Manual Laboratorio B005 2018

Departamento de Ciencias Básicas
Guía Laboratorios Bioquímica
Última actualización: Marzo, 2018

Laboratorio Bioquímica 2018
REGLAS DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL

PRIMER SEMESTRE 2018
Actividades prácticas:
Se realizarán un total de 5 actividades por cada sección de práctico, según se indica:

o Reforzamiento. La primera semana se realizará una actividad que consiste en un
reforzamiento de cálculos matemáticos aplicados a pH, ecuación de Henderson-
Hasselbach, ecuación de la recta, gráfica de ecuaciones no lineales (hiperbólicas) y
sus recíprocos. La será de carácter obligatorio y con evaluación.
o Actividades prácticas. Se realizará un total de 4 actividades prácticas en modalidad

de dos módulos semana por medio.
Asistencia:
La asistencia al laboratorio es de un 100%.

El estudiante que se ausente a un práctico debe presentar certificado médico. En el caso
de tener más de una inasistencia, el alumno queda en situación de reprobar la
asignatura.
Los estudiantes NO pueden asistir a un grupo de laboratorio diferente al asignado

en su carga académica.
Evaluaciones:
Se realizarán 6 quizzes de entrada, 5 informes de laboratorio y 1 seminario. Los

promedios de quizzes, informes y seminario tendrán una ponderación de 40%, 35% y 25%
respectivamente.
Los alumnos tienen la posibilidad de borrar la peor nota de quiz.
No se realizaran quizzes o informes recuperativos.
Los quizzes se tomarán al comienzo de TODAS las actividades prácticas y tendrán una
duración aproximada de 10 min. El alumno que llegue tarde no podrá rendir el control,
deberá esperar hasta que se inicien las actividades, y será evaluado con nota 1,0. Los
quizzes contemplarán las materias de la guía y lo que sea deducible de ellas; además
son acumulativos, es decir, se preguntará de prácticos anteriores.
Los informes deberán ser entregados la semana siguiente al práctico por un alumno del
grupo. El plazo de entrega es inamovible. El grupo que no entregue el informe o lo
entregue fuera de plazo, será evaluado con nota 1,0.
El usuario solo podrá utilizar la información entregada para su uso personal y no comercial y, en consecuencia, le queda prohibido
ceder, comercializar y/o utilizar la información para fines NO académicos. La Universidad conservará en el más amplio sentido la
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propiedad de la información contenida. Cualquier reproducción de parte o totalidad de la información, por cualquier medio, existirá la
obligación de citar que su fuente es "Universidad Santo Tomás" con indicación La Universidad se reserva el derecho a cambiar estos
términos y condiciones de la información en cualquier momento.
Presentación personal y conducta de laboratorio:
El estudiante debe presentarse:
1. Puntualmente a la actividad. En el caso de llegar atrasado, podrá ingresar al

laboratorio una vez terminado el quiz de entrada, y sólo en los cinco minutos
siguientes de rendido éste. No se permitirá el ingreso de estudiantes a la actividad
después de 15 minutos de iniciada ésta.
2. Siempre debe llevar delantal blanco mangas largas (tipo cotona) abotonado,
pelo tomado (coleta o cola de caballo), zapato cerrado, sin tacos altos (no chalas ni
sandalias) no se deben mostrar los tobillos, pantalón cerrado (no bermudas ni
faldas). Asimismo, no deben usar accesorios (anillos, pulseras u otros) que puedan
enredarse o limitar la manipulación de los instrumentos y material de laboratorio.
Cada estudiante debe ingresar al laboratorio con su Guía del Laboratorio, de modo
que pueda desarrollar la actividad sin entorpecer el trabajo de los demás. La falta
reiterada de este material puede ser motivo de una evaluación mínima (1,0).
En el laboratorio sólo se permitirá el uso de cuaderno, lápices, calculadora, guías y libros

de apoyo. Las mochilas y bolsos deben guardarse en los casilleros destinados para tal fin.
El estudiante debe evitar situaciones de riesgo, como correr y jugar en el laboratorio.
Si el estudiante requiere salir del laboratorio, debe informarle al profesor. Una ausencia
prolongada y sin informar puede ser considerada como inasistencia.
En el transcurso del práctico está PROHIBIDO el uso de aparatos de audio, teléfonos

celulares, ni el consumo de ningún tipo de bebida o comida (incluido chicle). El
profesor puede solicitar al estudiante que abandone el laboratorio si no cumple con esta
norma, quedando ausente de la actividad. No existe la posibilidad de apelar a esta
sanción, pues el estudiante debe aprender las normas mínimas de comportamiento en un
laboratorio.
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Pauta para la elaboración de informes de laboratorio
Los informes:
Deben realizarse en grupos de máximo 3 personas.
Deberán tener hasta seis páginas (sin incluir la portada), numeradas en la parte inferior
a la derecha, tamaño carta (21.59 x 27.94cm) y con tipo de margen normal (izquierda y
derecha 3cm; arriba y abajo 2.5cm); sólo se corregirán las seis primera páginas de los
informes. Lo anterior incluye esquemas, gráficos, literatura citada y otros, exceptuando
la página portada. Además, deben ser escritos a espacio simple con letra arial de
tamaño 12.
Se debe entregar en el plazo previamente fijado, es decir, una semana después de

haber realizado la experiencia (próximo laboratorio). Los atrasos en estas entregas
serán considerados con nota 1.0.
Deben constituir relatos fluidos, impersonales y objetivos acerca de la actividad

realizada. Serán escritos en tiempo pasado y en tercera persona singular, impersonal.
Deberán ser escritos en correcto castellano, es decir, con la adecuada redacción,
sintaxis, puntuación y ortografía.
Ejemplo :
“Durante el desarrollo de este trabajo se utilizó DNA proveniente de tallo de la cactácea
Copiapoa cinerea, disuelto (concentración) en tampón TE (composición, pH), mantenido a
-20°C durante 90 días.”
Las abreviaturas de unidades de medida (volumen, superficie y otras) NO son seguidas

por punto; utilice solamente los sistemas convencionales tipo cgs o mKs. Los litros, por
ejemplo, se pueden abreviar L o l; las abreviaturas “Lt” o “Lts” son incorrectas. En el caso
de los segundos, serán s y no “seg” ni “segs”. Si tiene dudas al respecto, pregunte.
Los informes deberán constar de las siguientes secciones:
1. En la primera página o portada:

- Título de la experiencia (y NO número del informe o trabajo práctico)
- Autores, los alumnos, en orden alfabético de acuerdo a su apellido
- Curso, carrera y sección
- Nombre del Profesor(a) de práctico y del ayudante alumno(a)
En su contenido:
2. Introducción (5,0 puntos) y objetivos (2,0 puntos)
En esa sección, se hará una descripción del marco teórico relacionado con el tema
abordado en la experiencia. Otro enfoque interesante dice relación con sistemas de
diagnóstico y patologías asociadas al tema. En este curso particularmente, las diversas
metodologías que se utilizarán tienen un fundamento que no es trivial a la hora de
elegirlas y aplicarlas. Deben explicar, es decir fundamentar, la elección de cada una de
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ellas, para cada experiencia; aportar los elementos que permitan comprender en qué
consisten las técnicas utilizadas, en qué se sustentan y cuál es su mecanismo básico de
acción.
En su parte final, la Introducción deberá contener los objetivos de la experiencia. La
introducción consta básicamente de una serie de afirmaciones y conceptos escritos de
manera fluida, que sustentan o apoyan la realización de la experiencia. Toda afirmación
que se plantee deberá ser apoyada por las referencias bibliográficas
correspondientes, entre paréntesis, utilizando un número para cada una, o bien los
apellidos de los autores y el año de la publicación. La misma referencia debe tener el
mismo número, que será repetido tantas veces se utilice dicha referencia. Muchas veces,
en la introducción se presenta la terminología a utilizar, con sus respectivas abreviaturas,
que serán utilizadas en el resto del informe.
Se puede utilizar figuras, gráficos u otros disponibles en texto, en cuyo caso es necesario
indicar la fuente al pie del esquema (ej: tomado de Meneses y Vidal 2005; NO olvidar
detallar la referencia en la sección 6).
3. Materiales y Métodos (5,0 puntos)

Aquí se detallará el procedimiento utilizado, paso a paso, y se hará referencia a los
materiales y a los fabricantes de los equipos e instrumentos utilizados, su marca y modelo
entre paréntesis, con excepción de aquellos de uso rutinario (No se detallará el uso de
micropipetas, ni su marca). Se trata de entregar el procedimiento o técnica realizados, los
reactivos, soluciones o elementos utilizados en forma ordenada, precisa y lo más
brevemente posible, de modo que la experiencia se comprenda paso a paso y pueda ser
reproducida por otra persona. Recuerde que hay un límite en la extensión, no repita el
protocolo de la guía.
Se detallará entre paréntesis, la composición y concentración de reactivos y tampones

utilizados (sólo la primera vez que se haga referencia a ellos, luego se mencionará
solamente su nombre).
La sección materiales y métodos NO ES una lista de materiales, instrumentos y reactivos

a modo de lista de supermercado. Debe ser fluida de manera que al ir describiendo el
procedimiento utilizado durante la experiencia, vayan apareciendo los diversos materiales
e instrumentos que en ese momento deben ser caracterizados con su marca y modelo.
Como el resto del informe, los Materiales y Métodos deben ser escritos en pasado y en
tercera persona, aunque impersonal.
Ejemplo :
Se agregó 20 ml de tampón PBS (10 mM Na2HPO4; 1.4 mM KH2PO4, pH = 7,4; 140
mM NaCl; 2,7 mM KCl) y se centrifugó durante 10 min a 300 rpm (marca y modelo
de la centrífuga); no es necesario decir que centrifugó en una centrífuga, por
razones obvias...
Si una solución de un reactivo determinado se agregó con una micropipeta de marca X y

capacidad Y, eso NO DEBE ser detallado pues es obvio que dicho volumen se tomó con
el instrumento apropiado. Tampoco es relevante mencionar si el tubo en el que se realizó
un determinado ensayo era de plástico, vidrio, teflón, etc, o si su capacidad era tal o cual.
5
En caso de haber efectuado experimentos, es fundamental detallar los controles positivos

y negativos en esta sección. La abreviatura de microlitros, µl, (10–6 L o 10-3 mL) lleva la
letra griega “µ” (= 10-6), la que no debe reemplazarse por la última vocal (“u”). En el
procesador word usted encuentra la letra griega µ en la tabla del menú “Insertar”,
“Símbolo”.
4. Resultados (5,0 puntos)

En esta parte del informe se describe los resultados y observaciones obtenidas,
apoyándose en:
- Dibujos, fotografías, tablas, gráficos u otros. Cada uno de ellos debe llevar su
TÍTULO y NÚMERO respectivo (bajo el gráfico o dibujo), asignado en forma
consecutiva.
- Breves descripciones de lo observado.
- Tablas, con una breve descripción en texto (con su número respectivo), que
señale las tendencias observadas
- Gráficos, cuyo título NO DEBE SER “A versus B”. Los gráficos deben estar
correctamente construidos, se debe detallar el nombre de las variables
independiente y dependiente con sus respectivas unidades entre paréntesis.
Cada figura debe llevar una breve leyenda explicativa. Sobre las figuras deberá ir indicado
con flechas o letras detalles relevantes para su entendimiento
Puesto que el espacio es limitado, NO DEBE REPETIRSE la información en tablas y

gráficos; se optará por aquella expresión que sea más clara y contenga mayor
información (generalmente ello corresponde a gráficos). SÓLO se debe incluir figuras,
tablas y gráficos a los cuales se haga alusión en el texto. No se debe incluir figuras,
gráficos ni tablas, sin hacer referencia a ellas en el texto.
5. Discusión (5,0 puntos)
Este es el capítulo MÁS IMPORTANTE del informe. La primera frase de la discusión es

la verbalización del resultado o conclusión obtenida más relevante. Luego, se
discutirá los resultados en detalle, de acuerdo con los antecedentes teóricos,
fundamentación de la experiencia, objetivos e hipótesis planteados en la introducción.
Aquí también se discutirá las eventuales discrepancias respecto de los resultados
esperados, en caso que las hubiera. Se propondrá las razones, tanto de orden
metodológico como conceptual, que podrían dar cuenta de tales discrepancias. Es
fundamental utilizar bibliografía para encontrar una explicación lógica a los resultados
observados. Recuerde que la discusión NO consiste en repetir los resultados
obtenidos, si no que explicarlos a l luz del conocimiento teórico. La discusión puede
finalizar con las CONCLUSIONES del práctico, las que son breves y puntuales., y
generalmente van asociadas a los objetivos del trabajo. Las conclusiones deben ir
incluidas en la discusión y no en una página aparte.
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6. Referencias o Literatura Citada (3,0 puntos)
Aquí se debe transcribir un listado de las referencias utilizadas durante la elaboración del
informe. No deben aparecer textos, páginas web o artículos científicos que no sean
mencionados en el texto del informe. Asimismo, todas aquellas citas que se hagan en el
informe deberán aparecer referidas en esta sección. Utilizar DE PREFERENCIA trabajos
publicados en Revistas con Comité Editorial. Las páginas web y la guía de laboratorio
no son utilizadas como referencias bajo ningún motivo.
Las citas en el texto, pueden hacerse a través de números consecutivos, de acuerdo al

orden en que se vayan utilizando, poniendo los números entre paréntesis y, e la sección
referencias y también de manera consecutiva, se debe escribir el número y la referencia
correctamente. Si una misma referencia se utiliza varias veces, debe tener siempre el
mismo número que se repetirá, en el texto, tantas veces se utilice esa referencia. Otra
alternativa al respecto, es sin utilizar números sino, luego del texto que sostiene la
afirmación, se coloca entre paréntesis el apellido del o los autores (si son hasta dos),
seguido del año de la publicación. Si son más de dos autores, se coloca el apellido del
primero y luego “y cols.” (por y colaboradores), seguido del año de la publicación. En la
sección referencias o literatura citada, el listado de las referencias se hace en orden
consecutivo, de acuerdo a la numeración que se les ha dado en el texto y dependiendo
del orden de su citación, en caso que se haya utilizado esta alternativa. Si se ha optado
por la segunda modalidad, es decir por el apellido de los autores, las referencias se harán
en orden alfabético según el apellido del primer autor del trabajo. TODOS los autores de
cada trabajo, libro o referencia consultada deben aparecer, figurando primero su apellido y
luego las iniciales de su(s) nombre(s). Por favor consulte si tiene dudas al respecto, o
directamente oriéntese poniendo atención en cualquier texto, y sobretodo artículo
científico, a su disposición.
Hay varias normas para escribir correctamente las referencias, sin embargo si Ud. escoge
cualquiera de ellas, debe ser conservador (consistente) a lo largo de todo el texto, es
decir, siempre utilizar la misma modalidad. Por ejemplo, el año de la publicación puede
señalarse inmediatamente después de los autores, o bien al final de la referencia. La
transcripción de los nombres propios completos de los autores es un error frecuentemente
cometido por los estudiantes: trate de no repetirlo y sólo escriba las iniciales de estos
nombres.
Ejemplos :
- Para un artículo científico:
(1) Fagan, T., D. Morse y J.W. Hastings. 1999. Circadian synthesis of a nuclear-
encoded chloroplast glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in the
dinoflagellate Gonyaulax polyedra is translationally controlled. Biochemistry. 38:
7689-7695.
En el texto, se debiera citar, siempre entre paréntesis, con un número (que sería en 1 si
es la primera cita) o si no, como (Fagan y cols., 1999) y en las referencias, de acuerdo al
orden alfabético de los apellidos de los autores, iría en la “F” y NO tendría número. Este
artículo, fue publicado en 1999, en el volumen 38 de la revista Biochemistry, entre las
páginas 7689 y 7695.
7
-Para un capítulo de libro:
Granéli, E. y P. Carlsson. 1998. The ecological significance of phagotrophy in

photosyntetic flagellates. En: Physiological Ecology of Harmful Algal Blooms. D.M.
Anderson, A.D. Cembella y G.M. Hallegraef (Eds.). NATO ASI Series. Vol G 41.
Springer-Verlag Berlin Heidelberg Pubs. pp.539-557.
Lo anterior quiere decir que el texto que Ud. consultó fue escrito por Granéli y Carlsson (lo
cual se puede citar en el texto de esa misma manera o con el número correspondiente),
se titula “The ecological significance....”, aparece en el libro titulado “Physiological Ecology
of Harmful Algal Blooms”, publicado en 1998. Los editores del libro son: D.M. Anderson,
A.D. Cembella y G.M. Hallegraef; la publicación es de la NATO, la editorial es la Springer-
Verlag de Berlin, Heidelberg Publicaciones y las páginas en las que aparece este capítulo
son desde la 539 hasta la 557.
- Para un libro completo:
Futuyma, DJ. 1986. Evolutionary Biology. 2ª Ed. Sinauer Associates Inc. Publishers
(Sunderland, MA). 600 pp.
- Para un resumen (“abstract”) de un trabajo, aparecido en las Actas de algún congreso:
Guillou, L., E. Nezan, P. Gentien and G. Barbier. 2000. Molecular study of the toxic algae
Dinophysis spp. from the French coast. Resúmenes de la 54th Reunión Annual de la Sociedad
Ficológica de América. D.F. Millie y P.Kugrens (Eds.). J. Phycol. 36 (3): 27.
Esta referencia, en el texto se citaría (si no se hace con número) como (Guillou y cols. 2000).
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Laboratorio Nº 1:
1.1 Reforzamiento pH, ecuaciones lineales y gráficas
El pH es una medida de la acidez o basicidad de una solución. También se puede describir

como el -log de la concentración de hidrogeniones [H3O+] o iones de hidrógeno [H+] presentes
en determinadas sustancias, pH = -log [H+].
El pOH es el -log de la concentración de iones hidroxilo [OH-] y al igual que el pH permite

determinar la acidez o basicidad de una sustancia, pOH = - log [OH-].
Las siglas pH significan ¨potencial de hidrógeno¨, termino descrito por el químico Danés
Sorensen, quien lo definió como logaritmo negativo en base 10 de la actividad de iones de
hidrógeno.
El pH y pOH provienen del producto iónico del agua (Kw). Puesto que el agua H2O está
disociada en una pequeña extensión en iones H+ e OH , tenemos que: Kw = [H+][OH ]=10 -14 .
– –
Por lo tanto:
log Kw = log [H+] + log [OH–]
-14 = log [H+] + log [OH–]
14 = -log [H+] - log [OH–]
pH + pOH = 14
En solución acuosa, la escala de pH varía, de 0 a 14. Si en una solución el pH = 7,0, se

considera neutro, si el pH > 7,0, se considera básico y si el pH < 7,0, se considera ácido
Escala de pH:
0 7,0 14,0
ÁCIDO BÁSICO
Para el cálculo de la concentración de hidrogeniones o hidroxilo se considera Antilog ≠ -Log
Si p = -log X, para despejar X se debe aplicar la función antilog (shift log)

Por lo tanto: –p = logX /antilog
10-p = X
Ejercicios: Calcular pH, pOH, [H+], [OH ], según corresponda:

–
a) NaOH = 0,0070M c) pH = 4,6
b) HCl = 0,0035M d) pOH = 5,0

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1.2 Soluciones Buffers o amortiguadoras:

Ecuación de Henderson-Hasselbalch
Muchos de los procesos más importantes de los sistemas químicos y biológicos son
reacciones ácido-base en disolución acuosa.
Arrehenius en 1887 postuló que hay sustancias, que en disolución, se disocian en

cationes y aniones. Por lo tanto un ácido es una sustancia que en disolución acuosa
disocia cationes H+. Una base es una sustancia que en disolución acuosa disocia aniones
OH-.
Ácido: AH (ac) ® A– + H+ Base: BOH (ac) → B+ + OH–
Ácido clorhídrico: HCl (ac) → H+ + Cl- Hidroxido de sodio: NaOH (ac) → Na+ + OH–
Sin embargo, esta teoría es válida solo en soluciones acuosas.
Según la teoría de Brønsted - Lowry, un ácido se define como una sustancia que es capaz
de donar o ceder protones y una base se define como una sustancia capaz de captar
protones. Cuando un ácido pierde protones (H+) se convierte en su “base conjugada” y
cuando una base captura H+ se convierte en su “ácido conjugado”.
Disociación de un ácido:
HCl (g) + H2O (l) → H3O+(ac) + Cl– (ac)
El H2O actúa como base y el HCl como ácido, que al perder H+ se transforma en Cl– (base
conjugada).
Disociación de una base:

NH3 (g) + H2O (l) → NH4+ + OH–
En este caso el H2O actúa como ácido pues cede H+ a la base NH3 que se transforma en
NH4+ (ácido conjugado).
Los ácidos y bases también se clasifican en fuertes y débiles:

Ácidos fuertes: Se disocian completamente cuando se disuelven en agua, por tanto,
ceden a la solución todos sus iones H+. Como el ácido Sulfúrico (H2SO4), ácido
Clorhídrico (HCl) y ácido Nítrico (HNO3).
Bases fuertes : se disocia completamente, da todos sus iones OH¯. Son las bases de los
metales alcalinos y los alcalinotérreos. Ejemplos hidróxido de sodio, de potasio. Pueden
llegar a ser muy corrosivas en bajas concentraciones. Como el Hidróxido de sodio (NaOH)
Hidróxido de potasio (KOH) e Hidróxido de calcio (Ca (OH)2 ).
Ácidos débiles: no se disocian completamente con el agua, es decir, liberan una parte
pequeña de sus iones H+. Ejemplo el ácido fosfórico, ácido sulfhídrico.
Bases débiles: no se disocian completamente con el agua. Ejemplos hidróxido de
amonio, el amoníaco.
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La ecuación de Henderson-Hasselbalch es utilizada para determinar el pH en

soluciones buffers. Estas soluciones son ácidos o bases débiles y sus bases o sales
conjugadas. Las soluciones buffers son también llamadas soluciones tampón,
amortiguadoras o reguladoras. Estas permiten mantener pH en un rango constante,
evitando los cambios bruscos de pH. Están presentes tanto en sistemas químicos como
en sistemas biológicos. Siendo de gran importancia para nuestro organismo.
Si representamos a un ácido débil por AH y su base conjugada por A -, su disociación será

AH ⇆ H+ + A-, el grado en que se disocia el ácido se representa por su constante de
disociación o de acidez Ka= [H ] x [A-] / [AH].+
Para un ácido AH con disociación parcial. El equilibrio es:
Para calcular pH en una solución buffer o amortiguadora se utiliza la siguiente ecuación

(Henderson-Hasselbalch):
AH= ácido A- = Sal o base conjugada
Ejercicios: Determinar el pH y el pOH de una solución de:
a) 10 gramos de NaOH en 1,25 L b) 200 mg de HCl en 500 mL
11
La siguiente tabla indica los valores de pKa y Ka de diferentes disoluciones:
12
Guía de Ejercicios
+ -3
1. En una solución donde [H ] es 1x 10 M calcule pH, y pOH. ¿La solución es ácida
o básica?
+ -
2. Si el pH de una solución es por ejemplo 4,5 calcule [H ], [OH ]. ¿La solución es
ácida o básica?
3. Calcular el pH y pOH de una solución de NaOH 0,001M
4. En una muestra de un lago contaminado, se determinó que el pOH del agua era de
-
6,59. ¿Cuál es el valor de [OH ] y pH?
5. Determinar el pH 100 mL de buffer lactato, donde la concentración de ácido láctico

es 0,050M, y la concentración del ión lactato es 0,32 M
6. En el problema anterior, ¿Cuál será el valor de pH si concentración de ácido

láctico y la del lactato son iguales?
7. Calcule la relación de concentraciones existente entre acetato y ácido acético en

un sistema amortiguador a pH = 5,3
8. Complete la siguiente tabla:
Especie [H+] [OH-] pH pOH

NaOH 0,00056 M
HCl 12,5
HCl 6,9
NaOH 0,00023 M
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Ecuación principal de una recta.
Se le llama ecuación principal de una recta a toda expresión de forma:
y = mx + n o bien y = ax + b
OJO: cuando utilizan la calculadora, ésta entrega el resultado como y = bx + a
Donde m o b representa la pendiente de la recta y n o a es el coeficiente de posición y es

el número donde la recta corta al eje de las ordenadas (Y).
Fig. 1: Representación gráfica de la ecuación de la recta
Concepto de Recta
Una recta es la representación gráfica de una función de primer grado. Toda función de la
forma y = mx + n representa una línea recta.
La x y la y son las variables de la ecuación, siendo “x” la variable independiente ya que

puede tomar cualquier valor, mientras que “y” se llama variable dependiente, ya que su
valor está determinado por el valor que tome x.
Cada punto (x,y) que pertenece a una recta se puede representar en un sistema de
coordenadas, siendo x el valor de la abscisa e y el valor de la ordenada.
(x,y) = (Abscisa , Ordenada)
Ejemplo: El punto (-3,5) tiene por abscisa -3 y por ordenada 5.
14
Pendiente de una Recta
En la ecuación principal de la recta y = mx + n, el valor de m corresponde a la pendiente

de la recta y n es el coeficiente de posición.
La pendiente permite obtener el grado de inclinación que tiene una recta, mientras que el
coeficiente de posición señala el punto en que la recta interceptará al eje de las
ordenadas.
Ejemplo: La ecuación y = 4x + 7 tiene pendiente 4 y coeficiente de posición 7, lo que

indica que interceptará al eje y en el punto (0,7).
Cuando se tienen dos puntos cualesquiera (x1,y1) y (x2,y2), la pendiente queda

determinada por el cuociente entre la diferencia de las ordenadas de dos puntos de ella y
la diferencia de las abscisas de los mismos puntos, o sea
Una recta que es paralela al eje x, tiene pendiente 0.
Ejercicios:
1) Hallar y graficar la ecuación de la recta que pasa por el punto (-2,3) y tiene pendiente 2.
2) Determinar la pendiente y obtener la ecuación de la recta que pasa por los puntos (1,3),
(2,5) y graficar.
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Manual de uso de la calculadora (modelos Casio fx-82MS/83MS/85MS/270MS/300MS/350MS
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Laboratorio Nº2: Soluciones Amortiguadoras y Capacidad Amortiguadora
OBJETIVOS GENERALES:
Conocer el funcionamiento de las soluciones reguladoras.

Determinar la capacidad reguladora de una solución amortiguadora.
Graficar la curva de titulación de una solución amortiguadora.
INTRODUCCIÓN
Una solución amortiguadora (Buffer o Tampón) es capaz de resistir cambios

bruscos de pH, cuando pequeñas cantidades de ácido o base son agregadas a la
solución. Por ejemplo, cuando 0,01 moles de ácido fuerte o base fuerte son adicionadas a
agua destilada, el pH desciende a 2 con el ácido y aumenta a 12 con la base. Si la misma
cantidad de ácido o base son adicionados a una solución amortiguadora formada por
ácido acético – acetato de sodio, el pH no varía bruscamente y puede variar solamente en
una fracción de unidad.
La regulación del pH es importante en muchas reacciones químicas, como así
también en el control de procesos metabólicos dentro de nuestro organismo, para la
mantención de la homeostasis. Así encontramos que el pH de la sangre de nuestro
organismo se encuentra regulado a un valor constante de 7,4. Pequeñas variaciones de
dicho valor pueden causar enfermedades e incluso la muerte, debido a que afecta los
procesos bioquímicos que ocurren en dicho fluido.
Una solución amortiguadora requiere dos especies. Una que sea capaz de
reaccionar exclusivamente con ion hidroxilo (OH-) y la otra con ion hidronio (H3O+). Estas
soluciones se forman por la combinación de un ácido débil y una sal derivada de éste
(ácido acético/acetato de sodio) o por una base débil y una sal derivada de ésta
(amoniaco/cloruro de amonio).
Debido a que las soluciones amortiguadoras presentan efecto de ión común, es
posible aplicar la ecuación de Henderson – Hasselbalch con la finalidad de prepararlas.
Esta ecuación es utilizada para determinar el pH de la solución amortiguadora:
pH = pKa + log ( Base Conjugada (Sal))

(Ácido débil)
La Capacidad Amortiguadora ( ) es una medida de la resistencia a los cambios

de pH de una solución amortiguadora cuando un ácido o una base son agregados a ésta.
Este parámetro es expresado como los moles de ácido o base necesarios para cambiar el
pH de un litro de una solución reguladora en una unidad. Mientras más grande el valor de
β, mayor la resistencia de la solución amortiguadora a cambios de pH.
β = (moles adicionados de OH- ó H3O+)

(Cambio de pH) (Volumen de buffer en L)
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ACTIVIDADES
En esta experiencia se estudiará la capacidad amortiguadora del buffer acetato, cuyo

comportamiento está dado por el siguiente equilibrio:
-5
CH 3COOH CH 3COO H Ka 1,75x10
1. Mediante la ecuación de Henderson – Hasselbalch, calcular la cantidad de base
conjugada necesaria para preparar 50 mL de buffer acetato a pH 5,0, conociendo la
concentración del ácido débil:
Grupo I. 0,10 M de ácido acético.

Grupo II. 0,25 M de ácido acético
Grupo III. 0,50 M de ácido acético
1. El resultado debe ser incluido en el informe.
Materiales, reactivos y equipos:
- pH metro
- Bureta 50 mL
- Pinza para bureta
- Soporte universal
- Vaso de precipitado 50 mL, 250mL
- Piseta
- Agua destilada
- NaOH (0.1 M)
-Solución buffer (ácido acético/acetato)
-Glicina
-HCl
Determinación de capacidad amortiguadora de buffer acetato
Procedimiento:
1. El pH-metro se encontrará previamente calibrado. Debe seguir las instrucciones del
profesor para el uso y limpieza de este equipo.
2. Usted encontrará en el mesón el material a utilizar, ya preparado e instalado. La

bureta contiene 50 mL de NaOH y el vaso precipitado contiene 50mL de la solución
buffer. Medir el pH inicial de la solución buffer preparada.
3. Adicionar alícuotas de 5mL de NaOH a la solución buffer. Medir y anotar en la tabla el

pH y el volumen agregado después de cada adición de NaOH. Continuar hasta
adicionar 100 mL de solución de NaOH.
4. Completar Tabla I y graficar pH versus moles de NaOH adicionados.
5. Una vez terminado el práctico TODO el material debe ser lavado y el laboratorio
debe quedar limpio y ordenado.
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Tabla I
Volumen Volumen moles Cambio de pH Capacidad

Buffer (L) NaOH (L) NaOH* pH pH final – pH Inicial Reguladora,
*Molaridad= moles
Volumen de solución e
Determinación de curva de titulación del aminoácido glicina
En esta experiencia se estudiará la capacidad amortiguadora del aminoácido Glicina

que en solución funciona como un ácido débil diprótico cuyo comportamiento está dado por
el equilibrio:
19
Procedimiento:
1. Llenar una bureta con 50 mL de solución de NaOH, otra con 50 mL de HCl

y 2 vasos de precipitado con 50 mL de Glicina.
2. Medir el pH de la solución amortiguadora preparada (Glicina)

.
3. Adicionar alícuotas de 5mL de NaOH y/o HCl a la solución de glicina .
4. Medir y anotar en la tabla II el pH y el volumen agregado después de cada

adición. Continuar hasta adicionar 100 mL de solución de NaOH y/o HCl.
5. Completar Tabla II y graficar pH versus moles de NaOH /yo HCl

adicionados.
6. Explicar cada punto de inflexión de la curva obtenida.
Tabla II
V. Soln. V. NaOH (L) Moles OH- pH Cambio de pH
Glicina (L) pH final – pH Inicial
V. Soln. V. HCl (L) Moles H+ pH Cambio de pH

Glicina (L) pH final – pH Inicial
20
Cuestionario
1.- a.- Defina los conceptos de Ka, Kb y Kw.

b.- Demuestre matemáticamente (fundamente) cómo se obtiene el valor de Kw.
2.- ¿Cuál es el pH que tiene una solución amortiguadora formada por CH3COOH (0,2
M)/CH3COO-(0,7 M)? ¿Cuál es el pH final si a 50 mL de esta solución se le agregan 10
mL de NaOH 0,1 M? (Ka CH3COOH= 1,8 *10-5).
3.- Suponga que quiere conseguir un tampón de un pH exactamente 7.00 utilizando

KH2PO4 y Na2HPO4. Si tiene una solución de KH2PO4 0.1 M, ¿qué concentración de
Na2PO4 necesitaría?
4.- Describa la curva de titulación característica para los aminoácidos alanina e histidina.
21
Laboratorio Nº 3: Reconocimiento y cuantificación de las proteínas
INTRODUCCIÓN
Todas las estructuras celulares están formadas por proteínas y prácticamente

todas las funciones celulares son realizadas por proteínas. Las enzimas, los
transportadores, los anticuerpos, los receptores, los elementos del citoesqueleto, etc, son
proteínas. Aparte de sus funciones específicas, las proteínas participan en la regulación
del equilibrio osmótico y tienen capacidad tamponante o reguladora del pH.
Existen variados métodos para reconocer y cuantificar proteínas, siendo los

métodos colorimétricos los más utilizados actualmente. La determinación colorimétrica
cuantitativa de una sustancia se basa en la capacidad de ésta para absorber
selectivamente ciertas longitudes de onda de la luz incidente. La cantidad de luz
absorbida es directamente proporcional al espesor del medio y a la concentración de la
sustancia presente. De esta manera, si se mantiene constante el espesor del medio, la
absorción de luz por una sustancia disuelta en un medio transparente (Ej. agua) será
proporcional a su concentración molar.
Estos principios están contenidos en las leyes de Lambert–Beer y están

expresadas en la siguiente ecuación:
A= εcl ó log Io/ I = ε c l
donde A es la Densidad Óptica o Absorbancia de la sustancia, ε es el coeficiente

de extinción molar, c es la concentración e l es el espesor de la celda, siendo éste último
igual a 1 cm. El coeficiente ε se expresa en litros/M cm y es numéricamente igual a la A
de una solución 1M (1 Molar) de concentración.
Si la solución de un analito sigue la ley de Lambert-Beer, presenta una relación

lineal entre A y concentración. Por otro lado si la relación entre A y concentración es
lineal para dos soluciones de la misma sustancia a igual espesor y longitud de onda,
entonces se puede usar una de ellas de concentración conocida (estándar) para
determinar la concentración de la otra solución.
En la práctica para determinar espectrofotométricamente la concentración de una

sustancia se requiere: a) un estándar (Solución de concentración conocida), en un rango
de concentración que muestre absorción lineal y que permita expresar la concentración en
A por unidad de masa o concentración. b) un blanco que contiene todos los componentes
del ensayo con excepción de la sustancia a medir y c) la muestra con la sustancia
problema a una dilución tal que su lectura de A este en el rango lineal de la curva de
calibración
22
OBJETIVOS
Una vez desarrollada esta actividad práctica, conocerán algunos métodos de

reconocimiento y cuantificación colorimétrica de las proteínas y sus fundamentos teóricos.
ACTIVIDADES
1. Reconocimiento de proteínas 280nm

2. Reconocimiento de proteínas plasmáticas a 540 nm, utilizando el método de Biuret
El plasma sanguíneo tiene un contenido de proteínas de aproximadamente 7g/100 mL

(g/dl), de los cuales aproximadamente 4g corresponden a albúmina y el resto está
constituido por anticuerpos, factores de coagulación, apoproteínas de las lipoproteínas,
enzimas proteicas, etc. Este contenido de proteínas puede variar de acuerdo a las
condiciones nutricionales o el estado de salud del individuo.
Reactivos y Soluciones
-Solución NaCl 0.9 % p/v

-Plasma diluido 1/20 v/v con NaCl 0.9 % p/v
-Solución estándar de seroalbúmina de Bovino (SAB) 5 mg/mL en NaCl 0.9 % p/v
-Reactivo de Biuret
Materiales y equipos
-Espectrofotómetro UV- Visible

-Cubetas de cuarzo y de plástico
-Tubos de ensayo de 10 mL
-Gradillas
-Pipetas de 1, 5 y 10 mL
-Baño termorregulado a 50°C
Procedimiento:
a) Reconocimiento por absorbancia a 280 nm de luz ultravioleta (UV).
Las proteínas absorben luz ultravioleta a 280 nm, longitud de onda a la que
absorben los aminoácidos aromáticos (triptofano, tirosina y fenilalanina) de las proteínas,
especialmente el grupo indol de triptofano. Esta propiedad se puede aprovechar para
reconocer la presencia de proteínas.
En esta actividad debe adicionar en 3 tubos de ensayo volúmenes de plasma

diluido 1: 20 con suero fisiológico, una solución de SAB 5 mg/mL y una solución de NaCl
0.9 % p/v, como se indica en la siguiente tabla:
23
Tubos 1 2 3
Na Cl 0,9 % p/v - - 3 mL
SAB 5 mg/mL - 3 mL -
Plasma diluido 3 mL - -
Luego leer absorbancia en el espectrofotómetro a 280 nm (UV) en cubetas de cuarzo.
Comparar resultados y discutir la utilización de tubos con SAB y con la solución de NaCl.
b.- Reconocimiento por absorbancia a 540 nm (reactivo de Biuret)
Este método se basa en la formación de un complejo coloreado entre el ión Cu+2 del reactivo
y los nitrógenos amídicos del enlace peptídico. Por lo tanto este reactivo reconoce
específicamente la presencia de enlaces peptídicos. Se utiliza como blanco el reactivo de
Biuret a la misma concentración de los tubos muestra y estándar.
En esta actividad debe adicionar los volúmenes correspondientes de plasma diluido 1:20 con
NaCl 0.9 % p/v y solución de SAB 5 mg/mL a los tubos de ensayo de acuerdo a la siuiente
tabla:
Tubos 1 2 3 4 5 6 7
NaCl 0.9% p/v - 1,8 1,5 1,0 0,5 - 2,0
SAB 5 mg/mL - 0,2 0,5 1,0 1,5 2,0 -
Plasma diluido 2,0 - - - - - -
Reactivo de Biuret 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0
Mezclar bien, sin agitar y leer después de 30 minutos a 540 nm en cubetas de

plástico. Se puede calentar en baño a 50ºC por 5 minutos y leer después de enfriar en
agua corriente.
Anotar los valores obtenidos de absorbancia y calcular absorbancia corregida (Amuestra –

Ablanco). Calcule la concentración total de proteínas del plasma en g/dL utilizando la
siguiente ecuación: Cm= Am (Cest), luego multiplicar Cm por el factor de dilución, donde:
Aest
Cm =concentración de la muestra
Am =absorbancia de la muestra
Cest =concentración del estándar
Aest =absorbancia del estándar
Factor de dilución = 20 (plasma diluido 1/20)
Valores de referencia= 6,0 g/dL – 8,3 g/dL
24
Cuestionario
1.- Explique a lo menos tres métodos de aislamiento y purificación de proteínas.
2.- ¿Existe posibilidad de que otros compuesto sean reconocidos por el reactivo de
Biuret?, de ser así, ¿Cómo se alterarían los resultados obtenidos?
3.- ¿Qué sucede si una muestra no puede ser leída por el espectrofotómetro
debido a que se sale de escala de medición del espectrofotómetro? ¿Qué haría en
ese caso?
4.- ¿Cómo determinaría usted la concentración de hemoglobina de una muestra

de sangre?.
25
Laboratorio Nº 4: Enzimología
INTRODUCCIÓN
Las enzimas son biocatalizadores esenciales para mantener los procesos

metabólicos a velocidades compatibles con la vida, contribuyendo además a su
regulación. Estas trabajan y son activas a una temperatura y pH óptimos. Además debido
a su naturaleza proteica las enzimas pueden modificar su actividad por cambios de
temperatura y pH, factores que pueden alterar su estructura molecular, provocando su
desnaturalización.
En general una reacción química aumenta su velocidad de reacción al aumentar la
temperatura, pero en el caso de las reacciones catalizadas por enzimas (en Humanos),
este efecto se observa sólo entre 35 y 40 ºC, ya que a temperaturas mayores la enzima
se desnaturaliza debido a la ruptura de enlaces débiles, principalmente puentes de
hidrógeno y la pérdida de su conformación nativa. Existen otros casos, por ejemplo las
bacterias termófilas, en las cuales las enzimas pueden funcionar hasta 100° C.
Debido a la naturaleza proteína de las enzimas, éstas presentan numerosos
grupos ionizables, los que derivan de los radicales de sus aminoácidos constituyentes.
Las alteraciones del pH pueden cambiar el grado de ionización de los grupos químicos
involucrados en el sitio activo de la enzima, afectando su actividad catalítica. Éstas son
activas en un rango estrecho de pH, por lo que la actividad enzimática se mide en
presencia de tampones o amortiguadores de pH.
OBJETIVOS
1. Conocer procedimientos para la determinación de la actividad enzimática en

muestras biológicas.
2. Estudiar el efecto de las variaciones de pH y temperatura sobre la actividad

de la amilasa salival.
ACTIVIDADES
La amilasa salival es una enzima que rompe específicamente los enlaces

glucosídicos α 1-4 de los polisacáridos. La hidrólisis del almidón por amilasa salival da
como producto una mezcla de maltosa, maltotriosa (dextrinas) y glucosa.
El almidón es un polisacárido formado por 2 tipos de cadena: amilasa (lineal), que
presenta sólo enlaces α 1-4 y amilopectina (ramificada), con enlaces α 1-4 y α 1-6.
La prueba de lugol es una reacción química que permite el reconocimiento de
carbohidratos (polisacáridos) como el almidón, el cual se reconoce químicamente por el
color azul intenso que desarrolla en presencia de yodo, por lo que la hidrólisis enzimática
del almidón se puede determinar por la pérdida del color azul de una mezcla de reacción.
26
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS:
-Tubos de ensayo
-Pipetas de 2 mL y 5 mL
-Preparación enzimática: Lavado bucal con agua destilada
-Tampón fosfato 0.1 M, pH 5.0, pH 7.0 y pH 9
-Cloruro de sodio 0.03 M
-Almidón 1% p/v
-Lugol
-Baño termoregulado y de agua hirviendo
PROCEDIMIENTO
A. Efecto de la temperatura sobre la hidrólisis enzimática del almidón
En tubos de ensayo adicionar los volúmenes de reactivos correspondientes, como se indica en

la tabla:
Tubos 1 2 3 4 5
NaCl 0.9% p/v 1ml 1ml 1ml 1ml 3ml
Tampón fosfato pH 7.0 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
Alimidon 1% p/v 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
Preparación enzimática 2ml 2ml 2ml 2ml -
Incubar a (15 min) 0°C 100°C 25°C 37°C 37°C
Luego de los 15 minutos agregar 2 a 3 gotas de lugol, mezclar y observar. Anotar y discutir sus
resultados.
B. Efecto del pH sobre la actividad de la amilasa salival
En tubos de ensayo adicionar los volúmenes de reactivos correspondientes, como se indica en

la tabla:
Tubos 1 2 3 4
NaCl 0.9% p/v 1ml 1ml 1ml 1ml
Tampón fosfato (1ml) pH5 pH7 pH9 pH9
Almidón 1% p/v 2ml 2ml 2ml 2ml
Preparación enzimática 2ml 2ml 2ml -
Mezclar e incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos. Luego adicionar una gota de
lugol y mezclar. Observar, anotar y discutir sus resultados.
*Tanto en el estudio de la temperatura como en el de pH debe relacionar su resultado

con la actividad enzimática de la enzima amilasa salival.
27
Cuestionario
1.- Almidón y celulosa son dos polímeros de D-Glucosa, indique la razón por la cual la
celulosa no puede ser degradada por los humanos durante la digestión y sí puede ser
degrada por los rumiantes.
2.- A nivel teórico, explique el efecto de la temperatura sobre la actividad biológica de una
enzima.
3.- Indique el nombre y modo de acción de 3 agentes químicos denaturantes de

proteínas. (fundamente)
28
Laboratorio Nº 5: Determinación enzimática de urea en orina
INTRODUCCIÓN
La urea constituye la fracción de nitrógeno no proteico más importante en la

mayoría de los líquidos biológicos. En el hombre es el principal producto final del
metabolismo proteico. Se produce en el hígado y es excretada por la orina a través de
los riñones.
La elevación de la urea sérica y en orina es producto de trastornos en la función
renal o hepática. Sin embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que las variaciones
de la concentración de urea se encuentran íntimamente relacionados con la dieta y el
metabolismo proteico, también con problemas dietéticos, diabetes y otros.
OBJETIVOS:
• Determinar la concentración de urea presente en una muestra de orina

• Establecer los valores de referencia de la urea y comparar con el valor de
la muestra problema a analizar.
• Identificar las principales patologías que se presentan al tener altos o bajos
valores de urea en una muestra de orina
MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
-Tubos de ensayo
-Gradillas
-Pipetas con agua destilada
-Micropipeta
-Puntas de micropioetas
-Baño termorregulado 37°C
-Espectrofotómetro
-Cubetas de cuarzo
-Muestra de orina diluida 1:100 con agua destilada.
-*Kit para Determinación de Urea en orina

Solución estándar (Urea 80 mg/dl Eq. a BUN 37,28 mg/dl, Azida de sodio)
A.- Solución de estándar (0.01ml de solución estándar)
B.- Dilución del estándar (0.01ml de solución estándar + 0.01ml de agua destilada)
C.- Dilución del estándar (0.01ml de solución B + 0.01ml de agua destilada)
Reactivo de trabajo (R1 + Enzima):

R1: Buffer fosfato (pH 7,0) 120 mmol/l Salicilato de sodio 60 mmol/l Nitroprusiato de
sodio 5 mmol/l EDTA
Enzima: Ureasa > 500 kU/l
Reactivo de hipoclorito:
R2: Buffer fosfatos (pH < 13) 120 mmol/l Hipoclorito ≈ 0,6 g/l Cl
29
ACTIVIDADES
La urea se hidroliza por acción de la ureasa en presencia de agua para producir

amoníaco y dióxido de carbono. En una reacción de Berthelot modificada, los iones de
amonio reaccionan con hipoclorito y salicilato en ambiente alcalino para formar un
complejo verde. La intensidad del color producido es directamente proporcional a la
cantidad de urea presente en la muestra, y su absorbancia se lee a 600 nm. (580-620).
La urea presente en la muestra, es desdoblada a amonio por acción de la enzima

ureasa, según la proposición de Faucet y Scott.
PROCEDIMIENTO
Determinación de Urea en orina
-Leer las absorbancias a 600 nm dentro del plazo de 1 hr.
-Anotar los valores de absorbancia y calcular absorbancia corregida (Am - Ab).
-Con los valores de absorbancia corregida construir la curva estándar y a partir de la

gráfica determinar la concentración de urea en orina en mg/dl.
- Calcular la concentración de urea en la muestra a partir de la siguiente fórmula:

*Cm = Am x Ce x Factor dilución muestra
Ae
-A partir de los valores de referencia Identificar las principales patologías que se

presentan en la muestra de orina.
30
*Cm= Concentración de la muestra

Am= Absorbancia corregida de la muestra
Ae= Absorbancia corregida del estandar (80mg/dl)
Ce= Concentración del estandar
Factor de dilución= 100 (dilución 1/100)
RANGOS DE REFERENCIA
Suero o plasma:
Urea: 10 a 50 mg/dl
Orina:
Urea: 15 a 30 g/dl
31

Manual Laboratorio B005 2018

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Departamento de Ciencias Básicas

Guía Laboratorios Bioquímica

Última actualización: Marzo, 2018

REGLAS DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL

Se realizarán un total de 5 actividades por cada sección de práctico, según se indica:

o Actividades prácticas. Se realizará un total de 4 actividades prácticas en modalidad

La asistencia al laboratorio es de un 100%.

Los estudiantes NO pueden asistir a un grupo de laboratorio diferente al asignado

Se realizarán 6 quizzes de entrada, 5 informes de laboratorio y 1 seminario. Los

Presentación personal y conducta de laboratorio:

El estudiante debe presentarse:

1. Puntualmente a la actividad. En el caso de llegar atrasado, podrá ingresar al

En el laboratorio sólo se permitirá el uso de cuaderno, lápices, calculadora, guías y libros

El estudiante debe evitar situaciones de riesgo, como correr y jugar en el laboratorio.

En el transcurso del práctico está PROHIBIDO el uso de aparatos de audio, teléfonos

Pauta para la elaboración de informes de laboratorio

Se debe entregar en el plazo previamente fijado, es decir, una semana después de

Deben constituir relatos fluidos, impersonales y objetivos acerca de la actividad

Las abreviaturas de unidades de medida (volumen, superficie y otras) NO son seguidas

Los informes deberán constar de las siguientes secciones:

1. En la primera página o portada:

2. Introducción (5,0 puntos) y objetivos (2,0 puntos)

3. Materiales y Métodos (5,0 puntos)

Se detallará entre paréntesis, la composición y concentración de reactivos y tampones

La sección materiales y métodos NO ES una lista de materiales, instrumentos y reactivos

Si una solución de un reactivo determinado se agregó con una micropipeta de marca X y

En caso de haber efectuado experimentos, es fundamental detallar los controles positivos

4. Resultados (5,0 puntos)

Puesto que el espacio es limitado, NO DEBE REPETIRSE la información en tablas y

5. Discusión (5,0 puntos)

Este es el capítulo MÁS IMPORTANTE del informe. La primera frase de la discusión es

6. Referencias o Literatura Citada (3,0 puntos)

Las citas en el texto, pueden hacerse a través de números consecutivos, de acuerdo al

-Para un capítulo de libro:

Granéli, E. y P. Carlsson. 1998. The ecological significance of phagotrophy in

- Para un libro completo:

- Para un resumen (“abstract”) de un trabajo, aparecido en las Actas de algún congreso:

El pH es una medida de la acidez o basicidad de una solución. También se puede describir

El pOH es el -log de la concentración de iones hidroxilo [OH-] y al igual que el pH permite

En solución acuosa, la escala de pH varía, de 0 a 14. Si en una solución el pH = 7,0, se

Para el cálculo de la concentración de hidrogeniones o hidroxilo se considera Antilog ≠ -Log

Si p = -log X, para despejar X se debe aplicar la función antilog (shift log)

Ejercicios: Calcular pH, pOH, [H+], [OH ], según corresponda:

a) NaOH = 0,0070M c) pH = 4,6

b) HCl = 0,0035M d) pOH = 5,0

1.2 Soluciones Buffers o amortiguadoras:

Arrehenius en 1887 postuló que hay sustancias, que en disolución, se disocian en

Sin embargo, esta teoría es válida solo en soluciones acuosas.

Disociación de una base:

Los ácidos y bases también se clasifican en fuertes y débiles:

La ecuación de Henderson-Hasselbalch es utilizada para determinar el pH en

Si representamos a un ácido débil por AH y su base conjugada por A -, su disociación será

Para un ácido AH con disociación parcial. El equilibrio es:

Para calcular pH en una solución buffer o amortiguadora se utiliza la siguiente ecuación

AH= ácido A- = Sal o base conjugada

Ejercicios: Determinar el pH y el pOH de una solución de:

a) 10 gramos de NaOH en 1,25 L b) 200 mg de HCl en 500 mL

La siguiente tabla indica los valores de pKa y Ka de diferentes disoluciones:

3. Calcular el pH y pOH de una solución de NaOH 0,001M

5. Determinar el pH 100 mL de buffer lactato, donde la concentración de ácido láctico

6. En el problema anterior, ¿Cuál será el valor de pH si concentración de ácido

7. Calcule la relación de concentraciones existente entre acetato y ácido acético en

8. Complete la siguiente tabla:

Especie [H+] [OH-] pH pOH