Technique de frottis mince

I. Principe :

1. Déposer une goutte de sang a un cm du bord droit de la lame

2. Tenir le bord de l’extrémité gauche de la lame
3. Poser le bord de la lamelle au contact de la lame à gauche de la goutte de sang (ongle de 45°)
4. Faire glisser la lamelle vers la goutte de sang => le sang se répartie régulièrement par capillarité
le long de la lamelle
5. Faire glisser la lamelle sur la lame vers la gauche jusqu’au bout + contact et pression nécessaire
=> couche mince uniforme de sang
6. Sécher immédiatement à l’air libre en faisant des mouvements d’éventails vifs
7. Observer au MO

II. Avantage : étudier la morphologie des protozoaires et des helminthes, et les modifications
éventuelles des hématies parasités

III. Inconvénients : manque de sensibilité

Technique de la goutte épaisse

I. Principe :

1. Déposer une goutte de sang prélevé au milieu de la lame

2. Défibrer la goutte de sang pour empêcher la coagulation pendant une à deux minutes
3. On s’arrête avant le séchage du sang pour obtenir un disque d’épaisseur uniforme
4. Laisser sécher à plat, et à l’air, ou dans l’étuve à 37°

II. Avantage :

1. Diagnostic des parasites sanguicoles

2. concentrer de parasites dans une petite quantité de sang => lecture facile

III. Inconvénients :

1. Diagnostic retardé (1 à 12h)

2. La préparation peut être décollée
3. Ne peut infirmer l’espèce (à associer avec un frottis)

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 Examen microscopique direct

 Examen à l’Etat frais

 Seul examen permettant de voir la forme végétative des protozoaires
 Technique : dépends de la situation

I. Examen direct des selles non dilués :

1. Selle glairo-sanguilonante
2. Selles fluides
3. Examiner rapidement après l’émission au labo
4. Examen à chaud en cas d’amibiase intestinal
5. Identification des formes végétatives grâce à leur mobilité, et confirmation par technique de
coloration

I. Examen de selles diluées :

1. Selles normales ou dures

2. Déposer dans une veine à pied : une noix de selle + du sérum physiologique (1/20)
3. Déposer une goutte sur une lame, et lire au microscope

1. Coloration au lugol systématique (entre lame et lamelle) : permet de visualiser le contenu des
kystes et leurs noyaux

Iode et iodure de potassium (lugol) colore :

 En brun : les vacuoles des kystes des pseudolimax

 En violet : les grains d’amidons

2. Avantage :

 Simple
 Matériel rudimentaire
 Permet de visualiser les kystes, les œufs, et les forme végétatives

3. Inconvénients : peu de chance de trouver les parasites

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 Technique de concentration de willis

I. Principe :

1. Technique de concentration par méthodes physiques

2. Basée sur une double priorité des œufs des helminthes :
 Flotter à la surface d’une solution saline saturé
 Adhéré au verre
3. La densité des réactifs est supérieure à celle des parasites => indiqué pour les œufs légers
d’helminthes

II. Modalités :

1. Dans un verre à pied : noisette de selle + solution saturé de NaCl à 25%

2. Laisser reposer quelques secondes
3. Remplir un tube conique avec le mélange
4. Déposer une lamelle sur le tube conique
5. Laisser reposer 15 min
6. Récupérer la lamelle, la recouvrir d’une lame, et observer au MO

III. Avantage :

1. Simple
2. Matériel rudimentaire

IV. Inconvénients :

1. Travailler rapidement
2. Ne pas dépasser les 15 min, parce que certains parasites peuvent d’imprégner de NaCl et
sédimenter

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 Technique de concentration de Bailanger

I. Principe :

Méthode diphasique : aqueuse et organique (non miscible) => réalisation d’un coefficient de partage
dont la valeur est conditionné par sa valence hydrophile-lipophile

II. Mode opératoire :

1. Dans un verre à pied : noisette de selle, acide acétique, acétate de sodium + eau distillé => PH=5
2. Laisser sédimenter une minute
3. Verser dans un tube conique 2/3 du volume surnageant du mélange et 1/3 d’éther
4. Mélanger énergétiquement pendant une minute
5. Centrifuger à 1500 tours/min pendant 2 à 3 min
6. Apparition de 4 couches après centrifugation : culot (à examiner), phase aqueuse, débris
alimentaire, phase éther
7. Retourner brusquement le tube
8. Prélever le culot à l’aide d’une pipette pasteur
9. Observer entre lame et lamelle au MO

Le pH 5 évite l’altération des formes kystiques

III. Avantage :

1. Rapide
2. Peu couteuse
3. Polyvalente
4. Concentre les œufs et autres formes parasitaires

IV. Inconvénient :

1. Réajustement du PH
2. Non indiquer pour les formes végétatives

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 Technique de coloration de kohn

I. Principe :

 Coloration du frottis de selle en un temps

 Pour les selles diarrhéiques

II. Modalités : Confection d’un frottis de selle :

1. Placer une noisette de selle sur une lame et étaler de façon concentrique
2. Inonder le frottis avec le colorant : noir Chlorazole
3. Laisser agir 18h
4. Faire passer dans un bain d’alcool à degrés croissant : 60°, 70°, 80°, 90° pendant 3 min pour
chaque bain => déshydratation
5. Faire passer dans un bain de xylène
6. Observer au MO x40, puis x100 après ajout d’une goutte d’huile à l’immersion

III. Avantage :

 Le noir chlorazole joue le rôle de fixateur et de colorant pour les parasites

 Permet de visualiser les formes végétatives et les kystes

IV. Inconvénients : contre indiqué pour les selles graisseuses