CUESTIONARIO

1. Indique y prepare un cuadro parea indicar que bacterias son Gram positivas y
cuales son Gram negativas indique las características como formas de cada uno de
ellos.
NOMBRE DIBUJO CARACTERÍSTICAS

GRAM +
Forma esférica.
staphylococcus Ausencia de endosporas
Cocos forma de racimo de
uvas

E.coli GRAM -
Tienen forma de bacilos
rectos
Es un coco bacilo

Cándida GRAM+
Cocos en cadena
Color morado

GRAM+
streptococcus mitis Cocos en cadena o en
pares
Tinción morada
Forma redonda u ovoide

GRAM+
Bacillus Bacilos rectos, delgados,
formadores de endosporas
2. Indique que son Colorantes y que son Tinciones, e indique la clasificación
respectiva en cada caso.
Los colorantes son sustancias de origen químico o biológico, generalmente tintes,
pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en la coloración de tejidos
microorganismos para exámenes microscópicos.

Clasificación
Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión, mientras que el anión
no tiene esa propiedad, por ejemplo: - cloruro de azul de metileno+.
Colorante ácido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante está a cargo del
anión, mientras que el catión no tiene propiedad, por ejemplo: eosinato- de sodio+
Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas de
colorantes ácido y básicos, donde el precipitado resultante, soluble exclusivamente en
alcohol, constituye el colorante neutro, que tiene la propiedad tintorial de sus
componentes ácidos y básicos, por ejemplo: la giemsa.

La tinción es una técnica auxiliar en microscopía para mejorar el contraste en la imagen

vista al microscopio. Pueden ser usadas para examinar tejidos, poblaciones celulares
(clasificando diferentes células sanguíneas, por ejemplo) u orgánulos dentro de células
individuales.

Clasificación
Tinción Simple: utiliza un solo colorante.
Tinción de Gram:
Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30
seg)
Tinción Ácido Resistente:
Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido.
En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa
o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.
Tinción de Giensa:
El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos
en la sangre para observar materias núcleos de las células.
Tinción de Esporas:
Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.
Tinción de Cápsula:
Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados
creando resistencias.
Tinción de Flagelos:
Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.

3. Explique cuál es la composición química de cada uno de los reactivos para la

tinción de GRAM. y cuál es el principio de la coloración de GRAM

CRISTAL VIOLETA: C25H30ClN3 Cristal violeta alcohol etílico oxalato de amonio

agua de amonio
YODO LUGOL: yodo sublimado – yoduro de potasio - agua destilada
ALCOHOL CETONA: 70% etanol absoluto y 30 % acetona
SAFRANINA: C20H19N4Cl Safranina O Alcohol etílico Agua destilada
 4. En una tabla indique cuales son los componentes de cada uno de los siguientes
MEDIOS y que tipo de reacción se debe de observar en cada caso y porque.
a.
MEDIOS COMPONENTES TIPO DE REACCIÓN
1-Prueba del rojo de metilo:
Positivo: color rojo.
Peptona Negativo: color amarillo
Dextrosa
MRVP Fosfato dipotásico 2-Prueba de Voges Proskauer:
Agua destilada Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos
minutos después de una completa agitación del tubo.
Negativo: ausencia de color rojo.
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo
Extracto de carne amarillo): el microorganismo solamente fermenta la
Pluripeptona glucosa.
Cloruro de sodio 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo
Lactosa amarillo): el microorganismo fermenta glucosa,
Sacarosa lactosa y/o sacarosa.
TSI Glucosa 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo):
Sulfato de hierro y amonio el microorganismo es no fermentador de azúcares.
Tiosulfato de sodio 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de
Rojo de fenol cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
Agar 5-El ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo produce ácido sulfhídrico.
1- Decarboxilación de la lisina:
Peptona de gelatina -Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
Extracto de levadura -Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
Glucosa 2-Desaminación de la lisina:
Lisina Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del
LIA Citrato de hierro y amonio género Proteus, Providencia y alguna cepas de
Tiosulfato de sodio Morganella spp.
Púrpura de bromocresol 3-Producción de ácido sulfhídrico:
-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio
(especialmente en el límite del pico y fondo)
Citrato de sodio -Positivo: crecimiento y color azul en el pico,
Cloruro de sodio alcalinidad.
Fosfato dipotásico -Negativo: el medio
CITRATO Fosfato monoamónico permanece de color verde
Sulfato de magnesio debido a que no hay desarrollo bacteriano y no hay
Azul de bromotimol cambio de color.
Agar
Urea Positivo: Rojo rosado intenso en el pico de flauta
Fosfato monopotásico Negativo: Amarillo
UREA Fosfato disódico
Extracto de levadura
Rojo fenol
Cepas móviles: producen turbidez del medio, que se
extiende mas allá de la línea de siembra.
Cepas inmóviles: el crecimiento se observa
solamente en la línea de siembra.
Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a lo largo de
SIM Tripteína la línea de siembra o en todo el medio.
Peptona Cepas SH2 negativas: el medio permanece sin
Sulfato de hierro y amonio cambio de color.
Tiosulfato de sodio Cepas indol positivas: desarrollo de color rojo luego
 Agar de agregar el reactivo de Kovac´s o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de color.
1-Pico alcalino/fondo ácido (pico rojo/fondo
Peptona de carne amarillo): el microorganismo solamente fermenta la
Cloruro de sodio glucosa.
Lactosa 2-Pico ácido/fondo ácido (pico amarillo/fondo
Tripteína amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y
Glucosa lactosa.
Kia Citrato de hierro y amonio 3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo):
Tiosulfato de sodio el microorganismo es no fermentador de azúcares.
Rojo de fenol 4-La presencia de burbujas, o ruptura del medio de
Agar cultivo, indica que el microorganismo produce gas.
5-El ennegrecimiento del medio indica que el
microorganismo produce ácido sulfhídrico.
Staphylococcus aureus Colonias amarillas de tamaño
medio, amarillo medio.
Staphylococcus epidermidis Colonias blancas de
Extracto de carne tamaño pequeño a medio, rojo medio.
Pluripeptona Estafilococos diferentes de S. aureus y S. epidermidis
Agar d-Manitol Colonias de tamaño pequeño a grande, con zonas de
Manitol Cloruro de sodio color rojo o amarillo, según la especie.
Salado Agar Micrococos Grandes, de color blanco a anaranjado
Rojo de fenol Enterococcus, Streptococcus Sin crecimiento a
crecimiento muy débil
Bacterias gram negativas Sin crecimiento a
crecimiento débil
Peptona E.coli: rojas con halo turbio
Pluripeptona Klebsiella pneumoniae: rosadas mucosas
Lactosa Salmonella typhimurium: incoloras, transparentes
Agar Mc Mezcla de sales biliares Shiegella flexneri: Incoloras, transparentes
Conckey Cloruro de sodio Proteus mirabilis: incoloras, transparentes
Agar Enterococcus faecalis: Diminutas, incoloras, opacas
Rojo neutro
Cristal violeta

5. Idique que funciones cumple la cápsula de una bacteria

Almacén de agua, adherencia, protección, sustrato para los desplazamientos de las
células, impide la acción fagocítica de otras células

6. Indique que tipo de Tinciones se puede usar para poder diferenciar esporas,
cápsula y flagelos de una bacteria
Tinción estructural ya que con él se puede identificar y estudiar las estructuras de las
bacterias.
7. Realice una lista de BACTERIAS Gram positivas y Gram Negativas que se
encuentren en el medio ambiente.
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS
Bacillus anthrasis Neisseria gonorrhoeae
Clostridium, perfringens Neisseria meningitidis
Clostridium tetani, Salmonella typhi
Clostridium botulini Hemophilus influenzae
Corynebacterium pyogenes Klebsiella pneumoniae
Lactobacillus acidofillus Helicobacter pylori
Listeria monocytogenes Pseudomonas aeruginosa
Streptococcus epidermidis Escherichia coli
Staphylococcus aureius Proteus mirabilis

8. Defina a que se llaman microorganismo aerobios obligados, anaerobio facultativo,

anaerobio estricto, microaerofillico.
Aerobios Obligados: Estos requieren oxígeno para la respiración celular aerobia.
Utilizan el oxígeno para oxidar sustratos (tales como grasas y azúcares) para obtener
energía.
Anaerobios Facultativos: Pueden emplear oxígeno pero también tienen la capacidad de
producir energía por medios anaeróbicos.
Anaerobio estricto: Un organismo que es incapaz de crecimiento oxígeno-dependiente
y no puede crecer en la presencia de una concentración de oxígeno equivalente a una
atmósfera de aire
Microaerófilos: Emplean oxígeno pero en cantidades muy bajas.

9. Cuál es la finalidad de realizar un cultivo en un medio sólido en forma de pico de

flauta
Este método es usado para la siembra por movilidad

10. Indique que tipo de baterías puede desarrollar en el Agar EMB, KF y ABP y
porque y cuál de sus componentes hace que las bacterias tengan las características
observadas en la práctica

EMB:
La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, está dada
por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre
muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp.
presentan un característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen
centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son
incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp.; la siembra en
profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp.
crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que
Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul
lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de
lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporación de azul de metileno a sus membranas.
En este medio se obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y
Shigella.

KF
La peptona ptoteosa es una peptona mixta de alta calidad nutritiva y el extracto de
levadura proporcionan la fuente de nutrientes necesarios para el crecimiento de los
microorganismos exigentes. La azida de sodio inhibe flora Gram negativa. La maltosa y
lactosa son utilizadas por la mayoría de loa Enterococos como fuente de energía con
 formación de ácido, éste se manifiesta por el vire a amarillo del indicador púrpura de
bromocresol.
Enterococcus faecalis, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes

BP
En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne
constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas
del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro
de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora acompañante. La yema de huevo
permite demostrar la actividad lecitinásica.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de
color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la yema de huevo produciendo alrededor de
la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara más externa
Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual características de colonias
pero sin la zona opaca y clara.
Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas bioquímicas.

11. Indique 4 microorganismo que den reacción positiva y 4 reacción Negativa e

indique porque

LIA Klebsiella pneumoniae

Color en pico de flauta; púrpura
Color en base de tubo: púrpura
Ennegrecimietno del medio: negativo
En este medio se permite evidenciar la descarboxilación del aminoácido lisina en la
diamina cadaverina, como también la desaminación de la lisina en un alfa cetoácido.
Estas 2 reacciones se ponen de manifiesto por el viraje del indicador púrpura de
bromocresol. La formación de H 2 S se pone de manifiesto por la presencia del
tiosulfato sódico, que dará formación al sulfato férrico. También puede verificarse la
formación de gas a partir de la degradación de la glucosa.

KIA P. aeruginosa
Pico/fondo: k/k
Producción de gas: (-)
Producción de ácido sulfhídrico: (-)
Este medio se emplea para la identificación de bacilos gram – basada en la fermentación
de la lactosa y la glucosa y en la producción de H 2 S. Los organismos que fermentan
glucosa pero no lactosa mostrarán un crecimiento K/A, mientras que los que si
fermentan lactosa mostrarán un resultado A/A, con o sin formación de gas. La
formación de H 2 S se demostrará por el ennegrecimiento del medio. Si el tubo no
muestra ningún cambio es porque la bacteria no consume ni lactosa ni glucosa.

SIM E.coli
Movilidad (+) producen turbidez del medio, que se extiende más allá de la línea de
siembra.
Indol (+) desarrollo de color rojo luego de agregar el reactivo de Kovac´
Producción de ácido sulfhídrico (-) el medio permanece sin cambio de color.
La motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor
del canal de la picadura La producción de H 2 S se reconoce por el ennegrecimiento de
la zona de crecimiento o del medio debido a la presencia del tiosulfato sódico. Para la
demostración del indol se usa el rvo de Kovacs, que manifiesta la degradación del
triptófano por la enzima triptofanasa en indol, que se combina con el aldehído presente
en el rvo de Kovacs, para producir un color rojo.
 TSI S. enteritidis
Producción de gas (+)
Producción de ácido sulfhídrico (+)
En este medio se busca determinar la capacidad de la bacteria para degradar los
azúcares y la formación de gas y de H 2 S.La fermentación aeróbica se produce en el
pico de tubo y la anaeróbica en el fondo del tubo. La degradación de la lactosa ocurre en
la parte superior, la de la sacarosa en la parte intermedia y la de la glucosa en la parte
profunda, produciéndose un viraje del rojo al amarillo. El tiosulfato es reducido a H 2 S
quien reacciona con el citrato férrico amoniacal para dar formación al sulfuro de fierro
que es de color negro. La presencia de gas se debe al CO 2 producto de la fermentación.

Simmons Citrato Agar S. typhimurium

Citrato permeasa: (+)
Color del medio:azul
Este medio nos permite comprobar la capacidad de la bacteria de utilizar el citrato como
fuente exclusiva de carbono. La degradación del citrato conlleva a la alcalinización del
medio y el viraje del indicador azul de bromotimol de verde a azul prusia. Con este
medio podemos diferenciar entre las coliformes fecales y bacterias de los grupos
Enterobacter y Citrobacter así como algunas especies del grupo Salmonella .

Caldo urea Proteus mirabilis

Actividad ureásica: (+)
Color del medio: rojo – rosado

S. typhimurium
Actividad ureásica: (-)
Color del medio amarillo

En este medio se observa la capacidad de la bacteria de degradar la úrea por medio de la

enzima ureasa formando amoniaco y carbonato de amonio, que alcalinizan el medio por
lo cual el rojo de fenol vira a un rojo cereza.

12. Explique cuál es la diferencia estructural y de forma de los Staphylococcus y

Streptococcus.
STAPHYLOCOCCUS STREPTOCOCCUS

Cocos racimos irregulares de uvas Cocos cadenas de 3 o más

BIBLIOGRAFIA
http://www.ecured.cu/index.php/Colorante
http://www.hca.es/huca/web/contenidos/websdepartam/farmacia/FN/LUGOLSOLORA
L5.pdf
http://www.fagalab.com/Hojas%20de%20Seguridad/SAFRANINA%20O.pdf
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http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/lisinahierroagar.htm
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http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/micro/contenidos4.htm
http://micro1011profesoraflores.weebly.com/uploads/1/8/6/9/18697132/lab_6.1.pdf
http://bacteriaspatogenascocosdiplococosyest.blogspot.pe/2012/12/bacterias-patogenas-
cocos-diplococos.html