Tema:

METODOLOGIA PARA EXTRACCIÓN DE CAROTINOIDES E

IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Objetivo:

Extraer carotinoides e identificar por cromatografía de capa fina

Objetivos Específicos:

Conocer la técnica y procedimientos básicos para la extracción de

carotenoides a través del método de Söxleth.

Utilizar el método de cromatografía de capa fina para la identificación

de los carotenos y calcular Rf.

Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, (C.C.F), sus

características y los factores que en ella intervienen.
 METODOLOGÍA EXPERIMENTAL

a.- Materiales b.- Equipos

 Bisturí
 Probeta 10, 50ml  Equipo Söxleth
 3 matraces erlenmeyer de 250ml  Rotavapor
 1 agitador de vidrio  Cocineta
 1 espátula
 Pinzas de 3 dedos c.- Reactivos y Sustancias.
 Soporte universal
 Vidrio reloj  Metanol
 Placa  Agua destilada
 Papel filtro  Éter de petróleo
 Frasco cámara  Silica gel
 3 vasos de precipitados de 150ml  Benceno
 Embudo de separación
 Pipeta pasteur
 Vial ámbar Material biológico

 20 g de zanahoria
d.- Procedimiento.

EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE CAROTENOS

1. Picar 20 gramos de zanahoria debe estar perfectamente seca (Fig.1), extraer los
carotenoides mediante extracción Söxleth, y reflujar con 25 ml de metanol.(Fig.2)

Fig.1 Fig.2
2. Seguidamente realizamos una Extracción liquido-liquido, con la solución obtenida
en el paso anterior, a la cual se le añade 25ml de éter de petróleo (Fig.3), agitar la
solución (Fig.4) y permitir reposo para lograr separar los carotenoides (capa
superior) y xantofilas (capa inferior). (Fig.5)

Fig.3 Fig.4 Fig.5

3. Guardar la capa superior.(Fig.6)

Fig.6

4. Volver la capa inferior al embudo y lavar con 2 porciones sucesivas de 10 ml c\u

de éter de petróleo. (Fig.7)
 Fig.7

5. Combinar los extractos de éter de petróleo.(Fig.8)

6. Evaporar el éter de petróleo calentando a menos

Fig.8
de 40° C usando al vacío (manipule con cuidado). (Fig.9)

Fig.9
7. Disolver el residuo en 2 ml de éter de petróleo antes de pasar a la prueba de
cromatografía de capa fina.

IDENTIFICACIÓN DE CAROTENOS.

Cromatografía Capa Fina:

1. Haga una marca con lápiz a 1 cm del borde inferior de la placa de silicagel,

2. Realice otra marca a 1 cm arriba de la marca inferior. Estas servirán de guía para
colocar sus muestras y hasta dónde dejará correr la cromatografía.

3. Agregue la muestra sobre la placa de silicagel. Quedarán unas manchitas de

humedad sobre la silicagel.

4. Previamente debe estar preparada la cámara CCF, con una mezcla de 9ml de éter de
petróleo, 0,5 de benceno y 0,5 de metanol, y dejar por 5 min para tener una mejor
concentración de los reactivos

5. Coloque la muestra preparada en la cámara de CCF, Deje que el solvente suba por la
placa.

6. Mida la distancia recorrida por cada mancha desde el lugar donde colocó la
muestra, para calcular el Rf.
DIAGRAMA DE FLUJO.

10 g de muestra PESAR
(seca)

Éter de petróleo
25 ml

EXTRACCIÓN
SOXHLET

Residuo

Alcohol
25 ml FILTRAR

Filtrado

9 ml de H2O

DECANTAR
Fase acuosa FILTRADO

Eliminar

FASE
Hacer
lavados ORGÁNICA

EVAPORAR EL ÉTER
DE PETRÓLEO

PRUEBAS
CROMATOGRAFÍA DE Fin
CAPA FINA