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Estrategias de biorremediación de hidrocarburos

Sánchez-Yáñez, Juan Manuel syanez@zeus.umich.mx

1. Resumen
2. Introducción y antecedentes
3. El concepto de biorremediación
4. Tipos de biorremediación
5. Factores que influyen en la biorremediación
6. Aplicaciones de la biorremediación
7. Conclusión
8. Bibliografía

Estrategias de Biorremediación de Hidrocarburos en Agua Superficial, Subterránea y Suelo.

Minirrevisión

Resumen
Los productos desecho de la industria petroquímica causan contaminación de aguas y suelos en el
mundo, resultado de la manufactura, uso, derrames y confinamientos inadecuados de hidrocarburos (HC)
como: La gasolina, el diesel, los aceites lubricantes, y de los productos finales de procesos de lubricación
en motores del tipo residual automotriz (ARA). La remoción de los productos tóxicos de los HC en el
ambiente por métodos tradicionales como la excavación e incineración en suelos, ó el bombeo de agua, no
es económico ni ecológico.
Una estrategia biotecnológica y ecológica alternativa, es la biorremediación, en la que la microbiota
mineraliza y elimina los HC de los ambientes naturales. Este tipo de biotecnología se realiza por: a)
bioaumentación, cuando se inoculan cultivos axénicos ó mezclas de microorganismos y/o por b)
bioestimulación: en donde el ambiente contaminado con HC, se enriquece con nutrientes esenciales para
estimular la actividad microbiana nativa, que se recomienda además es tolerante a la solubilidad mayor
mineralización de los productos contaminantes de los HC.
En suelo y agua contaminados con HC, su alta concentración excede la capacidad mineralizadora
de los consorcios microbianos nativos. Es necesario una previa remoción mecánica para disminuirla y
permitir biorremediación.
El objetivo de esta breve revisión es analizar las principales estrategias de biorremediación en
suelos y aguas contaminadas con productos tóxicos de HC.
Palabras clave. Hidrocarburos, estimulación, nutrientes esenciales, consorcio microbiano.

I. Introducción y Antecedentes.
La contaminación de suelos y aguas por productos de los HC., actualmente es un grave problema
mundial ambiental. En Estados Unidos de América, existen aproximadamente 34 mil sitios contaminados
con productos de HC., en Alemania se registran casi 50 mil; en la República Mexicana todavía se
desconoce la dimensión real del problema, aunque se reporta que por la importancia petrolera en el país, la
cifra es elevada en suelos, en agua dulce y salada.
Petróleos Mexicanos (PEMEX) durante el 2001, reportó que 8,031 toneladas de productos de los
HC (petróleo crudo, diesel y gasolina), fueron derramados en suelos.
A nivel nacional algunas de las zonas más contaminadas son el río Tuxpan, en Puerto de Veracruz,
la Laguna del Ositión, los ríos Coatzacoalcos y Tonalá la refinería “Lázaro Cárdenas” y el Pantano de Santa
Alejandrina en el estado de Veracruz, las lagunas El Carmen, La Machona y Mecoacán, en el estado de
Tabasco; El Sistema Lagunar de Términos, en el estado de Campeche y la Laguna de de Bojórquez, en el
estado de Quintana Roo, situadas en el sureste de México. Debido a la intensiva actividad petroquímica y
por falta de una infraestructura para el tratamiento adecuado de los productos de los HC residuales y su
disposición final.
En México es escasa la aplicación de auditorias ambientales para verificar las emisiones y el
impacto de las aguas y los suelos por productos de la industria petroquímica. Existe un informe de 1995 de
la Procuraduría Federal de Protección al Ambiente (PROFEPA), que reportó que de 1992 a 1994, se
realizaron 179 auditorias ambientales. (Bojórquez y García, 1995)
Además no existen normas racionales respecto a los límites permisibles de los productos de los HC
en esos suelos y en esas aguas, por ello se usan referencias del Canadá, los Estados Unidos y los Países
Bajos en Europa. En México, la PROFEPA emplea los criterios de limpieza desarrollados por su Grupo de
Trabajo de Restauración de suelos contaminados (PROFEPA, 1999). El problema se complica por que

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hasta hace pocos años, no existía una conciencia de la dificultad y del enorme costo económico que
representa para la sociedad la recuperación de suelos y cuerpos de aguas naturales. Los HC residuales
individuales y en mezclas complejas impactan negativamente los procesos biológicos naturales,
relacionados con los ciclos biogeoquímicos y reducen la cantidad y disponibilidad de los recursos naturales.
Biodegradación de los productos tóxicos de- los HC en suelos y en aguas, se realiza por atenuación
natural de los consorcios microbianos nativos de esos ambientes (Roling et al., 2002), normalmente no
existen las condiciones fisicoquímicas que favorezcan la eliminación de esos contaminantes.

II. El concepto de biorremediación.

Es una biotecnología de restauración, en la que se inoculan microorganismos alógenos o
bioaumentación que oxidan el ó los contaminantes de los productos de los HC (Jones, 1998, Müller y
Mahro, 2001).
Una segunda estrategia es la bioestimulación que modifica el ambiente mediante el enriquecimiento
con minerales esenciales (Head y Swannell, 1999) de compuestos de nitrógeno, fósforo azufre y potasio.
La combinación de estos factores en el suelo ó en el agua estimulan la actividad biológica natural de
mineralización de los productos de los HC de la microbiota nativa (Prince, 1993; Swannell et lt. 1996;
Rosenberg, 1996; Korda et al., 1997; Vasudevan, 2001). Otros factores limitantes en la oxidación de los
productos de estas, la incorporación de O2 y/ó H2O2, mejora la condición aerobia en la oxidación de los
productos de los, o una combinación de estos factores en función de la complejidad de la mezcla y la
condición ambiente.

III. Tipo de biorremediación.

III.a. Bioestimulación.
Un ejemplo de lo anterior son las investigaciones de Cunningham et al. (2001) en sedimentos de
un acuífero en Seal Beach. California, EUA. contaminados con: benceno, tolueno, etilbenceno y xileno
(BTEX). Los sedimentos se enriquecieron con nitrato y/ó sulfato + nitrato. El nitrato y el sulfato estimularon
la mineralización d benceno; pero el sulfato en aerobiosis no en el caso del etilibenceno, y en anaerobiosis
sí. (Cunningham et al., 2000, 2001); Margesin y Schinner (2001) enriquecieron con nutrientes esenciales
(N-P-K: 15-15-15) un suelo podzolico alpino contaminado con diesel y lo compararon contra la
mineralización del diesel en el suelo durante 3 veranos. Donde los autores reportaron contra la
mineralización del diesel en el suelo con nutriente se redujo en un 50 ± 4% y sin nutrientes en un 30± 2%.
Pruebas de eliminación con diversos HC contaminantes in Vitro demuestran la capacidad mineralizadora de
los consorcios microbianos.
Passman et al. (2001) investigaron el efecto del enriquecimiento con nutrientes esenciales sobre la
oxidación de gasolina por un consorcio microbiano a nivel de microcosmos. Los autores reportaron una
disminución del 67% aproximadamente de los compuestos oxigenados de la gasolina comparado con el
control el cual no contenía nutrientes, y una transformación de isoparafinas y/o parafinas a alquilparafianas.
Vinas et al., (2002) aislaron 3 consorcios microbianos degradadores de: petróleo residual (F1AA); de
diesel (TD) y de una mezcla de aromáticos policíclicos (AM) de un suelo. En las pruebas in Vitro se
demostró que la fracción saturada se degradó en un 60% por F1AA; en un 48% con TD y en un 34% con
AM, en función de la fuente de carbono aplicada en el enriquecimiento. Los consorcios F1AA y TD
eliminaron al 100% los n-alcanos y los ramificados, la AM eliminó solo el 9%. La efectividad de la
biorremediación en la fracción poliaromática fue de 19% por los AM, de un 11% con TD, y de un 7% por
F1AA. Lo que indica diversa capacidad biológica en la biota para eliminar HC.
Riis, 1995 evaluó la capacidad de mineralización de consorcios microbianos aislados de suelos
contaminados y sin contaminar enriquecidos con nutrientes esenciales en 5 productos refinados y 4 aceites
minerales in Vitro. El diesel se mineralizó en un 95%, los refinados de alto punto de ebullición y los
extraídos de suelo contaminado se degradaron entre 40-60% con respecto al control sin nutrientes.
Ghazali et al., (2004) investigaron la biorremediación in Vitro de un suelo contaminado con diesel,
petróleo crudo y aceite de motor, por mezclas de bacterias degradadotas de HC [C]:3 bacterias y C2:6
baterías, enriquecidas con nutrientes. La mezcla C2 de Bacillus y Pseudomonas spp., fue más eficiente en
la remoción de alcanos de cadena media y larga, y los autores reportaron la mineralización del 100% de
alcanos a los 30 días del tratamiento comparado con la mezcla C1.
Capella et al., (2001) investigaron la biorremediación de HC por un consorcio microbiano nativo a
nivel de biorreactor en cultivo por lote. La concentración de HC totales se redujo en un 70% con respecto al
control sin solución mineral. Los HC saturados y aromáticos fueron degradados en un 70 y 60%
respectivamente.

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Se han aislado microorganismos de los ambientes naturales, que en cultivo axénico y el

enriquecimiento con soluciones minerales se estimula su capacidad degradativa para eliminar ciertos
contaminantes, como lo demuestran los reportes de investigaciones in Vitro de: Palittapongampim et al.,
(1998) investigaron la capacidad degradativa de 5 microorganismos: 3 bacterias y 2 levaduras, aislados de
un suelo agrícola contaminado con petróleo crudo ligero, en un medio mineral con aceite crudo (0.5% v/v)
como fuente de carbono. De los aislados Candida tropicales 15Y, redujo en un 87.3% la concentración del
petróleo total y en un 99.6% la de n-alcanos en 7 días a 25.2°C.
La inoculación de Rhodococcus y Pseudomonas a un medio mineral, combustible y diesel aumentó
la mineralización de estos contaminantes. Sin embargo el incremento en el número de microorganismos, no
estimuló la mineralización, lo que indica que la estabilidad de las poblaciones depende del tipo de
microorganismos que lo compone. (Baryshnikoba et al., 2001).
III.b Bioaumentación.
Estrategia de biorremediación en la cual se inoculan en suelo y/ó agua microorganismos
autóctonos ó modificados por ingeniería genética que mineralizan HC, estimulados por el enriquecimiento
con nutrientes esenciales. L actividad de los microorganismos inoculados depende de factores abióticos
como: el pH, la temperatura, la solubilidad, la concentración y complejidad de los HC y de los nutrientes, y
de factores bióticos como: la depredación, el parasitismo y la competencia por la población microbiana
nativa, que disminuye la densidad de la microbiota introducida (Walter, 1997). Ejemplo de lo anterior son
las investigaciones en suelos agrícolas contaminados con diesel a donde se adicionaron microorganismos
de la composta y d lodos activados, los cuales incrementaron la mineralización de diesel (Namkoong et al.,
2002). Pruebas con diversos HC contaminantes in Vitro demuestran la capacidad mineralizadora de los
consorcios microbianos nativos. Singer et al., (2000) investigaron el efecto de la inoculación de 2 especies
bacterianas primero cultivadas en carvona, ácido salicílico y detergente, en la biorremediación de un suelo
contaminado con bifenilos policlorados (BPC), el resultado fue la degradación de los BPC en un 55-59% con
respecto al suelo control sin inocular bacterias. Lucas et al., (2003), investigaron la biodegradación natural
de gas en un suelo antártico por bioaumentación y bioestimulación de la microbiota nativa in Vitro. La
primera con la cepa psicrotolerante (B-2-2), la cual mineralizó los HC en un 75%. El enriquecimiento con
nitrógeno y fósforo a altas concentraciones inhibió el crecimiento microbiano. Los resultados demuestran
que la biota nativa del suelo antártico tiene la capacidad de degradar algunos componentes del
contaminante y que la bioaumentación es una estrategia factible para mejorar la biorremediación.
Gallego et al., (2003) estudiaron la degradación de una mezcla de: 2-clorofenol, fenol y m-cresol por
cultivos axénicos y mezclas de microorganismos nativos en un biorreactor por cultivo en lote y continuo.
Los HC individuales se mineralizaron al 100% por los cultivos axénicos a las 27h., la mezcla de 2-clorofenol
(100mg/l-1), fenol (50mg/1-1), y m-cresol (50mg/1-1), fue mineralizada por el consorcio microbiano en un
99.8% en el reactor por lote y continuo a las 36h. lo que indica que la mineralización los contaminantes fue
debido a la actividad concertada de los diferentes microorganismos del consorcio.

IV. Factores que influyen en la biorremediación

IV.a. Concentración de los hidrocarburos
Un factor fundamental limitante es la concentración de los productos contaminantes de los HC en
aguas y suelos. Su elevada concentración impide la actividad de la microbiota nativa (Admón. et al., 2001),
y es por tanto necesario una remoción mecánica, sin la cual no es posible realizar ninguna operación por vía
biológica.
Cuando no se realiza la remoción mecánica no se logra resultados positivos como los que
reportaron Seklemova et al., (2001) al estudiar el efecto del enriquecimiento con nutrientes minerales sobre
la actividad mineralizadora de la microbiota nativa, en un suelo forestal contaminado con diesel a
concentración de: 6000 mg/kg-1 , 4000 mg/kg-1 y 2000 mg/kg-1. La falta de resultados indica que la solución
mineral no fue suficiente para estimular la mineralización de los HC por la alta concentración de los
productos de los HC que inhibió la actividad metabólica.
Ijah y Antai evaluaron el efecto de diferentes concentraciones: 10, 20, 30, 40% v/w de petróleo crudo
ligero nigeriano (PCLN) derramado en un suelo agrícola. La población bacteriana disminuyó con el
aumento en la concentración del petróleo. La degradación de los productos de los HC fue de 26.7-13.3%
después de 16 días. En el suelo contaminado con PCLN a concentración de 10% y 20% los productos de
los HC se mineralizaron rápidamente, al 30% ligeramente. Mientras que a concentración del 40% fue
mínima su mineralización en 12 meses.
IV.b. Solubilidad de los hidrocarburos
Otro factor que limita la mineralización de los productos los HC es la solubilidad de sus
componentes. Por ello se recomienda detergentes químicos y biológicos que al reducir la tensión

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superficial, aumentan la solubilidad de los productos tóxicos de los HC y su disposición para su

mineralización por la microbiota nativa. Un ejemplo es el reportado por Moran et al., (2000), donde
evaluaron el efecto de minerales esenciales y un detergente en la degradación de HC por la biota nativa de
un suelo agrícola a nivel matraz y reportan que los minerales y el detergente estimularon la mineralización
natural de los productos de los HC de tipo alifácticos en un 35.5% y en el caso de los aromáticos en un
41%. El detergente facilito la degradación de alcanos de cadena larga.
IV.c. Concentración de nutrientes en la estimulación de la actividad biológica natural.
Los HC son una fuente importante de carbono y energía para la microbiota nativa, sin embargo la
concentración de otros nutrientes (nitrógeno y fósforo) para estimular el crecimiento microbiano es mínima
(Prince et al., 2002). La alta concentración de carbono en suelos y aguas contaminados por HC
disminuyen la disponibilidad de nutrientes inorgánicos rápidamente (Margesin et al., 1999), y en
consecuencia la actividad mineralizadora del consorcio microbiano. Una estrategia para equilibrar la
concentración de nutrientes y estimular la mineralización de los HC por la biota nativa es la bioestimulación
(Trinidade et al., 1990).
IV.d. Disponibilidad de oxígeno.
La degradación de productos de los HC por consorcios microbianos y hongos se lleva a cabo por
oxidación de los contaminantes por oxigenasas dependientes de oxigeno molecular, por lo que un factor
crítico limitante en la biorremediación de los productos contaminantes de los HC es la disponibilidad de
oxígeno (Leía and Colwell, 1990). Su solubilidad en el agua es baja (8mg/l), ya que la oxidación de 1 litro de
HC disminuye drásticamente su concentración en 385,000 -400,000 lts de agua (Atrás, 1997). En acuíferos
contaminados con productos de HC, la adición de oxígeno “in siuo” se realiza con difusores de aireación
forzada.
Jamison et al., 1975, utilizaron este tipo de aireación en un suministro de agua subterránea
contaminada con gasolina. El enriquecimiento con nutrientes esenciales, sin aireación, no estimuló la
degradación de los HC, En cambio, el enriquecimiento con nutrientes y oxígeno, favoreció la eliminación de
hasta 1000 barriles de gasolina (Atrás, 1997).
Otra forma de superar las limitaciones de oxígeno es aplicar peróxido de hidrógeno (H 2O2); siete
veces más soluble que el oxigeno molecular, Un mol de H 2O2 equivale aproximadamente a 0.5 moles de
O2. Su hidrólisis libera oxígeno y estimula la actividad microbiana de oxidación de productos de HC.
Berwangen y Barrer investigaron el efecto del H 2O2 como fuente de oxígeno en la biorremediación “in situ”
de aguas subterráneas saturadas con metano. El H 2O2 estimuló la actividad biológica aerobia y la
mineralización de benceno, tolueno, etibenceno y o-, m- y p- xileno por la biota nativa (Atlas, 1997). En otro
estudio, Barenschece et al., observaron que los productos de los HC del diesel de un suelo contaminado
se degradaron entre 4 y 7 veces más rápido cuando se añadió H 2O2, que con nitrato como fuente de O 2. La
adición de H2O2 incrementó el número de microorganismos aerobios degradadores de los productos de HC,
medido por la producción de CO 2 y la disminución de la concentración de los HC en un 70-80% (Atlas,
1997).
De manera general la biorremediación considera las siguientes estrategias para resolver el
problema de contaminación ambiental por HC (Vogel, 1996. Walter, 1997, Dua 2002).

V. Aplicaciones de la biorremediación.
V.a. Biorremediación in situ.
El suelo y agua contaminados con HC es tratado en el sitio lo que implica: el enriquecimiento con
nutrientes esenciales, cambio de la humedad y suplir la demanda de oxígeno para estimular el metabolismo
de los HC por la microbiota nativa. Se tratan extensiones de suelo con un mínimo de transporte.
Tratamientos de biorremediación in situ en donde la oxigenación es clave para la eliminación de los
HC.
1) Bioventilación o “bioventing”. En este caso se realiza una aireación forzada mediante
el enriquecimiento de nutrientes y la inyección de aire en la zona no saturada del suelo o
el agua subtèrranea a través de pozos de inyección. La mineralización de los HC
depende del enriquecimiento con minerales que estimulan la actividad oxidativa de de la
microbiota nativa de cada sitio, requiere de un aumento en la disponibilidad de oxigeno,
así como la volatilización de los HC. Una alta concentración de arcilla y la solubilidad
de los HC son factores que limitan su utilización, pero no en aguas superficiales ni
subtèrraneas
2) Bioaspersión “biosparging”. En esta estrategia inyecta aire bajo presión, lo que
aumenta la concentración de oxígeno y se enriquece el suelo y/o el agua contaminados
con minerales, lo que favorece la mineralización de los HC por los microorganismos

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nativos. La bioaspersión es viable en amientes contaminados con diesel, gasolina etc.,

en el caso de aceites lubricantes su degradación por la microbiota nativa es más lenta.
Es una técnica de bajo costo y adaptable en su diseño construcción a los diferentes
suelos y aguas contaminadas.
V.b. Biorremediación ex situ. El agua y/ó suelo contaminados por HC se extraen y transportan a
otros sitios o a un reactor en el laboratorio. Se enriquecen con nutrientes para estimular la
mineralización de los HC por la microbiota nativa, con la adición de detergente y oxigeno (Brubaker,
1995).
Tratamientos de biorremediación ex situ
1) Practicas culturales “landfarming”. Es una técnica en la cual el suelo contaminado con HC es
removido y colocado sobre una capa de suelo no contaminado enriquecido con nutrientes
minerales. Los dos suelos son mezclados periódicamente para favorecer la oxigenación y la
mineralización de los HC por los consorcios microbianos nativos.
2) Compostaje. El suelo contaminado es removido y mezclado con residuos orgánicos agrícolas o
estiércol animal. Estos residuos orgánicos ricos en una diversa microbiota facilitan la mineralización
de los HC.
3) Biopilas. Se forman con suelo contaminado y materia orgánica (composta) que se someten a
aireación de manera continua, girando la pila ó de forma pasiva por tubos perforados; el
enriquecimiento con nutrientes se realiza con fertilizante, estiércol o composta. Se enriquece con
paja o astillas de madera para aumentar la permeabilidad y porosidad del suelo. Este método es
utilizado en zonas limitadas de terreno.
4) Biorreactores. Son sistemas cerrados donde se puede optimizar la temperatura, la concentración
de minerlaes y de HC para la oxidación de los HC por los microorganismos nativos estimulada por
la adición de nutrientes esenciales, detergente, y oxigenación (Brubaker, 1995). Este método
reduce la dispersión de los microorganismos y de los productos de degradación y su mineralización
rápida. En los birreactores el metabolismo de los microorganismos es más eficaz en términos de
control, peor más costoso en términos de construcción y operación (Levin y Gealt, 1997).

VI. Conclusión.
La biorremediación es una alternativa de restauración ambiental que se recomienda para eliminar
mezclas de HC, que requiere de una acción integral de factores fisicoquímicos y biológicos, no es una
estrategia simple ni barata, sin embargo la inversión en tiempo y dinero para la conservación de los
ambientes naturales vale la pena.

VII. Bibliografía.
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Agradecimientos.
Al proyecto 2.7 (2006-2007 )de la CIC-UMSNH el apoyo a esta investigación, a SUMA del estado
de Michoacán, a COSUSTENTA y V Phytoorganic por las facilidades.
Se dedica este trabajo: a mis estudiantes de La UANL, U de G, y CONALEP, a mi padre JM SanchezMarin.

Autor:
Sánchez-Yáñez, Juan Manuel
syanez@zeus.umich.mx
Microbiología Ambiental Instituto de Investigaciones Químico Biológicas (*autor correspondiente
syanez@umich.mx)). Ed. B-3., CU. Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, Morelia, Mich,
México.

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