LABORATORIO MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRÁCTICA DE LABORATORIO
Recuento de Estafilococos coagulosa positiva

MARCO TEORICO

Morfológicamente los Staphylococcus son cocos grampositivos. Los estafilococos

crecen fácilmente sobre casi todos los medios bacteriológicos, en cultivos su
crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar sangre. Es un coco anaerobio
facultativo, esto significa que puede crecer tanto en condiciones con oxígeno como
carente de éste. Su mayor velocidad de crecimiento es a 5 - 25 °C; pero también se
puede ver en activa fisión binaria entre 30 y 27 °C. Además, producen catalasa, lo que
los diferencia de los estreptococos. Tiene importancia médica principalmente el S.
aureus, y en humanos además de éste, el S. saprophyticus y el S. epidermidis.
La presencia de Staphylococcus aureus en un alimento se interpreta como indicativo
de contaminación a partir de la piel, boca y fosas nasales de los manipuladores de
alimentos, material, equipos sucios y materias primas de origen animal contaminadas.
Es una especie muy sensible a la acción del calor y los desinfectantes. Su presencia o
la de sus toxinas en los alimentos es signo evidente de falta de higiene. Las
intoxicaciones estafilocóccicas son causadas por la ingestión de alimentos que
contienen una de las enterotoxinas producidas por el Staphylococcus aureus en el
alimento. Puede ocurrir que no se detecte Staphylococcus aureus en un alimento, que
el número detectado sea pequeño y que, sin embargo, exista cantidad detectable
suficiente de enterotoxina. En este caso los microorganismos que originaron la toxina
han ido descendiendo en número, incluso desapareciendo, mientras que la toxina, por
su mayor resistencia, permanece en el alimento.

OBJETIVO:

Realizar adecuadamente la cuantificación de Staphylococcus aureus en

alimentos, Mediante la técnica descrita en la NTC
Explicar el fundamento de todas las etapas del método de detección de
Staphylococcus aureus en alimentos.
 Materiales

Pipetas estériles de 1 ml
Cajas de Petri

Equipos
Incubadora de 35 ± 2 °C
Balanza
Contador de colonias
Pipeteador

Medios de cultivo

Agua peptonada
Agar Baird Parker
Caldo BHI
Plasma de conejo

Reactivos

Frascos de dilución con 90 ml de agua peptonada

Tubos de 9 ml de agua peptonada
 NOMBRE: AGUA PEPTONADA BUFFERADA

USO: Medio de cultivo empleado para el pre enriquecimiento de microorga-

nismos a partir de diferentes muestras.
FORMULA (g/L) FUENTE PREPARACION

Peptona de carne 10,0 CARBONO Y NITROGENO Disolver 20 g del

polvo en 1 litro de
agua purificada.
Cloruro de sodio 5,0 SODIO
Reposar 5 minutos.
Mezclar calentando
Fosfato disódico 3,5 FOSFORO hasta ebullición
durante 1 minuto y
distribuir en
Fosfato monopotásico 1,5 FOSFORO recipientes
apropiados.

INTERPRETACION: El crecimiento microbiano se observa por la turbidez del

medio de cultivo

NOMBRE: Caldo BIH

USO: cultivo de amplia variedad de tipos de organismos, incluidas las bacterias

levaduras y hongos filamentosos, a partir de muestras de alimentos.
FORMULA (g/L) FUENTE PREPARACION

Infusión de cerebro y corazón 8,0 - Disolver 4,7 gramos

de medio en un litro
Digerido péptico de tejido de agua destilada
5,0 - .calentar hasta
animal
ebullición, agitando,
Cloruro sódico 5,0 sodio para su total
homogenización.
Repartir en tubos o
Glucosa 2,0 Carbono y energía frascos y esterilizar
en autoclave a 121°c
durante15 min no
sobrecalentar para
evitar la
Fosfato de hidrogeno 2,5 fosforo
oscurecimiento y
caramelizacion del
medio

INTERPRETACION: l caldo preparado es amarillo oscuro

NOMBRE: Agar SPS

USO: El SPS Agar es un medio selectivo utilizado en el aislamiento selectivo de

Clostridium , especialmente diseñado para la detección y enumeración
Clostridium botulinum en muestras de alimentos.
FORMULA (g/L) PREPARACION

Citrato ferico 0.5 gr

Extracto de levadura
Hidrolizado pancreático de
caseína
Poliximina B sulfato
Sulfadicina
Sulfito sodico
Suspender 39,7 gramos del medio
10 gr en un litro de agua destilada.
Mezclar bien y disolver por
calentamiento con agitación
15 gr
frecuente . Hervir durante un
minuto hasta la disolución
0.01
completa . Esterilizar en autoclave
0.12 a 121 ° C durante 15 minutos . Se
enfría a 45-50ºC , se mezcla bien y
0.5 se distribuye en placas .

Tioglicolato sódico 0.1

Agar 15

INTERPRETACION:
El suplemento antibiótico inhibe a la mayoría de bacterias acompañantes en la
muestra, diferentes de Clostridium spp. Por otra parte, aquellos
microorganismos que pudieran crecer no producen SH2 y por tanto no forman
colonias con el precipitado negro.
Procedimiento
Pesar 10 gramos de alimento en 90 ml de agua peptonada, realizar dos
diluciones según la contaminación del alimento.
Sembrar 0,1 ml de cada dilución en la superficie de una caja de agar Baird
Parker y esparcir cuidadosamente por toda la caja con suavidad
Permita que el inoculo sea absorbido por el medio
Invierta e incube la caja a 35°C por 24 a 48 horas
Realice la lectura de las colonias características (Las colonias típicas son
negras o grises, brillantes redondas, de borde lisos, húmedas y convexas (de
1mm a 1,5mm de diámetro después de 24h de incubación y 1,5mm a 2,5mm
de diámetro después de 48h de incubación) rodeadas por una zona clara.
Después de por lo menos 24h de incubación puede aparecer en esta zona
clara, un halo opalescente, en contacto con las colonias.)
De la superficie de cada colonia seleccionada, se remueve el inoculo con un
asa estéril y se transfiere a un tubo de BHI. Se incuba a 35°C por 24 ± 2 horas.
Posterior a la incubación se adiciona 0,1 ml de cada cultivo a 0,3 ml de plasma
de conejo en tubos o frascos estériles y se incuba a 35°C, se inclina el tubo, se
examina el coagulo del plasma después de 4 a 6 horas de incubación, y si la
prueba es negativa, se reexaminan a las 24 horas de incubación. Se
considerara la prueba coagulasa positiva si el volumen del coagulo ocupa
desde un cuarto del volumen original del liquido.
Como control negativo, para cada lote de plasma se adicionan 0,1 ml de caldo
BHI a la cantidad recomendada de plasma de conejo y se incuba sin
inoculación. Para validar la prueba, el plasma de control no debe mostrar
ningún signo de coagulación.
Resultados que se obtuvieron de la muestra de salpicón
Análisis de resultados:

Staphylococcus aureus es un microorganismo de forma cocácea que se agrupa

en adoptando una disposición de racimos irregulares. Son anaerobios
facultativos, aunque crecen mejor en aerobiosis. Muestran un buen desarrollo a
concentraciones de NaCl superiores al 10%, característica que se aprovecha
para su aislamiento.
S. aureus produce intoxicación alimentaria de carácter toxigénico. Estos
microorganismos producen enterotoxinas que actúan a nivel del tubo digestivo
produciendo náuseas, vómitos y diarreas. Estos síntomas aparecen a las pocas
horas de ingerido el alimento contaminado.
La principal fuente de contaminación de los alimentos se encuentra en los
manipuladores. Este microorganismo se localiza en la nariz, piel, pelo o en
lesiones. El 50% de las personas sanas albergan S. aureus en su nasofaringe y
al menos un 20% pueden producir toxinas. Estas personas contaminan el
alimento mediante secreciones nasales, saliva, escoriaciones, partículas de
heridas infectadas o al tocar con la mano contaminada el alimento. Los
principales alimentos implicados en la intoxicación estafilocócica son leche,
carne y productos cárnicos, pescados, huevos, pasteles y ensaladillas.
Los resultados que se obtuvieron en las cajas de petril nos afirman que el
microorganismo creció y está entre el límite permisible en el alimento pero la
recomendación seria que se le diera una mejor manipulación al salpicón se
tomó parte de la colonia y se le hizo la prueba de coagulasa y el resultado que
se obtuvo es coagulasa negativa además este resultado se reporta ausencia o
presencia ya en este caso sería ausencia del microorganismo ya que no se
excedió del límite .también se le realizo tinción de Gram y el resultado que se
obtuvo fueron Staphylococcus gran positivos.

BIBLIOGRAFIA:

http://www.consumer.es/seguridad-alimentaria/sociedad-y-
consumo/2003/11/22/9514.php