FACULTAD DE MEDICINA

HUMANA

INFORME DE PRÁCTICA

ACTIVIDAD ENZIMATICA

INTEGRANTES:

SANTA CRUZ RUIZ ANALUCIA

ZURITA JULCA DAVID MARTIN

CURSO: BIOQUIMICA

FECHA:

15 de Mayo del 2018

 INTRODUCCIÓN

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica que catalizan reacciones químicas,
siempre que sean termodinámicamente posibles: Una enzima hace que una reacción
química que es energéticamente posible pero que transcurre a una velocidad muy baja,
sea cinéticamente favorable, es decir, transcurra a mayor velocidad que sin la
presencia de la enzima. En estas reacciones, las enzimas actúan sobre unas moléculas
denominadas sustratos, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas
productos. Casi todos los procesos en las células necesitan enzimas para que ocurran
a unas tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se las denomina
reacciones enzimáticas.

Debido a que las enzimas son extremadamente selectivas con sus sustratos y su
velocidad crece sólo con algunas reacciones, el conjunto de enzimas sintetizadas en
una célula determina el tipo de metabolismo que tendrá cada célula. A su vez, esta
síntesis depende de la regulación de la expresión génica.

La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y
vegetales. La función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el
metabolismo celular, se forma una molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno,
H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo descompone en agua y oxígeno,
por lo que se soluciona el problema.

La existencia de catalasa en los tejidos animales se aprovecha para utilizar el agua

oxigenada como desinfectante cuando se agrega sobre una herida. Como muchas de
las bacterias patógenas son anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con el
desprendimiento de oxígeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa
sobre el agua oxigenada. Una propiedad fundamental de proteínas es la
desnaturalización. Ya que la catalasa químicamente es una proteína, podemos
desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Mediante esta experiencia, vamos a
ver la actividad de otra enzima, la amilasa, presente en la saliva. Esta enzima actúa
sobre el polisacárido almidón, hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo que el
almidón se terminará por transformar en unidades de glucosa.
 II. OBJETIVOS:
 Apreciar los efectos de la temperatura y la concentración de enzima sobre su
velocidad de reacción.
 Observar la actividad catalítica de la amilasa salival, determinando: La presencia
del almidón no transformado (sustrato residual); la presencia de carbohidratos
reductores (productos de la reacción).
 MARCO TEORICO

Función de las enzimas

 Las enzimas son proteínas que catalizan todas las reacciones bioquímicas. Además
de su importancia como catalizadores biológicos, tienen muchos usos médicos y
comerciales.

 Un catalizador es una sustancia que disminuye la energía de activación de una

reacción química. Al disminuir la energía de activación, se incrementa la velocidad de
la reacción.

 La mayoría de las reacciones de los sistemas vivos son reversibles, es decir, que en
ellas se establece el equilibrio químico. Por lo tanto, las enzimas aceleran la
formación de equilibrio químico, pero no afectan las concentraciones finales del
equilibrio.

Clasificación de las enzimas

De acuerdo a su complejidad:

 Apoenzima: Es la parte polipeptídica de la enzima.

 Cofactor: Es la parte no proteica de la enzima.

La combinación de la apoenzima y el cofactor forman la holoenzima.

Los cofactores pueden ser:

 Iones metálicos: Favorecen la actividad catalítica general de la enzima, si no

están presentes, la enzima no actúa. Estos iones metálicos se denominan
activadores. Ejemplos: Fe2+, Mg2+, Cu2+, K+, Na+ y Zn2+
 La mayoría de los otros cofactores son coenzimas las cuales generalmente son
compuestos orgánicos de bajo peso molecular, por ejemplo, las vitaminas del
complejo “B” son coenzimas que se requieren para una respiración celular
adecuada.

De acuerdo con su actividad

Tipo de enzimas:

 Hidrolasas: Catalizan reacciones de hidrólisis. Rompen las biomoléculas con

moléculas de agua. A este tipo pertenecen las enzimas digestivas.
 Isomerasas: Catalizan las reacciones en las cuales un isómero se transforma en
otro, es decir, reacciones de isomerización.
 Ligasas: Catalizan la unión de moléculas
  Liasas: Catalizan las reacciones de adición de enlaces o eliminación, para
producir dobles enlaces.
 Oxidorreductasas: Catalizan reacciones de óxido-reducción. Facilitan la
transferencia de electrones de una molécula a otra. Ejemplo; la glucosa, oxidasa
cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico.
 Tansferasas: Catalizan la transferencia de un grupo de una sustancia a otra.
Ejemplo: la transmetilasa es una enzima que cataliza la transferencia de un
grupo metilo de una molécula a otra.

Factores que afectan la actividad enzimática

1.Concentración del sustrato. - A mayor concentración del sustrato, a una

concentración fija de la enzima se obtiene la velocidad máxima. Después de que se
alcanza esta velocidad, un aumento en la concentración del sustrato no tiene efecto en
la velocidad de la reacción.

2.Concentración de la enzima. - Siempre y cuando haya sustrato disponible, un

aumento en la concentración de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto
límite.

3.Temperatura. - Un incremento de 10°C duplica la velocidad de reacción, hasta

ciertos límites. El calor es un factor que desnaturaliza las proteínas por lo tanto si la
temperatura se eleva demasiada, la enzima pierde su actividad.

4.PH. - El pH óptimo de la actividad enzimática es 7, excepto las enzimas del estómago

cuyo pH óptimo es ácido.

5.Presencia de cofactores. - Muchas enzimas dependen de los cofactores, sean

activadores o coenzimas para funcionar adecuadamente. Para las enzimas que tienen
cofactores, la concentración del cofactor debe ser igual o mayor que la concentración
de la enzima para obtener una actividad catalítica máxima.

ENZIMAS A ESTUDIAR EN LA PRÁCTICA

AMILASA: Es un enzima hidrolasa que tiene la función de catalizar la reacción de
hidrólisis de los enlaces 1-4 del componente α-Amilosa al digerir el glucógeno y el
almidón para formar azúcares simples, se produce principalmente en las glándulas
salivares y en el páncreas. Tiene un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se
inflama aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre.

ACTIVIDAD ENZIMATICA

Las Enzimas son Biocatalizadores de naturaleza Proteica de gran eficiencia. Elevada

especificidad y susceptibles de ser reguladas en su función.
Poseen un Sitio Activo el que se une íntimamente con el sustrato. La Cinética
Enzimática mide la velocidad de reacción y la formación de un producto a partir de
un sustrato, existen factores que modifican la velocidad de reacción enzimática:
a. Concentración de la Enzima.
b. Concentración del Sustrato
c. Concentración de la Coenzima.
d. Grado de acidez o alcalinidad del medio.
e. Temperatura.
f. Inhibición Enzimática.

Métodos de Purificación Enzimáticos:

a. Precipitación Isoeléctrica y salina.

b. Electroforesis.
c. Cromatografía.
d. Ultracentrifugación preparativa.

MATERIALES:

 Baño María.
 Mechero.
 Gradillas con tubos de ensayo
 Tubos de ensayo
 KCl
 TCA
 Almidón 5%
 H2O

Enzimas a estudiar:
 Alfa Amilasa (Ptialina)………….sustrato: Almidón
 Aminotransferasas.
Recolección de saliva:
 Enjuagar varias veces la boca, luego recolectar en un Beaker más de 2 cc de
saliva adicione 10 cc de H2O bidestilada y mezcle (Rotule como solución de
Enzima)
 PRÁCTICA A:
Efecto de la concentración de enzima sobre la velocidad de reacción.
 CUATRO TUBOS DE ENSAYO:

REACTIVOS Tubo I Tubo II Tubo III Tubo IV

Buffer pH 6.9 0.1 cc 0.1 cc 0.1 cc 0.1 cc

KCl 0.2 cc 0.2 cc 0.2 cc 0.2 cc

Almidón 5% 0.5 cc 0.5 cc 0.5 cc 0.5 cc

H2O 1.2 cc 1.1 cc 1.0 cc 0.8 cc

Enzima 0.1 cc 0.2 cc 0.3 cc 0.4 cc

Controlar en TIEMPO de Reacción: Agregar a cada tubo la solución de Enzima con

un lapso de 30 segundos y agitar c/u de ellos.
Para detener la reacción se añade 0.2 cc de Ácido Tricloroacético (TCA) después
de haber transcurrido 4 minutos de reacción con intervalos de 30 segundos.
Después de haber retenido la reacción en todos los tubos de ensayo se procede a
agregar a c/tubo 2 gotas de Lugol: Observe grafique y explique.

DISCUSIÒN:
La actividad catalítica de un enzima se determina midiendo la velocidad inicial de
reacción, que es la pendiente de la curva de progreso (curva de producto formado ó
sustrato transformado frente al tiempo) en el tiempo cero.
Inicialmente, las reacciones transcurren linealmente, pudiéndose tomar la pendiente
de esta recta como velocidad inicial. A tiempos más largos, el progreso de la reacción
se aparta de la linealidad. Esta caída de la velocidad de reacción se debe a la
disminución significativa de la concentración de sustrato, aunque también pueden
influir otros factores como el aumento de la concentración de producto, cambios de
pH, inactivación del enzima, etc.
La máxima fiabilidad en la determinación de la actividad de un enzima la suministra el
valor de velocidad inicial o velocidad durante el tramo inicial de progreso lineal de la
reacción.
OBSERVACIÒN:
 Siempre y cuando haya sustrato disponible, un aumento en la concentración
de la enzima aumenta la velocidad enzimática hacia cierto límite.
 En presencia de NaCl la actividad enzimática de la amilasa aumenta puesto
que necesita un tiempo menor al del central para lograr el efecto acromático.
 Se podría suponer que Na+ o Cl- pueden afectar la acción enzimática de la
alfa amilasa.
 PRACTICA C:
Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccion enzimática
Prepare 3 tubos de ensayo

REACTIVOS Tubo I Tubo II Tubo III

H2O 1.0 cc 1.0 cc 1.0 cc

Buffer 6.9 0.1 cc 0.1 cc 0.1 cc

KCl 0.2 cc 0.2 cc 0.2 cc

Almidón 5% 1.0 cc 1.0 cc 1.0 cc

ENZIMA 0.5 cc 0.5 cc 0.5 cc

Antes de Adicionar la ENZIMA coloque: tubo I durante 5 minutos al recipiente con hielo
y al Tubo III al baño María en Ebullición durante 5 minutos, alego añada la Enzima sin
sacar estos tubos de sus baños respectivos y espere 4 minutos luego adicione el ácido
Tricloroacético (TCA), Añada a cada tubo 2 gotas de Lugol, Observe los Resultados.
Comente.

DISCUSIÒN:

La velocidad de una reacción enzimática varía al aumentar la temperatura de acuerdo a

lo indicado, donde se representa una típica curva de actividad enzimática/temperatura.
Tal dependencia refleja un doble efecto de la temperatura: positivo a bajos valores,
debido al incremento general que experimenta la velocidad de cualquier reacción
química al hacerlo la temperatura, y negativo a valores altos, debido a la
desnaturalización térmica del enzima.
Esto es, la velocidad de una reacción enzimática se incrementa al aumentar la
temperatura dentro de un determinado rango, alcanzando un valor máximo a la
denominada temperatura óptima. A valores superiores la actividad disminuye debido a
que el enzima, como cualquier otra proteína, sufre procesos de desnaturalización y, por
lo tanto, de inactivación.

OBSERVACIÒN:

En cada serie de tubos se utilizarán las mezclas de ensayo indicadas en la Tabla.

Incubar las mezclas de ensayo a temperatura tomándolo con la mano, otro al agua y
otro tubo al mechero durante 5 min. Pasado el periodo de incubación se toman 0,1 ml
de cada tubo y se le añade 1 ml del reactivo. Enfriar y determinar la absorbancia de la
mezcla problema utilizando como blanco la mezcla de ensayo del blanco de sustrato. A
partir de los valores de absorbancia y tiempo de incubación se pueden determinar los
valores de actividad enzimática.

CONCLUSIONES:

 La amilasa salival tiene una mayor velocidad de reacción a una temperatura

adecuada (37°C), en cambio al someterla a cambios bruscos de temperatura ya
sea calor o frío su velocidad de reacción será más lenta.
  En las diferentes concentraciones de enzima (0.1cc, 0.2cc; 0.3cc; 0.4cc) se
observó que en el tubo IV tubo un mayor efecto en la reacción lo que nos
permite concluir que a mayor concentración de la enzima tiene una mayor
actividad enzimática y mayor velocidad de reacción.

REFERERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

1. Amilasa”. Disponible en: http://amilasa.blogspot.com/

2. Bioquímica estructural y biológica. Disponible en http://ocw.unican.es/ciencias-

de-la-salud/bioquimica-estructural-y-metabolica/otros-recursos-1/practica_02.pdf
3. Actividad enzimática. Disponible en : http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-
salud/fisiologia-general/materiales-de-clase-1/tema-1.-introduccion-al-estudio-de-
la-fisiologia/Tema%202B-Bloque%20I-Enzimas.pdf

4. Cox M. M. y Nelson, D.L. (2006). Lehninger. Principios de Bioquímica.

Barcelona. Editorial Omega