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DEPARTAMENTO CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA

CARRERA DE INGENIERÍA AGROPECUARIA

SANTO DOMINGO

Asignatura: Fitopatologia

Nivel: Cuarto A

Docente: Ing. Gustavo Núñez J. M.Sc

Fecha: 29 de Mayo del 2017

Autor: Franklin Sanchez

Tema: Identificar el hongo Moniliophthora perniciosa obtenido


de la escoba de bruja del cultico de cacao(Theobroma Cacao)

Período
Abril- Agosto 2017
I. INTRODUCCION

En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas con


otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se llaman por ello cultivos
mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los microorganismos se consigue mediante el
estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio en cultivos puros. En ocasiones el
estudio molecular conduce a la caracterización de los microorganismos, aún en
poblaciones mixtas. Sin embargo la identificación bacteriana y la caracterización
completa solo son posible tras el aislamiento de la bacteria y la obtención de cultivos
puros. Por ello el primer problema al estudiar una bacteria es su aislamiento del resto de
los microorganismos presentes (en una muestra patológica, de agua, de suelo, de
alimentos, etc.). Una vez que se ha logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria
de interés en cultivo puro (MANTILLA, 2006).

En Ecuador, a partir de la primera detección de M. perniciosa en el año de 1917, la


producción se redujo 40 % en un período de cinco años. Mientras que en Trinidad y
Tobago, las pérdidas promedio de cosecha de 1936-1937 fueron del 37.5 %. En el año de
1985 se reportó una epidemia causada por esta enfermedad en Surinam, la cual ocasionó
pérdidas del 50 % en el rendimiento anual del cultivo

Se entiende por identificación microbiana al conjunto de técnicas y procedimientos que


se aplican para establecer la identidad de un microorganismo y es importante resaltar que
los microorganismos (generalmente bacterias y hongos). Para ello en la siguiente practica
se purificaron cepas con anterioridad para que el cultivo e encuentre puro y así observar
todas las características del microorganismo y describirlo (Araya & Brito, 2012)

II. OBJETIVOS:

I.1. Objetivo general

• Aislar El patógeno Moniliophthora perniciosa para poder observar su morfología


en el microscopio.

I.2. Objetivos específicos


• Conocer la estructura del fitpatogeno a estudiar (Hongos)
• Ejercitarse en las técnicas de observación microscópica de microorganismos
comunes.
• Identificar a través de un dibujo y de las claves taxonómicas si corresponde al
hongo Moniliophthora.
III. REVISION DE LITERATURA
Medios de Cultivo
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica de los microorganismos es
enorme, la variedad de medios de cultivo es también muy grande. La mayoría de los
medios de cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar. La
preparación de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio y
redisolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las
instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles se esterilizan por filtración y se
añaden al resto de los componentes previamente esterilizados en el equipo llamado
autoclave (Goñi, 2006).
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra de un cultivo exigen:
 Que se efectúen asépticamente
 Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
 Que se realicen solo los manipuleos indispensables
 Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un
mechero o bien Flujo laminar (Santambrosio, 2009).
Cultivos puros.
Son aquellos que contienen un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener estos cultivos
consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola célula (son clones) (Soriano,
2014).
Características:

 Las colonias deben ser iguales en forma, tamaño y color.


 Que no existan formas inhibidas.
 Al microscopio deben tener un aspecto común.
 Deben ser bioquímicamente y fisiológicamente iguales.
PDA
El Agar Papa Dextrosa (Potato Dextrose Agar, PDA, por sus siglas en inglés) es un medio
de propósito general para levaduras y mohos que puede ser suplementado con ácidos o
antibióticos para inhibir el crecimiento bacteriano. La infusión de papa como fuente de
almidones y la dextrosa son la base para el crecimiento de hongos y levaduras. El bajo
pH (3.5) evita el crecimiento de las bacterias (Dibico, 2014).
Organismos Patógenos
Los agentes que causan enfermedades en las plantas se caracterizan por ser infecciosos
(bióticos o vivos) y no infecciosos (abióticos o no vivos). Los agentes infecciosos
incluyen las bacterias, hongos, micoplasmas, nemátodos y virus. Los agentes no
infecciosos incluyen, desbalances nutricionales, estrés ambiental y toxicidad química
(causada por plaguicidas y contaminantes del aire. Para propósito de esta publicación
vamos a hablar de los agentes infecciosos. Los agentes patógenos más comunes en las
plantas son los hongos, aunque las bacterias y los nemátodos también son importantes.
Las enfermedades causadas por micoplasmas y virus no se registran a menudo,
mayormente porque son muy difíciles de detectar (Andrade, 2015).
Los Hongos
Los hongos constituyen un grupo muy numeroso de organismos (se han descrito
aproximadamente 500.000, pero se estima que pueden existir entre 1 y 1,5 millones de especies)
que presentan una amplia distribución en la naturaleza, contribuyendo a la descomposición de la
materia orgánica (Figura 1) y participando en los ciclos biológicos. Un pequeño número son
patógenos de animales y plantas. Inicialmente, los hongos fueron clasificados dentro del Reino
Plantae ya que fueron considerados organismos inmóviles presentando estructuras que se asientan
firmemente en el sustrato sobre el que crecían. Sin embargo, cuando se ha aplicado la biología
molecular en los estudios taxonómicos se ha observado que los hongos están más próximos al
Reino Animalia que al Plantae. En el sistema de clasificación de los seres vivos en cinco reinos,
los hongos se encuentran clasificados en el Reino Fungi, que se divide en cuatro Phyla
denominados Ascomycota (el más extenso que comprende el 50% de los hongos conocidos y
aproximadamente el 80% de los hongos patógenos (Figura 2), Basidiomycota (Figura 3),
Zygomycota (Figura 4) y Chytridiomycota, encontrándose en los tres primeros los hongos
patógenos humanos (Alcivar, 2014)
Moniliophthora perniciosa

Ataca a diferentes partes de la planta del cacao: brotes, cojines florales, ramas y frutos
afectando tejidos en crecimiento, causando incremento de tejidos resultando hipertrofias
o “deformaciones”. En los brotes se producen hinchamientos, que posteriormente se
secan. Si el ataque es severo al nivel de brotes en la copa de la planta sufre un stress que
afecta la producción.
En cojines florales se observa la transformación de los pedúnculos florales en brotes,
formación de frutos en forma de chirimoya, que también se momifican.
En los tejidos afectados luego de secarse aparecen las estructuras de propagación del
hongo causal de la escoba de bruja (Amarun, 2013)
IV. MATERIALES Y EQUIPOS
Equipos
• Estufa de incubación
• Estufa de esterilización
• Cámara de flujo laminar
• Autoclave
• Cocineta eléctrica
• Microscopio

Materiales
• Pipeta volumétricas
• Tejido vegetal para aislar el patógeno.
• Vasos de precipitados
• Kit de disección
• Mechero de alcohol

V. PROCEDIMIENTO

 Se sembró el microrganismo obtenido la unión entre la escoba de bruja y el tallo


del cacao, en el medio de PDA, pasando por varios pasos de esterilización,
primero se añadió hipoclorito de sodio por un minuto y medio, en segundo lugar
etanol por un minuto y medio, tercero se bañó la muestra en agua destilada por
un minuto y medio se repitió este paso una vez más y finalmente la siembra se
la realizo en la cámara de flujo.
 Se procedió a sacar las cajas Petri del hongo Moniliophthora perniciosa de la
estufa incubadora en donde se sometieron a una temperatura de 28°C.
 Se limpió el portaobjetos con alcohol, y se lo flameó sobre la columna de fuego
del mechero bunsen.
 Se procedió a colocar con el gotero una gota de agua destilada sobre la placa porta
objeto.
 Con la ayuda de una aguja de disección se raspo el sitio en donde contenía la
presencia de hongo y luego se lo coloco en porta objetos y luego sobre este se
colocó un cubre objetos
 Se colocó la placa sobre la platina del microscopio, asegurándola mediante las
pinzas y se procedió respectivamente a la observación del hongo.
VI. RESULTADOS
Se logró aislar en patógeno muy bien, pero a la hora de visualizar su estructura en el
microscopio óptico obtuvo un resultado negativo, pues no se pudo observar el patógeno
ni su morfología

VII.CONCLUSIONES
• Aprendimos la correcta manipulación del microscopio.
• Mejoramos las destrezas para la manipulación de instrumentos del laboratorio.
• Comprendimos ciertas normas de uso y manipulación del microscopio.
• Nos familiarizamos con los libros de taxonomía que nos ayudan para la identificación
de los microorganismos.

VIII. RECOMENDACIONES
 Realizar el proceso de siembra con el debido cuidado para que monilla perniciosa se
multiplica y así poder tener materia prima para la masificación.
 Siempre Colocar la caja Petri en forma invertida para la incubación de bacterias y
hongos.
 Escoger las mejores colonias de Moniliophthora a la hora de observarlas en el
microscopio
 Etiquetar la caja Petri con la respectiva información y sellar con la cinta para evitar
contaminaciones

IX. BIBLIOGRAFIA

Alcivar, J. (23 de Mayo de 2014). Generalidades de los hongos. Obtenido de http://hongos-


alergenicos.reviberoammicol.com/files/001.PDF
Amarun. (22 de Enero de 2013). Senasa. Obtenido de
http://www.senasa.gob.pe/senasa/escoba-de-bruja/
Andrade. (21 de Octubre de 2015). Enfermedades en las plantas. Obtenido de
http://www.uprm.edu/agricultura/sea/clinica/CLDIAEnfPlan.pdf
Dibico. (2014). Probiotek. Obtenido de Agar de Dextrosa y Papa:
http://www.probiotek.com/producto/agar-de-dextrosa-y-papa/
Goñi, C. S. (Octubre de 2006). MICROBIOLOGIA GENERAL. Obtenido de Prácticas de
Microbiología General :
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual%20practicas%20micagral.pdf
Santambrosio, E. (Febrero de 2009). Siembra y recuento de microorganismos. Obtenido de
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/prac
ticoIII.pdf
Soriano, A. (27 de Septiembre de 2014). Cultivo puro y cultivo mixto. Obtenido de
http://laboratoristaquimico09.blogspot.com/2014/09/cultivo-puro-y-cultivo-
mixto.html

ANEXOS