Preguntas Seminario 3

SEMINARIO ENZIMAS

1.- Mencione algunas diferencias entre un catalizador inorgánico y un catalizador

biológico (enzima)

CI: son sencillas, por ej metales. No se ven afectados por cambios en el ambiente
como el pH, amplio espectro
CB: se ven afectados por los parámetros ambientales como el pH, algunas
requieren un cofactor, pueden ser activados o inhibidos, en su mayoría de origen
proteico

2.- Identifique en una curva de Michaelis-Menten los parámetros Km y Vmax.

Qué representa cada uno de ellos?

Km es un parámetro de afinidad de la enzima por el sustrato. Corresponde a la

conc de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la Vmax cuando la enzima esta
saturada, por lo tanto mientras mas pequeño este valor mayor sera la afinidad de
la enzima por el sustrato

3.- Defina y explique qué es el número de recambio de una enzima

se define como la cantidad de substrato transformado en la unidad de tiempo por

una cantidad dada de enzima, por ej. la catalasa hidroliza 5,6 * 10 6 moléculas de
H2 O2 por molécula de enzima por minuto, por lo que su número de recambio es
5,6 * 106

4.- Explique el mecanismo de acción general de una enzima (su funcionamiento),

respecto a la reacción química que cataliza, en términos de la Energía Libre de la
reacción.

Las enzimas aumentan la velocidad de reaccion sin alterar el equilibrio de esta

Disminuyen la entropía de los sustratos, por lo que aumentan las colisiones
efectivas
Las enzimas reemplazan todos (o casi todos) los puentes de H que el sustrato
forma con el agua, por lo que provee de energía para alcanzar más fácilmente la
Ea

5.- Defina sitio activo de una enzima.

zona o surco que comparte cierta complementariedad tridimensional con el

sustrato. En este surco existe complementariedad de cargas o de densidades de
carga, con el sustrato; lo cual depende de los aminoácidos que queden en esa
zona que, a su vez corresponderá, en últimas instancia, a la estructura primaria de
la proteína.

· Características del sitio activo:

1. Responde a una porción relativamente pequeña del volumen total de la
enzima.
2. Es una entidad tridimensional.
3. Los sustratos se unen a las enzimas por numerosas fuerzas débiles.
4. Presentan forma de surco o hendidura
5. La especificidad depende de la disposición exactamente definida de los
átomos del centro activo.

6.- Defina los siguientes conceptos:

Holoenzima: enzima unida a su cofactor o coenzima.

Apoenzima: sólo la parte proteica.
Cofactor: iones inorganicos unidos a las enzimas
Coenzima: complejos orgánicos unidos a las enzimas
Enzima alostérica: se regulan por la unión reversible y no covalente de un
modulador alostérico. puede ser un metabolito o un cofactor.

en la mayoria de las enzimas alostericas el sitio de

union del modulador es distinto al sitio de union del
sustrato.

7.- Que es un inhibidor enzimático?. Mencione y describa tres tipos de inhibición

enzimática.

Los Inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y disminuyen

su actividad. Hay 2 tipos de inhibiciones, reversibles e irreversibles.
I.Reversibles:
1. Competitiva: El Inh se une al sitio activo, compite con el sustrato,
aumentando la Km sin modificar la velocidad máxima de la reaccion

2. Acompetitiva: el inh. Se une a un sitio diferente al sitio activo, disminuyendo

tanto la Vmax como la Km
 3. No competitiva o mixta: el inh se une a un sitio contiguo al sitio activo,
disminuyendo Vmax y aumentando Km

8.- El alopurinol es utilizado en el tratamiento de la gota, patología asociada al

metabolismos de las purinas, y su mecanismos de acción está asociado a la
inhibición de cierta enzima . Averigue la enzima blanco y el mecanismo de
inhibición.

El allopurinol es un isómero de la hipoxantina (una purina que

se encuentra de forma natural en el cuerpo) y un inhibidor
enzimático de la xantina oxidasa. La xantina oxidasa es la
enzima implicada en la oxidación de la xantina e hipoxantina
dando lugar a ácido úrico, el compuesto final producido
mediante el metabolismo humano de las purinas. La
inhibición de la producción del ácido úrico mediante
inhibición de la xantina oxidasa también ocasiona unos
mayores niveles de xantina e hipoxantina, que se convierten
 en los ribonucleótidos de purina
denominados guanosina y adenosina monofosfato. Estos
ribonucleótidos inhiben la amidofosforribosil transferasa, la
enzima inicial de la biosíntesis de las purinas y elemento
limitante en la velocidad de la ruta. Por todo esto, el
alopurinol disminuye la formación de ácido úrico y de purinas.

9.- Describa el mecanismo de acción de la aspirina (acido acetilsalisilico) y viagra

(sildenafil citrato).

ASPIRINA
Bloquea la producción periférica de prostaglandinas, especialmente las E 1, F2 alfa responsables del
dolor y los tromboxanos Tx, al inhibir la enzima ciclooxigenasa (prostaglandinsintetasa PGSH).
Vía enzimática COX1 se producen PGs citoprotectoras y de las COX2 las PGs proinflamatorias.
La aspirina a bajas dosis se comporta como un inhibidor selectivo de la COX 1 y a elevadas dosis
como inhibidor no selectivo de la COX.
Inhibe las endoperoxidasas, enzimas encargadas de continuar la cascada del ácido araquidónico,
fuente de las distintas prostaglandinas como los tromboxanos y las prostaciclinas.
Facilita la actividad de las prostaciclinas PI que son antiagregantes plaquetarios.
Reanuda la permeabilidad capilar modificada por la histamina y la serotonina, bloquea el efecto
agregante plaquetario de los tromboxanos A2 y estimula la vasodilatación por la liberación de óxido
nítrico.

Mecanismo de Acción Mecanismo de Acción

Inhibición de la síntesis de: Inhibición:
PG's  Del sistema del complemento.
   Leucotrienos (LTs)  De la agregación plaquetaria.
 Histamina  De la elastasa.
 Mucopolisacarídos .
 Mecanismo de Acción
Prevención de la acumulación leucocitaria.
   Estabilización de membranas lisosomales.
 Acción central.
 Desacoplamiento de la fosforilación oxidativa.

Mecanismo de Acción
 Barredora de radicale libres.
 Disminución del baño tisular por acción sobre el
metabolismo del hueso y cartílago.
 Bloqueo de receptores periféricos de PGs.
 Antagonismo de las cininas.

Estabiliza las membranas de los lisosomas, puede impulsar la producción de glucocorticoides.

Bloquea la formación de tromboxanos, por lo que disminuye la formación de trombos con
predisposición a infarto. También provoca analgesia, antipiresis y reduce la inflamación.
Muchas células sintetizan nuevamente ciclooxigenasa pero las plaquetas no.
Se acepta que los AINS y entre ellos la aspirina pueden inhibir la síntesis de leucotrienos, de
histamina; antagonizar o desplazar de sus receptores a las cininas; barrer los radicales libres;
inhibir el sistema de complemento, la agregación plaquetaria, la elastasa, el sistema de
complemento.
La diversidad en el efecto farmacológico de los diferentes Ains se explica en gran parte por la COX
inhibida y por la preferencia o especificidad de los AINS por las COX.
VIAGRA

Gran parte del proceso fisiológico de la erección peneana involucra al Sistema Nervioso
Parasimpático y produce liberación de óxido nítrico (ON) en el cuerpo cavernoso del pene.
El oxído nítrico se une a los receptores de la enzima guanilato ciclasa, lo que deriva en
niveles aumentados de monofosfato de guanosina cíclica (cGMP). Esta molécula lleva a
una relajación muscular suave, denominada vasodilatación del cuerpo cavernoso. Esta
vasodilatación permite la mayor afluencia de sangre y consecuentemente se produce
erección.
El Sildenafil (conocido popularmente como Viagra) es un potente y selectivo inhibidor
específico de la fosfodiesterasa tipo 5 (PDE5) que es responsable de la degradación del
cGMP en el cuerpo cavernoso.
La estructura molecular del Sildenafil es similar a la del cGMP (por favor vea, la
estructura del Sildenafil en el artículo Citrato de Sildenafil (Viagra): generalidades)
y actúa como un agente competitivo de unión del PDE5 en el cuerpo cavernoso,
resultando en más CGMP y mejores erecciones.
Sin estimulación sexual y por ende la falta de activación del sistema óxido nítrico/cGMP,
el Sildenafil no produce erección.
Parte del proceso fisiológico de la erección incluye
al sistema nervioso parasimpático causando la liberación
de óxido nítrico (NO) en el cuerpo cavernoso del pene. El NO
se une a los receptores de la enzima guanilato ciclasa, lo que
deriva en niveles aumentados de guanosín monofosfato
cíclico (GMPc), llevando a una relajación del músculo liso del
cuerpo cavernoso, mediante vasodilatación de las arterias
helicinas del interior del pene. La vasodilatación incrementa
el flujo de sangre en el interior del pene, causando así la
erección.16 Robert F. Furchgott ganó el Premio Nobel de
Fisiología y Medicina en 1998 por el descubrimiento y el
análisis del factor de relajación derivado
del endotelio (EDRF en siglas en inglés: endothelium-
derived relaxing factor), que posteriormente fue identificado
comoóxido nítrico o algún otro compuesto relacionado muy
cercano.
El sildenafilo es un potente y selectivo inhibidor específico de
la fosfodiesterasa tipo 5 (PDE5) que es responsable de la
degradación del cGMP en el cuerpo cavernoso. La estructura
molecular del sildenafilo es similar a la del cGMP
compitiendo por la unión de éste a PDE5. El resultado es que
el cGMP permanece más tiempo en el interior del pene,
produciéndose erecciones más potentes y mantenidas. Los
principios activos como el tadalafilo (Cialis®) y
el vardenafilo(Levitra®) actúan siguiendo el mismo
mecanismo. Sin estimulación sexual, y por ende, en ausencia
de activación del sistema NO/cGMP, estos fármacos no
causan una erección.
El sildenafilo es metabolizado por las enzimas hepáticas y
excretado tanto por el hígado como por los riñones. Tomado
con una dieta altamente grasa, su tiempo de absorción se
reduce en más de una hora y su concentración máxima en
el plasma sanguíneo se reduce en dos terceras partes,
disminuyendo considerablemente por tanto sus efectos.

10.- Comente brevemente el mecanismo de acción de las enzimas del tipo beta-
lactamasas.

Una betalactamasa (a veces usado con el guion: beta-

lactamasa) es una enzima (EC 3.5.2.6 ) producida por
algunas bacterias y es responsable por laresistencia que
éstas exhiben ante la acción de antibióticos
betalactámicos como las penicilinas, las cefalosporinas,
monobactamicos y carbapenémicos (carbapenemasas). Todos
estos antibióticos tienen un elemento en común dentro de su
estructura molecular denominado anillo betalactámico, un
anillo químico de cuatro átomos. Las lactamasas rompen el
anillo, desactivando las propiedades antimicrobianas de la
molécula. Las betalactamasas por lo general son producidas
por bacterias Gram positivas en forma secretada. Por lo
general, las cepas resistentes a la penicilina se relaciona
directamente con el porcentaje de cepas productoras de
betalactamasa.1
Es el mecanismo de resistencia a los β-lactámicos más
importante en las enterobacterias y otros bacilos
gramnegativos. Las β-lactamasas pueden ser cromosómicas o
plasmídicas.

Las betalactamasas destruyen el anillo betalactámico mediante dos

mecanismos de acción principales. En primer lugar, las enzimas
poseen un mecanismo de acción que radica en la serina. Se
dividen en 34 clases (A, C y D) sobre la base de las secuencias de
aminoácidos. Contienen un sitio activo, con una cavidad en su piso
(bolsillo oxianión) que está laxamente organizado con una
flexibilidad conformacional en términos de unión al sustrato. Cerca
se encuentra el residuo de serina que reacciona de forma
irreversible con el carbón carbonilo del anillo betalactámico,
produciendo un anillo abierto (inactivo) y la regeneración de las
betalactamasas. Estas enzimas son activas frente a penicilinas,
cefalosporinas y monobactámicos. En segundo lugar, un grupo de
enzimas menos común comprende las metalobetalactamasas o
clase B. Estas utilizan un ion metal de transición divalente, con
frecuencia el zinc, unido a residuos de histidina cisteína o ambos,
para reaccionar con el grupo carbonilo de la unión amida de la
mayoría de las penicilinas, cefalosporinas y carbapenémicos.

El mecanismo de acción de las penicilinas no ha sido completamente

dilucidado. Sin embargo se sabe que ellas actúan mediante
la inhibición en la síntesis de la pared celular de la bacteria y la
activación de su sistema autolítico (autolisinas).

La acción de las penicilinas necesita la

presencia de una pared celular que
contenga peptidoglicanos.

En la división activa de la bacteria, las

penicilinasinhiben ciertas enzimas que
crean reacción cruzada entre las cadenas
peptídicas de la pared y de esta forma
impiden el desarrollo de la estructura
normal del peptidoglicano.

Mediante este mecanismo se crea

una pared celular defectuosa que no
protege a la baceria y fácilmente se
produce la lísis celular del
microorganismo por la alta presión osmótica de su interior.

En la pared celular existen unas enzimas bacterianas (transpeptidasa,

carboxipeptidasa y endopeptidasa) que son llamadas proteínas ligadoras
de penicilinas.

La habilidad para penetrar la pared celular y el grado de afinidad de

estas proteínas determinan la actividad de la penicilina en la bacteria.
Varias bacterias difieren en el tipo y concentración de sus proteínas
ligadoras de penicilina y la permeabilidad de sus paredes celulares a los
antibióticos. Esto determina la susceptibilidad de las diferentes bacterias
a los antibióticos.

Adicionalmente, se ha encontrado que las penicilinas activan el sistema

endogeno autolítico de las bacterias, un proceso que inicia la lisis celular
y muerte de la bacteria.

Las penicilinas y las cefalosporinas son bactericidas solo si la célula se

encuentra en crecimiento activo y sintetizando su pared celular.