteriológica
c. Otros
Microscopio
Colorantes: set Gram (cristal violeta, solución de lugol, alcohol cetona,
safranina).

III. PROCEDIMIENTO

a) Preparado en fresco:
1° Se coloca gotas de agua estancada en una lámina portaobjetos.
2° Se cubre la muestra con la lámina cubreobjetos.
3° Se observa lo siguiente:
b) Preparado en seco:
COLORACIÓN SIMPLE:

1° Se colocó 3 gotas de agua destilada sobre la lámina portaobjetos.

2° Se esterilizó el asa bacteriológica en el mechero, para extraer cultivo de

bacterias.

3° Se combinó el cultivo de bacterias con el agua destilada en la lámina

portaobjetos, con ayuda del asa bacteriológica para obtener una mezcla
homogénea.

4° Se fija la muestra al calor del mechero.

5° Se agrega unas gotas de azul de metileno y se deja en contacto por 1 minuto.

6° Luego, se enjuaga con abundante agua.

7° Finalmente, se seca la muestra con ayuda del mechero para poder observar
microorganismos a través del microscopio.
c) Lámina montada: HONGOS
d) Lámina montada: GRAMPOSITIVA

e) Cultivo de bacterias
CUESTIONARIO:
1. ¿EN QUÉ SE DIFERENCIA UN PREPARADO EN FRESCO DE UN
PREPARADO EN SECO?

PREPARADO EN FRESCO PREPARADO EN SECO

Se usa para examinar muestras sin colorear. Sufren un procesamiento previo (toma de la
muestra, extensión o frotis, fijación y
coloración).
Se realiza inmediatamente. Es un preparado que lo puedes ir a buscar
Permite observar microorganismos vivos, en un laboratorio que se hicieron hace
así como actividades biológicas como la tiempo y la muestra se encuentra fijada
movilidad, y determinar su morfología. en el portaobjeto, si las células están
muertas, pero conservadas y teñidas.
Para la observación es necesario el uso del Para la observación es necesario el uso del
microscopio, a baja intensidad de luz, el microscopio, con gran intensidad de luz, el
objetivo no tiene que ser mayor de 40X. objetivo tiene que ser 100X.
Se utiliza para observar hongos Se utiliza para observar al igual que el
unicelulares, protozoos, helmintos, hasta preparado en fresco; bacterias.
bacterias.

2. ¿CUÁLES SON LAS CARACTERÍSTICAS QUE DEBE TENER UN

FROTIS BACTERIANO QUE ESTÉ BIEN HECHO?

Evitar la contaminación de una muestra con líquidos, sudor, manipulación sin el

equipo adecuado, aire ambiente, por lo que el material usado debe encontrarse
estéril. Este frotis debe estar fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar la
tinción que permite la observación al microscopio de las bacterias sin que la
muestra sea en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace
que las bacterias queden adheridas al vidrio alterando en lo menos posible en la
morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber

3. SEGÚN LO OBSERVADO EN PRÁCTICA CUALES SON LAS

PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS DE LOS ORGANISMOS
PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS
Las células procariotas:
 Estructura sencilla.
 Tienen pocas formas: esféricas (cocos), de bastón (bacilos), de coma
ortográfica (vibriones), o de espiral (espirilos). Siempre son unicelulares,
aunque pueden formar colonias.
 Los orgánulos membranosos son los mesosomas. Las cianobacterias
presentan, además, los tilacoides.
 No tienen núcleo. El ADN está condensado en una región del citoplasma
denominada nucloide. No se distinguen nucléolos.
 Estructura celular típica de bacterias.
 Las células eucariotas:
 Estructura compleja
 Tienen formas muy variadas. Pueden constituir organismos unicelulares o
pluricelulares. En éstos hay células muy especializadas y, por ello, con
formas muy diferentes.
 Si tienen núcleo y dentro de él uno o más nucléolos.
 Estructura celular típica de protistas, hongos, plantas y animales.

4. ¿QUÉ GRUPOS DE MICROORGANISMOS EXISTEN EN UNA

MUESTRA DE AGUA ESTANCADA?

 Algas: Son diversos organismos unicelulares o multicelulares que habitan

en aguas o ambientes muy húmedos. El excesivo crecimiento de estas
puede causar mal olor en las aguas.
 Paramecios: (género Paramecium) Son protozoos ciliados con forma
ovalada, habituales en aguas dulces estancadas con abundante materia
orgánica, como charcos y estanques.
 Ameba: (o Amiba) Es un protista unicelular del género Amoeba. Es un
protozoo caracterizado por su forma cambiante, puesto que carece de
pared celular, y por su movimiento ameboide a base de pseudópodos,
que también usa para capturar alimentos a través del proceso llamado
fagocitosis.
 Gusanillo o cobra: (nematodos) Casi todos los nematodos son gusanos
de cuerpo muy pequeño afilado y alargado, pero a pesar de su aparente
delicadeza son muy resistentes pues, aunque no lo parezca, están
vestidos con una coraza flexible, transparente y casi siempre lisa.
 Euglena: (Euglenoidea o Euglenophyta) Son uno de los más conocidos
grupos de flagelados, comúnmente presentes en agua dulce, en especial
cuando ésta es rica en materia orgánica. Sólo unos pocos miembros
habitan aguas marinas o son endosimbiontes. Muchos euglénidos poseen
cloroplastos y producen energía mediante fotosíntesis, mientras que
otros se alimentan por fagocitosis o por pinocitosis. Se los ubica dentro
del fila Euglenozoa, y su estructura celular es típica de dicho grupo.
 Aelosoma: (Euglenoidea o Euglenophyta) Son uno de los más conocidos
grupos de flagelados, comúnmente presentes en agua dulce, en especial
cuando ésta es rica en materia orgánica. Sólo unos pocos miembros
habitan aguas marinas o son endosimbiontes. Muchos euglénidos poseen
cloroplastos y producen energía mediante fotosíntesis, mientras que
otros se alimentan por fagocitosis o por pinocitosis. Se los ubica dentro
del fila Euglenozoa, y su estructura celular es típica de dicho grupo.
 Stentor igneus: Los Stentor, a veces llamados animálculos trompeta son
un género de organismos unicelulares filtradores, heterótrofos protistas
ciliados, representativo de la clase Heterotrichea. Normalmente tienen
 forma de cuerno y llegan a medir 2 milímetros, encontrándose entre los
mayores organismos unicelulares.

5. ¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA QUE TIENE LA TÉCNICA DE GRAM

EN LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIA?

Esta tinción tiene gran importancia en taxonomía bacteriana ya que indica

diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias.
Las bacterias Gram negativas poseen mayor contenido lipídico que las Gram
positivas pero también poseen menor cantidad del polisacárido peptidoglucano, el
cual en las Gram positivas pueden observarse varias capas.

6. ESCRIBA EL NOMBRE DE 3 BACTERIAS GRAM POSITIVA Y 3 GRAM

NEGATIVA

 Bacterias Gram positivas

1. Staphylococcus aureus. Responsable de abscesos, dermatitis, infecciones

localizadas y posibles gastroenteritis.
2. Streptococcus pyrogenes. Causante de infecciones supurativas en el trayecto
respiratorio, así como de fiebre reumática.
3. Streptococcus aglactiae. Frecuente en casos de meningitis neonatal, endometritis
y neumonía.

 Bacterias Gram negativas

1. Escherichia coli. Habitante usual del colon humano, está involucrada en las
llamadas “diarreas del viajero”, así como en meningitis neonatal, sepsis e
infecciones urinarias.
2. Salmonella typhi. Bacteria responsable de la enfermedad conocida como fiebre
tifoidea, suele transmitirse por vía fecal-oral: contaminación de aguas, mala
disposición de excretas o higiene defectuosa.
3. Salmonella enteritidis. Suele ocasionar enterocoitis y septicemia con abscesos si
llega a pasar del intestino a la sangre.