Tema 1 Biosíntesis de Macromoléculas

TEMA 1.
CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN

1. Introducción
2. El DNA como molde
3. Modelos de replicación del DNA
4. Replicación del DNA es semiconservativa en células procariotas y eucariotas
5. DNA polimerasas: Características de la reacción de polimerización
6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

6.1 Las DNA polimerasas utilizan un solo sitio activo para catalizar la
síntesis del DNA
6.2 Estructura de las DNA polimerasas
6.3 Las DNA polimerasas son enzimas procesivas
6.4 Las DNA polimerasas corrigen errores
TEMA 1. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN
7. La horquilla de replicación
7.1 La replicación es semidiscontínua
7.2 RNA cebador
7.3 DNA ligasas
7.4 Helicasas
7.5 Proteínas de unión al DNA de cadena sencilla
7.6 Topoisomerasas
8. Unidad de replicación: el replicón

1. Introducción
 Característica principal de los seres vivos: Originar otros seres a su imagen y

semejanza
 Células somáticas antes de dividirse: duplicar su material genético
REPLICACIÓN
2. El DNA como molde
 Estructura de la doble hélice del DNA: Watson y Crick , 1953
 Cada cadena de DNA serviría de molde para la síntesis de su

complementaria
3. Modelos de replicación del DNA.
Semiconservativo Conservativo Dispersivo


 Meselson y Stahl (1957)
 E. coli crecidas en 15NH4Cl
 Centrifugación gradiente de densidad
 https://www.youtube.com/watch?v=RiSWYwOcZ2I

 J.H. Taylor (1960
a) b)
5. DNA polimerasas
 Enzimas que sintetizan una molécula de DNA utilizando otra cadena de DNA
como molde
 DNA polimerasas dependientes de DNA
o Sustratos
• dNTP
• Unión cebador-molde
5. DNA polimerasas TEMA 1. CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN
DNA + dNTP → DNA n+1 + 2Pi
 Características de la reacción de polimerización

1) Necesita un extremo 3ÓH libre.
2) La selección del nucleótido entrante en base a la complementariedad de bases
3) Dirección de síntesis: 5á 3

6.1 Las DNA polimerasas utilizan un solo sitio activo para catalizar la síntesis del DNA
 Un sitio activo: 4 dNTP
 La geometría de los pares de bases A:T y G:C.

 Forma de mano derecha casi cerrada
 Dominios:
• Palma
• Dedos
• Pulgar
Fragmento Klenow de la DNA polimerasa I de E. coli


 Dominio de la palma
 Sitio catalítico del enzima
 Dos iones metálicos divalentes

• Reduce la afinidad del 3´ -OH por su
hidrógeno
• Coordina las cargas negativas de los
fosfatos
• Estabiliza el pirofosfato
 Verifica la precisión del apareamiento


 Dominio de los dedos

 Catálisis
 Interacción con los dNTP
 Cambio de conformación

 Dominio de los dedos

 Asociación con el molde
 Giro de casi 90º del esqueleto de
enlaces fosfodiéster del molde
The crystal structure of phage T7 DNA polymerase shows the template strand takes a
sharp turn that exposes it to incoming nucleotide.

 Dominio del pulgar
 Interacción con DNA recién sintetizado

• Mantiene la posición correcta del
cebador y el sitio activo.
• Ayuda a mantener una asociación firme
entre la DNA polimerasa y su sustrato.

6.3 Las DNA polimerasas son enzimas procesivas
Procesividad: el promedio de la cantidad de
nucleótidos añadidos cada vez que la enzima se suma
a una unión cebador-molde.
 Específica de cada DNA polimerasa
 Facilitada por la capacidad de la DNA

polimerasa para deslizarse a lo largo del
molde de DNA
 DNA polimerasa interacciona fuertemente

con el DNA bicatenario

Actividad exonucleasa 3´→ 5´


Mecanismo
 Geometría alterada
 Disminución de la catálisis
• Desplazamiento al centro
exonucleasas
 John Cairos: autorradiografía cromosoma E.coli replicando: “burbujas de

replicación u ojos de replicación (estructura θ, theta)
 Horquilla de replicación: punto de ramificación en un ojo de replicación en el

que se lleva a cabo la síntesis de DNA. Las cadenas de DNA recién
sintetizadas tienen polaridad opuesta.
 Número de horquillas de replicación
 Una: replicación unidireccional
 Dos: replicación bidireccional
LA REPLICACIÓN ES BIDIRECCIONAL
7.1 La replicación es semidiscontínua
 Las cadenas de DNA se replican de forma simultánea en la horquilla de

replicación
 DNA pol extiende dirección 5á 3´:
 1968 Reiji Okazaki: Replicación semidiscontinua
 Cadena conductora-líder-adelantada: síntesis contínua

 Cadena retrasada: fragmentos de Okazaki
7.2 RNA cebador
 DNA pol requiere grupo 3ÓH libre
 Fragmento de Okazaki: RNA y DNA
 Primero síntesis de RNA

o Primasa (RNA, polimerasa
7.2 RNA cebador
 Eliminación del RNA cebador

 Unión fragmentos: DNA ligasa
7.3 DNA ligasas
Catalizan la formación de un enlace fosfodiester. Unen fragmentos de DNA, sellan

mellas.
Requieren cofactores:
NAD+ en E. coli
ATP en mamíferos
Características:
Sellan mellas presentes en doble cadena de DNA
Sólo repara cuando lo que falta es un enlace fosfodiester
Reacción independiente de la composición de las bases
7.3 DNA ligasas
 Mecanismo de Acción
DNA ligase seals nicks between adjacent nucleotides by employing an enzyme-AMP

intermediate.
7.4 Helicasas
 Separan las dos cadenas del DNA

 Rotura de los enlaces de hidrógeno: ATP
 Procesivas
 Polaridad
7.4 Helicasas
 Oligómeros: 6 subunidades
 Forma de anillo
Mecanismo de acción
7.5 Proteínas de unión al DNA de cadena sencilla (SSBP)
 Mantiene la conformación lineal de la cadena de DNA dejando las bases
expuestas para que la DNA pol actúe.
 Unión cooperativa
 Unión independiente de secuencia
 Interacciones electrostáticas con la columna de fosfatos
 Interacciones de apilamiento con las bases del DNA.
7.6 Topoisomerasas
 Superenrollamiento del DNA que se sitúa por detrás de la horquilla de replicación
 Topoisomerasas introducen o eliminan superenrollamientos provocando escisiones
transitorias en el DNA.
 Tipo I
 Tipo II
7.6 Topoisomerasas
Topoisomerasa de tipo I Mecanismo de acción
 Rotura transitoria en una cadena del

duplex
 Nuclesas reversible
 No requiere ATP
7.6 Topoisomerasas
Topoisomerasa de tipo II
Mecanismo de acción
 Rotura transitoria de ambas cadenas del DNA
 Requiere ATP
Introducción
 Sin importar el número de cromosomas que posea una célula (1 en una

bacteria o 1400 en Ophioglossum) el genoma completo debe ser
duplicado (replicado) un sola vez y de una manera fiel con cada división
celular.
 Relación replicación y ciclo celular:
1) La iniciación de la replicación del DNA obliga a la célula (procariota o

eucariota) a dividirse.
2) La replicación se controla UNICAMENTE durante la iniciación, una
vez iniciada no se puede ni regular ni apagar, continua hasta copiar
todo el genoma
3) Una vez replicado el DNA, la célula se divide
Replicón
 Unidad de DNA (fragmento) que se replica de una vez

 Sitio de origen de la replicación
 Sitio de terminación de la replicación
 Número de replicones
 Bacterias: 1
 Arqueobacterias: 1 o varios
 Sulfolobus tienen 3 orígenes de replicación por lo que contiene 3
replicones
 Eucariotas: Varios orígenes – varios replicones
• Cada uno de los cuales es “disparado” una sola vez durante el ciclo
celular aunque no de manera simultánea.
 DNA extracromosómico
 Plásmidos: 1 replicón
 Mitocondrias y cloroplastos: 1 replicón
 Los fagos o virus de DNA también son replicones

Tema 1 Biosíntesis de Macromoléculas

Загружено:

Сведения о документе

Оригинальное название

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Tema 1 Biosíntesis de Macromoléculas

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

TEMA 1.

CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LA REPLICACIÓN

2. El DNA como molde

3. Modelos de replicación del DNA

4. Replicación del DNA es semiconservativa en células procariotas y eucariotas

5. DNA polimerasas: Características de la reacción de polimerización

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

8. Unidad de replicación: el replicón

 Característica principal de los seres vivos: Originar otros seres a su imagen y

2. El DNA como molde

 Estructura de la doble hélice del DNA: Watson y Crick , 1953

 Cada cadena de DNA serviría de molde para la síntesis de su

3. Modelos de replicación del DNA.

Semiconservativo Conservativo Dispersivo

4. Replicación del DNA es semiconservativa en células procariotas y eucariotas

4. Replicación del DNA es semiconservativa en células procariotas y eucariotas

DNA + dNTP → DNA n+1 + 2Pi

 Características de la reacción de polimerización

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

 Forma de mano derecha casi cerrada

Fragmento Klenow de la DNA polimerasa I de E. coli

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

 Sitio catalítico del enzima

 Dos iones metálicos divalentes

 Verifica la precisión del apareamiento

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

 Dominio de los dedos

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

 Dominio de los dedos

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

 Dominio del pulgar

 Interacción con DNA recién sintetizado

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

 Específica de cada DNA polimerasa

 Facilitada por la capacidad de la DNA

 DNA polimerasa interacciona fuertemente

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

Actividad exonucleasa 3´→ 5´

6. Mecanismo de acción de las DNA polimerasas

 John Cairos: autorradiografía cromosoma E.coli replicando: “burbujas de

 Horquilla de replicación: punto de ramificación en un ojo de replicación en el

 Las cadenas de DNA se replican de forma simultánea en la horquilla de

 1968 Reiji Okazaki: Replicación semidiscontinua

 Cadena conductora-líder-adelantada: síntesis contínua

 Primero síntesis de RNA

 Eliminación del RNA cebador

Catalizan la formación de un enlace fosfodiester. Unen fragmentos de DNA, sellan

DNA ligase seals nicks between adjacent nucleotides by employing an enzyme-AMP

 Separan las dos cadenas del DNA

Topoisomerasa de tipo I Mecanismo de acción

 Rotura transitoria en una cadena del

8. Unidad de replicación: el replicón

 Sin importar el número de cromosomas que posea una célula (1 en una

 Relación replicación y ciclo celular:

1) La iniciación de la replicación del DNA obliga a la célula (procariota o

8. Unidad de replicación: el replicón

 Unidad de DNA (fragmento) que se replica de una vez

 Los fagos o virus de DNA también son replicones

Вам также может понравиться