PRESABERES MICROBIOLOGIA

No. de grupo 11 No. de subgrupo: 05

Nombre: Duvan Alexis Silva Silva Código: 55713522
Nombre: Luis Leandro Orduz Hernández Código: 55714028
Nombre: Lorena Cáceres Ríos Código: 55714005
Nombre: Martha lizeth Tamayo sosa Código: 55713517
Nombre: Angie esmeralda calderón Montenegro Código: 55713572

PRÁCTICA DE LABORATORIO #1. INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGÍA

1. ¿Cuáles son las áreas de un laboratorio de Microbiología?

 2. ¿Qué son las cabinas de seguridad biológica y para que se utilizan en el laboratorio de
Microbiología?

Forman parte de un de un grupo de equipos destinados a mejorar las condiciones

generales bajo las cuales se realizan una gran variedad de actividades en los
laboratorios clínicos y de investigación en el área de salud pública. Los equipos son los
que garantizan la existencia de ambientes controlados, indispensables para realizar
actividades que por sus características resultan potencialmente peligrosas para la salud
del hombre y del ambiente. Por otra parte, alguna de las cabinas protegen el estado de
los productos o cultivos objeto de la investigación.
Por otra parte estas sirven para proporcionar un caudal de aire a través de un filtro
HEPA (High Efficiency Particulate Absorbing), direccionándolo hacia la parte inferior
de la cabina y recirculando al ambiente por la parte frontal, creando una presión que
protege la muestra de la contaminación. (Cantón, 2009)

3¿De qué material están fabricadas las asas microbiológicas?

El asa bacteriológica o asa de platino es un instrumento de laboratorio tipo pinza que

consta de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio y un filamento que
puede ser de nicromo, tungsteno o platino que termina o en un arito de 5 mm o en
punta.

4¿Cuál es la importancia de mantener la esterilidad durante los procedimientos

microbiológicos?

Es de gran importancia mantener la esterilidad porque nosotros mismos podemos

contaminar el cultivo y el aire que nos rodea en el laboratorio hay contaminación y esto
puede afectar el desarrollo del cultivo; por otra parte siempre se requiere utilizar el
mechero para que ayude a la esterilización de este mismo.

14
 PRÁCTICA DE LABORATORIO #2. MICROSCOPÍA

1. ¿Cuáles son las características fundamentales de los principales tipos de microscopios

(óptico, electrónico y atómico)?

TIPO DE CARACTERISTICAS (Magnificación de los objetos y

MICROSCOPIO utilidad)
el microscopio consta de un tubo en cuyos extremos se sitúan
dos lentes:
1) Ocular, lente próxima al ojo.
2) Objetivo, lente cercana al objeto de estudio
PLATINA: plataforma donde se coloca el portaobjetos con la
muestra. La fuente luminosa es la luz natural, normalmente
bombilla, antiguamente se usaban espejos. También hay lentes
que condensan la luz. Todo el soporte se denomina estatipo.
Óptico Hay dos tipos de tornillos que van a permitirnos un perfecto
enfoque: tornillo micrométrico y tornillo macrométrico. El
número de aumentos total es el producto de los aumentos del
ocular y objetivo. Los objetivos, normalmente 4, se colocan en
el revólver, con aumentos generalmente de 3, 10, 30 y 100. El
aumento del ocular suele ser x10 o x15.
Todas las lentes tienen algún defecto, son las conocidas
aberraciones. Tipos de aberraciones:
- Esférica: no es posible enfocar homogéneamente por toda la
superficie.
- Cromática: aparecen alteraciones en el contorno de los objetos
observados.

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 Hay dos tipos básicos de microscopios electrónicos: el
microscopio electrónico de transmisión y el microscopio
electrónico de barrido. Todos los microscopios electrónicos
cuentan con un sistema que registra o muestra la imagen que
producen los electrones.
Todos los microscopios electrónicos cuentan con varios
elementos básicos. Disponen de un cañón de electrones que
emite los electrones que chocan contra el espécimen, creando
Electrónico una imagen aumentada. Se utilizan lentes magnéticas para crear
campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que las
lentes convencionales utilizadas en los microscopios ópticos no
funcionan con los electrones. El sistema de vacío es una parte
relevante del microscopio electrónico.
Los electrones pueden ser desviados por las moléculas del aire,
de forma que tiene que hacerse un vacío casi total en el interior
de un microscopio de estas características. Por último, todos los
microscopios electrónicos cuentan con un sistema que registra o
muestra la imagen que producen los electrones.
Este es un instrumento que permite visualizar estructuras
yacentes en superficies relativamente lisas, con resolución de
tamaños que va desde los micrones hasta los nanómetros. El
instrumento que dispone el CICIMA es modelo Multimode de la
compañía Veeco.
El AFM pertenece a la familia de instrumentos llamado
microscopios de sonda de rastreo ("scanning probe
microscopes",SPM). Este tipo de instrumentos rastrea la
Atómico superficie de la muestra con una sonda, que puede ser una punta
muy fina que viaja a lo largo de la topografía del espécimen, ya
sea en forma continua o bien en forma pulsada ("tapping
mode"). Un rastreador cilíndrico piezoeléctrico se encarga de
controlar la distancia y la posición de la muestra con respecto a
la punta.

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2. Defina las propiedades del microscopio óptico.

PROPIEDADES DEL MICROSCOPIO OPTICO

PODER DEFINICIÓN
Aumento El poder de aumento de una lente está determinado por el grado de
curvatura de su superficie y la distancia focal. En las lentes
convexas mientras mayor sea la curvatura, menor será la distancia
focal y mayor será el aumento. Se ha anunciado anteriormente que
el microscopio compuesto aumenta en dos etapas y puesto que una
sola lente no es suficiente se deben colocar varias lentes una detrás
de la otra, potenciando de esta manera el poder de aumento. El
primer juego de lentes, cercano al objeto en estudio, se denomina
objetivo y el segundo juego, cercano al ojo del observador se
denomina ocular (11). Cada sistema de lentes es capaz de producir
una imagen aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, así que
10x significa que la imagen está aumentada 10 veces.

Resolución es la capacidad de separar dos puntos muy próximos y dar de ellos

imágenes claras y definidas. El del ojo humano es de 100µm y el de
un microscopio óptico es de 0.24µm. En los microscopios ópticos el
material biológico a examinar se observa por transparencia,
significa que la luz debe atravesar los tejidos para formar imágenes.
La consecuencia de esto es que se hace necesario estudiar: - Células
aplanadas sobre la superficie de un vidrio - Finos cortes de tejidos
suficientemente delgados como para ser atravesados por radiación
luminosa.
Definición es la nitidez de las imágenes que se obtiene. Esto depende de la
calidad de las lentes.

Profundidad de definida como la distancia axial de la región objeto para la que se

obtienen imágenes aceptables, se confunde en el caso de las lupas,
campo
los oculares y los microscopios con la profundidad del enfoque (a
causa de la acomodación). Esta profundidad dará el máximo tamaño
de las rugosidades que será admisible para el ojo sin que la visión
sea incomoda.

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 3. ¿Cuál es la utilidad del aceite de inmersión en microscopía?

El aceite de inmersión para microscopia tiene aproximadamente el mismo índice de refracción

que el vidrio. Mediante el aceite de inmersión se elimina casi completamente la desviación de
los rayos de luz y se aumenta considerablemente la eficacia de los objetivos de los
microscopios. (Universidad de los Andes, 2016)

PRÁCTICA DE LABORATORIO #3

PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

1. Realice un mapa conceptual que incluya la clasificación de los medios de cultivo según
la composición química, su estado aparente y su función o aplicación.

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2. ¿Qué es el agar-agar y de donde se obtiene? ¿Qué función tiene en el medio de cultivo?

El agar-agar es un producto que se obtiene de numerosas algas, principalmente de los géneros

Gracilaria, Gelidium y Euchema. Todas estas algas se caracterizan por pertenecer al grupo de
las algas rojas (Rodoficeas). Son algas de tamaño pequeño, poseen en un tallo de color rojizo y
son muy ricas en mucilagos. Estos son extraídos aplicando agua caliente sobre ellas una vez
hayan sido secadas al sol. Tradicionalmente esta actividad se realizaba principalmente en Japón
a partir de la especie de Gelidium Amansii Kütz. El mucilago o gelatina, una vez extraída y
seca, se vende en forma de polvo, filamentos, barras o copos constituyendo lo que se como
Agar-Agar. (Universidad Tecnologica Nacional, 1998)

3. Mencione los dos principales tipos de esterilización por calor utilizados en el laboratorio de
Microbiología y explique el efecto de cada uno de ellos sobre la integridad celular.

ESTIRILIZACION POR CALOR HUMEDO: El calor húmedo produce desnaturalización y

coagulación de proteínas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones:

 El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas (DNA, RNA,
proteínas, etc) son producidas por reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones
inversas podrían dañar a la célula a causa de la producción de productos tóxicos. Además, las
estructuras secundarias y terciarias de las proteínas se estabilizan mediante uniones puente de
hidrógeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua a altas
temperaturas.
 El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia
de calor mucho más elevado que el aire. Por lo que, los materiales húmedos conducen el calor
mucho más rápidamente que los materiales secos debido a la energía liberada durante la
condensación. El autoclave es el aparato más comúnmente utilizado en los laboratorios para
esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no se
desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 °C. Una temperatura de 121 °C (una atmósfera de
sobrepresión) con un tiempo de exposición mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos
formadores de esporas.

VENTAJAS:
 Rápido calentamiento y penetración.
 Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo.
 No deja residuos tóxicos.
 Hay un bajo deterioro del material expuesto.
 Económico.

DESVENTAJAS:
 No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua.
19
 Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos.

ESTIRILIZACION POR CALOR SECO: El calor seco produce desecación de la célula,

efectos tóxicos por niveles elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusión de
membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los
microorganismos que están en contacto con éstos. El aire es mal conductor del calor, y el aire
caliente penetra más lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La acción
destructiva del calor sobre proteínas y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material
está seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las proteínas se
estabilizan mediante uniones puente de hidrógeno intramoleculares que son más difíciles de
romper por el calor seco. La estufa de esterilización es el artefacto utilizado en los laboratorios
para esterilizar por calor seco.

Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposición que el autoclave. La temperatura varía

entre 120° y 180°C, requiriéndose distintos tiempos de exposición. A 140°C se necesitan por lo
menos 5 horas de exposición, mientras que a 160°C se requieren al menos 2 horas de
exposición.

Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodón no pueden ser esterilizados a más
de 160°C.

VENTAJAS:
 No es corrosivo para metales e instrumentos.
 Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no
volátiles.

DESVENTAJAS:
 Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja
penetración del calor.

4.¿Qué efecto tiene la luz ultravioleta sobre la célula microbiana?

Cuando un microorganismo se expone a luz ultravioleta, los núcleos de las células, debido a los
procesos photolytic, esto modifica la; división de la célula, y por lo tanto la reproducción es
prevenida.

20
 PRÁCTICA DE LABORATORIO #4: MÉTODOS DE SIEMBRA DE
MICROORGANISMOS EN EL LABORATORIO

1. ¿Cuál es el objetivo de realizar diferentes tipos de siembras en el laboratorio de

Microbiología?

- Facilitar el crecimiento y el aislamiento de microorganismos presentes en una muestra.

- Identificar la multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos
- Determinar que bacterias entre las que se desarrollan tienen más probabilidades de ser las
causantes de la infección y cuáles son sus posibles contaminantes o colonizadores.
- Servir como medio para favorecer un proceso deseado. (Área de Bacteriología. Departamento
de Ciencias Microbiológicas, 2003)

2. ¿Cuáles son los tipos de siembra que se pueden realizar en caja de Petri? Realice los esquemas
representativos y coloque el nombre correspondiente a cada uno.

TIPO ESQUEMA
Siembra por inmersión: Se coloca el
inóculo en una placa o caja de Petri y
sobre el mismo se vierte el medio de
cultivo previamente fundido. Este
método se utiliza para microorganismos
aerobios.

Siembra por diseminación cruzada:

Trazar con el hisopo que contiene el
inóculo una "Z"en la superficie del
medio; Completar la siembra con un asa
de platino estéril, imprimiendo
movimientos ondulatorios sobre la "Z"

Siembra masiva: Se puede utilizar la

espátula de Driglaski. En este caso la
gota de muestra liquida se esparce con la
espátula por toda la superficie del medio
de cultivo sólido imprimiéndo un
movimiento en espiral. La siembra
masiva también se puede realizar con un
hisopo grueso embebido de un cultivo
líquido, procediendo a su deslizamiento
sobre toda la superficie de una placa de
agar.
21
Siembra en superficie: se vierte sobre
una placa de Petri el medio de cultivo
fundido, se deja solidificar y se coloca
sobre la superficie el inóculo. Con ayuda
de una espátula de Drigalsky se extiende
el inóculo hasta su absorción total por el
medio de cultivo. Este tipo de siembra se
recomienda para microorganismos
aerobios estrictos.

Siembra en estría: se vierte sobre una

placa de Petri el medio de cultivo
fundido y se deja solidificar.

Siembra por estría por

agotamiento: Con éste procedimiento se
puede conseguir una buena separación
de las colonias y aislarlas fácilmente.
Para ello se funde el medio de cultivo, se
vuelca en caja de Petri y se deja
solidificar. Con el asa previamente
esterilizada se toma material de un
cultivo heterogéneo y se descarga sobre
la superficie del medio formando
estrías. Medio de cultivo: solido en placa
de Petri. Instrumento. Asa. Finalidad.
Obtener colonias aisladas

22
3. ¿Cuáles son los tipos de siembra que se pueden realizar en tubo de ensayo? Realice los
esquemas representativos y coloque el nombre correspondiente a cada uno.

TIPOS ESQUEMA
Siembra en medios sólidos en cuñas
(tubos de ensayo): Trazando una línea
perpendicular desde el fondo hacia arriba;
Deslizando el instrumento con el inóculo
de abajo hacia arriba en forma de zigzag;
Roturando el medio

Siembra en agar en tubo inclinado o

bisel: en este caso se colocan 5 ml de
medio de cultivo fundido y estéril, se
inclina el tubo y se deja enfriar.

Siembra por dilución: Se toma el tubo de

ensayo con medio líquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se
siembra en el tubo con el uso del asa
cargada con el material bacteriológico, se
agita, con movimientos moderados.
Medio de cultivo: Liquido
Instrumento: Asa

Por picadura o punción: Con una aguja

se toma el material que se quiere sembrar
y se lo introduce en el tubo, con medio
semisólido. Introducir la aguja hasta el
fondo, formando un canal de punción,
trayecto por el cual la retiraremos luego.
Este método se utiliza para estudiar la
movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo. Semisólido
Instrumento: aguja bacteriológica
Finalidad: Estudiar la movilidad de las
bacterias

4. ¿A qué se le denomina pico de flauta o tubo inclinado y que utilidad tiene?

La prueba de Kligler es una prueba múltiple que permite conocer si una determinada bacteria
(inicialmente se diseñó para la identificación de enterobacterias) produce ácidos y gases a partir
23
de la glucosa, de la lactosa o de ambos a la vez. También sirve para investigar si es capaz de
producir sulfhídrico. El medio incorpora glucosa y actosa en proporción 1:10, respectivamente.
Lleva, además, una fuente de azufre (tiosulfato sódico) y una fuente de hierro (sulfato ferroso).
Como indicador ácido-base se añade rojo fenol (pH neutro: color rojo; pH ácido: color
amarillo). La parte de arriba del medio se denomina pico de flauta y la de abajo, fondo.

5. ¿Qué son los aerosoles microbianos?

Son suspensiones aéreas de partículas constituidas total o parcialmente por microorganismos.
(Chin, 2006)

PRÁCTICA DE LABORATORIO #5: DESCRIPCIÓN MACRO Y

MICROSCÓPICA DE BACTERIAS: TINCIÓN DE GRAM
1. Complete el siguiente cuadro que indica los parámetros guía para la descripción
macroscópica de colonias bacterianas

PARAMETRO CLASES DIBUJO

Elevación Plana

Convexa

Umbilicada

Papilar

Mamelonada

Borde o margen Regular: continuo

Irregular: dentado
Lobulado

Filamentoso

Aspecto Brillante o traslucida

24
 Mate u opaca
Consistencia Dura
Blanda
Mucoide
Color Por definir
Olor Aromático, pútido, alcohólico, etc.

2.Elabore un mapa conceptual acerca de los tipos de coloraciones que se utilizan en el

laboratorio de Microbiología. Coloque ejemplos.

25
26
 3 ¿Cuáles son las formas bacterianas básicas y las agrupaciones que se pueden
encontrar? Realice esquemas y adjudíqueles nombres científicos de bacterias según
corre

Las agrupaciones bacterianas aparecen cuando las células se mantienen juntas después de la

división celular. Son características de diferentes microorganismos.

A PARTIR DE LOS COCOS: Diplococos, Estreptococo (un plano de división), Tétradas,

sarcinas y Estafilococos (dos o más planos).

DIPLOCOCOS: dos células.

ESTREPTOTOCOCOS: cadenetas de varias células.

TETRADAS: dos planos perpendiculares.

SARCINAS: tres planos ortogonales (paquetes cúbicos).

ESTAFILOCOCOS: muchos planos aleatorios.

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4. Realice los esquemas de la pared celular bacteriana tanto para Gram positivas como para
Gram negativas y explique cuáles son sus diferencias.
GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS

Poseen una pared celular más compleja:

-pared celular interna
Poseen una pared celular interna y una -pared de peptidoglucano
pared de peptidoglucano. bicapa lipídica externa
*Peptidoglucano: es un exoesqueleto Membrana externa: forma un saco rígido
que da consistencia y forma esencial para alrededor de la bacteria, mantiene estructura
replicación y supervivencia de la bacteria. y es barrera impermeable a
No tiene membrana externa. macromoléculas, ofrece protección en
La red de mureína está muy desarrollada y condiciones adversas
llega a tener hasta 40 capas. La red de mureína presenta una sola capa
Poseen otros componentes: ácidos teicoicos Poseen proteínas con concentraciones
y lipoteicoicos, y polisacáridos complejos.1 elevadas.2

1 USMP filial Norte. Bacterias Gram Positivas y Gram Negativas. Biologia medica. blog(2010).
[en linea ] http://biologiamedica.blogspot.com.co/2010/09/bacterias-gram-positivas-y-
gram.html [citado el 29 de febrero 2016]

2
Ibid.

28
 Bibliografía
Área de Bacteriología. Departamento de Ciencias Microbiológicas. (2003). MEDIOS DE CULTIVO Y
METODOS DE SIEMBRA. URUGUAY: FVET.

Cantón, E. C. (2009). Procedimientos en Microbiología. Bogota.

Chin, J. (2006). El control de las enfermedades trnasmisibles. Estados Unidos: publicacion cientifica y
tecnica N° 581.

Universidad de los Andes. (2016). Tipos de microscopios. Medellin.

Universidad Tecnologica Nacional. (1998). preparacion medios de cultivo. Universidad de rosario.

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