IN VITRO EMBRYO PRODUCTION (IVP)

In vitro embryo Production adalah proses produksi untuk menghasilkan atau

pengembangbiakaan sel telur dan spermatozoa menjadi zigot dan berkembang menjadi embryo
pada kultur jaringan diluar tubuh hewan. Secara ringkas teknologi fertilisasi in vitro merupakan
teknologi untuk produksi embrio pada lingkungan buatan (di luar tubuh). Dalam produksi
embrio in vitro juga menawarkan kemungkinan penyelidikan ilmiah masalah consepsi dan yang
berhubungan dengan kebuntingan. Teknik embriyo in vitro untuk menetapkan bahwa sapi
birahi berulang juga menunjukkan penyelesaian untuk penyimpangan dari kontrol dalam
produksi dan selanjutnya di vitro pengembangan oosit. Oosit yang dikumpulkan akan berada di
berbagai tahap kedewasaan dan sebagainya, untuk memanfaatkan mereka, mereka harus
matang dan dibuahi in vitro dan kemudian dibiakkan sebelum transfer akhir ke penerima.
Keberhasilan kebuntingan dari sapi fertilisasi in vitro pertama kali dilaporkan oleh Brackett et
al. (1982).

Proses Dan Tahapan Pada Produksi Embryo Secara In Vitro

1. Koleksi Oosit

Pada tahap awal produksi embryo in vitro adalah koleksi oosit dati sapi. Koleksi oosit dari
sapi dapat dilakukan dengan penyembelihan (pada RPH) dan dengan koleksi oosit pada ternak
hidup. Berikut ini penjelasan singkat proses pengambilan Oosit pada sapi.

Koleksi Oosit Pada Ternak Pasca Penyembelihan

1. Aspirasi Oosit

Pengambilan oosit dengan cara aspirasi menggunakan berbagai peralalatan (pipet, syrinx dan
jarum, jarum aspirasi di bawah vacuum pressure) adalah cara yang paling sering dilakukan pada
ovarium sapi yang telah dipotong. Kekurangan dari metode ini adalah bahwa oosit yang
dikoleksi dari sekali ambil dengan penusukan jarum hanyalah 30-60%.

2. Teknik Mengiris Ovarium (slicing Ovary)

Teknik slicing ini dapat dilakukan pada ovarium setelah dilakukan aspirasi atau tidak.
Beberapa laporan menyebutkan penggunaan slicing setelah aspirasi meningkatkan hasil yang
didapat dari aspirasi dan laporan lain juga menyebutkan bahwa metode ini memberikan hasil
yang lebih baik pada kambing dan domba.

3. Diseksi Folikel (Pembelahan Folikel)

Keuntungan dari diseksi folikel adalah metode ini dapat mengidentifikasi follikel non-
atresic. Kriteria folikel yang dapat diidentifikasi, yaitu: kenampakan misalnya keseragaman
permukaan yang cerah, tanda vaskularisasi yang luas, dan memiliki lapisan stratum granulosum
di dalam folikel. Sebaliknya, pada folikel atresia akan terllihat suram, abu-abu, gelap, dan hanya
terlihat sedikit tervaskularisasi. Pada metode ini, Cumulus Oocyte Complex dikeluarkan
dengan merupturkan folikel yang masih utuh pada medium diseksi. Jika dibandingkan antara
cara diseksi dengan aspirasi, cara diseksi oosit memiliki hasil kualitas oosit yang lebih baik
karena pada aspirasi terjadi kerusakan pada kumulus oophorusnya.

Koleksi Oosit dari Hewan Hidup

1. Teknik Leparoskopi

Teknik laparoskopi merupakan metode yang dapat dilakukan untuk menjamin

ketersediaan oosit dari donor hidup dan alat bantu dalam
rangka penerapan bioteknologi reproduksi lainnya. Melalui teknik laparoskopi dapat
diperoleh sejumlah oosit dari donor yang tetap dibiarkan hidup karena teknik ini hanya
menimbulkan sedikit perlukaan dan proses persembuhan luka yang lebih cepat. Pengambilan
melalui serviks dengan terlebih dahulu dirangsang dengan pemberian estrogen dan atau
oksitosin untuk merangsang terjadinya relaksasi serviks.

2. Teknik Endoscopi

Teknik endoskopi telah memberikan pengaruh besar dalam bidang reproduksi pada spesies
yang berbeda. Sinkronisasi hewan, folikel aspirasi inseminasi, koleksi embrio dan pengalihan
adalah topik utama di mana penggunaa endoskopi dapat memiliki efek yang efisien dan
menguntungkan pada strategy peternakan (Besenfelder, et all., 2012). Pada dasarnya teknik
endoskopi mirip dengan leparoskopi, ternak yang digunakan masih hidup dan membutuhkan
injeksi anastesi sebelum memeriksa ovarium menggunakan seperangkat alat endoskopi. Teknik
endoskopi merupakan trobosan baru dalam teknologi reproduksi karena lebih efisien dan ternak
tetap hidup dan dapat digunakan berulang kali.
 3. Teknik Flushing

Flushing merupakan teknik pengambilan embryo (panen embryo) yang diambil dari ternak
hudup melalui bantuan cairan tertentu. Bahan menggunakan media instan PBS dan Metal Salt
yang dilarutkan dalam 1 liter Aquadestilata dan ditambah 2 % serum serta antibiotik penicillin
dan streptomycin 100.000 IU atau 100 mg. Selama ini PBS yang dipakai adalah merk ZA 451
buatan IMV Perancis dan PBS Dulbecco’s buatan Gibco Laboratoris. Sebagian media flushing
tersebut dipakai untuk mencuci embrio (handling) setelah ditambah 20 % serum. Kalau embrio
dibekukan harus menggunakan media freezing, setelah embrio tersebut dicuci dengan media
handling. Media freezing yang dipakai adalah gliserol, propandiol dan sucrose. Sedangkan
untuk media transfer apabila transfer embrio segar cukup menggunakan media handling setelah
embrio dicuci 2 – 3 kali.

4. Teknik Ovum Pick Up (OPU)

Transvaginal pengambilan oosit (TVOR), juga disebut sebagai ovum pick-up (OPU) atau
bahkan sekedar koleksi telur, adalah teknik yang digunakan dalam hubungannya dengan
fertilisasi in vitro (IVF). Teknologi ini memungkinkan untuk menghilangkan oosit (OPU) dari
ovarium donor hewan betina pada hewan penerima, pemupukan oosit tersebut dengan
menggunakan (IVF) di luar tubuh, dan memungkinkan sejumlah besar embrio yang dibuahi
akan tersedia untuk implantasi pada hewan penerima.
Proses Pematangan (in Vitro)

Salah satu kelemahan utama in vitro produksi embrio adalah bahwa kurang dari 40% oosit
yang diperoleh OPU kemudian berkembang menjadi blastokista, mungkin karena kualitas oosit
sendiri, daripada efisiensi prosedur berikutnya. Hal ini tidak mengherankan bila dianggap
bahwa proporsi yang sangat tinggi dari folikel ovarium ditakdirkan oleh alam untuk menjadi
atresia. Selain itu, oosit yang diperoleh akan berada di berbagai tahap perkembangan. Proses
maturasi oosit sebagai berikut :

Sel telur dengan sel cumulus (cumulus-enclosed oocytes) dicuci 2 kali dalam larutan Bench
sebelum dibagi secara acak ke medium pematang (maturasi) TCM-199 yang diberi hormone.
(6 hormon perlakuan), yaitu 10 ug FSH/ml ; 2 IU hCG ; 1 ug estrogen/ml ; 10 ug FSH + 2 IU
hCG/ml; 10 ug FSH+1 ug estrogen/ml dan 10 ug FSH + 2 IU hCG + 1 ug estrogen/ml. Sel telur
di dalam masing-masing perlakuan kemudian dimatangkan dengan menggunakan inkubator
CO, dengan 5% CO2 di udara dan suhu 38C selama 24 jam

Faktor-faktor yang terlibat dalam pematangan oosit adalah bahwa Sel-sel granulosa
memainkan peran penting dalam pertumbuhan dan perkembangan oosit selama hidup
intrafollicular nya. Antar komunikasi antara sel-sel kumulus dan oosit terjadi melalui faktor
parakrin dan melalui gap junction. Sel kumulus memfasilitasi transfer nutrisi dan factor penting
untuk pengembangan oosit, seperti metabolit, asam amino, molekul transduksi sinyal dan faktor
lainnya. Gumpalan awan Sel-sel yang dikenal untuk memainkan peran penting dalam regulasi
sitoplasma dan nuklir pematangan oosit. Oocyte yang dikoleksi dari ovarium belum matang,
tidak bisa dibuahi hingga mereka matang..

Perkembangan oocyte : source Besenfelder, et all., (2012)

.Fertilisasi Secara In Vitro

Proses fertilisasi pada produksi embryo secara in vitro diawali dengan kapasitasi
spermatozoa. Dalam produksi embrio, salah satu langkah pertama adalah pemilihan sperma
untuk digunakan dalam IVF. IVF adalah prosedur yang kompleks yang melibatkan oosit
pematangan, pemisahan sperma dan sperma kapasitasi. Sperma kapasitasi adalah modifikasi
sperma biokimia harus menjalani dalam saluran reproduksi wanita sebelum sel dapat mengikat
zona pelusida dan menjalani reaksi akrosom (AR).

Mendes et al. (2003) menemukan bahwa heparin meningkatkan tingkat kesuburan terlepas
dari teknik pemisahan sperma meskipun pengamatan dari industri IVF sapi yang menunjukkan
bahwa heparin mungkin tidak diperlukan untuk sapi cryopreserved sperma yang telah
dipisahkan melalui Percoll gradien. Lechniaket al. (2003) melaporkan bahwa pre-inkubasi
sperma selama 24 jam mengurangi pembentukan blastokista, tetapi secara signifikan mengubah
rasio jenis kelamin dalam mendukung betina.

Metode fertilisasi digambarkan sebagaui berikut :

Teknik Fertilisasi Sperma

1. Teknik Injeksi Sperma Intra Sitoplasma (ICSI)

Teknik ini sangat sesuai jika diterapkan pada kasus sperma yang mutu dan jumlahnya
sangat minim. Jika pada teknik IVF konvensional membutuhkan 50 ribu-100 ribu sperma untuk
membuahi sel telur, maka pada teknik ICSI hanya membutuhkan satu sperma dengan kualitas
bagus. Dengan bantuan pipet khusus, sperma kemudian disuntikkan ke dalam sel telur.
 2. Teknik Subzonal Sperma Intersection (SUZI)

Subzonal Sperm Intersection (SUZI). Teknik SUZI dilakukan dengan menyemprotkan

sperma ke sel telur dengan membuat celah pada dinding sel telur terlebih dulu agar
memudahkan kontak antara sperma dengan sel telur. Sedangkan pada teknik SUZI, sperma
disuntikkan secara langsung ke dalam sel telur. Hanya saja dari sisi keberhasilan, kedua teknik
ini dianggap masih belum memuaskan. Pada teknik ini jumlah sperma yang dimasukan lebih
dari satu sel spermatozoa.

Kultur Embryo In Vitro

Situmorang (1997) menyatakan kultur embryo dimulai setelah pembuahan selama 18-24 jam
pada medium fertilisasi TALP, zigot dikeluarkan dan dimasukkan ke dalam larutan Bench dan
vortex dilakukan selama 1 menit . Pembiakan dilakukan dengan memasukkan masing-masing
4 zigot pada synthetic oviduct fluid (Sof media) pada inkubator CO Z dengan 5% CO Z di
udara, suhu 38 0 C selama 48 jam. Kemudian setiap 48 jam dilakukan penggantian medium
lama dengan medium yang baru. Perkembangan embrio dievaluasi setelah 6 hari dari waktu
fertilisasi (hari ke-7 setelah penampungan sel telur) dengan menggunakan mikroskop.

Embryo Hasil In Vitro Produksi : Gordon (2005)

 REFERENSI

1. Besenfelder , Havlicek V., Brem G., 2012. In: Embyo Technology,

Constantine the Philosopher University in Nitra, Faculty of Natural Sciences.
2. Brackett, B.G., D. Basquet, H.L. Boice, W.J. Donawick, J.F. Evans And M.A Dressel. 1982.
Normal development foUowing in vitro fertilization in the cow. Biology of Reproduction 27:
147-158.
3. Gordon, Ian. 2005. Reproductive Technologies in Farm Animals. CABI Publishing;
Wallingford UK.
4. Gordon,Ian R. 2003. Laboratory Production of Cattle Embryos. CABI Publishing; Wallingford
UK.
5. Situmorang, P., E. Triwulaningsih, A. Lubis, N. Hidayati, And T. Sugiarti . 1998 . Effects of
the addition of hormone inmaturation medium for in vitro production of embryo (IVP) . Jurnal
Ilmu Ternak dan Yeteriner 3 (1) : 22-26.
6. Situmorang, P dan E. Triwulaningsih. 2004. Aplikasi dan inovasi teknologi transfer embrio
(TE) untuk pengembangan sapi potong. Lokakarya Nasional Sapi Potong. pp. 95-105.