INFORME N° 6: ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA

LAURA ROMERO BUSTOS – 1611141

YUDER CAMILA LAZARO JEREZ – 1611176
MARÍA ALEJANDRA ZAPATA BLANCO – 1611178
DENGONCOF MICHELLE CORDERO FLOREZ - 1611181
CLAUDIA IMER SUAREZ GRACÍA – 1611197

DOCENTE: AZULA SANGUINO QUINTERO

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE
INGENIERÍA BIOTECNOLÓGICA
INFORME LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
SAN JOSE DE CÚCUTA
23/10/2017
Procedimiento

Toma muestra del rio pamplonita

Procedimiento de recolección del agua

Debe voltearse el frasco

Se destapa el frasco dentro de la
ligeramente con la finalidad de
fuente del agua, una vez penetra Si la muestra se demora al llegar
que penetre el agua, sin que haya
en el agua a 20 o 30cm se invierte al sitio para su analisis debe ser
posibilidad de contaminación con
la boca del frasco y se introduce refrigerada, y llevada en el menor
las manos del operador y para
en sentido perpendicular hasta tiempo posible.
ellos se sitúa la boca del frasco en
unos 20 o 30cm de profundidad.
sentido
Determinacion de la calidad microbiana del agua

10 ml Muestra de agua

1ml 1ml

10-1

10-2 10-3
9ml 9ml
90ml APE APE
APE

1. Recuento de aerobios mesofilos

10-2
9ml
APE

Realizar siembra
por duplicado en
profundidad

Agar Plate Count Incubar de 35 ± 2°C / 3-5

dias
 10-3
9ml
APE

Realizar siembra
por duplicado en
profundidad

Agar Saboraud

Incubar de 30°C / 3-5

dias

2. Método NMP para coliformes totales

 Prueba presuntiva
 1ml 1ml

10-1

10-2 10-3
90ml 9ml 9ml
APE APE APE

10-1 10-1 10-1 10-2 10-2 10-2 10-3 10-3 10-3

Pre-enriquecido Pre-enriquecido Pre-enriquecido

10ml caldo Lauril Sulfato 10ml caldo Lauril Sulfato 10ml caldo Lauril Sulfato

Incubar 35 ± 2°C/48h
 Método más probable de Echerichia coli

De los tubos positivos de coliformes totales

transfiera de cada tubo con caldo BRILLA, a
otro tubo que contenga Triptofano y agar EMB.

Incubar 44± 0,5°C /24-48hr

  Tecnica filtracion por membrana
De acuerdo al IDEAM (Instituto de Hidrología, Meteorología y Estudios Ambientales)
El método es aplicable a aguas superficiales y residuales en el IDEAM en un rango
de 1 a 200000 UFC/100mL. Según el Decreto número 1575 de 2007 “Por el cual se
expiden normas técnicas de calidad de agua potable”. ARTICULO 25. El agua para
consumo humano debe cumplir con los siguientes valores admisibles desde el punto
de vista microbiológico. FILTRACION POR MEMBRANA: Coliformes totales. 0
UFC/100mL y E. coli, 0 UFC/100mL

Coliformes Totales:
Bacterias gram negativas, no
esporoformadoras, oxidasa
negativa, con capacidad de
crecimiento aeróbico y
facultativamente anaeróbico
en presencia de sales
biliares, que a temperatura
especificada de 35ºC +/- 2ºC
causan fermentación de
lactosa con producción de
gas. Poseen la enzima B-
galactosidasa.
E. coli: Escherichia coli:
Bacilo gram negativo, capaz
de desarrollarse en presencia
de sales biliares u otros
agentes (tensoactivos) que tengan propiedades similares e inhibitorias del
crecimiento y que son capaces de fermentar la lactosa a temperaturas de 35°C +/-
2°C, con producción de ácido, gas y aldehído en un lapso de 18 a 48 horas. Oxidasa
negativa, no esporógena y reduce el nitrato a nitrito. También es capaz de producir
indol a partir de triptofano a una temperatura de 44°c +-05 en un tiempo de 21+/- 3
horas. Poseen la enzima B-glucoronidasa, la cual es detectada por medios
cromógenos o fluorógenos.
Resultados
1. Recuento de aerobios mesofilos

10-2 =5
= 6X102 UFC/ mL
10-2 =7

2. Método NMP para coliformes totales

 Prueba presuntiva:
 10-1 Positivo (+) en los 3 10-2 Positivo (+) en 1 tubo
tubos (a, b y c). Presento de los 3 tubos (e) Presento
turbidez y gas en la turbidez y gas en la
campana de Durham. campana de Durham.

 Prueba confirmativa:

Dilución Gas Turbidez

10ˉ¹ a (+) (+)
10ˉ¹ b (+) (+)
10ˉ¹ c (+) (+)
10ˉ² e (+) (+)

Hay crecimiento microbiano.

De acuerdo a la tabla de NMP 10ˉ¹ 10ˉ² 10−3
3 1 0 = 40 Bact/mL
3. Método más probables de coliformes fecales

 Caldo BRILLA

Dilución Gas Turbidez

10ˉ¹ a (+) (+)
10ˉ¹ b (+) (+)
10ˉ¹ c (+) (+)
10ˉ² e (+) (+)

 Caldo Triptona o Tritofano

Dilución Gas Turbidez Indol

10ˉ¹ a (+) (+) (+)
10ˉ¹ b (+) (+) (+)
10ˉ¹ c (+) (+) (+)
10ˉ² e (+) (+) (+)
 Agar EMB

10ˉ¹ a 10ˉ¹ b 10ˉ¹ c 10ˉ² e

De acuerdo a la tabla de NMP Escherichia coli 10ˉ¹ 10ˉ² 10−3

3 1 0 = 40 Bact/mL

4. Recuento de hongos y levaduras

No hubo
crecimiento de
microorganismos.

10-3 =0 10-3 =0 = <103 UFC/ mL CE

5. Resultados Técnica Filtración Por Membrana.
Muestra tomada del Rio pamplonita a la altura del
municipio de Chinácota.
Tipos de Color de Recuento
Colonias colonias

Coliformes Rojo salmón Incontables

Totales +⁄− 𝑈𝐹𝐶 /100 ML

E. coli Azul 32 +⁄− 𝑈𝐹𝐶 /100 ML

Análisis de resultados
1. Recuento de aerobios mesofilos
Bacterias mesófilas que reflejan la exposición de la muestra a la contaminación en
general, la existencia de condiciones favorables para la multiplicación de
microorganismos y la presencia de materia orgánica. La determinación de bacterias
mesófilas también es rutinaria en el análisis bacteriológico del agua.
Streptococcus de origen fecal, que son más abundantes que los coliformes en el
tracto intestinal y heces de los animales, pero sobreviven menos que los coliformes
porque prácticamente no se multiplican en el agua, por ello su predominio en el agua
indica contaminación fecal proveniente de animales o contaminación relativamente
reciente. (Analisis microbiologico de agua, 2013)
Las siembras realizadas con la dilución 10−2 en agar plate count presentaron
crecimiento de colonias, lo cual nos muestra la presencia de contaminantes en la
muestra analizada de aguas, teniendo en cuenta que es un agua sin tratar la
presencia de contaminación es tolerable en este caso.

2. Método de NMP para coliformes totales

Los coliformes totales, se encuentran con más frecuencia en el medio ambiente,
pueden estar en el suelo y en las superficies del agua dulce, por lo que no son
siempre intestinales.
Según el Decreto número 475 de1998 “Por el cual se expiden normas técnicas de
calidad de agua potable”.
ARTICULO 25. El agua para consumo humano debe cumplir con los siguientes
valores admisibles desde el punto de vista microbiológico.
NUMERO MÁS PROBABLE:
Coliformes totales: 0 microorganismos/100mL
E. coli: 0 microorganismos /100mL (IDEAM, Determinación de Coliformes totales y
E. Coli de aguas aplicando Numero Más Probable., 2007)
Al realizar la siembra para los tubos de las diluciones 10−1 , 10−2 , 10−3 en los caldo
BRILLA (bilis verde brillante) con lactosa para para un pre enriquecimiento o prueba
presuntiva; en cuatro de las muestras analizadas de las diluciones 10-1 y 10-2 se
encontró la presencia de organismos coliformes totales, manifestándose la
fermentación de la lactosa con producción de gas y la presencia de turbulencia; con
posible presencia de enterobacterias que son fermentadoras de la lactosa, según
estos resultados y lo anterior explicado se considera que esta agua no cumple con
las normas establecidas por cual no es apta para el consumo.
 3. Método más probable de coliformes fecales
los coliformes fecales se definen como todos aquellos bacilos cortos, gram
negativos, aerobios y anaerobios facultativos, capaces de fermentar lactosa con
producción de ácido y gas en 24-48 horas a 44 b 0.5 %C.
La principal diferencia entre los coliformes totales y fecales es la capacidad de estos
últimos de crecer a mayor temperatura en condiciones de laboratorio.
Desde el punto de vista salud, este grupo es más importante que los coliformes
totales, dado que se relaciona más con la probabilidad de encontrar patógenos
excretados (bacterias, parásitos y virus entéricos).
Sin embargo, algunas cepas dan negativa la prueba de temperatura en el
laboratorio; se ha visto que tienen la capacidad de reproducirse en aguas ricas en
nutrimentos, en sedimentos y aún en aguas poco contaminadas; algunas cepas de
Escherichia coli sobreviven menos tiempo que Salmonella en aguas a bajas
temperaturas y algunas son patógenas al hombre. (Sandoval & Carlos, 2011)
La siembra para la presencia de Escherichia coli en los caldos BRILLA, triptófano y
el agar EMB (de los cuatro tubos positivos del procedimiento anterior) lo cual nos
mostró la presencia coliformes fecales, las cuatro colonias muestreadas dieron
positiva esta prueba como se observó con la presencia de gas y turbidez en el caldo
BRILLA, el anillo rojo que se formó al agregar las gotas de reactivo de kovac´s en
el caldo triptófano y la colonias con precipitado purpura en el agar EMB.
Lo anterior concuerda con los resultados en el laboratorio porque la muestra de
agua a analizar fue tomada de una de las partes altas del rio donde casi no hay
presencia del hombre u otros factores contaminantes y sin embargo hubo
crecimiento de coliformes fecales y E. coli.
4. Recuento de hongos y levaduras

Los hongos y levaduras para el agar sabourad con la dilución 10−3 no presentaron
crecimiento alguno, se sospecha que tal vez sea por el número de dilución, ya que
en las pruebas presuntivas dio negativo para los tres tubos de la dilución 10 -3.
Probablemente si no se hubiera seguido la norma y se realizaran siembras desde
la dilución 100 , 10-1 y 10-2 si hubiera crecimiento de hongos y levaduras.
 5. Resultados Técnica Filtración Por Membrana.
La presencia de Escherichia coli indica contaminación fecal en agua, ya que este
microorganismo es habitante normal del tracto digestivo de animales de sangre
caliente y rara vez se encuentra en agua o suelo que no haya sufrido algún tipo d
contaminación fecal, por ello se considera como indicador universal. Este
microorganismo genera una alerta a cualquier sistema de suministro de agua ya
que su presencia por si sola puede generar gastroenteritis y causar la muerte como
el caso de la cepa E coli O157:H7 o puede sugerir la presencia de otros
microorganismos altamente patógenos como son la Salmonella, Shigella, Klebsiella,
Listeria, entre otras.
La identificación de Coliformes totales es más difícil ya que estos pueden provenir
de suelo, y de superficies de agua dulce por lo que no siempre son intestinales. La
presencia de Coliformes sugiere fallas en la eficacia del tratamiento y la integridad
del sistema de distribución. La identificación de las cepas aisladas puede a veces
dar una indicación sobre el origen. (IDEAM, 2007)

Teniendo en cuenta los resultados de las demás muestras analisadas por los grupos
en el laboratorio se puede notar que a medida que el rio llega al área urbana donde
la presencia del hombre es más notoria también lo es la contaminación en el rio
pamplonita.
La muestra de Chinacota presento 3 tubos positivos de los nueve, la muestra de la
Honda presento cuatro tubos positivos de los nueve y las muestras de San
Fernando y Malecom dieron nueve tubos positivos de nueve.
Esto evidencia el alto impacto que causamos al ambiente y la marca que dejamos
en esta.
Conclusiones
 Con base a las pruebas presuntiva, confirmativa y completa realizadas
se entiende que el agua analizada de la zona del rio pamplonita
llamada Honda, no reúne las condiciones microbiológicas para
considerarse potable, ya que todas presentan un NMP importante de
coliformes totales, fecales y Eschrerichia coli lo que indica que el agua
está contaminada con materia fecal.

 La recopilación de la información obtenida por cada uno de los puntos

de donde se tomaron las muestras correspondientes al río pamplonita
nos indica que entre más lejos del nacimiento del río mayor es la
contaminación debido a factores externos (agricultura, industrias,
aguas negras) favoreciendo la presencia de microorganismos
patógenos.
Bibliografía

(2013). Analisis microbiologico de agua.

IDEAM. (25 de Agosto de 2007). Determinación de Coliformes totales y E. Coli de
aguas aplicando Numero Más Probable. Obtenido de
http://www.ideam.gov.co/documents/14691/38155/Coliformes+totales+y+E.
+coli+en+agua+NMP+M%C3%A9todo+Colilert.pdf/463a6c8d-122c-4f75-
8572-81bd64baa2d2
IDEAM. (30 de 8 de 2007). Determinación de Eschericha coli y coliformes totales
en agua por método de filtración por membrana. Obtenido de
http://www.ideam.gov.co/documents/14691/38155/Coliformes+totales+y+E.
+coli+en+Agua+Filtraci%C3%B3n+por+Membrana.pdf/5414795c-370e-
48ef-9818-ec54a0f01174
Sandoval, A. M., & Carlos, G. (2011). Determinación de coliformes fecales .