ANTIBIOGRAMA:

SENSIBILIDAD ANTIBACTERIANA
POR EL METODO DE DIFUSION CON DISCO
PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA

 Son métodos in vitro que determinan la susceptibilidad

antimicrobiana las cuales deben reunir condiciones de
laboratorio específicas y estandarizadas.
 PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
Clasificación según el resultado obtenido:

• MÉTODOS CUANTITATIVOS
Son aquellos procedimientos que permiten determinar la
concentración inhibitoria mínima (CIM) y la concentración bactericida
mínima (CBM).

• MÉTODO CUALITATIVOS

Son aquellos procedimientos que permiten clasificar directamente a

un microorganismo como sensible o resistente.
MÉTODO DE DILUCIÓN MÉTODO DE DIFUSIÓN
 PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD - DISCO DIFUSION
HISTORIA Y DESARROLLO

 Fines Siglo XIX - Pioneros de la Microbiología: Pasteur, Koch y

Ehrlich hicieron numerosas referencias sobre “Antibiosis”.
Progreso significativo estandarización metodología
Test de susceptibilidad antimicrobiana

Bauer, Kirby
Sherris y Turck

1966
“Antibiotic susceptibility testing by standardized single disk method.”
Am J Clin Pathol 1966;45:493-496.
METODO DE DISCO DIFUSION
(KIRBY – BAUER)
* Selección de colonias

Colonias aisladas
* Preparación del inoculo

Realizar la suspensión Mezclar la suspensión

 Escala 0,5 Macfarlán (1,5 x 108 ufc/ml)

Absorbancia 0,08 – 0,10

Tubo Problema Tubo Patrón

* Hisopado de la placa

Estriamos en 3 Direcciones
Retirar el exceso de muestra “Suspensión uniforme”
* Colocación de Discos

“Método manual” Dispensador automático

* Incubación

Bacterias fastidiosas requieren el uso de medios enriquecidos y de

condiciones propias para su posterior interpretación.
Lectura e Interpretación
 Metodologías estandarizadas

– Swedish Reference Group for Antibiotics (Suecia)

– Deutsches Institut für Normung (Alemania)

– Werkgroep Richtlijnen Gevoeligheidsbepalingen (Holanda)

– British Society for Antimicrobial Chemotherapy (BSAC)

– Societé Française de Microbiologie (Francia)

- Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI)

Principios de la difusión del
antibiótico en el agar

• Leyes Generales de la Difusión

• Factores Ligados a la Difusión

• Factores Ligados a la Técnica

 Leyes generales de la Difusión

* Difusión de los antibióticos

 DISCO Ampicilina
* Efecto de deposito (Ericsson) 10µg

AGAR

Diámetro del disco: 6 mm

Concentración del disco: 10 g

Espesor del agar: 4 mm

4 mm
La superficie es de 30 mm2

El volumen es de 120 mm3

La concentración en el borde
del disco es: 10 g/120 mm3
80 g/ml
6 mm
Que más observamos?
Características del borde de la zona de inhibición

Halo de inhibición

3 4
2
1
Disco

1. Zona de completa inhibición

2. Zona de crecimiento tardío
3. Zona de parcial inhibición
4. Zona de crecimiento estimulado
Relación diámetro de la zona de inhibición y MIC

20 mm

AM

32
16
8
4
2
32 16 8 4 2 1 0.5
ug/ml MIC
 Comité de expertos

Datos Datos Datos

Microbiológicos Clínicos Farmacológicos

PUNTOS DE CORTE

SENSIBLE INTERMEDIO RESISTENTE

Agente Contenido Diámetro (mm) MIC (µg/ml)

antimicrobiano del disco S I R R S

Ampicilina 10 µg  13 14 - 16  17  32 8
Que más nos ofrece ?
CONTROL DE CALIDAD – Método Disco Difusión

1 . Composición – Profundidad del agar

2. pH del medio

3. Densidad del inóculo

4. Concentración del disco

5. Temperatura y tiempo de incubación

6. Tiempo de aplicación de los discos

7. Medidas de inhibición
Composición del Medio de cultivo

Medio referencial (CLSI)

Muller Hinton
 Profundidad del Medio de cultivo

4 mm

2 mm

6 mm

Profundidad aceptable: 3 – 5 mm
 pH del Medio de cultivo

pH aceptable: 7.2 – 7.4 Medición en el agar

Densidad del Inoculo bacteriano

Escala de Mc Farland 0.5

 Densidad del Inoculo bacteriano

Mc farland 1.0 Mc farland 0.5 Mc farland 0.3

 Concentración del disco

Refrigeración Adecuada