UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

CURSO BIOQUIMICA, CICLO 2018-I

PRÁCTICA 7

DETERMINACION DE PROTEINAS TOTALES Y ALBUMINA

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA PROBLEMA (SUERO O PLASMA):

Extraer 3 mL de sangre (con sistema al vacío, aguja libre o jeringa) y separar el suero o plasma
previa centrifugación.

PROTOCOLO Y RESULTADOS
1. Preparar la siguiente batería de tubos: Blanco (B), el Estandar (St) y Muestra Problema
(MP):

Fundamento del método

Proteínas totales: El método se basa en la reacción de Biuret, en la cual los enlaces peptídicos
reaccionan, en medio alcalino, con sulfato de cobre para formar un complejo azul-violeta. La
intensidad del color es proporcional a la cantidad de proteína presente en la muestra.

Albúmina: El método se basa en la unión de la albúmina al indicador Verde de bromo cresol

2. Mezclar e Incubar en baño maría a 37°C por 10 minutos. Terminado el tiempo, leer las
absorbancias de los tubos a 540 nm. Encontrar la concentración de proteínas totales
(g/dL o g%) en la muestra problema (suero o plasma), mediante la siguiente fórmula:
 Imagen 1. Preparado blanco, estándar y muestra problema

PROTOCOLO PARA ALBUMINA

Preparar la siguiente batería de tubos: Blanco (B), el Estándar (St) y Muestra Problema (MP):

 Mezclar y dejar a temperatura ambiente por 3 minutos.

 Terminado el tiempo, leer las absorbancias a 620 nm. Encontrar la concentración de
albúmina (mg/dL o mg%) en la muestra problema (suero o plasma), mediante la
siguiente fórmula:

[ 𝑆𝑡 ]
[Albúmina g/dL] = 𝑥 𝐴 𝑚𝑝 − 𝑏𝑙 𝑥 𝐹𝑑
𝐴 𝑠𝑡 − 𝑏𝑙

 Comparar con VALORES NORMALES: 3,5 a 5,0 g/dL

Se puede calcular la concentración de globulinas, considerando que:

Globulinas = Proteínas totales – Albúmina

Valores NORMALES Globulinas: 1,5 a 3,0 g/dL

INTERPRETACIÓN Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

A) Las proteínas son los compuestos que más abundan en la sangre; intervienen en la
construcción de los tejidos celulares y en el transporte de hormonas, vitaminas, minerales y
lípidos. Un análisis de proteína total es una forma de medir la cantidad conjunta de proteínas en
la sangre. Aunque en el análisis de laboratorio se detecta todas las proteínas que hay en el suero
sanguíneo, se centra específicamente en la albúmina y la globulina. (Sarao, párr.1, 2017). En la
segunda parte de esta práctica determinamos la cantidad de albúmina en g/dL en el plasma
sanguíneo para que al restar con estos resultados se determine la concentración de globulinas.
Nuestro equipo obtuvo como resultado de proteínas totales: 6,772 g/dL lo que indica que se
hallan en el rango de VALORES NORMALES: 6 a 8 g/dL. Estos exámenes a menudo se hacen para
diagnosticar problemas nutricionales, enfermedad renal o enfermedad hepática. Si la proteína
total es anormal, se tienen que realizar exámenes adicionales para identificar el problema
específico. Se habla de hipoproteinemia cuando la tasa de proteínas es anormalmente baja:
esto se da particularmente en el caso de insuficiencia hepática, como la cirrosis, las
enfermedades generadoras de mala absorción intestinal o enfermedades de los riñones que
cursan con "fugas" de proteínas por la orina. En contraste, en la hiperproteinemia encontramos
una dosis demasiado alta de proteínas en la sangre y puede ser debida a una deshidratación
grave o indicar ciertas enfermedades como el mieloma. (CCM, párr.1, s.f.)

B) La albúmina —en latín: albūmen, ‘clara de huevo’— es una proteína que se encuentra en
gran proporción en el plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre, y una de las
más abundantes en el ser humano. Se sintetiza en el hígado.

La concentración normal en la sangre humana oscila entre 3,5 y 5,0 gramos por decilitro,1 y
supone un 54,31 % de la proteína plasmática. El resto de proteínas presentes en el plasma se
llaman en conjunto globulinas. La albúmina es fundamental para el mantenimiento de la
presión oncótica, necesaria para la distribución correcta de los líquidos corporales entre el
compartimento intravascular y el extravascular, localizado entre los tejidos. A través del
procedimiento realizado nuestro grupo obtuvo 4,498 g/dl como valor para la concentración de
la albúmina en suero de la muestra. Este valor se halla precisamente en el rango en el que
podríamos considerarlo como normal en referencia a los valores humanos. Debemos tener en
cuenta la posibilidad de un margen de error correspondiente a los instrumentos utilizados, ya
que al compararlo con otros grupos los valores variaban en más de un ítem sin embargo,
mantenían una proporción que finalmente daba un resultado aceptable, que si bien era
teóricamente correcto afectaría a los resultados de la prueba.

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REFORZAMIENTO:
1. Fundamento de prueba Biuret. Revisar otras pruebas para determinación de
proteínas.

La reacción o prueba de BIURET es un método que detecta la presencia de compuestos con dos
o más enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos.
El reactivo de biuret (sulfato de cobre es una base fuerte) reacciona con los enlaces del péptido
cuando entra en contacto con otra sustancia, tornándose VIOLETA.
Mientras más cantidad de proteína esté presente en la solución, más oscuro es el color.
Por ejemplo cuando se calienta la urea a 180 Celsius, se descompone transformándose en un
compuesto llamado “biuret”, el cual en presencia de Cu2+ en solución alcalina forma un
complejo color violáceo ya que reconoce los enlaces peptídicos de las proteínas, no es específico
para identificación de proteínas con dos o más enlaces peptídicos.( párr.1, 2014)

Esta prueba no indica la presencia o ausencia de aminoácidos, se centra en las proteínas y los
péptidos.

También tenemos otras pruebas para determinar proteínas, entre las principales tenemos:
1.- Reacción de la Ninhidrina

La ninhidrina es específica para aminoácidos y proteínas, para diferenciar entre carbohidratos y

aminoácidos y proteínas. Reacciona con todos los α-aminoácidos contenidos en la proteína
dando lugar a la formación de un complejo color purpura cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, a
excepción de la prolina e hidroxi-prolina que dan lugar a complejos de color amarillo. Este
complejo colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, el cual es
independiente de la coloración original del aminoácido y/o proteína. Esta prueba es positiva
tanto para proteínas como para aminoácidos. Por ejemplo, en aquellos casos donde la prueba
de Biuret es negativa y positiva la de Ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay
aminoácidos libres.

2.- Reacción de Millon

Este reactivo está formado por una mezcla de nitrito y nitrato mercúrico disuelto en ácido
nítrico. Esta reacción se lleva a cabo con residuos fenólicos, es decir proteínas que contienen
tirosina para la formación de nitrotirosina. Las proteínas se precipitan por acción de los ácidos
inorgánicos fuertes del reactivo, dando un precipitado blanco que se vuelve gradualmente rojo
al calentar por formación de una sal mercúrica.

3.- Reacción Xantoproteica

Reactivo a base de ácido nítrico que sirve para la identificación de proteínas con grupos
aromáticos que son derivados del benceno como la fenilalanina, tirosina y triptófano, mediante
la formación de compuestos nitrados amarillos. La intensidad del color amarillo se intensifica
cuando la reacción ocurre en una solución básica. Los aminoácidos tirosina y triptófano
contienen anillos de benceno activados y se someten fácilmente a la nitración, mientras que la
fenilalanina no se somete fácilmente a la nitración, debido a que el anillo no está activado.
4.- Prueba de Nitroprusiato

Es específico para aminoácidos o proteínas que contienen azufre, -SH (cisteína y cistina) da un
color rojo-púrpura llamado “prueba de Mörner”.

5.- Prueba se Sakaguchi

Esta prueba es específica para Arginina o proteínas que la contienen. Es positiva para el
aminoácido que contiene el grupo guanidina en la Arginina. El grupo guanidina presente en el
aminoácido reacciona con α-naftol e hipobromito alcalino para dar un complejo de color rojo

6.- Prueba de aldehído- Hopkin-Cole

La prueba de Hopkins-Cole es específica para el triptófano, el único aminoácido que contiene un

grupo de indol. El anillo de indol reacciona con el ácido glioxílico en presencia de un ácido fuerte
(ácido sulfúrico) para formar un producto cíclico color violeta. El reactivo Hopkins-Cole solo
reacciona con proteínas que contienen triptófano. La solución de proteína se hidroliza mediante
el ácido sulfúrico concentrado en la interfaz de la solución. Una vez que el triptófano está libre,
reacciona con el ácido glioxílico para formar el producto de color violeta (en forma de anillo).
(Blogpucp, párr.1,2017)

2. Importancia de la determinación de proteínas en muestras medioambientales.

La producción de alimentos animales que contienen proteínas originaría un menor impacto

ambiental aproximadamente oscilando dentro del rango de la mayoría de los alimentos de
origen vegetal, debido a la mayor calidad de las proteínas animales. Estas consideraciones
podrían ser útiles en la planificación política del sistema de producción de los alimentos, cuyo
objetivo es proporcionar los nutrientes suficientes para los seres humanos en un futuro próximo.
Según Tessari y sus coaboradores (2016):

La "huella ambiental" en la producción de los alimentos es el tema clave en los

tiempos modernos. La Organización para la Agricultura y la Alimentación (FAO)
de las Naciones Unidas ha estimado recientemente que unos 850 millones de
personas, es decir, el 15% de la población mundial, padece el hambre de forma
crónica, y que incluso muchos más tienen una nutrición inadecuada.

Alrededor de mil millones de personas ingieren una dieta pobre en proteínas, lo que origina una
gran cantidad de deficiencias nutricionales, los problemas de crecimiento, la mala salud y otros
varios. Entre un 70 y un 100% más de los alimentos que se producen hoy en el mundo, se
requerirán en el año 2050. Por lo tanto, se espera que en el próximo futuro se produzca el
aumento en la demanda de la tierra y la necesidad de aumentar la eficiencia en el sistema de
producción de los alimentos y, o una reconsideración de los hábitos dietéticos en los humanos.

Dos parámetros utilizados ampliamente para cuantificar el impacto medioambiental de la

producción de los alimentos son: el uso de la tierra y el greenhouse gas protocol (GHGE). Tanto
el uso de la tierra como el GHGE dependen de los sistemas de producción (de los rendimientos
por superficie, de la eficiencia de los procesos), y de los patrones de estilo de vida / la tradición
/ y el consumo de una determinada población. Por lo tanto, la producción de alimentos y los
hábitos de consumo ejercen gran impacto tanto en el uso del suelo como en el GHGE,
aproximadamente en el mismo grado de magnitud.

Estos útiles métodos para cuantificar los monómeros como los aminoácidos proporcionar cifras
exactas que permiten una correcta predicción tanto de los impactos positivos como negativos
de su existencia, gracias a los artículos que hemos leído podemos constatar que la presencia de
proteínas en el mundo genere una gran beneficencia, sin embargo para que este dato cualitativo
tenga una mayor optimización como conocimiento, es necesario calcularlo, lo cual afianza la
importancia de esta práctica de laboratorio

BIBLIOGRAFÍA.

 Sarao, C. (2017). "¿Qué significa tener el nivel de proteínas totales elevado?".

Recuperado el 19 de mayo del 2018 de: https://muyfitness.com/que-significa-tener-el-
nivel-de-proteinas-totales-elevado_13168191/
 CCM. (s.f.). "Proteínas totales: definición". Recuperado el 19 de mayo del 2018 de:
https://salud.ccm.net/faq/8282-proteinas-totales-definicion
 Sarao, C. (2014).”Fundamentos de la Biuret". Recuperado el 20 de mayo del 2018 de:
https://www.clubensayos.com/Ciencia/Fundamentos-De-La-Biuret/1385362.html
 BlogPucp (s.f.). "Química de los alimentos". Recuperado el 20 de mayo del 2018 de:
http://blog.pucp.edu.pe/blog/quimicaalimentos/2017/10/31/reacciones-de-
reconocimiento-de-proteinas/
 https://www.news-medical.net/health/Blood-Sugar-Normal-Values-(Spanish).aspx
 http://webs2002.uab.es/ipividori/argo/6330_glicemia_enzimatica_sp.pdf
 Obtenido del Dr Marcos Becerro:
https://www.facebook.com/juanfrancisco.marcosbecerro. Paolo Tessari, Anna
Lante, and Giuliano Mosca. Essential amino acids: masterregulators of nutrition
and environmental footprint?. Sci Rep. 2016; 6: 26074. Published online 2016
May 25. doi: 10.1038/srep26074PMCID: PMC4897092