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Taxonomía
Domino Bacteria
Filo Firmicutes
Clase Bacilli
Orden Bacillales
Familia: Staphylococcaceae
Género Staphylococcus
Especie: S. aureus
Características Macroscópicas
Se trata de cocos Gram positivos que poseen tendencia a agruparse en racimos, colonias
lisas, brillantes y convexas. Fermenta glucosa, lactosa y maltosa. El crecimiento ocurre en
un amplio rango de temperatura 6,5 a 50º C, siendo optimo 30-40º C. En los medios de
cultivo tradicionales la mayoría de las especies crecen después de incubarse durante 18-24
horas, formando colonias de 0.5-1.5 mm de diámetro.
Pruebas Bioquímicas
La identificación de S. aureus se realiza con el empleo de pruebas bioquímicas como:
prueba de la catalasa, fermentación de glucosa, que permite diferenciar al género
Staphylococcus del género Micrococcus, que también se considera una catalasa positiva
pero no fermenta la glucosa. Sin duda, la prueba de la coagulasa sigue siendo la más
utilizada. Se basa en la capacidad de S. aureus para producir la enzima extracelular que
coagula el plasma. La detección de la coagulasa permite diferenciar S. aureus coagulasa
positivo de las demás especies de estafilococos coagulasa negativos.
Coagulasa
La prueba de la coagulasa es sencilla y tiene una especificidad muy alta. La prueba se puede
realizar con un cultivo o en tubo y consiste en la búsqueda del factor de aglutinación. Se
lleva a cabo con la administración de S. aureus a plasma de conejo con EDTA, al cabo de
unas horas podrá verse la formación de un coagulo (prueba positiva). Puede usarse la
aglutinación en látex y la Hemaglutinación pasiva como medio alternativo para detectar el
factor de agregación.
Desoxirribonucleasa (DNasa)
Catalasa
Sensibilidad a la lisostafina
Esta prueba mide la facilidad con la que los microorganismos estafilocócicos se lisan en
presencia de lisostafina. Lisostafina es una endopeptidasa que rompe los puentes de
entrecruzamiento de glicina en el peptidoglucano. Entre las bacterias de lisis rápida y
marcada encontramos: S. aureus, S. simulans, S.cohnii y S. xylosus; y las de lisis lenta o
insensibles: S. hominis, S. saprophyticus y S. haemoliticus.
Oxidasa
Esta prueba es rápida, se usan discos de papel filtro con tetrametil-p-fenilendiamina como
reactivo y DMSO para hacer permeables a las bacterias al reactivo. La prueba se basa en
que evidenciar la reacción de óxido-reducción y se torna violeta a los 30 segundos cuando
es positiva. Staphylococcus aureus, y la mayoría de las especies del mismo género son
oxidasa-negativos.
Enzimoinmunoanálisis
Taxonomia
Dominio Bacteria
Filo Actinobacteria
Orden Actinomycetales
Familia Corynebacteriaceae
Género Corynebacterium
Especie: C. diphtheriae
Características microscópicas
Bacilo delgado en forma de clava, mide 1,5-5 μm de ancho y 0,5-1 μm de largo; es Gram
positivo, no esporulado e inmóvil y forman en cultivos agrupaciones ramificadas con la
apariencia de ideogramas chinos. Bacilo pleomorfo, no encapsulado, no formador de
esporas, Catalasa +, inmóvil, se agrupan en L o V, toman formas características de letras
chinas. Gram + y al teñirse con azul de metileno se pueden observar gránulos
metacromáticos, no son acido-alcohol resistentes. dentro de los bacilos no esporulados C.
diphtheriae es uno de los más resistentes a la luz, desecación y congelamiento. Pero son
susceptibles a los desinfectantes de uso habitual.
Medios de cultivo
Se deben inocular tanto en una placa de agar sangre enriquecido no selectivo como en un
medio selectivo como el agar sangre con telurito de potasio AST, medio de cultivo de
Tinsdale, agar colistina-nalidixico CNA. La identificación de sospecha de C. diphtheriae
se puede realizar por la presencia de cisteinasa y la ausencia de piracinamidasa, que son
dos reacciones enzimáticas que se realizan con rapidez.
Pruebas bioquímicas
Prueba de Pirazinamidasa. Negativa
Prueba de producción de Ureasa: Negativa
Prueba de reducción de Nitratos: Positiva
Prueba de fermentación de carbohidratos: positiva (glucosa y maltosa), Negativa
(sacarosa)
Listeria monocytogenes
Taxonomía
Dominio Bacteria
Filo Firmicutes
Clase Bacilli
Orden Bacillales
Familia Lactobacilaceae
Género Listeria
Especie: L. monocytogenes
Características microscópicas
Listeria crece bien en medios como agar sangre de cordero al 5% en el cual muestra la
pequeña zona característica de hemólisis alrededor de las colonias y por debajo de las
mismas. El microorganismo es un anaerobio facultativo y produce catalasa, hidrólisis de
esculina y es móvil. Las colonias son suaves, ligeramente convexas, con bordes regulares,
traslúcidos y una pequeña zona de β hemólisis. Con transiluminación oblicua podemos
apreciar un color azul. En hemocultivo, encontramos bacilos pequeños, rectos (unos pocos
pueden ser curvados) con extremos redondeados. Se presentan aislados, en grupos en V o
en L, en empalizada, y algunas veces en cortas cadenas.
Pruebas Bioquímicas
Reacción de catalasa: Positiva
Oxidasa: Negativa
Ureasa: Negativa
Prueba Indol: Negativa
Hidrólisis de esculina: positiva, que puede demostrarse en el agar bilis esculina, dado que
es capaz de crecer en bilis al 40%,
Fermentación de glucosa y maltosa, motilidad (+) a 25 °C que en medio semisólido se
observa en forma de paraguas cercano a la superficie.
La prueba de CAMP es (+).
Prueba de reducción nitratos a nitritos: se observará la formación anillo rojo, reacción
positiva. Si no se forma anillo rojo-violeta agregar polvos de zinc y mantener durante una
hora, si se forma anillo rojo-violeta, la reacción es negativa y si no se forma color la
reacción es positiva. Listeria monocytogenes no reduce nitratos a nitritos.
Fermentación de carbohidratos: en la prueba de esculina se observa una pigmentación
inequívoca, puede omitir la prueba de esculina en caldo. Listeria monocytogenes es manitol
negativo, ramnosa positiva y xilosa negativa.
Listeria monocytogenes tiene un patrón de susceptibilidad estable, generalmente es
sensible a penicilina, ampicilina, amino-glucósidos, eritromicina, rifampicina, tetraciclina,
cotrimoxazol, vancomicina e imipenemcilastatina.
CLOSTRIDIUM BOTULINUM
Dominio Bacteria
División: Firmicutes
Clase: Clostridia
Orden: Clostridiales
Familia: Clostridiaceae
Género: Clostridium
Especie: C. botulinum
dd
Características Microscópicas
Las esporas de C. Botolinum tienen un diámetro mayor al de los bastoncillos en los cuales
se forman. Son móviles y poseen flagelos periticos. Pueden producir colonias grandes,
elevadas con bordes enteros, producen hemolisis en agar sangre. Las colonias pueden
presentar un aspecto pleomórfico dando la impresión de un cultivo mixto. En los medios
solidos, las colonias a menudo son de color blanco grisáceo con un borde irregular.
Medios de cultivo
C. Botolinum, puede diferenciarse en grupos según sus características de cultivo,
bioquímicas y fisiológicas. Todos los cultivos del tipo A y algunos del tipo B y F son
poteoliticos, cuando se cultivan en un medio con clara de huevo coagulada o carne. Todos
los de características del metabolismo de los carbohidratos que los diferencian de los
grupos no-proteoliticos de los tipos E y D.
La temperatura óptima para los tipos A y B es de 35-40°C y un pH mínimo de 4.8 tomando
5 minutos a 100°C para matar estos subtipos. La temperatura óptima para el tipo E es 18-
25°C y un pH mínimo de 5.0 tomando a.1minutops a 100°C para matar este subtipo.
Medio carne cocida (CMM)
Caldo tripticasa peptona glucosa extracto de levadura (TPGY). Medio selectivo
Caldo tripticasa peptona glucosa extracto de levadura adicionado con tripsina (TPGYT).
Medio selectivo
Agar hígado de ternera
Agar para asilamiento de C. botulinum (CBI).
Agar McClung Toabe
Pruebas Bioquímicas
Glucosa: positiva
Maltosa: positiva
H2S: positiva
L de Gelatina: positiva
STREPTOCOCCUS PYOGENES
Taxonomía
Dominio Bacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Lactobacillales
Familia: Streptococcaceae
Género: Streptococcus
Especie: S. pyogenes
Estreptococos hemolíticos β del grupo A
(Streptococcus pyogenes) después del cultivo
durante la noche en una placa de 10 cm con
agar sangre de carnero al 5%. Las colonias
blancas pequeñas (0.5 a 1 mm de diámetro)
están rodeadas por zonas difusas de hemólisis
β de 7 a 10 mm de diámetro. (Cortesía de H.
Reyes.)
Características microscópicas
Las cepas de S. pyogenes son cocos esféricos de diámetro comprendido entre 1 y 2 µm que
forman cadenas cortas en las muestras clínicas y cadenas de mayor longitud cuando crecen
en medios de cultivo. Su crecimiento se ve favorecido en el agar sangre enriquecido pero
se ve inhibido cuando contiene una concentración elevada de glucosa. Después de 24 horas
de crecimiento se observa β-hemólisis. A las 24 horas de incubación las colonias
aparecerán en forma de cúpula, de color grisaceo.
Los cocos individuales son esféricos u ovoides y están dispuestos en cadenas. Los cocos
se dividen en un plano perpendicular al eje longitudinal de la cadena. Los miembros de la
cadena a menudo tienen un aspecto diplococico llamativo y esporádicamente se observan
formas semejantes a un bastón. Las longitudes de las cadenas son muy variables y están
condicionadas por factores ambientales.
Medios de Cultivo
Pruebas Bioquímicas
PyR: positivo
Bacitracina: S (sensible)
Catalasa: negativa
LAP: positivo
Hidrolisis de la esculina: positivo
Crecimiento en NaCL al 6.5%: negativo
Vancomicin: S (sensible)
PSEUDOMONAS AERUGINOSA
(gram negativa)
Taxonomía
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gamma Proteobacteria
Orden: Pseudomonadales
Familia: Pseudomonadaceae
Género: Pseudomonas
Pseudomonas aeruginosa. Detalle
ampliado de las colonias, grandes, β Especie: P. aeruginosa
hemolíticas y con brillo metálico.
Fuente: ASM MicrobeLibrary.org ©
Características microscópicas
P. aeruginosa es móvil, tiene forma de bastón, mide casi 0.6 × 2 μm. Es gramnegativo y
muestra una disposición en bacterias individuales, en pares y a veces en cadenas cortas
móviles, procedentes de un cultivo con olor a frutas y fluorescencia bajo luz ultravioleta.
Morfología típica de las colonias. A menudo generan microorganismos de P. aeruginosa
que forman colonias mucoides como resultado de la producción excesiva de alginato, un
exopolisacárido.
Medios de cultivo
Crece con facilidad en los medios de cultivo, donde forma colonias pigmentadas de color
verdoso, hemolíticas. Entre los pigmentos producidos por la Ps. Aeruginosa están la
piocianica, una substancia azul, soluble en agua y en cloroformo, y la fluoresceína, una
substancia verdosa, fluorescente, soluble en agua, pero no en cloroformo. La Ps.
Aeruginosa es aerobia y posee citocromo - oxidasa.
Cultivo en placa de agar sangre en atmosfera aeróbica. A las 24-48 horas crecen en medios
convencionales (AS, ACH, Mac Conkey), con una temperatura óptima de crecimiento
entre 30ºC y 37ºC. De las especies del género Pseudomonas, solo P. aeruginosa crece a
42ºC.
Pruebas Bioquímicas
Coagulasa: positivo
Catalasa: positivo
Nitrato: positivo
Brucella abortus
Taxonomía
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Proteobacteria alfa
Orden: Rhizobiales
Familia: Brucellaceae
Cultivo en agar sangre de caballo Género: Brucella
Características Microscópicas
Son Gram-negativas en forma de vara de bacterias que no tienen flagelos o pili. Al
microscopio electrónico se distinguen, de fuera hacia dentro: la envoltura celular, integrada
por la membrana externa, el espacio periplásmico y la membrana citoplasmática que rodea
al citoplasma. son cocobacilos de 0,5 a 0,7 µm de diámetro por 0.6-1.5 µm de largo.
Medios de cultivo
La bacteria crece lentamente, necesitando un mínimo de 3 días hasta 2 semanas. La
temperatura óptima de incubación del cultivo es de 35ºC. Son aerobios estrictos, aunque
algunas cepas requieren suplemento de CO2. puesto que son organismos de crecimiento
lento, pero sobre las máquinas automáticas modernas, los cultivos a menudo pueden ser
positivos en siete días.
Pruebas Bioquímicas
Reacción de;
Catalasa: positivo
Oxidasa: positivo
Ureasa: positivo
Reacción de Indol: negativo
Vogues Proskauer: negativo
Neisseria gonorrhoeae
Taxonomía
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Beta Proteobacteria
Orden: Neisseriales
Familia: Neisseriaceae
Género: Neisseria
Especie: N. gonorrhoeae
Detalle ampliado de las colonias de N.
gonorrhoeae. A las 24 horas son pequeñas,
brillantes y elevadas. A partir de las 48 horas
presentan una coloración marrón debida a la
autolisis de las células. Fuente: CDC ©
Características Microscópicas
N. gonorrhoeae es un diplococo Gram negativo de tamaño que fluctúa entre 0,6 y 1 um de
diámetro, siendo el tamaño promedio de 0,8 µm de diámetro. Los microorganismos se
visualizan al microscopio de luz como diplococos intracelulares, dentro de los neutrófilos.
Los gonococos son bacterias frágiles, de crecimiento lento y con requerimientos
nutricionales estrictos. Las colonias son pequeñas, brillantes y elevadas.
Medios de cultivo
Uno de los medios de cultivo empleado con mayor frecuencia es el Thayer Martin
modificado, suplementado con agar chocolate y que contiene vancomicina (3 µg/ml),
colistina (7,5 µg/ml), y nistatina (12,5 µg/ml) y lactato de trimetropima (5 µg/ml). Estas
sustancias antimicrobianas se agregan para inhibir aún más los microorganismos que
pudiesen crecer como contaminantes del medio.
Pruebas Bioquímicas
Oxidasa: positivo
Glucosa: positivo
Catalasa: positivo
Superoxol: positivo
TM: positivo
AN: negativo
Pigmento: negativo
TSI: SD
DNasa: ND
Haemophilus influenzae
Taxonomía
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gammaproteobacteria
Orden: Pasteurellales
Familia: Pasteurellaceae
Género: Haemophilus
Especie: H. influenzae
H. influenzae sobre una placa de agar-sangre.
Características Microscópicas
Es un pequeño bacilo gram negativo inmóvil, que no forma esporas, con requerimientos
nutricionales exigentes, crece aeróbica o anaeróbicamente. Mide 0,2-0,3 por 0,5-0,8 μm,
inmóvil, no formador de esporas. Las colonias tienen una forma convexa, circular, granular
o transparente, levemente opaca; de 0,5-0,8 mm a las 24 h y 1-1,5 mm a las 48 h. Las
colonias de las cepas capsuladas son de mayor tamaño y de aspecto más mucoide,
alcanzado los 3 mm. Presenta un olor característico.
Medios de cultivo
Los cultivos bacterianos de H. influenzae se realizan en placas de agar, de preferencia agar
chocolate, con adición de X (Hematina) y V (NAD), a 37 ° C en un incubador con CO2-
enriquecido. El crecimiento de agar sangre es sólo un fenómeno satélite alrededor de otras
bacterias. Las colonias de H. influenzae aparecen como colonias convexas, lisas, pálidas,
grises o transparentes. En las pruebas serológicas es necesario distinguir el polisacárido
capsular y diferenciar entre la cepa b de H. influenzae y las cepas no encapsuladas. Aunque
muy específicos, los cultivos bacterianos de H. influenzae carecen de la sensibilidad. La H.
influenzae crece en la zona hemolítica de Staphylococcus aureus en placas de agar sangre
pues la hemólisis de las células de S. aureus libera nutrientes vitales para su crecimiento.
Su pH óptimo de 7,6 en condiciones aeróbicas o con 5% CO2.
Pruebas Bioquímicas
Se puede realizar biotipificación por la producción de indol, ureasa y actividad de la
ornitina descarboxilasa. Fermenta glucosa y deoxiribosa, con producción de ácido, pero no
gas, también lo hace con xilosa, pero no sucrosa, lactosa o manitol. Son catalasa y oxidasa
positiva. Posee fosfatasa alcalina y son H2S y esterasa negativa. Todas las cepas son α
(PNPG) y β glucosidasa positiva, así como β galactosidasa (ONPG) positiva
Hemolisis: negativo
Lactosa: negativo
Manosa: negativo
Catalasa: positivo
Oxidasa: positivo
Escherichia coli
Taxonomía
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gammaproteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Género: Escherichia
Especie: E. coli
Características Microscópicas
Bacilo Gram negativo, no forma esporas, móviles (flagelos perítricos). Miden 0.5 μ de
ancho por 3 μ de largo. Las colonias de esta bacteria varían según el medio de cultivo donde
crezcan, en este caso el medio de cultivo es Agar Eosina Azul de Metlileno abreviado
EMB, podemos observar en la imagen que las colonias tienen en demasía una coloración
verde-metalico, lo cual es característico de E. coli, aunque hay otras bacterias que logran
producir este color es muy tenue y escaso. Se logran ver colonias aisladas, son colonias
medianas, circulares, convexas, moradas, contorno verde-metalico, bordes redondeados.
Medios de Cultivo
Para el aislamiento e identificación de la E. coli, se debe tomar una muestra a 37 ºC en un
medio selectivo en condiciones aeróbicas, ya sea en agar MacConkey o eosina azul de
metileno. Además de la temperatura, el pH y la actividad de agua pueden influir en la
proliferación de E. coli. Las condiciones óptimas de desarrollo para estos parámetros son
de 7,2 y 0,99 respectivamente. El desarrollo de E. coli se detiene a pH extremos (inferiores
a 3,8, o superiores a 9,5), y valores de aw inferiores a 0,94. Por ello, el grado de acidez de
un alimento puede constituir un factor de protección y garantizar su seguridad.
Pruebas Bioquímicas
Prueba gelatinasa: negativo
Reduccion de nitratos: negativo
Urea: negativo
TSI: A/A
Indol: positivo
H2S: negativo
Movilidad: positivo