- EXPLICAR EL MECANISMO DE CATÁLISIS DE LA LISOZIMA CON GLU 50 Y ASP 35

Los únicos grupos funcionales en la vecindad inmediata del centro reactivo de la lisozima
que tienen las propiedades catalíticas requeridas son las cadenas laterales de Glu 35 y Asp 35.
Estas cadenas laterales, dispuestas a ambos lados del enlace glicosídicos que se desea escindir,
tienen entornos con diferencias marcadas.
Asp 52 tiene un pK normal; esto es, no debería estar protonado, y por lo tanto tener carga
negativa en el rango de pH de 3 a 8 para el cual la lisozima tiene actividad catalítica. Por ende,
Asp 52 puede actuar en la estabilización electrostática de un ión oxonio.
Por el contrario, el grupo carboxilo de Glu 35 se anida en un bolsillo con predominio no polar,
donde es probable que se mantenga protonado con valores de pH inusualmente elevados de los
grupos carboxilo. Por lo tanto, este residuo puede actuar como catalizador acido. En los estudios
en lo que se utilizaron reactivos modificadores de proteínas y muta génesis dirigida a sitio (p. ej.
En los que se modifican Asp 52 a Asn y Glu 35 a Gln) se verifico la importancia catalítica de estos
residuos.
La reacción de la lisozima procede por medio de un intermediario covalente. Según la propuesta
de Phillips, en el mecanismo de lisozima se incluye la catálisis acida por Glu 35 y la estabilización
de un intermediario de ion oxonio por el grupo carboxilato de Asp 52. La formación de un enlace
covalente entre el oxígeno de carboxilato de Asp 52 y Cl del residuo D del sustrato no parecía
posible, debido a que estos átomos están separados por -3 A (la longitud del enlace covalente C
–O es de -1,4 A). Sij embargo, en la investigación más reciente se revelo que, de hecho, la
reacción de lisozima tiene lugar a través de un intermediario covalente. La reacción comienza
cuando la lisozima se une a una pared celular bacteriana, por unión a una unidad de
hexasacárido. Esto distorsiona el residuo D para adoptar la conformación de semisilla. El resto
del mecanismo catalítico se produce como sigue (fig. 11-21):
1.- Glu 35 transfiere su protón a O1 del anillo D (un ejemplo de catálisis acida). Este paso
comprende un estado de transición de ion oxonio estabilizado por resonancia, cuya formación se
facilita por la tensión en el anillo D que lo distorsiona para dar la forma de semisilla en la que C1,
C2, C5 y O5 son coplanares (catálisis por el enlace preferencial del estado de transición).
2.- El grupo carboxilato de Asp 52 que actúa como un nucleófilo ataca el C1 ahora reducido del
anillo D para formar un intermediario glucosilo-enzima (catálisis covalente).
3.- Después de la extracción del grupo que se elimina que contiene el anillo E, entra agua en el
sitio activo para hidrolizar el enlace covalente y regenerar los grupo del sitio activo con la ayuda
de Glu 35 (catálisis general básica).
4.- La enzima luego libera el producto del anillo D, para completar la reacción catalítica.
El mecanismo de doble desplazamiento diagramado en la figura 11-21 érmite que la molecula ingresante
de agua se una a la misma cara del residuo D que el residuo E al que reemplaza. En consecuencia, se
mantiene la configuración del residuo D. una sola reacción de desplazamiento, en la que el agua desplaza
directamente el grupo que se elimina, invierte la configuración en C1 del anillo D entre el sustrato y el
producto, un resultado que no se observa

BIBLIOGRAFIA:
Donald Voet, Judith G. Voet, Charlotte W. Pratt. Fundamentos De Bioquímica. Página 336-337,
Capitulo 11, Catálisis enzimática.2007