INSTITUTO POLITÉCNICO

NACIONAL
Escuela Nacional De Ciencias Biológicas
“Laboratorio de Bioquímica Clínica”

Práctica:
Fosfatasa Acida (ACP) y Fosfatasa Alcalina (ALP)

Alumna: Sandoval Oscoy Gabriela

Grupo: AQM1
Introducción
Las fosfatasas constituyen un grupo de enzimas de baja especificidad que
catalizan la hidrólisis de los esteres del ácido fosfórico. En función de los valores
de pH en los que alcancen su actividad óptima, se distinguen dos tipos: Fosfatasa
Acida (ACP) y Fosfatasa alcalina (ALP).

La Fosfatasa alcalina (ALP) alcanza su máxima actividad a un pH de 9.8. En las

células se encuentra fundamentalmente unida a membranas celulares, facilitando
el movimiento de sustancias con fosfatos a través de las membranas celulares.

La ALP citoplasmática posee varias isoformas, no específicas de tejido, que se

pueden encontrar en riñón, hígado y huesos. Existen otras isoenzimas de origen
placentario e intestinal y otra ALP de células germinales. La isoenzima ósea, está
relacionada a un incremento de la actividad de los osteocitos. En suero normal se
encuentra una sola isoenzima (hepática u ósea). Sin embargo, en una enfermedad
hepática se pueden elevar ambas isoformas. La ALP siempre aumenta de manera
importante en afecciones metabólicas del hígado, por lo que es una enzima que se
utiliza como marcador tumoral. Se han propuesto varios métodos para la
cuantificación de la ALP presente en suero, sin embargo todos se fundamentan en
la hidrólisis de esteres de fosfato los cuales no tienen absorbancia a la luz visible.

Por otra parte, las fosfatasas acidas (ACP) tienen su máxima actividad entre los
valores de pH de 4.8-6.0. Estas enzimas poseen cierta especificidad de tejido, y
las concentraciones más altas se encuentran en próstata, hígado, bazo, eritrocitos
y hueso. Se han encontrado 5 isoformas importantes en el humano, las cuales se
encuentran en lisosomas, próstata, eritrocitos, macrófagos y osteocitos. La
isoforma TRAP (fosfatasa ácida tartrato resistente) está presente en algunas
leucemias crónicas y en algunos linfomas.

Objetivos:
 Cuantificar la fosfatasa alcalina presente en la muestra problema.
 Cuantificar la fosfatasa acida total y prostática presente en la muestra
problema.
Fundamentos:
1. Método de Bessey, Lowry y Brock para determinación de ALP.

Para la determinación de la fosfatasa alcalina, se utiliza como sustrato el P-

nitrofenilfosfato que, por acción de la enzima, se libera fosfato inorgánico y p-
nitrofenol que a pH alcalino se ioniza con el p-nitrofenilato de color amarillo que se
lee a 405nm. La variación de la absorbancia por unidad de tiempo, es
directamente proporcional a la velocidad de transformación del sustrato y, por lo
tanto, a la actividad de la enzima.

2. Método de Andersch y Szcypinsky

La ACP hidroliza el p-nitrofenilfosto a p-nitrofenol y ácido fosfórico. La reacción se

detiene con hidróxido de sodio, en donde el p-nitrofenol se ioniza a p-nitrofenilato
de color amarillo, se lee a 405nm. La cantidad de p-nitrofenol que se libera por
unidad de tiempo es directamente proporcional a la actividad de la fosfatasa. La
ACP prostática es inhibida por el tartrato, por lo tanto con la diferencia de los
resultados de la determinación con y sin tartrato, podemos determinar la cantidad
de la enzima prostática específica.

FAC
Resultados
 Determinación de ALC y ACP por sección

ACP prostática
Equipo ALP (UI/L) ACP total (UI/L)
(UI/L)
1 113.9
P 14.1 P 11.1
2 141.45
3 136.8
M 11.8/11.1 M 7.35
4 107.6
Valores esperados 160-177 19-23 P: 2.97 M:4.45
P=paciente M=muestra

 Resultados obtenidos por mi equipo

ALC (UI/L)
Resultados obtenidos 136.8

Valores esperados 160-170

% de error 17%

CALCULOS:

1.- Determinación de ALP:

 ΔA= A2-A1= 1.661-1.618= 0.043

 ΔA= A3-A2= 1.792-1.738= 0.054
 ΔA= A5-A4= 1.858-1.792= 0.066
 Promedio de ΔA 1-2 + ΔA 2-3 + ΔA 5-4 / 3=0.163/3= 0.054
 UI/ L de AST= 0.086 x 2760= 238.74 UI/L


2.-Determinacion de ACP prostática del paciente

 ACP total – ACP inhibida = 14.1 UI/L- 3 UI/L= 11.1 UI/L

3. Determinación del % error.

(𝑽𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒐𝒃𝒔𝒆𝒓𝒗𝒂𝒅𝒐−𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒆𝒔𝒑𝒆𝒓𝒂𝒅𝒐 )
 % 𝒅𝒆 𝒆𝒓𝒓𝒐𝒓 = 𝒙 𝟏𝟎𝟎
𝒗𝒂𝒍𝒐𝒓 𝒆𝒔𝒑𝒆𝒓𝒂𝒅𝒐
(𝟏𝟑𝟔.𝟖−𝟏𝟔𝟓 )
 % 𝒅𝒆 𝒆𝒓𝒓𝒐𝒓 𝒑𝒂𝒓𝒂 𝑨𝑳𝑷 = 𝒙 𝟏𝟎𝟎 = 𝟏𝟕. 𝟎𝟗%
𝟏𝟔𝟓
Discusión
De acuerdo con los resultados obtenidos se observó que en la determinación de
ALP se encuentran dentro de los valores normales de referencia que son de 65-
306 UI/L en hombres y de 80-306 UI/L para mujeres, y el valor obtenido fue de
136.8 UI/L, lo cual indica que el paciente está sano, encontrándose libre de
enfermedades de tipo hepáticas y Oseas.

En el caso de la ACP total los valores obtenidos, tanto para el total como el
prostático dieron mucha variación con los valores esperados, esto es debido a las
condiciones de trabajo, porque cuando se determinan enzimas, los factores físico
químicos como pH, temperatura, ec, deben ser muy bien controlados, ya que una
ligera variación como en el caso de la temperatura por ejemplo, si esta varía tan
solo un grado por arriba o por debajo de los 37°C el porcentaje de error será de un
10%. Es por eso que no se pueden sacar conclusiones de los resultados
obtenidos por nosotros en el laboratorio por lo antes explicado.

Conclusión
Los valores obtenidos para el paciente con respecto a la fosfatasa alcalina no
indican alguna patología

Referencia:
 Facultad de Química. Manual de prácticas. Bioquímica Clínica. 2009.
Universidad Nacional Autónoma de México. México, DF.
 Fuentes X. Cantañeras M. 1998. Bioquímica Clínica y Patología molecular
Volumen II. Segunda edición. Editorial Reverté. S.A. Barcelona, España.