“Año del buen servicio al ciudadano”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL
CIENCIAS BIOLOGICAS

INFORME N° 4
“MÉTODOS DE CULTIVOS DE LOS
MICROORGANISMOS”
CURSO :
MICROBIOLOGIA
ALUMNO :
FARFÁN PASAPERA BRANDON YAMIR
SEMESTRE :
2017-I
DOCENTE :
Blgo.-McBlgo. M. Dorothy Torres de León

Piura, 26 de junio del 2017

 INTRODUCCIÓN

Una vez que ha sido preparado un medio de cultivo, puede ser inoculado (es
decir, se le añaden organismos) y a continuación incubado en condiciones
que favorezcan el crecimiento microbiano. En general, se tratará del
crecimiento de un cultivo axénico o puro, esto es, de un cultivo que contiene
sólo un único tipo de microorganismos. Para obtener y mantener un cultivo
axénico o puro es esencial evitar la entrada en él de otros organismos.
(Madigan, 2003)
La inoculación o siembra es poner en contacto los microorganismos o la
muestra bacteriológica con medios de cultivo. Hay diferentes métodos,
dependiendo del objetivo que se persiga con la siembra. (Espinal, 2005)
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo
artificial, debe reunir una seria de condiciones como son: temperatura, grado
de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de
acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener nutrientes y factores
de crecimiento necesarios. (Espinal, 2005)
Los medio de cultivo se preparan con frecuencia en forma semisólida o
sólida mediante la adición al medio líquido de un agente solidificante. Los
medios sólidos inmovilizan a las células, permitiéndoles crecer y formar
masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias bacterianas pueden
ser de forma y tamaño variable dependiendo del organismo, las condiciones
del cultivo, el suministro de nutrientes, y otros parámetros fisiológicos.
(Madigan, 2003)
Los objetivos fueron demostrar que utilizando asa de Kolle y espátula de
Driglasky se pueden obtener en forma rápida gran número de colonias
aisladas en las placas de agar, realizar un método práctico para la
enumeración y aislamiento de los microorganismos viables y demostrar que
la transferencia de cultivos es una técnica sencilla que requiere de ciertos
cuidados.
II. MATERIALES Y MÉTODOS
Aislamiento por la técnica de siembra por estría
Primero se esterilizó el asa de Kolle, se enfrió y se cargó con la
suspensión de microorganismos, se trazó 5 líneas paralelas sobre la
superficie del medio en la placa de Petri.
Luego sin tomar un nuevo inoculo se hizo otra serie de líneas paralelas
de tal forma que atravesaron las primeras.
Se repitió esta operación cuidando de hacer una solo estría en la última
vez.
Se incubaron las placas a 37°C durante 24 horas.
Aislamiento por la técnica de siembra por difusión en placa
Se hizo la extensión del inoculó con la espátula de Driglasky, en la
placa de Petri.
Se incubaron las placas a 37°C durante 24 horas.
Aislamiento por diluciones sucesivas.
Se tomó 2 tubos de ensayo conteniendo 9 ml de SSP y un matraz con
90 ml.
Al matraz se le agrego 10 gr de diluyente, se homogenizo y luego se
extrajo 1 ml y se colocó en el tubo de ensayo I, se homogenizo el tubo
de ensayo I, y luego se extrajo 1 ml y se colocó en el tubo de ensayo
II, y se homogenizo.
Las diluciones fueron:
1
Matraz = 10−1
10
1
Tubo I = 10−2
100
1
Tubo II = 10−3
1000

Del tubo I y II, con una pipeta se extrajo 0.5 ml de cada tubo y se
colocaron en una placa de Petri respectivamente. Luego se añadió agar
nutritivo enfriado 15 ml aproximadamente, lo suficiente para cubrir la
base de la placa y se realizaron movimientos suaves para homogenizar
la muestra.
 Se esperó por 5 minutos para que se solidifique y luego se llevó a
incubar a 37°C por 24 horas.
Trasplante o resiembra
Con la mano izquierda, se tomó un tubo con la fuente de inóculo.
Se destapo el tubo, se flameo la boca de los tubos y la aguja o asa de
kolle.
Con el asa de kolle, extraer una muestra de la colonia y se volvió a
flamear el tubo para proceder a colocar su respectivo tapón de
algodón.
Luego se tomó el tubo con el medio a sembrar, se flameo el tubo y se
hizo la siembra del inóculo por:
Picadura en agar recto (aguja)
Estrías en agar inclinado
Suspensión en medio líquido
Se colocaron en la incubadora a 37°C por 24 horas.

III.RESULTADOS
Aislamiento por la técnica de siembra por estría
Aislamiento por la técnica de siembra por difusión en placa

Aislamiento por diluciones sucesivas.

1
Tubo I = 10−2
100

1
Tubo II = 10−3
1000
Trasplante o resiembra

Agar en columna Agar inclinado Caldo nutritivo

Crecimiento: superficial Crecimiento en estrías Cantidad: moderada

en profundidad. sobre agar inclinado
Distribución: uniforme
Olor: imperceptible Cantidad: moderada distribuido

Color: blanco Margen: presenta Olor: pútrido

irregularidades

Consistencia de
crecimiento: butiroso

Color: blanco
IV.DISCUSIÓN
Sembrar un microorganismo es colocarlo en un ambiente artificial apropiado
para que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproducción. Una
condición básica de la siembra es que se realice bajo rigurosas reglas de
asepsia, ya que es indispensable evitar el crecimiento de gérmenes del
ambiente en el cultivo. Estos microorganismos se denominan contaminantes.
(Negroni, 2009)
Efectivamente, para realizar el método de “siembra” se tuvo como
condición primordial, evitar la contaminación de los materiales para
así obtener un cultivo óptimo. Para ello se procedió en todo momento
a esterilizar las asas de siembra y las bocas de los tubos de ensayos
para evitar una contaminación.
Al sembrar el material proveniente de una muestra microbiológica por lo
general se obtiene un cultivo mixto (que contiene más de una clase de
gérmenes), del cual es imprescindible separar los distintos tipos de colonias
para obtener cultivos puros o axénicos, porque los cultivos mixtos
proporcionan información de poca utilidad e incluso errónea. (Negroni,
2009)
En efecto, los microorganismos obtenidos del cultivo eran mixtos,
pero justamente por eso se realizaron las diluciones en 3 tubos de
ensayo para obtener muestras más puras conforme éstas iban
realizándose.
Algunas bacterias producen pigmentos que dan color a las colonias.
Independientemente de su posible pigmentación, las colonias permiten al
microbiólogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan más
de un tipo de colonia no fueron sembradas con un cultivo axénico o puro.
(Madigan, 2003)
En la práctica de laboratorio, en las muestras que se observaron, se
presenció uniformidad, pues todas las colonias presentaban una sola
pigmentación, además de presentar características parecidas entre
colonia y colonia.
V.CONCLUSIONES
Se logró obtener con éxito los microorganismos cultivados por el método de
“agotamiento por estría”, “siembra por difusión en placa”.
Se logró obtener microorganismo por el método de aislamiento por
diluciones sucesivas y aislamiento de colonias.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Bibliografía
Espinal, G. (2005). Manual de prácticas de microbiología I. Santo Domingo: INTEC.

Madigan, M. T. (2003). Biología de los microorganismos. PEARSON Prentice Hall.

Negroni, M. (2009). Microbiología Estomatológica. Médica Panamericana.