INFORME DE PRÁCTICA DE

LABORATORIO N°03
1.-TITULO:
“INMOVILIZACIÓN DE CÉLULAS”.

2.-INTRODUCCION:

Actualmente muchos países desarrollados experimentan grandes avances en el

campo de la biotecnología; uno de ellos y que a suscitado el interés de muchos
investigadores es el estudio de inmovilización celular, como técnica de
aplicación de la biotecnología que ha permitido desarrollar nuevos métodos
que han vuelto rentables a muchos procesos y productos industriales por su
simpleza y rendimiento.

Dentro de la industria alimentaria, la inmovilización de microorganismos en

soportes naturales o sintéticos proporciona estabilidad a las funciones celulares.
Esta técnica permite alcanzar altas concentraciones celulares en volúmenes
reducidos, así como la reutilización como biocatalizador y la implantación de
sistemas de continuos de producción.

En este caso, el uso de células inmovilizadas dentro de procesos continuos

como por ejemplo para la producción de bebidas fermentadas representa una
línea de investigación de elevado interés debido a las ventajas económicas y
técnicas que presenta en comparación a los sistemas discontinuos con células
libres.

Es por esto que en el presente informe se desarrollará uno de los diversos

métodos de inmovilizar levaduras con capacidad de reutilización, a fin de
valorar su importancia en procesos industriales.
3.- FUNDAMENTO TEORICO:

La inmovilización de células se puede definir como cualquier técnica que

restringe el movimiento libre de células. El trabajo en estos sistemas comenzó
en los años 70 (Mattiasson, 1982; Messing, 1980; Scott, 1987; Prenosil, 1983). Las
ventajas de la inmovilización de células son las siguientes:

1. Las fermentaciones en lote se pueden reemplazar por reacciones

continuas.
2. Las células inmovilizadas permiten el uso de una densidad celular
considerablemente mayor, con los que se logra la intensificación del
proceso.
3. Muchas enzimas son activos en la fase estacionaria o de reposo; en un
sistema de inmovilización las células se pueden retener en ese estado.
4. El uso de células inmovilizadas elimina la necesidad de extraer y
purificar la enzima
5. El sistema celular es menos sensible a cambios en las condiciones de
operación como pH.

Una desventaja del sistema celular inmovilizado es que impone barreras

difusionales adicionales (pared celular) de modo que se puede requerir la
permeabilización de las células. En este caso, puede ser difícil el mantenimiento
de la integridad celular.
MÉTODOS DE INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS.

 ADSORCIÓN
Muchos microorganismos tienden a adherirse a superficies sólidas en la
naturaleza. Esta capacidad para formar películas se ha usado en el tratamiento
de aguas negras (película perclorada). Algunas células de mamífero son
dependientes de anclaje y requieren para crecer camas o portadores hechos de
dextranos, celulosa, poliestireno, agarosa o colágena.

Las células microbianas pueden actuar como cationes y aniones dependiendo

del pH del medio y, por lo tanto, pueden interactuar con resinas
intercambiadoras como el DEAE y resinas de intercambio iónico.

Otra técnica de absorción incluye las lecitinas, que son proteínas naturales
extraídas de las plantas y que tienen la capacidad de unir factores específicos de
la superficie de microorganismos.

 C
APTURA
La captura de células en una red tridimensional de polímero es un método muy
popular.
Se han usado polímeros similares a los utilizados con las enzimas para atrapar
células completas, como poliacrilamida, poliuretano, colágena, gelatina,
garbosa, alginato y k-carragenano.

 MEMBRANAS SEMIPERMEABLES

Las membranas semipermeables se han usado para confinar células dentro del
medio. Se han utilizado unidades de diálisis con fibras porosas para atrapar
muchos organismos.

4.-OBJETIVOS:

 Inmovilizar células de levadura.

 Valorar su importancia en procesos industriales
 Determinar la viabilidad de las levaduras inoculadas en el medio de
cultivo.

5.- MATERIALES Y EQUIPOS:

 Levaduras: Cepa de Saccharomyces sp.

  Agar.

 Aceite casero.

 Medio de cultivo: extracto de levadura (0.5gr.), KM2PO4 (0.5 gr.), Azúcar

(20 gr.), Agua destilada (100 ml.).

 Jeringas

 Gel pack.

 Refractómetro.

6.- PROCEDIMIENTO:
1. Se enfrió el agar de 50ºC hasta 42ºC ya que a esta temperatura el agar se

solidifica.

2. Inocular en este Agar 2 ml. de levadura.

3. Agitar lentamente la mezcla.

4. Con ayuda de una jeringa estéril tomar 5 ml. de la mezcla (agar con

levaduras) y se deja caer gota a gota en forma rápida en aceite vegetal,

contenido en un frasco de vidrio sumergido en un recipiente con hielo

 (gel pack) en forma permanente, hasta que se formen esferas (30

aproximadamente).

5.

5. Las perlas se lavaron con agua destilada estéril en forma sucesiva para

desprender el aceite de su superficie.

6. Colocar estas esferas lavadas en medio de cultivo, el cual contiene:

extracto de levadura (0.5gr.), KM2PO4 (0.5 gr.), Azúcar (20 gr.), Agua

destilada (100 ml.).

7. Unir al recipiente que contenga esta mezcla una pequeña bomba de aire,

con la finalidad de brindarle aireación al medio.

8. Las evaluaciones se realizaron diariamente, determinando consumo de

sustrato (azúcar) utilizando un refractómetro.

7.- RESULTADOS
y DISCUSIÓN:

TABLA Nº 01
Medición del consumo de azucares reductores (glucosa) por día mediante
refractómetro.
 TIEMPO (DIAS) CONSUMO DE AZÚCARES
REDUCTORES (%BRIX)
0 17

1* -

2* -

3 13.8

4 10.6

5 7.5

6 5.3

7 3.8

* Días en los que no se realizaron mediciones debido a los días no laborables.

GRAFICA Nº 01

Como discusión de los resultados obtenidos en el laboratorio

puedo expresar lo siguiente:

1. Después de inmovilizar el cultivo de Saccharomyces y ver su capacidad

fermentativa, logramos determinar que los azúcares (glucosa) que
contiene el medio de cultivo (compuesto de: Extracto de levadura
 (0.5gr.), KM2PO4 (0.5 gr.), Azúcar (20 gr.), Agua destilada (100 ml.))
disminuyeron en un 77% aproximadamente, los cuales han sido
empleados por las células y esto debido a que ellas necesitan fuentes
carbonadas para su desarrollo.
2. La gran ventaja de este bioproceso es que se pueden reutilizar las
levaduras inmovilizadas en el agar, siempre y cuando se le suministre
una fuente carbonada que les permita estar viables para un próximo
proceso.
3. El Agar resultó ser un eficaz inmovilizador celular.
4. EL aceite común utilizado fue un buen formador de perlas de Agar,
debido a su propiedad hidrofóbica.

A manera de análisis, después de toda la realización de este

informe puedo decir que:

1. La inmovilización de levaduras puede disminuir la mayoría de los

problemas que plantean procesos, como por ejemplo, la fermentación
utilizando células libres. Este sistema tiene la ventaja de poder manejar la
densidad celular, previa al inicio de la fermentación.
2. Además, se facilita el sistema de operación de un proceso continuo,
evitando el paso de eliminar las levaduras. La inmovilización celular
desacopla el crecimiento microbiano de los procesos metabólicos de
interés industrial. Es así, que diversos grupos de investigación han
empleado este sistema de levaduras inmovilizadas especialmente del
género Saccharomyces para la obtención de variados productos de
interés industrial como el vino por ejemplo.

8.- CONCLUSIONES:
1. La inmovilización de microorganismos en soportes naturales o sintéticos
proporciona estabilidad a las funciones celulares. Esta técnica permite
alcanzar altas concentraciones celulares en volúmenes reducidos, así como
la reutilización como biocatalizador y la implantación de sistemas de
continuos de producción.
2. La inmovilización de células se puede definir como cualquier técnica que
restringe el movimiento libre de células.
3. La inmovilización de levaduras puede disminuir la mayoría de los
problemas que plantean procesos, como por ejemplo, la fermentación
utilizando células libres. Este sistema tiene la ventaja de poder manejar la
densidad celular, previa al inicio de la fermentación
4. Existe viabilidad de las levaduras inoculadas en el mosto, ya que hubo una
considerable reducción de azúcares en 77% aproximadamente, estos
azucares han sido empleados por las células y esto debido a que ellas
necesitan fuentes carbonadas para su desarrollo.
5. El Agar resultó ser un eficaz inmovilizador celular.
6. EL aceite común utilizado fue un buen formador de perlas de Agar, debido
a su propiedad hidrofóbica.

9.- INFORMACIÓN BIBLIOGRÁFICA:

1. http://www.ugr.es/~ars/abstract/arroyo.pdf
2. http://www.slidefinder.net/E/Enzimas/8032952

3. http://www.scribd.com/doc/32302574/INMOVILIZACION-DE-
CELULAS