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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD


INGENIERÍA EN ALIMENTOS

INFORME DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA


Integrantes: Valeria Cabrera Romero Fecha: 11/01/2018
Docente: Ing. Alim. Cecilia Ramos
Número de Informe: 4
Nombre de la práctica: Tinción Gram (YOGURT)

 FUNDAMENTACION
Tinción empleada en microbiología para la visualización de bacterias en muestras clínicas.
También se emplea como primer paso en la diferenciación bacteriana. El examen con
microscopio óptico de preparación con tinción de Gram se emplea de rutina para
determinar la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos (esféricas), bacilos
(alargadas) y formas espirales
Las bacterias pueden diferenciarse con esta tinción en dos grupos. Los microorganismos
Gram. Positivos se tiñen de azul, mientras que aproximadamente un tercio de los cocos, la
mitad de los bacilos y todos los organismos espira lados se tiñen de rojo y se dice que son
gramnegativos.
Las aplicaciones más comunes de la coloración de Gram son las siguientes:
 La presencia de cocos Gram positivos agrupados sugiere estafilococos; en cadenas
sugiere estreptococos; en forma de lanceta a los diplococos
 La presencia de diplococos gramnegativos son características de especies de
Neisseria
 Los bacilos Gram. Positivos grandes sugieren especies de Bacillus o clostridium, los
bacilos Gram. positivos pequeños sugieren especies de Listeria o una de las
corineiformes ( difteroides)
 Los bacilos Gram. negativos son las bacterias más comunes halladas en los
laboratorios clínicos e incluyen a Enterobacteriaceae, bacilos no fermentados y
especies de Haemophilus.
El valor diagnóstico de esta tinción es variable; normalmente permite una buena
orientación al microbiólogo para seleccionar las técnicas de cultivo más adecuadas y
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también tiene valor en orientar hacia un diagnóstico etiológico, en especial para instaurar
un tratamiento inicial.

FUNCION DE LOS REACTIVOS

CRISTAL VIOLETA: Compuesto químico empleado como indicador de pH y colorantes.


Usos.
 Su principal uso es el de la tintura textil de color purpura y
 para dar tonos violeta oscuro en las pinturas y tintas de impresión.
 Indicador de pH de 0 a 10.
 Como ingrediente activo de la tinción de gram.
 Para conectarse al ADN.
 Trazador fluorescentes y en experimentos de emisión de óptica no lineal.
 Clasificación de bacterias.

Aplicación.
 No medico; para la coloración de papel y como un componente de color azul marino y
negro para la impresión, bolígrafos y en las impresoras de chorro de tinta.
 Para color izar productos diversos como fertilizantes, anticongelantes, detergentes y
chaquetas de cuero.
 En las ciencias biomédicas para ensayos de viabilidad celular.
 En la química como indicador de pH.
 En el área de la física como un trazador fluorescente y en experimentos de emisión de
efectos de óptica no lineal.
 Medico; se utiliza medicamente por sus propiedades antibacterianas,.
 En la medicina forense para desarrollar huellas dactilares.
¿Cómo funciona?
El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto Gram
positivas como Gram negativas) a través de la pared bacteriana.

LUGOL: Es una disolución de yodo molecular I2 y yoduro potásico en agua destilada.


Usos.
 Desinfectante antiséptico.
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 Como reactivo en las pruebas de yodo en análisis médicos y de laboratorio.


 Para cubrir deficiencias de yodo.
 Para reconocer la presencia del almidón en los tejidos vegetales.
 Para teñir el núcleo de las células y hacerlo mas visible.
 Para tratamiento de enfermedades relacionadas con la glándula tiroides.
Aplicación.
 Reconocimiento de almidón, ya que absorbe el yodo produciendo una coloración azul
interna.
 Acuarios marinos, como fuente de yodo y yoduro.
 En la medicina como biopsia para detectar el cáncer de vagina.
 Química analítica para hacer valoraciones cuantitativas.
¿Cómo funciona?
El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio)
y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente
(son sustancias que aumentan la afinidad de la célula por el colorante. Suelen añadirse
después del colorante en determinadas tinciones diferenciales), haciendo que el cristal
violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las
células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.

ALCOHOL – ACETONA: Es un compuesto químico con formula química


CH3(CO)CH3 es
Un líquido incoloro de olor característico.

Usos.
 Fabricación de plásticos y productos químicos.
 Disolvente de sustancias químicas.
 Quitar manchas y el esmalte de uñas.
 En la tinción de gram para realizar la decoloración.
Aplicación.
 En la química industrial.
 Disolvente general
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 Como aditivo para la comida particularmente se encuentra en el pan donde lo ayuda a


madurar y fermentar.
 En el área de la cosmética donde desnaturaliza ciertos alcoholes en los compuestos
químicos, dándole al producto un aroma especial.
¿Cómo funciona?
La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la
misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se
decoloran, mientras que los Gram negativos sí lo hacen.

SAFRANINA: Colorante biológico, su fórmula química es C20N14ClN4, es un dimetil


de safranina.

Usos.
 Líquido contraste en algunos protocolos de tinción
 Detecta el cartílago mucina y gránulos de mastocitos
 Indicador redox en la química analítica
 En distintas técnicas histológicas que detectan células.
 Teñir tejidos biológicos.
Aplicación.
 En la tinción de safranina ya que se usa para diferenciar una estructura celular
previamente teñida con un colorante.
 En la identificación de procesos degenerativos como la osteoartritis.
 Histología vegetal donde tiñe de rojo los núcleos de paredes celulares secundarias.
 Herramienta de detención de estructuras en las células eucariontes y procariontes.
 En los laboratorios como un colorante fácil de manejar.
¿Cómo funciona?
Para poner de manifiesto las células Gram negativas se utiliza una coloración de contraste.
Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la
coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram
positivas permanecen violetas.
La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción
de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al término del protocolo,
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las Gram positivas se verán azul-violáceas y las Gram negativas, se verán rosas (si no se hizo
la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina).

ACEITE DE INMERSIÓN: Aceite hecho principalmente a base de aceite mineral.

Usos.
 Para observar un objeto en el microscopio fijado en el portaobjetos.
 Restringe el movimiento de una muestra.
 Para ver frotis bacterianos.
 Facilita la visión del microscopio al entrar en contacto con el cubreobjetos.

Aplicación.
 En la biología como aceite a base de un aceite mineral.
 Uso de laboratorio, análisis, investigación y química fina.
 En la microscopía, se elimina casi completamente la deviación de los rayos de luz y se
aumenta considerablemente en la eficacia de los objetivos de los microscopios.
 En la microbiología para ver frotis bacterianos.
¿Cómo funciona?
Restringiendo el movimiento de una muestra. Al intercalar entre el objetivo y el aceite, el
índice de refracción en casi igual al vidrio, los rayos emergentes continúan su camino sin
desviación, consiguiendo mayor calidad de luz llegue al objetivo, mejorando notablemente
la visión.

 OBJETIVOS

o Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras


(yogurt)

o Identificar en la muestra del yogurt la presencia de microorganismos.

o Observar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del


aceite de inmersión.

 MATERIALES E INSUMO

 Mechero Bunsen o de Alcohol


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 Asa de Cultivo

 Portaobjetos

 Muestras bacterianas de origen natural: Yogurt

 Microscopio

 Aceite de inmersión

 Agua destilada

 Colorantes para Tinción: Solución de cristal Violeta, Lugol, Alcohol Cetona,


Safranina.

 PROCEDIMIENTO

1. Preparar una porta objeto bien limpia y coger una porción pequeña de yogur
2. hacer una extensión sobre el porta objeto con la ayuda de un asa de cultivo

3. Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.

4. Cubrir la muestra con reactivo de cristal violeta durante un minuto

5. Lavar el portaobjetos en una corriente suave de agua destilada durante 5 segundos.

6. A continuación, aplicar el reactivo de lugol durante un minuto.

7. Lavar inmediatamente como se indica en el paso 4.

8. Cubrir la muestra con el reactivo de alcohol cetona durante 5 a 30 segundos.

9. Lavar inmediatamente como se indica en el paso 4.

10. Cubrir la muestra con el reactivo de safranina durante un minuto.

11. Lavar inmediatamente como se indica en el paso 4 y dejarla secar a temperatura


ambiente.

12. Observar la muestra utilizando microscopio con aceite de inmersión.

 OBSERVACIONES:

Antes de entrar al laboratorio es necesario ponerse la bata, cubre bocas, cofia y guantes
de látex y además desinfectar el área donde se va a trabajar.
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 CUADRO DE RESULTADO:

GRAM POSITIVAS
LACTOBACILOS Y
STREPTOCOCCUS
actobasilos

 CONCLUSIONES
Hemos podido reconocer a través del método de tinción Gram, en este caso se identificó
bacterias y sus formas y los lactobasilos del yogurt, en nuestro caso se juntaron las bacterias
de streptococcus y los lactobasilos estando unidos en el portaobjetos y diferenciándose por
los colores rosa y los lactobasilos eran gran positivas y de color rosa y los streptococcus eran
vien la observación del microscopio se pudo apreciar su formas bien definidas y
diferenciadas. Gram + violetas y cerradas y las Gram - incoloras y abiertas
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 RECOMENDACIONES
Llevar la vestimenta adecuada y los materiales necesarios para obtener una buena práctica.

 ANALISIS
Mediante la tinción de Gram se identifican bacterias Gram positivas y Gram negativas
gracias al color que tornan después de ser teñidas; en el caso de las bacterias Gram positivas
se tiñen de violeta, esto se debe a que gracias a que contienen una pared gruesa de
peptidoglicano y gran cantidad de ácidos teicóicos que permiten fijar y retener rápidamente
el colorante inicial el cual es, el cristal violeta de Hucker, y además son resistentes a la
decoloración. Lo contrario ocurre con el caso de las Gram negativas, las cuales poseen una
pared delgada con menos cantidad de peptidoglicano y lípidos.

La tinción de Gram permite conocer la morfología celular, el tamaño, la forma y su


clasificación taxonómica (Gram positivos o Gram negativos) de acuerdo al color que tornan
las bacterias después de la tinción, sin embargo no permite conocer la especie o género de
la bacteria al cual pertenece.

 BIBLIOGRAFIA

http://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/reactivos-de-la-tinci-n-de-gram

https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram

http://microbiologiaulat2013.blogspot.com/2013/12/tincion-de-gram_7.html
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 ANEXOS